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Colorantes para microscopia

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Los colorantes se utilizan en microscopia cuando deben visualizarse componentes de clulas y tejidos en material animal y vegetal. Frecuentemente estas tcnicas de visualizacin pticas son los nicos mtodos de identificar y diferenciar tales tejidos. Los colorantes para microscopia se utilizan principalmente en histologa, citologa y microbiologa, pero tambin en el anlisis de fibras textiles, papel y otros productos tcnicos. Los colorantes para microscopia Certistain son analizados qumicamente de acuerdo con estrictas especificaciones y son comprobados respecto a su eficacia funcional. Los colorantes aseguran una eficacia coherente de lote a lote, adaptados a los criterios de la Biological Stain Commission de los Estados Unidos de Amrica. Con Certistain le ofrecemos la mejor calidad de manera que se pueden obtener siempre resultados reproducibles.

Tincin
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Un espcimen histolgico teido, colocado entre portaobjetos y cubreobjetos, montado sobre la platina de un microscopio ptico. Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o incluso para resaltar organelas dentro de clulas individuales. En bioqumica, esto implica agregar un colorante especfico (esto significa que se una de manera selectiva ya sea a ADN, protenas, lpidos, carbohidratos, etc.) a un sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Tanto la tincin como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos propsitos. Diferentes tipos de tinciones biolgicas son utilizadas tambin para marcar clulas en citometra de flujo y para marcar protenas cidos nucleicos en electroforesis en gel. Las tinciones no estn limitadas a su uso en materiales biolgicos, tambin pueden ser utilizadas para estudiar la morfologa de otros materiales (por ejemplo, las estructuras lamelares de polmeros semicristalinos de las estructuras de dominio de bloques de copolmeros.

ndice
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1 Tincin in vivo e in vitro o 1.1 Mtodos de tincin in vitro 1.1.1 Preparacin 1.1.2 Tincin adecuada

1.2 Tincin directa 1.3 Tincin indirecta 2 Afinidad de diferentes tejidos por diferentes colorantes o 2.1 Tincin negativa 3 Colorantes o 3.1 Colorantes histolgicos ms comunes o 3.2 Azul brillante de Coomassie o 3.3 Azul de metileno o 3.4 Azul Nilo o 3.5 Bismarck brown o 3.6 Bromuro de etidio o 3.7 Carmn o 3.8 Cristal violeta o 3.9 DAPI o 3.10 Eosina 4 Lista de algunas de las tinciones ms comunes 5 Referencias 6 Enlaces externos

o o

Tincin in vivo e in vitro[editar editar cdigo]

Una tincin in vivo (tincin supravital) es el proceso de teir tejidos vivos. Al provocar que determinadas clulas o estructuras adquieran los colores de contraste, se puede estudiar su ubicacin y morfologa mientras estn desempeando su funcin. El propsito ms comn es revelar detalles de la citoestructura que de otra manera no resultaran evidentes, sin embargo, la tincin supravital puede revelar adems donde aparece un determinado producto qumico o donde se lleva a cabo una determinada reaccin qumica dentro de las clulas o tejidos. A menudo estas tinciones son llamadas tinciones vitales o supravitales. Se introducen en el organismo mientras las clulas an se encuentran vivas. Para conseguir el efecto deseado, el colorante usualmente se utiliza en soluciones muy diluidas que van entre 1:5.000 a 1:50.000. A pesar de esto las tinciones son eventualmente txicas para los organismos, algunas ms que otras. Una tincin in vitro involucra el coloreo de clulas o estructuras que han sido removidas de su contexto biolgico. Se utiliza a menudo una combinacin de varios colorantes para revelar ms detalles y caractersticas de las que se obtendran con la utilizacin de uno solo. Combinados con protocolos especficos de fijacin y de preparacin de muestras, los cientficos y profesionales de la salud pueden utilizar estas tcnicas estandarizadas como una herramienta diagnstica repetible y consistente. Una contratincin es una tincin que consigue que las clulas o estructuras sean ms visibles, cuando no se consigue que sean totalmente visibles con la tincin principal.

Por ejemplo, el cristal violeta tie nicamente a las bacterias Gram positivas en la tincin de Gram. Se utiliza una contratincin de safranina (que colorea todas las clulas), para permitir tambin la identificacin de bacterias Gram negativas. Es de notar que muchas tinciones pueden ser utilizadas tanto en clulas vivas como en clulas fijadas.

