Serie Roja (Glbulos Rojos)

Determinacin Tcnica Obtener sangre por va venosa y colocarla en un tubo con anticoagulante E.D.T.A. Llenar la pipeta de Sahli con la sangre aforando hasta la marca de 20, equivalente a 0.02mL (20L). Limpiar el exceso de sangre de la pipeta. Depositar la sangre en un tubo que contenga 5ml de reactivo de Drabkin. Homogenizar mediante burbujeo con la pipeta de sahli. Dejar reposar 10min a temperatura ambiente. Leer a 540 nm ajustando a cero con el blanco de reactivos. Valores de Referencia Hombres 13 a 18 g/dl Mujeres 11 a 16 g/dl Nios 12 a 14 g/dl Recin Nacidos 16 a 22 g/dl.

Hemoglobina (Cianometahemoglobina)

Determinacin de Hematocrito (Macro y Micro)

Macro mtodo
Obtener sangre venosa con anticoagulante. Con una cnula metlica conectada a una jeringa o con una pipeta Pasteur, aspirar sangre completa del tubo de muestra. Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca 0-10. Centrifugar a 3000rpm durante 30 min. Realizar la lectura de hematocrito (columna de glbulos rojos) Escala de abajo hacia arriba.

Hombres 40 a 54% Mujeres 37 a 47% Nota: ndices hematticos. Glbulos rojos por calculo No Gb/mm3=Hto+10% del Hto x 100 000. VCM VCM= Hto en % /No eritr/mm3 (x 10) Adultos 81 a 100 fl HCM HMC= Hb/No eritr/mm3 (x 10) Adultos 27 a 35 pg. CHCM CHCM= Hb/ Hto % (x100) 32 a 35%

Micro mtodo
Se obtiene sangre venosa o capilar. Tomar un tubo capilar y llenarlo tres cuartas partes. Sellar el tubo capilar en extremo contrario al llenado. Centrifugar durante 10 min en la micro centrfuga (10000rpm). Leer en lector de micro hematocrito. Colocar el capilar centrifugado en el canal escavado con el extremo abierto hacia el punto de referencia rojo. La lnea blanca debe coincidir con la lnea marcada a la mitad del canal escavado. Girar el disco con el ngulo de 90 hasta que la lnea de la izquierda coincida con el inicio del paquete globular y la lnea derecha coincida con el lmite del plasma.

Velocidad de Sedimentacin Globular

Obtener sangre por extraccin venosa. Con cnula metlica o pipeta Pasteur llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca 0-10. Colocar en la gradilla de sedimentacin verticalmente durante 1 hora. Medir la velocidad de sedimentacin Globular despus de una hora (Observar cada 15 min)

Hombres 0 a 7 mm/hora Mujeres 0 a 15 mm/hora Nios 0 a 15 mm/hora

Recuento de Reticulocitos

Colocar en un tubo de ensaye limpio y seco 12 gotas de sangre y 12 gotas de azul de cresil brillante. Mezclar e incubar durante 10 a 15 min a bao Mara a 37C. Decantar el sobrenadante. Con el sobrenadante, mezclar y realizar frotis. Enfocar el microscopio a 10x y 100x y contar el nmero de Reticulocitos en 1000 eritrocitos. Mediante una proporcin directa calcular el % de Reticulocitos en 1000 eritrocitos como: % Reticulocitos= No de Reticulocitos x 100/ 1000eritrocitos

Adultos 0.5 a 1.5% Recin Nacidos 2.5 a 6.0%

Determinacin Cuenta total de leucocitos

Tcnica Obtener sangre por puncin venosa Llenar la pipeta de thoma para GB hasta la marca 0.5 (50 L) evitando la formacin de burbujas Limpiar el exceso de sangre en la superficie exterior de la pipeta con gasa o papel absorbente El volumen de la sangre debe permanecer en la marca 0.5 si el volumen esta por arriba de esta eliminar el exceso por contacto con la gasa o papel Con el extremo libre de la pipeta casi vertical; dentro del contenedor de liquido turk aspirar lentamente hasta la marca 11 dilucin 1:20 evitar formar burbujas Homogeneizar durante dos minutos con un manualmente o en agitador mecnico Limpiar la cmara de recuento cubrehematimetro Retirar el Parafilm de la pipeta y dejar caer las primeras 4 gotas Llenar la cmara de neubauer de ambos extremos Enfocar con objetivo seco dbil (10x) Identificar los 4 cuadrante donde se realizara el conteo Calcular numero de leucocitos por mm3 GB/mm3=No. GBx20x10/4 No GBx50 Hacer un frotis sanguneo Colocarlo sobre el puente de tincin Al frotis se le agrega colorante de Wright cubriendo toda la extensin y se deja reposar 8 min Enseguida se le agrega el buffer para Wright y se deja reposar 10 min con la pipeta Pasteur soplar la muestra para mezclar los reactivos lavar a chorro de agua procurando no daar la pelcula de sangre dejar secar el frotis el a temperatura de pao que no deje pelusa y colocar el

