Propiedades fsico-qumicas y cinticas de la enzima lacasa inmovilizada de Fusarium proliferatum Gonzlez Arzola K. y Falcn Sanabria M. A.

Departamento de Microbiologa y Biologa Celular. Facultad de Farmacia. Universidad de La Laguna. Avenida Astrofsico Francisco Snchez.38206. La Laguna. Tenerife. Correo electrnico: katiga@hotmail.com

Las lacasas (EC 1.10.3.2) son glicoprotenas producidas por algunos hongos y bacterias, que catalizan la oxidacin de diferentes compuestos fenlicos. Son enzimas excepcionalmente verstiles, que pueden ser empleadas en diversos procesos industriales (bioblanqueo y depuracin de los efluentes de industrias papeleras, degradacin de compuestos fenlicos contaminantes, etc). Actualmente, los estudios van dirigidos a la bsqueda de nuevas lacasas con mayor estabilidad, y, sobre todo, al empleo de enzimas inmovilizadas. La inmovilizacin no solo contribuye a la estabilizacin de la protena, sino que facilita la reaccin enzimtica a gran escala. Los soportes empleados para ello son muy diversos: celulosas modificadas, chitosano, carbn activado, perlas de vidrio, entre otros (1). La unin se puede efectuar a travs de enlaces covalentes con el soporte o con un agente entrelazante, o bien por adsorcin inica a la matriz. El objetivo de este trabajo consiste mejorar las propiedades de la enzima lacasa de Fusarium proliferatum a travs de su inmovilizacin sobre perlas de vidrio, empleando glutaraldehido como agente de entrecruzamiento (2). La actividad lacasa inmovilizada present un pH ptimo ms bsico (4,5) que la enzima libre (3,5), as como una temperatura ptima de reaccin superior (70C frente a los 60C de la enzima libre). Asimismo, la enzima inmovilizada mantuvo un 100% de su actividad tras 2 horas de incubacin en un rango de pH de 5 a 9, y alrededor de un 90% a pH entre 2 y 4, en comparacin con la lacasa libre (60 y 50%, respectivamente). De la misma forma, cuando se someti durante 2 horas a 30 y 40C conserv ntegra su actividad enzimtica, perdiendo solo un 40% de la misma cuando se trat a 50C. Cabe destacar que la enzima resisti el tratamiento a 80C (15% de actividad). Por otra parte, tambin se mejor la afinidad por el sustrato, ya que la constante de Michaelis (Km) disminuy 3 veces en comparacin con la lacasa libre y la velocidad mxima de la reaccin se increment 17 veces, lo que da lugar a una eficiencia cataltica 38 veces superior. Este ltimo aspecto contrasta con los descritos para otras lacasas fngicas. En conclusin, la lacasa inmovilizada presenta una excelente estabilidad en condiciones extremas de pH y temperatura, as como una mejora sustancial de sus propiedades cinticas, lo que la convierte en un catalizador ideal para su aplicacin industrial.

(1) Durn N., Rosa M. A., D Annibale A. y Gianfreda L. (2002). Appications of laccases and tyrosinases (phenoloxidases) immobilized on differents supports: a review. Enz. Microbiol. Technol. 31: 907-931. (2) Leonowicz a., Sarkar J. M. y Bollag J.-M. (1988). Improvements in stability of an immobilized fangal laccase. Appl. Microbiol. Biotechnol. 29: 129-135.