Mtodos de tincin in vitro[editar editar cdigo]

Preparacin[editar editar cdigo] Las etapas preparatorias involucradas en una tincin van a depender del tipo de anlisis planeado; bajo estas premisas se puede considerar que algunos o todos de los siguientes pasos podran requerirse.

Fijacin: de por si, esta etapa puede consistir en varios pasos. La fijacin es una modificacin de las propiedades fisicoqumicas de las protenas que forman una clula o tejido y que tiene por finalidad preservar las formas de las clulas o tejidos tanto como sea posible. A veces se puede utilizar una fijacin por calor para matar, adherir y alterar un espcimen de modo que acepte la tincin. La mayor parte de las veces se utiliza un fijador qumico. Los fijadores qumicos en general causan la formacin de enlaces cruzados entre protenas, o entre protenas y otras sustancias presentes en la muestra, incrementando su resistencia mecnica. Entre los fijadores qumicos ms comunes se encuentran el formaldehdo, etanol, metanol, y/o el cido pcrico. Pequeos bloques de tejido pueden ser embebidos en parafina o algn polmero, proceso conocido como inclusin, para incrementar su resistencia y estabilidad, y para hacer ms fcil cortarlos en rodajas extremadamente delgadas, ya que cuanto ms delgado es un corte histolgico, ms definicin se obtiene en las imgenes microscpicas. Permeabilizacin este paso implica el tratamiento de las clulas con un surfactante suave. Este tipo de tratamiento tiene como finalidad disolver la membrana celular para permitir que las grandes molculas de colorante puedan acceder a las estructuras del interior de las clulas. Montaje frecuentemente implica adherir los cortes histolgicos a un portaobjetos de vidrio para su observacin al microscopio o anlisis. En algunos casos, se puede cultivar a las clulas directamente sobre le portaobjetos. En muestras de clulas sueltas, como las que se presentan en un extendido de sangre o de fluidos biolgicos, la muestra puede ser aplicada directamente sobre el portaobjetos. Para piezas de tejido de mayor tamao, se utiliza un micrtomo que corta la muestra en rodajas sumamente delgadas. Estas rodajas son luego adheridas al portaobjetos por medio de una substancia que funciona como pegamento, ya sea una resina transparente, gelatina o clara de huevo. El montaje tiene por finalidad aumentar la resistencia mecnica de una muestra que de otra manera sera extremadamente

frgil, para que soporte el proceso de teido conservando lo ms posible su estructura original. Tincin adecuada[editar editar cdigo] En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la inmersin de la muestra (antes o despus de la fijacin y el montaje) en la solucin colorante, seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin embargo, requieren del uso de un mordiente, esto es, un compuesto qumico que reacciona con el colorante para formar un precipitado coloreado insoluble. Cuando la solucin de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tincin mordentada permanece. La mayora de los colorantes utilizados en microscopa se encuentran disponibles como colorantes certificados. Esto significa que los colorantes ofrecidos por el fabricante han sido evaluados por un organismo independiente, la Biological Stain Commission, y que este organismo ha determinado que el producto ofrecido cumple o excede ciertos estndares de pureza, concentracin de sustancia colorante y desempeo en las tcnicas de tincin empleadas. Estos estndares son publicados detalladamente en la revista Biotechnic & Histochemistry.1 Muchos colorantes presentan una composicin diferente entre diferentes fabricantes. La utilizacin de colorantes certificados elimina una fuente de resultados inesperados.2

Tincin directa[editar editar cdigo]

Hablamos de tincin directa cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato, sin otro tratamiento previo.

Tincin indirecta[editar editar cdigo]

Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente. Un mordiente habitual es el cido tnico.3

Afinidad de diferentes tejidos por diferentes colorantes[editar editar cdigo]

Cuando un tejido u estructura subcelular presenta una afinidad por un determinado colorante se suele designar por los sufijos -filo o -flico. Por ejemplo, los tejidos que se tien con azure suelen ser nombrados como azurfilos o azuroflicos. Tambin puede ser utilizado para designar propiedades tintoriales ms generalizadas, por ejemplo los tejidos que se tien con colorantes de naturaleza cida (por ejemplo la eosina) suelen ser denominados como acidoflicos, basoflicos cuando se tien con colorantes de naturaleza bsica (tales como por ejemplo el azul de metileno o la hematoxilina), y anfiflicos cuando aceptan ambos colorantes.4 Por el contrario, los tejidos cromfobos no toman colorante con facilidad.