Valores de referencia Adultos: 4500 a11000xmm3

Caractersticas morfolgicas y tintoriales de leucocitos

ambiente colorante

limpiando

excedente

enfocar con el objetivo 10x y observar al microscopio con el objetivo de inmersin 100x

Cuenta diferencial de leucocitos y valores absolutos

hacer un frotis sanguneo inmediatamente despus de tomar la muestra colocar el frotis en el puente de tincin y

Linfocitos:18-15% 28% 1000-4200 Monocitos: 3-10% 7% 100-

teirlo por la tcnica de Wright soplar el frotis con ayuda de la pipeta Pasteur para mezclar los reactivos enjuagar el frotis a chorro de agua dejarlo secar a temperatura ambiente enfocar con el objetivo de 10x y observar al microscopio el con de el objetivo los de inmersin 100x realizar conteo en el diferentes del frotis leucocitos Recuento de plaquetas centro

800 Eosinofilos:1-4% 2% 100200 Basfilos:0-1% 1% <100 Neutrfilos totales:50-70% 60% 1500-7000 Neutrfilos segmentados:45-65% 60% 2000-6000 Neutrfilos en banda:2-7% 4% 100-800

desplazando en greca los dif. Leucocitos se registran en el contador manual hasta contar 100 clulas calcular los dif. Leucocitos obtener una muestra sangunea por puncin venosa homogeneizar la muestra y llenar la pipeta de toma para glbulos rojos hasta la marca 0.5 limpiar el excedente de sangre y llenar con liquido diluyente (oxalato de amonio al 1%) hasta el aforo 101 sin formar burbujas homogeneizar la dilucin manualmente o en agitador mecnico desechar de 3.5 gotas cargar la cmara de neubauer por ambos extremos dejar reposar 15 min dentro de una caja petri con papel hmedo para evitar la desecacin (cmara humeda) contar el numero de plaquetas en todo el cuadro central el numero de plaquetas se determina de la sig manera plaquetas/mm3 contadas x200 mtodo indirecto realizar un frotis teir por tcnica de Wright o giemsa enjuagar frotis y dejar secar contar 1000 eritrocitos y simultneamente las plaquetas que se encuentran entre estos el numero de plaquetas se relacionan con el nmero total de eritrocitos contenidos en 1mm cubico de sangre el nmero de glbulos rojos se obtienen realizando un micro hematocrito =No de plaquetas

150 000 a 450 000 plaquetas por mm3

 Tiempo de protrombina(TP) y del tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPa)

plaquetas/mm3=No contadas x No GR/1000 tiempo de protrombina

de

plaquetas Protrombina: Un plasma normal debe coagularse en 12-13seg Tromboplastina parcial activada: Menos de 45 seg

obtener muestra sangunea por puncin venosa con tubo con citrato de sodio como anticoagulante centrifugar la sangre a 3000 rpm durante 5 min separar el plasma y colocar 0.1 ml del mismo en dos tubos 13x75 mm e incubarlos a 37C durante 2-3 min

aada 0.2 ml de tromboplastina liquida activada con calcio y empezar a cronometrar el tiempo

con un aplicador de madera agitar el tubo dentro del bao mariana durante 2-3 seg despus dejarlo reposar hasta 10 seg en seguida examine el tubo hasta que aparezca el coagulo en este momento se detiene el cronometro

se repite el procedimiento para que se obtengan por lo menos dos registros (TTPa) Centrifugar la muestra y separa el plasma Colocar en un tubo 0.1mL de tromboplastina parcial activada e incubar 2min a 37C

Adicionar 0.1 mL de plasma agitando rpidamente y colocar en bao mara a 37C por 2min

Adicionar cloruro de calcio 0.02M iniciar conteo del tiempo con el cronometro a los 20 seg observar cuidadosamente la muestra removiendo con un aplicador

Para el cronometro hasta la aparicin de los primeros hilos de fibrina

ndices hematicos

Numero de glbulos rojos por calculo No de GR/mm3=hematocrito+10%del de ndices hemticos o Htox100 000 Clculos constantes de wintrobe Volumen corpuscular medio (VCM) VCM=hematocrito No eritrocitos en /mm3 porcentaje =millones /No de eritrocitos/mm3 x 10 (fL) eritrocitos/1 000 000 (HCM) HCM=hemoglobina(g/dL)/No

eritrocitos/mm3x10

Unidades picogramos(pg) CHVM=hemoglobina g/dL/hematocrito en porcentaje x 100