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RECHERCHE DES CLOSTRIDIUMS SULFITO-REDUCTEURS

Dans les l eau et la poudre de lait

Rappel: caractristiques du Genre Clostridium


Bactrie anarobie stricte, catalase (-), oxydase (-), capable de sporuler, rduis les sulfites (SO32-) en sulfures (S-). Prsent dans le sol sous forme de spores, ainsi que dans l'intestin des Hommes et des animaux. L'espce Clostridium perfringens pousse 46C, rsiste deux antibiotiques: la cyclosrine et la nomycine. Il s'agit d'une espce pathogne par voie orale; responsable de ToxInfections Alimentaires.

Valeur d'indice
Cas d'analyse de l'eau
On cherche les spores de tous les Clostridium sulfitoreducteurs car ils sont tmoins de contaminations fcales anciennes (les spores rsistent au temps). Rmq: on peut remplacer Clostrodium par Anarobies car Cl. est le seul genre qui soit anarobie, sporul et sulfito-rducteur.

Cas d'analyse des aliments


On recherche les anarobies sulfito-rducteurs 46C (donc que des bactries ici), on recherche alors que Cl. perfringens car il est le seul crotre 46C.

Milieux et Techniques
Toujours conditionns en tubes haut, gloses rgnres avant utilisation (pour liminer les gaz dissouts). Toujours prsence de Soufre oxyd, gnralement des sulfites et des Sel de Fer3 pour rvler les sulfures.

Glose glucose viande-foie


FORMULE - TYPE (pouvant tre ajuste de faon obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu : - Peptone viande-foie .......................................................................30,0 g - Glucose............................................................................................2,0 g - Amidon soluble ................................................................................2,0 g - Sulfite de sodium .............................................................................2,5 g - Citrate de fer ammoniacal................................................................0,5 g - Agar agar bactriologique..............................................................11,0 g pH du milieu prt--lemploi 25C : 7,6 0,2.

Objectif :
Le dnombrement des spores danarobies sulfitorductrices permet de dceler une prsomption de la prsence de Clostridium perfringens ( C. perfringens prsomptif ). Cette mthodologie est utilise pour les microorganismes danarobies strictes ou les microorganismes mtabolisme fermentaire dont le dveloppement est favoris par lanarobiose et aussi les spores danarobies sulfitorducteurs

Principe :
La mthodologie propose permet la destruction des formes vgtatives et le seul dnombrement des spores ayant rsist au traitement thermique. Les microorganismes anarobies sulfitorducteurs sporulent et sont capables de se dvelopper en condition danarobiose et de manifester des proprits sulfitorductrices. Le milieu VF contient de lamidon qui favorise la germination des spores, du sulfite qui est rduit en sulfure qui prcipite avec les ions ferriques en formant un prcipit noir. Outre la thermorsistance des spores, la slection est base sur la culture en anarobiose stricte. (J.-P. GUIRAUD, 1998)

Mode opratoire :
Prparation du milieu : - Faire fondre un flacon de VF puis le refroidir 45c. - Ajouter une ampoule dalun de fer et une ampoule de sulfite de sodium. - Mlanger soigneusement et aseptiquement. - Maintenir le milieu dans une tuve ou au bain-marie 45c jusquau moment de lutilisation. Ensemencement et incubation : - Prparer 2 tubes striles contenant 5 ml de la prise dessai. - Mettre les tubes au bain thermostat rgl 80c pendant 10 mn et les refroidir immdiatement sous courant deau. - Verser dans chacun des 2 tubes 15 ml de la glose VF en surfusion. - Homogniser sans introduire des bulles dair. - Laisser solidifier sur la paillasse puis les incuber ( ) 37c pendant 24 48h.

Lecture et interprtation :
- Les colonies, dans la profondeur de la glose, donc en anarobiose, entoures dun halo noir (rduction des sulfites en sulfure et prcipitation du sulfure de fer) sont des colonies correspondant aux spores thermorsistantes danarobies sulfitorducteurs. - Dnombrer les colonies isoles, entoures dun halo noir ; cette numration peut tre effectue avant la fin du temps dincubation si les colonies ont tendance confluer.

Merci pour votre attention


Mme SAFAR ZITOUN Djazia - PSEP1 MICROBIOLOGIE

AU TRAVAIL!!!!!!