Tincin negativa[editar editar cdigo] Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un claro caso de cromofobia y que por lo tanto funciona an cuando los mtodos de tincin positiva fallan, es la tincin negativa. Esto puede ser conseguido simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gota de nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos. Luego de esto, los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de microscopa en campo claro como inclusiones claras muy bien contrastadas contra el medio oscuro que las rodea.5 Adicionalmente, la tincin negativa es una tcnica suave que no destruye a los microorganismos, permitiendo por lo tanto un recultivo posterior para el estudio de patgenos.

Colorantes[editar editar cdigo]

La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn. Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie.

Colorantes histolgicos ms comunes[editar editar cdigo]

Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las clulas o tejidos, y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o reas especficas. Algunos de los colorantes biolgicos ms comunes se listan ms abajo. A menos que se indique lo contrario la mayora de estos colorantes se utilizan con clulas y tejidos fijados. Las tinciones vitales (que pueden ser utilizadas con organismos vivos) se encuentran destacadas.

Azul brillante de Coomassie[editar editar cdigo]

Coomassie blue (tambin conocido como azul brillante) es un colorante que tie en forma no especfica a todas las protenas con un fuerte color azul. Se utiliza frecuentemente para teir las corridas de protenas en las electroforesis en gel.

Azul de metileno[editar editar cdigo]

Azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.

Azul Nilo[editar editar cdigo]

El Nile blue (o Nile blue A), es decir azul Nilo, tie a los ncleos de color azul. Tambin puede ser utilizado para teir clulas vivas.

Bismarck brown[editar editar cdigo]

Bismarck brown, Marrn Bismarck, (tambin conocido como Bismarck brown Y o Manchester brown) le imparte un color amarillo a las mucinas cidas. Se puede utilizar con clulas vivas.

Bromuro de etidio[editar editar cdigo]

El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja fluorescente. A pesar de que no es capaz de teir clulas vivas ya que no atraviesa las membranas intactas, puede ser utilizado para identificar clulas que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis, ya que tales clulas poseen unas membranas mucho ms permeables. Por el mismo motivo, el bromuro de etidio es utilizado como un marcador de apoptosis en poblaciones celulares y para localizar las bandas de ADN en una corrida en electroforesis en gel. Este colorante puede ser utilizado en combinacin con naranja de acridina (NA) en el conteo de clulas viables. Esta tincin combinada BE/NA le otorga a las clulas vivas un color verde fluorescente mientras que las clulas apoptticas aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja.

Carmn[editar editar cdigo]

El carmn es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para teir glicgeno, mientras que las sales de alumbre-carmn son colorantes que se adhieren al ncleo. Las tinciones con carmn requieren del uso de un mordiente, que usualmente es aluminio o alumbre.

Cristal violeta[editar editar cdigo]

El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie las paredes celulares de color prpura. El cristal violeta es un componente importante en la coloracin de Gram.

DAPI[editar editar cdigo]

El DAPI es un colorante nuclear (tie el ncleo) fosforescente, se excita con luz ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN. El DAPI se une a las regiones de alta repeticin A=T en los cromosomas. Adems no es visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisin corriente. Puede ser utilizado en clulas vivas o fijadas. La tcnica de tincin con DAPI es especialmente adecuada para el recuento celular.6

Eosina[editar editar cdigo]

La eosina se utiliza ms frecuentemente como contracoloracin de la hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de tincin. De hecho existen dos compuestos muy estrechamente relacionados (aunque no iguales) conocidos como eosina. El ms frecuentemente utilizado es la eosina Y (tambin conocida como eosina amarillenta) ya que posee una tonalidad amarillenta muy suave. El otro compuesto conocido como eosina es la eosina B, tambin conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual posee una suave tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables, y el la utilizacin de uno u otro es ms una cuestin de preferencia y tradicin.

Lista de algunas de las tinciones ms comunes[editar editar cdigo]

Nota: Esta lista incluye slo algunas de las tinciones ms comunes, y no es ni con mucho completa. Tincin Caractersticas Tie ncleos, cidos nucleicos y estructuras Bsica / basoflicas Acidoflica (mitocondrias y ribosomas) en azul. Tie protenas y estructuras con cida / afinidad por los cidos Basoflica en diferentes tonos de rojo Tipo Uso Tincin histolgica general Ejemplo

Hematoxilina

Eosina

Tincin histolgica general

Tincin hematoxilinaeosina Bicomponente Anfiflica

Los ncleos aparecen en azul (hematoxilina) Los cidos nucleicos asociados a protena (ej. Tincin histolgica ribosomas) en general violeta Fibra muscular en rojo Tejido conectivo en rosado

Tincin hemalumbreeosina

Similar a la tincin Tincin histolgica H&E con colores ms general marcados y definidos

Tincin HOPS

Policromtica

Los ncleos aparecen en azul (hematoxilina) La elastina aparece en negro (orcena) Fibra muscular en rojo (filoxina) Tejido conectivo (colgeno) en amarillo (safranina) Los ncleos aparecen en azul (hematoxilina) Fibra muscular en rojo (filoxina) Tejido

Tincin HPS

conectivo (colgeno) en amarillo (safranina) Permite ver la cromatina con mucha claridad

Tincin de Papanicolau

Ncleos aparecen entre azul y negro Clulas con Se utiliza para alto contenido diferenciar clulas de queratina en en muestras de amarillo secreciones Glucgeno en biolgicas (esputo, amarillo LCR, orina, etc.) y Clulas en raspados y superficiales de biopsias. Permite naranja a distinguir con rosado. relativa facilidad Clulas clulas con intermedias y transformaciones parabasales neoplsicas, entre turquesa y levaduras y azul. bacterias. Clulas metaplsicas muestran coloraciones mezcladas (P. Ej. verde y rosa)

Tincin de Romanowsky

Pancromtica de Romanowsky

Extendidos sanguneos

Tincin de Wright

Tincin de Giemsa

Tincin de Jenner

Tincin de Leishman

Tincin de Field Tincin de May Grnwald Tincin de May GrnwaldGiemsa Tie de azul oscuro restos de cidos Supravital nucleicos, y los proteoglicanos cidos metacromtica en varios tonos de violeta. Diagnstico de anemias regenerativas

Tincin con azul de metileno

Tincin con azul de prusia

Demostracin de estructuras metacromticas Diagnstico de Tie los depsitos de hemopoyesis hemosiderina y hierro ineficaz, y de color azul-celeste hemocromatosis

Tincin tricrmica de Masson

Los ncleos aparecen en marrn o negro Keratina y msculo en rojo Los citoplasmas en tonos de rosa El colgeno y hueso en azul o verde

Tincin tricrmica de Lillie

Smil tricrmica de Masson

Tricrmica Tincin tricrmica AZAN de Heidenhan

Smil tricrmica de Masson, los citoplasmas aparecen en tonos de rojo ms profundos y el conectivo en tonos ms intensos de azul Smil tricrmica de Masson

Tincin tricrmica de Mallory

Tincin de Van Gieson

Ncleos celulares color marrn a negro. Colgeno (tejido conectivo fibroso): Color rosa o rojo. Msculo y Citoplasma: Color amarillo.

Tincin de Movat

Negro = ncleos, fibras elsticas Amarillo = colgeno, fibras reticulares Azul = sustancia basal, mucina Rojo brillante = fibrina Rojo = msculo

Tincin tricrmica de Gmri Tincin de WarthinStarry Tincin de Von Kossa

Tricrmica Argntica

Tie de tonos de marrn y negro los depsitos de fosfato inorgnico en hueso.

Tincin de Golgi Tincin de Bielchowsky

Argntica

Tincin de Jones

Tinciones para Microbiologa Tincin de Gram

Tincin de Ziehl-Neelsen Tincin de SchaefferFulton Tincin de Conklin Tincin de Grocott Tie endosporas de verde y bacterias en rojo Tie endosporas de verde, similar a Schaeffer-Fulton Deteccin de microorganismos, en especial fngicos. Sirve para diferenciar endosporas y bacterias

Tincin de Dieterle

Bsqueda de microorganismos, ej., Treponema pallidum

Tincin negativa

Tincin con mucicarmina

Tincin metacromtica

Es muy utilizada en microscopa Tie el exterior, pero electrnica. En no el interior de clulas microscopa ptica y estructuras para identificar microorganismos encapsulados. Sirve para diferenciar bacterias Tie las paredes con pared de celulares de polisacridos de polisacridos de un otras que no. (Ej intenso color rojo Cryptococcus son mucicarmina +) Tinciones para Organelas Produce colores prpuras y violetas en presencia de mucopolisacridos cidos sulfatados

Tinciones para Fibras Tincin de Weigert Tie fibras elsticas en tonos de azul y violeta

Tincin con orcena

Tie fibras elsticas en tonos de marrn y negro Tinciones para Carbohidratos

Tincin PAS

Tie carbohidratos y protenas glicosiladas de color rojo magenta Tie el almidn de azul, el glucgeno de amarillo y el resto en tonos de ocre

Tincin con Lugol

Tincin con Carmn

Tie el glicgeno de intenso color rojo.

Tincin argntica

Tincin con Rojo Congo

Tinciones para Protenas Dependiendo del fijado tie protenas y cidos nucleicos en tonos de negro y marrn Se utiliza con Tie el amiloide de un hematoxilina eosina intenso color rojo en patologa cuando se busca amiloide Tie mucopolisacridos cidos de color azul

Tincin con Alcian Blue

Tincin con Coomassie Brilliant Blue

Tie inespecficamente protenas de color azul

Tinciones para cidos Nucleicos Tincin de Feulgen Tie el ADN y cromosomas de color rojo-violeta Tie ADN y cromosomas de color verde fluorescente, ARN y ribosomas en color rojo fluorescente Tie ADN de color azul-celeste fluorescente

Naranja de acridina

DAPI

Bromuro de etidio Tinciones para Lpidos Tincin con Luxol Fast Blue Tcnica de la Hematina cida de Baker Tincin con Oil Red O Sudn lipoflica Tie la mielina de azul-celeste Tie fosfolpidos y nucleoprotenas de color azul negro Tie lpidos neutros de color rojo intenso

Tincin con Sudan Black B

Tie gotas de lpidos netros de color negro azulado

Tincin con Sudan II Tincin con Sudan III Tincin con Sudan IV

Tie lpidos neutros de color rojo

El aceite de inmersin: por qu se llama as, que funcin tiene, cuando y como se debe usar?
Seguir Lista de destacadas CHE_TED HE_RT preguntada hace 3 aos

Mejor respuesta Eleccin del votante dmdn respondida hace 3 aos

Esta es una pregunta de microscopia... su funcion es de darle mas nitidez a la muestra que se esta observando, solo se puede usar con el objetivo de 100X que es el objetivo de inmersion, y se usa aplicando 1 gota de aceite de cedro ( es el mas comn o bueno el que conozco ) entre el objetivo y la muestra. Calificar Comentario Microscopio

Importancia del microscopio en la micologa: Una vez analizados los datos macroscpicos del hongo, los cuales pueden variar mucho de unos ejemplares a otros, ayuda mucho y es imprescindible para la determinacin de muchos gneros y especies, el conocer los datos microscpicos. Los caracteres microscpicos, son mucho ms estables y fiables que los macroscpicos. Se puede secar el hongo o una parte de l, y guardarlo por muchos aos en un herbario. De tal manera, que varios aos despus, podramos determinar dicho hongo, compararlo con otro o incluso darnos cuenta que en su da se determin mal. Permite a los noveles o principiantes en el estudio de los hongos, a un coste relativamente bajo, determinar los propios hongos recolectados con bastante seguridad permitiendo un aprendizaje rpido y seguro, a la vez que nos da independencia y permite formarnos nuestras propias conclusiones e impresiones. Ayuda mucho, saber llegar macroscpicamente a los gneros y aproximarnos a las posibles especies de los hongos que queremos determinar, para saber qu buscar. Saber lo que buscar, ayuda mucho a reconocer los elementos o estructuras que vemos a travs del microscopio. Por otra parte, una vez tengamos los datos microscpicos, y junto con los datos macroscpicos recopilados, podremos ir avanzando en la determinacin del hongo e ir llegando al gnero y luego a la especie con certeza a reducir la posibilidad de equivocarnos. Nos ayudaremos de las claves y libros especializados, en los que vengan los datos microscpicos. Y como no! de la ayuda de otros miclogos, foros, listas y dems personas que estn dispuestas a echarnos una mano. Los reactivos microscpicos nos van a ayudar mucho a la hora de llegar al gnero e incluso a la especie. Por eso es muy importante, conocer todo lo que podamos sobre las reacciones microscpicas existentes. Sin duda el papel principal en el estudio microscpico recae en las esporas, siendo uno de los parmetros ms importantes a tener en cuenta. Tanto para las esporas, como para el resto de elementos o estructuras microscpicas; necesitaremos conocer las medidas, para lo cual tendremos que ayudarnos de un ocular micromtrico. Partes del microscopio Los microscopios pticos son instrumentos que nos van a permitir ver una imagen ampliada por medio de un conjuntos de lentes. Los que nos interesan, para la

microscopia de hongos estarn en el rango de ampliacin comprendido entre 40 y 1000 aumentos (con oculares de 10X).

Los oculares Deben su nombre a la proximidad a los ojos, los mas comunes suelen ser 10X esto quiere decir que aumentan la imagen que vemos diez veces. Cuando el microscopio tiene dos oculares (microscopio binoculares) tienen un mecanismo intermedio que sirve para ajustar la distancia interpupilar, su correcto ajuste ocurre cuando al mirar a travs de los dos vemos nicamente un circulo, un mal ajuste nos hara ver dos crculos o uno superpuesto en el otro.

Los Objetivos Son lentes con diferente tipo de aumento, se encuentran insertados en una pieza metlica llamada revolver y que gira en ambas direcciones Lo ms frecuente es encontrar revolver con cuatro objetivos que suelen ser de 4X 10X 40X 100X aumentos Cuando giremos el revolver para cambiar de objetivo debemos mantener la vista en ellos para evitar que rocen la preparacin y daar las lentes con ello.

Tipos de Objetivos

Acromtico: son los que se usan ms comnmente en la micologa. Se han corregido cromticamente para dos longitudes de onda, azul y rojo y la aberracin de esfericidad se fija para una longitud de onda, generalmente de color amarilloverde. Ventaja: son los mas baratos y fciles de encontrar. Inconveniente: solo se observa con calidad aceptable en el centro del campo de visin. Semiapocromticos: estn ajustados para corregir las aberraciones cromticas de dos o incluso tres colores bsicos y las aberraciones de esfericidad. Con ellos se suele tener una mayor apertura numrica. Es raro encontrarlos a la venta. Apocromticos: estn calibrados para 3 o cuatro longitudes de onda (cada una de ellas representa un color bsico) y la aberracin de esfericidad se corrige con azul y rojo. Bastante caros. Planacromticos: acromticos donde la curvatura de campo est eliminada. Esto es que el campo de visin es igual en el centro que en cualquier lado. Lo mejor que podemos adquirir sin arruinarnos. Ideales para fotografa (evidentemente sin contar con los ltimos). Planapocromticos: apocromticos donde la curvatura de campo est eliminada. Son los ideales a fecha actual pero el precio nos hace descartarlos. Existen adems los Semiplanacromticos pero no merecen la pena pues la diferencia de precio con los Planacromticos no es significativa (por lo general). Mesa de trabajo Platina

Es la plataforma donde colocaremos las preparaciones para su observacin, tiene un orificio central por donde pasa la luz procedente de la fuente de iluminacin. Tiene dos pinzas para sujetar el portaobjetos y dos tornillos que nos van a permitir mover la preparacin de adelante a atrs, de izquierda a derecha y viceversa.

Condensador:

Justo debajo de la mesa de trabajo se encuentra el condensador, es un sistema de lentes que concentra la luz de la fuente de iluminacin hacia la preparacin. En su interior tiene un diafragma-iris con el que podremos condensar (limitar) el haz de rayos de luz que atraviesa el sistema de lentes, eliminando los rayos demasiados desviados consiguiendo aumentar o disminuir el contraste, obteniendo una mayor nitidez en la visin Tiene un filtro de color azul para corregir el exceso de amarillo de la luz y proteger la visin. Este filtro es intercambiable por otros de distinto color con los que se puede obtener distintos efectos. Fuente de iluminacin

Esta se encuentra en la parte inferior del microscopio y encargada de proporcionarnos la iluminacin para ver la preparacin tiene dos pulsadores uno de encendido y apagado y otro para regular la intensidad de luz.

Fuente de iluminacin

Esta se encuentra en la parte inferior del microscopio y encargada de proporcionarnos la iluminacin para ver la preparacin tiene dos pulsadores uno de encendido y apagado y otro para regular la intensidad de luz.

Tercer ocular En los microscopios trioculares tienen un tercer ocular diseado para instalar una cmara digital especficas para microscpicos o en su defecto por medio de unos adaptadores tambin podremos acoplar nuestra cmara digital para resultarnos mas cmoda la fotografa.

Macromtrico y micromtrico Son los mando que estn situados en la parte baja del pie que se usan para enfocar, subiendo y bajando la mesa de trabajo. Con el de mayor tamao (macrometico) subiremos y bajaremos de manera rpida mientras que con el mando pequeo enfocaremos con ms precisin ya que son micras el desplazamiento que se obtiene con este mando.

Utilizacin del microscopio En primer lugar encenderemos la luz del microscopio y ajustaremos los oculares a nuestro espacio interpupilar. Deberemos tener colocado el objetivo de menor aumento 4X y la mesa de trabajo (Platina debe estar en su posicin mas baja y totalmente recogida sin que ninguna pieza sobresalga de ella. Cuando terminemos de trabajar con el, despus de realizar la limpieza que le corresponda, esta debe ser siempre la posicin en que lo guardemos.

Seguidamente colocaremos la preparacin sobre la mesa de trabajo y procederemos a enfocar con el tornillo macrometrico, una ver enfocado cambiaremos al siguiente objetivo, siempre sin saltarnos el objetivo inmediatamente superior, y as lo haremos hasta llegar al de 40x que ser el objetivo que mayormente usemos. En el objetivo de 40X Sujetaremos el tornillo micromtrico y jugaremos (subir y bajar ligeramente y continuamente) para tener profundidad de campo ya que el microscopio nos da una visin bidimensional . Para el calibrado del ocular micromtrico necesitamos de un portaobjeto micromtrico ya que la regla que aparece en el ocular, en muchos casos no corresponde a ninguna unidad de medida. Calibrado del ocular micromtrico Con el calibrado del ocular micromtrico conseguiremos determinar el valor que tiene cada divisin que vemos en el, generalmente suele tener cien divisiones. Si es posible este proceso lo dejaremos en manos de un experto, o alguien que lo haya realizado con anterioridad o lo realizaremos bajo su supervisin, ya que el portaobjeto micromtrico suele resultar costoso y romperlo no seria del todo complicado para los que no tienen experiencia con el microscopio. Si no tuvisemos a nadie que nos ayudase estos serian los pasos a seguir: 1- Sustituiremos el ocular del microscopio por el ocularel ocular micromtrico 2- Bajaremos la mesa de trabajo al punto mas bajo y colocaremos el objetivo de menor aumento 4x 3- Colocaremos el portaobjeto micromtrico en la mesa del microscopio y enfocaremos hasta ver las dos escalas micromtricas 4- Situaremos una escala sobrepuesta sobre la otra y haremos que coincidan en el punto 0 5- Buscar una divisin del ocular que coincida con otra del portaobjeto micromtrico tomando el mximo de divisiones posibles tanto en el ocular micromtrico como en el portaobjeto micromtrico 6- Por una regla de tres se calcula la medida en micras a lo que corresponde cada divisin del ocular 7 Este proceso lo realizaremos con el resto de objetivos

Utilizacin de la cmara para fotografa microscpica No resulta fcil realizar una buena fotografa microscpica, ser tan importante el buen conocimiento de nuestra cmara como la buena realizacin de la preparacin a fotografiar Con prctica conseguiremos poco a poco ir mejorando los resultados Existen cmaras en el mercado exclusivas para la fotografa microscopia que se introducen dentro del tercer ocular o en su defecto en el tubo donde va uno de nuestros ocular de visin Estas cmaras adems de costosas suelen carecen de una buena lente ptica por los que las fotografas realizadas carecen de buena calidad, existen algunos modelos expresamente diseados por los propios fabricantes de microscopios que serian de un elevadsimo coste A favor tienen que son muy cmodas de usar ya que se conectan al ordenador mediante un cable USB viendo la imagen en la pantalla de este, facilitndonos la realizacin de la fotografa y la seleccin de la zona a fotografiar Tenemos tambin unos adaptadores para nuestra cmara digital por medio de adaptadores, anillos y oculares de rosca que conseguirn unir a los tubos de nuestro microscopio consiguiendo unos resultados muy buenos. Existen ciertos modelos de cmaras digitales en el mercado que podemos conectar a nuestro pc mediante el cable Usb con las que obtendremos las mismas comodidades que las anteriores Este es el mejor mtodo por que nos permite en un futuro cambiar de cmara si necesidad de cambiar el resto del materia, adems de la gran calidad en las fotografas que podemos obtener. Con un coste bajo Para los que no dispongan de estos adaptadores para la cmara tambin podemos realizar fotografa. Para la realizacin de esta, colocaremos la cmara sobre un trpode y haremos coincidir el objetivo de la cmara con el del microscopio, aproximndolos lo mejor posible Existen en el mercado cmaras con unos objetivos muy pequeos que se acoplan al ocular del microscopio y con las que obtendremos buenos resultados Mantenimiento del microscopio Solamente se requiere de uno pocos consejos para el mantenimiento de un microscopio. Al terminar de trabajar con el, dejaremos el objetivo de menor aumento, dejaremos la mesa de trabajo (Platina) completamente recoga, sin quedar ningn elemento que sobresalga de ella.

Siempre que usemos el objetivo de inmersin debemos eliminar de el los restos de aceite Lo ideal es que utilicemos toallitas especiales para la limpieza de lentes con un compuesto tambin diseado para la limpieza de las lentes llamado xilol, el mismo mtodo emplearemos para la limpieza de las dems lentes siempre que lo necesiten y si abusar de ello. No utilizaremos nunca alcohol para limpiar las lentes ya que su uso reiterado, daar las lentes y su sujecin. Cubriremos con una funda o bolsa para que no coja polvo y si lo vamos a dejar un tiempo continuado sin usar lo guardaremos en su caja. Eleccin de microscopio A la hora de adquirir un microscopio debemos tener presente que este debe reunir las caractersticas necesarias para el uso que le vamos a dar. Como ocurre con todas nuestras aficiones, en un principio adquirimos herramientas ms econmicas para luego ir mejorndolas con el tiempo. Lo mismo nos ocurrir con el microscopio, no debemos hacer un gran desembolso para luego dejarlo guardado en un rincn cogiendo polvo. Es recomendable que el equipo que elijamos no este muy desfasado, para si es necesario, ir aadindole mejores elementos que el equipo que elijamos no este muy desfasado, para si es necesario, ir aadindole mejores elementos. Lo mnimo que le podemos pedir a un micro es lo siguiente: Que la longitud del tubo sea estndar (160 mm.) Que sea binocular (por comodidad, aunque se puede uno apaar con un monocular) y si se quiere comodidad para hacer fotografa, triocular (aunque con un binocular e incluso un monocular se pueden hacer). Que tenga al menos 3 objetivos (mejor 4 e ideal 5) de 10X, 40X y 100X (con 4 aadir el de 4X y con 5 aadir uno de 60X o de 20X). La calidad y la cualidad de dichos objetivos marca la diferencia en los precios: normales (acromticos), mejores (semiplanacromatico), ideales (planacromaticos) y de soadores (planapocromticos). Que tengan una luz de al menos 20 w. No le daremos menos importancia a la mecnica, como son los tornillos de enfoque y a la mesa de trabajo (stage) con ejes de coordenadas X e Y para poder mover el portaobjeto de forma milimtrica y cmoda. Aparte debemos adquirir un objetivo micromtrico para poder realizar mediciones. Errores a evitar

-. Debemos aprender a reconocer las burbujas de aire y no confundirlas con esporas de paredes gruesas. -. No confundir los basidiolos (basidios inmaduros) con cistidios. -. A la hora de la recoleccin de hongos para su observacin en el microscopio es importantsimo guardarlos independientemente a poder ser envolver en papel de

aluminio para evitar la contaminacin de las esporas de unos con otros, ya que nos llevara a cometer grandes errores. -. Nos aseguraremos ante una reaccin negativa, del buen estado de los reactivos y que no sean demasiado viejos (se puede comprobar la validez de un reactivo probndolo sobre un hongo ya conocido y viendo su resultado). -. Si el microscopio no viniese montado (cosa que es frecuente) a la hora de montar los objetivos en el revolver, se deben de montar de menor a mayor y habituarse a la hora de usarlo en empezar por el de menor aumento e ir pasando progresivamente a mas aumento y acostumbrarse a hacerlo as para evitar golpear los objetivos de mayor aumento (a no ser que el micro tenga tope). -. No utilizaremos el portaobjetos micromtrico para realizar la elaboracin de una preparacin que luego vallamos a observar en el microscopio. -. A la hora de sustituir la bombilla de la fuente de alimentacin debemos tener presente las indicaciones del fabricante de nuestro microscopio y respetar el voltaje de dicha bombilla. Colocar una bombilla, con distintas especificacin en el microscopio va a reducira notablemente su calidad del visionado Componentes de un microscopio: