PRUEBA DE RODIZONATO DE SODIO Objetivo: Que el alumno aprenda a realizar la tcnica de Rodizonato de sodio as como la identificacin de los metales

provenientes de la plvora. Introduccin Cuando se dispara un arma de fuego la mano de !uien lo "ace puede resultar maculada por gases # derivados nitrados provenientes de la deflagracin de la plvora plomo # bario. Con base en este "ec"o la prueba de Rodizonato de $odio tiene como finalidad identificar el bario # el plomo !ue pudieron "aber resultado en la mano de !uien dispar. %al identificacin s posible en virtud de la coloracin !ue resulta de la reaccin !umica entre las substancias de referencia # los elementos se&alados !ue son partes integrales de los cartuc"os a saber: plomo del pro#ectil # bario del fulminante. 'l (cido clor"drico al )* tiene la cualidad de ser inofensivo para la piel "umana sin embargo es posible abrir los poros # fijar los elementos de plomo # bario !ue pudieron "aber !uedado en las manos de !uien "a#a efectuado un disparo. +l aplicar un p, de -../ el rodizonato de sodio reacciona con el plomo # el bario obteniendo as rodizonato de plomo # rodizonato de sodio los cuales presentan una reaccin colorimtrica !ue puede ser identificada macro # microscpicamente. Reactivos 0oteros 1aminillas portaobjetos 2cido clor"drico al )* u +cido ntrico. 2cido rodizonico al 3.-* 4sal de rodizonato de sodio5 $olucin buffer a un p, de -../. +gua destilada. 6icroscopio estereoscopio. %ela blanca de algodn limpia # libre de apresto 4%ela cabeza de Indio5 6aterial de laboratorio

7reparacin de reactivos ,Cl al )*. // mililitros de agua destilada ) mililitro de (cido clor"drico. Rodizonato de sodio al -*. 3.- gramos de rodizonato de sodio )33 mililitros de agua destilada.

$olucin 8uffer con p, de -../ )./ gramos de 8itartrato de sodio. ).9 gramos de (cido t(rtarico. )33 mililitros de agua destilada

%cnica ). Recortar la tela en cuadros de - por - centmetros # "umedecerla con dos o tres gotas de (cido clor"drico al )*. -. 1impiar con fragmentos de tela diferentes las regiones palmar # dorsal de ambas manos fundamentalmente las zonas anatmicas mas frecuentes de maculacin. :. Colocar los fragmentos de tela en laminillas porta;objetos. <. 7oner dos gotas de solucin buffer en la parte de cada fragmento de tela !ue se utilizo para "acer la limpieza. 9. 7oner dos gotas de rodizonato de sodio al 3.-* en cada una de las partes de tela tratadas !umicamente con anterioridad. =. Observar micro # macroscpicamente los fragmentos de tela. .. $e deber(n recoger lgicamente en total cuatro fragmentos de tela o sea los correspondientes a las regiones palmar # dorsal de ambas manos. Interpretacin de resultados $e obtiene una prueba positiva con las siguientes coloraciones: Coloracin rosa marrn>>>>>...8ario. Coloracin rojo escarlata>>>>.>7lomo 6ezcla de los colores anteriores>>..7lomo # 8ario. $e obtiene una prueba negativa cuando la coloracin de la solucin de rodizonato de sodio desaparece al cabo de unos minutos.

PRUEBA DE WALKER Objetivo: Que el alumno aprenda a realizar la tcnica de ?+1@'R en ropas u objetos as como realizar la modificacin de la misma. Introduccin: 'sta prueba tiene por objeto identificar la presencia de derivados nitrados en la ropa al rededor del orificio de entrada del pro#ectil del arma de fuego a fin de determinar si el disparo fue prAimo o a una distancia tal !ue no permita la maculacin de los derivados nitrados de la deflagracin de la plvora. +l producirse un disparo con arma de fuego se desprenden como resultado de la deflagracin de la plvora derivados nitrogenados nitrito de potasio # otros provenientes del nitrato de potasio segBn la siguiente reaccin !umica: - @CO: - @CO- D O-

7or lo tanto el nitrato de potasio 4@CO -5 !ueda depositado alrededor del orificio de entrada del pro#ectil. 'ste compuesto !umico es identificado mediante la reaccin !umica !ue se desarrolla sobre una "oja de papel fotogr(fico en el cual se forman los compuestos diazo de color naranja o rosa el !ue se aprecia sobre la superficie de papel fotogr(fico previamente desensibilizado. Reactivos 2cido sulfanilico al 3.9* en solucin acuosa. +lfa naftil amina al 3.9* en solucin alco"lica. 2cido actico al -9* 7apel fotogr(fico Eodabromide grados - : 4u papel opalina5 7lanc"a 0asa tela de algodn. +plicadores con punta de algodn. Cinta ad"erible. 1(piz graso. ,ojas blancas 4recicladas5 6aterial de laboratorio

7reparacin de reactivos 2cido sulfanilico al .9* <9 mililitros de agua destilada. ).3 gramo de acido sulfanilico.
3

+lfa neftil amina al .9* <9 mililitros de alco"ol. ).3 gramo de alfa naftil amina.

2cido actico al -9* -93 mililitros de agua destilada. =-.9 mililitros de (cido actico.

%cnica. ). Identificar localizar # ubicar los orificios provocados por el paso de pro#ectil de arma de fuego de nuestra prenda de vestir !ue ser(n analizados -. Fesensibilizar el papel fotogr(fico con una solucin de "iposulfito durante tres minutos lavar en agua tres veces # dejar secar. :. +plicar (cido sulfanilico al 3.9* sobre toda la superficie con un algodn embebido dejar secar # repetir la operacin tres veces. <. +gregar alfa naftil amina al 3.9* sobre toda la superficie con un algodn embebido dejar secar # repetir la operacin tres veces. 9. $obre la mesa de trabajo colocar el papel fotogr(fico con la superficie gelatinosa "acia arriba # sujetarlo en sus cuatro vrtices con cinta ad"erible. =. 1a parte problema de la prenda de vestir se coloca sobre la superficie gelatinosa del papel fotogr(fico. .. Con l(piz de grafito se marca en el papel fotogr(fico el orificio provocado por el pro#ectil. G. $obre la prenda se coloca un lienzo delgado # limpio 4gasa5 previamente "umedecido con la solucin de (cido actico # se coloca encima de el un lienzo seco durante : a )3 minutos 4dependiendo del tipo # grosor de la tela de nuestra prenda de vestir5. /. Retirar con cuidado todos # cada uno de los objetos !ue se colocaron sobre el papel fotogr(fico. Interpretacin de resultados 1a prueba se considera 7ositiva cuando se observa en el papel fotogr(fico puntos rojizos o rosados los cuales segBn la distancia a la !ue se "a#a "ec"o el disparo varan de tama&o nBmero # distribucin. 'sta prueba se considera altamente especfica en virtud de !ue ningBn otro radical produce esta reaccin. 7or lo tanto no es posible obtener falsas positivas.

PRUEBA DE LUNGEN Objetivo: Que el alumno aprenda a realizar la prueba de 1HC0'C as como la modificacin de la misma. Introduccin 'sta prueba recibe tambin el nombre de I0RI'$$J # su objetivo es detectar nitritos en el interior del (nima del ca&n de un arma de fuego para poder establecer si esta arma fue disparada o no. $e trata de una prueba de origen Qumico # sus resultados son colorimtricos debido a la reaccin !ue se logra entre los nitritos recogidos del (nima del ca&n del arma de fuego # el material !umico !ue se utiliza. Reactivos: +plicadores de madera. 4el largo depende del ca&n5 7ortaobjeto de vidrio 6icroscopio estereoscpico Fifenilamina o Rodizonato de sodio 2cido sulfBrico concentrado +cido Citrico u +cido Clor"idrico 4o se prepara al )*5 +gua destilada 6aterial de 1aboratorio

7reparacin de reactivos: Fifenilamina ) gramo>>>>>>>>>>.4a5. +cido sulfBrico concentrado G9 mililitros>>..4b5. +gua destilada )9 mililitros>>>>>>>>4c5. 'n el vaso se pone el 4a5 m(s el 4c5 # gota a gota el 4b5. KKKK $i se prepara Rodizonato de sodio se trabajar( 3 9 gramos en )33 m1 de agua destilada. %cnica ). $e prepara un "isopo con la fibra de vidrio 4en caso de !ue no se consiguiera sta se prepara con algodn5 u "isopo. -. $e introduce en el (nima del ca&n del arma de fuego en cuestin "aciendo fuertes fricciones en el interior con la finalidad de colectar tanta muestra sea necesaria. :. +l "isopo con la muestra colectada se le adiciona gota a gota el reactivo de 0riess. se coloca en un portaobjeto.

<. se observar( la reaccin !ue se produce bajo el microscopio con la finalidad de identificar la coloracin adecuada !ue indi!uen la positividad.

Interpretacin de resultados 1a prueba ser( positiva cuando se observe una coloracin azul permanente. 1a prueba ser( negativa cuando no aparezca ninguna coloracin. Nota.-Hna prueba !ue tiene la misma finalidad # fundamento es la prueba de Rodizonato de sodio modifi ada se realiza tomando la muestra del (nima del ca&n mediante un "isopo con (cido clor"drico al )* se le agrega una solucin buffer a p, de -../ as como unas gotas de solucin acuosa de rodizonato de sodio al -* una coloracin rojiza y/o rosada vista macro y/o microscpicamente demostrarn una positividad de la prueba.

PRUEBAS RELA!IONADAS !ON DELITOS SE"UALES Introduccin 'ntre las "uellas !ue pueden resultar de la comisin de un delito como la violacin el estupro # de algunos delitos contemplados como faltas a la moral figuran las manc"as de semen como testimonio acusador # prueba importante. 'l semen es un fluido producido por los rganos seAuales masculinos. Hsualmente es de color blanco amarillento pero puede ser pardo con pigmentos de "ematina tiende a amarillo verdoso cuando pasa el tiempo. Consta de dos elementos distintos: las clulas o espermatozoides !ue proceden de los tubos seminferos del testculoL # el plasma seminal !ue procede del epidmio prstata vesculas seminales # gl(ndulas de CoMper. 'l plasma seminal sirve como soporte ve"culo # medio de nutricin # de estabilizacin al espermatozoideL el promedio de e#aculacin es de - a < ml1 conteniendo espermatozoides de .3 333 333 a )93 333 333 por m1. 7ruebas presuntivas o Nluorescencia a la luz ultravioleta 4determinacin de la presencia de fluidos biolgicos OsemenP5. 7ruebas Confirmatorias o Feterminacin por placas Inmunocromatogr(ficas de la protena p;:3 en esta prueba se presenta la formacin de un complejo inmunolgico anticuerpo;antgeno; anticuerpo. o Observacin fresco5. 7ruebas de tincin: C"rismas %ree Consideraciones tcnicas 's importante !ue se recaben las muestras en un rango no ma#or de setenta # dos "oras despus de ocurridos los "ec"os #a !ue despus de este tiempo por la acidez de la vagina el ba&o los lavados pomadas duc"as vaginales !ue se realice la personas no ser( posible determinar la presencia de l!uido seminal. microscpica de espermatozoides 4en

ESTUDIO DE #EGETAL #ERDE $IDENTI%I!A!I&N DE !ANNABIS' Objetivo: Que el alumno aprenda a reconocer observar e identificar a la 6+RI,H+C+ 4genero Cannabis5 por medio de diferentes pruebas colorimtricas. Introduccin: Cannabis sativa 4 ()amo o ma*i+,ana5 es una especie "erb(cea de la familia Cannabaceae con propiedades psicoactivas. 's una planta anual originaria de las cordilleras del ,imala#a +sia. 1os seres "umanos "an cultivado esta planta en el transcurso de la "istoria como fuente de fibra teAtil aceite de semillas # como alimentos en el caso de las variedades sin contenido de %,C 4c(&amo5. $e "a utilizado durante milenios la planta como una medicina con registros escritos !ue datan de -.:. a.C. Como droga # como una "erramienta espiritual. $u fibra tiene usos variados inclu#endo la manufactura de vestidos cuerdas ropa # papel. +un!ue la principal sustancia psicoactiva del cannabis es el tetra"idrocannabinol 4%,C5 la planta contiene en total cerca de =3 cannabinoides 4entre stos: cannabinol cannabigerol cannabicromeno cannabiciclol5 !ue se presenta en muc"as variedades siendo la m(s activa la Q/;%,C. 7resenta pelos tectores curvados aislados o formando parte de la epidermis. +lgunos de ellos pueden estar engrosados en la base con cristales de carbonato c(lcico 4cistolitos5. 1as br(cteas de la inflorescencia femenina poseen abundantes pelos secretores con pie pluricelular pluriseriado # cabeza globulosa constituida por G;)= clulas. 6aterial: O;dianisidina 6etanol 7laca eAcavada de porcelana +gua destilada Rainillina +cetalde"do +cido Clor"drico 'tanol 6icroscopio estereoscopico 6aterial de 1aboratorio

%cnicas: P*,e-as de o*ienta i.n $ o/o*im0t*i as' o 7rueba de +zul r(pido 4Ortodianisidina5 o 7rueba de Fu!uenois Observacin microscpica y macroscopicamente (el genero masculino y femenino)

1 REA!!I&N DE O 2 DIANISIDINA $AZUL R3PIDO' 'n un tubo colocar 93 miligramos 4aproAimadamente5 del vegetal verde triturado adicionar ) 3 m1 de metanol # agitar a fin de eAtraer los principios activos decantar # al eAtracto agregarle 3 9 m1 de la solucin de O S dianisidina 4solucin al 3 9* de O;dianisidina en agua5.

Interpretacin de resultados: $i se "ace aparente una coloracin roja en menos de 9 min. se trata de un resultado positivo.

1 REA!!I&N DE DU4UENOIS 5ODI%I!ADA + una pe!ue&a parte de la muestra triturada se le adicionan ) 3 m1 del reactivo + 4disolver <.3 gramos de vainillina D 9 3 m1 de acetalde"do en -33 m1 de etanol5 agitar # posteriormente agregar - gotas de (cido clor"drico.

Interpretacin de resultados: 'l resultado se considera positivo cuando aparece una coloracin violeta al fondo del tubo. azul S

ESTUDIO DE POL#O BLAN!O $IDENTI%I!A!I&N DE !O!A6NA' PRUEBA E !"#C"A$A!# E C#BA%!#

Objetivo: Que el alumno apli!ue las pruebas de orientacin e identifi!ue por medio de reacciones colorimtricas las canas presentes en la cocana. Introduccin: 1a o a7na $-enzoi/meti/e 8onina' 4FCI5 es un alcaloide tropano cristalino !ue se obtiene de las "ojas de la planta de coca.9 'l nombre viene de la TcocaT adem(s del sufijo alcaloide -ina formando cocana. 's un estimulante del sistema nervioso central un supresor del apetito # un anestsico tpico. 'specficamente es un in"ibidor de la recaptacin de serotonina;norepinefrina; dopamina 4tambin conocido como un in"ibidor de la recaptacin triple 4%RI55 !ue media la funcionalidad de estos neurotransmisores como un ligando de transportador de catecolamina eAgeno. 's adictiva debido a la forma en !ue afecta el sistema de recompensa mesolmbico.= + diferencia de la ma#ora de las molculas la cocana posee bolsillos con alta eficiencia "idrfila # lipfila violando la regla de e!uilibrio "idrfilo;lipfilo. 'sto provoca !ue cruce la barrera "ematoencef(lica con un refuerzo mu# superior !ue a otras sustancias !umicas psicoactivas. $u posesin cultivo # distribucin son ilegales para fines sancionados no mdicos # no gubernamentales en pr(cticamente todas las partes del mundo. + pesar de !ue su libre comercializacin es ilegal # se "a visto severamente penalizada en casi todos los pases su uso en todo el mundo sigue siendo mu# eAtenso en muc"os (mbitos sociales culturales # personales. Reactivos:

7laca "oradada u eAcavada de porcelana 3 - gramos de %iocianato de cobalto 4II5 = 3 m1 de agua destilada < 3 m1 de 0licerol

Procedimiento: +gregar un poco de polvo problema en una placa "oradada u eAcavada +gregar de - a : gotas del reactivo de %iocianato de cobalto Observar la coloracin Resultados:

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KKKK$e observara una coloracin azul tur!uesa 4Observacin de C+IC+$5 PRUEBA DE S!OTT Reactivos: %cnica: + la coloracin azul de la tcnica anterior agregar de - a : gotas de (cido clor"drico agitar. +gregar de < a 9 gotas de cloroformo # agitar Fejar en reposo por :3 segundos aproAimadamente Observar las diferentes coloraciones # sus fases rosa 4para resultado

Reactivo de %iocianato de cobalto +cido Clor"drico Cloroformo

Resultados: $e observaran diferentes colores azul positivo5

PRUEBA DE BOU!9ARDAT Preparacin de Reactivos: %cnica: +gregar un poco de polvo problema en una placa "oradada u eAcavada +gregar a la muestra ) gota de (cido clor"drico # mezclar +dicionar : a 9 gotas del reactivo de 8ouc"ardat # mezclar Observar la coloracin. 2 gramos de Yodo resublimado gramos de yoduro de potasio !"" m# de agua destilada $cido %lor&idrico

Interpretacin de resultados: 1a formacin de un precipitado caf es indicativa de la presencia de alcaloides 4cocana "erona morfina5 por lo !ue el resultado es positivo para la identificacin de +1C+1OIF'$. 'ota: #a prueba de confirmacin para determinar si el polvo blanco es (cocana) debe de reali(arse el )spectrofotometro *nfrarro+o,

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T:!NI!A DE 5I!RODI%USION EN !A5ARA DE !ONWA; PARA LA DETER5INA!ION DE AL!O9OL ETILI!O

Objetivo: Que el alumno observe # determine el alco"ol etlico presente en la orina "umana por medio de tcnicas colorimtricas por medio de la c(mara de ConMa#.

Introduccin: 'l compuesto Qumico etanol conocido como alco"ol etlico es un alco"ol !ue se presenta en condiciones normales de presin # temperatura como un l!uido incoloro e inflamable con un punto de ebullicin de .G UC. $u frmula !umica es C,:;C,-;O, 4C-,=O5 principal producto de las bebidas alco"licas como el vino 4alrededor de un ):*5 la cerveza 49*5 o licores 4"asta un 93*5. 'l cierre "ermtico es necesario dado el car(cter vol(til del etanol # adem(s es importante !ue no eAista c(mara de aire en el recipiente de recoleccin de las muestras dado !ue el oAgeno presente podra oAidar al etanol # tambin para minimizar prdidas por volatilizacin. 7ara su determinacin las metodologas basadas en la oAidacin bajo ciertas condiciones son Btiles para la dosificacin de los alco"oles pero no para su identificacin #a !ue no dosifican el alco"ol como tal sino a tus productos de oAidacin.

Reactivos: Ficromato de potasio 2cido $ulfBrico Carbonato de 7otasio +gua destilada 'stufa C(mara de ConMa# 6aterial de 1aboratorio

7reparacin de reactivos: 7esar 9 - gramos de Ficromato de potasio en <33 m1 de agua destilada # aforar a )333 m1 con (cido sulfBrico.
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%cnica: $e toman 9 mililitros de orina se depositan en la c(mara de ConMa#. $e le agregan : a 9 gotas de Ficromato de potasio acidificado a la muestra de orina. $e mete la c(mara de ConMa# a la estufa # se pone a calentar por -3 minutos a =3UC. Fespus de este tiempo se observa el viraje de color.

Interpretacin de Resultados: Observar el viraje de color de anaranjado a azul u verde

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DETER5INA!ION DE %AR5A!OS $BARBITURI!OS'

Objetivo: Que el alumno aprenda a identificar # manejar los medicamentos controlados por la $ecretaria de $alud 7ublica. Introduccin: 1os -a*-it<*i os son una familia de f(rmacos derivados del (cido barbitBrico !ue actBan como sedantes del sistema nervioso central # producen un amplio es!uema de efectos desde sedacin suave "asta anestesia total. %ambin son efectivos como ansiolticos como "ipnticos # como anticonvulsivos. 1os barbitBricos tambin tienen efectos analgsicos sin embargo estos efectos son algo dbiles impidiendo !ue los barbitBricos sean utilizados en ciruga en ausencia de otros analgsicos. %ienen un alto potencial de adiccin tanto fsica como psicolgica. Reactivos: +cetato de cobalto II 6etanol +cido actico glacial Isopropilamina +gua destilada 6aterial de laboratorio

7reparacin del reactivo de Di//e-Ko==an>/ Reactivo ) se disuelve 3 ) gramos de acetato de cobalto 4II5 "idratado en )33 mililitros de metanol absoluto se a&aden 3 - mililitros de (cido actico glacial # se mezcla. Reactivo - se a&aden 9 mililitros de isopropilamina en /9 mililitros de metanol absoluto. %cnica: $e a&aden - m1 del reactivo ) a la muestra a analizar # por Bltimo - m1 del reactivo -. Interpretacin de resultados:

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KKKK$e observar( una coloracin morada o un amarillo 4Ra a depender del tipo de medicamento !ue se tratase5

DETER5INA!ION DE BENZODIA!EPINAS Objetivo: Que el alumno aprenda a identificar # manejar los medicamentos controlados por la $ecretaria de $alud 7ublica. Introduccin: 1as 8enzodiacepinas son medicamentos !ue se recetan frecuentemente para el tratamiento sintom(tico de la ansiedad. 1as 8enzodiacepinas tambin se emplean como sedantes antes de realizar algunos procedimientos mdicos # !uirBrgicos # para el tratamiento de ciertos desrdenes # el abandono del alco"ol. $u interrupcin abrupta puede originar trastornos del sue&o # gastrointestinales prdida de apetito fatiga temblores debilidad ansiedad # cambios en la percepcin. $lo cantidades mu# pe!ue&as 4menos del )*5 de la ma#ora de las 8enzodiacepinas se eliminan inalteradas en la orina apareciendo la ma#or concentracin en orina en forma de una droga conjugada. 'l periodo de deteccin de las 8enzodiacepinas en la orina es de :; . das. Reactivos: Ficromato de 7otasio +cido sulfBrico concentrado +cido Clor"drico concentrado 6ortero +gua destilada 6aterial de laboratorio

7reparacin de los Reactivos: Rea ti?o de %o**est 7esar 93 miligramos de Ficromato de potasio +dicionar .9 m1 de 2cido sulfBrico concentrado +gregar 9 m1 de 2cido clor"drico concentrado +forar a )33 m1 con agua destilada

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%cnica: %riturar una pastilla en un mortero tomar una cierta cantidad de la misma. +dicionar 9 gotas del reactivo de Norrest # agitar Observar la coloracin

Interpretacin de resultados: Observar la coloracin de amarillo S naranja a verde u azul dependiendo !ue tipo de benzodiacepina se este trabajando.

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9E5ATOLOG6A %ORENSE $e ocupa de la identificacin # caracterizacin de la sangre !ue se encuentra en objetos asociados con un delito o con el lugar donde se "a cometido un delito 'ste estudio comprende las tcnicas de: identificacin de manc"as de sangre determinacin de sangre "umana # del grupo sanguneo estas tcnicas permiten establecer si la manc"a problemaL Ves o no de sangreW en caso de serlo Vcual es su origen: "umano o animalW V+ !ue grupo sanguneo # factor R" perteneceW si se cuenta con muestras para realizar un estudio comparativo Va cual puede relacionarseW TE!NI!AS DE ORIENTA!ION PARA LA IDENTI%I!A!ION DE SANGRE !&C$"CA E %A BE$C" "$A # E A %ER

Objetivo: Que el alumno aprenda a identificar sangre de origen "umano por medio de las diferentes tcnicas colorimtricas. Introduccin: 1as peroAidasas sanguneas son catalasas !ue como su nombre lo indica poseen actividad cataltica 4enzim(tica5 en las reacciones de oAidacin #a !ue tienen la propiedad de descomponer el perAido de "idrogeno u otros perAidos org(nicos produciendo liberacin de radicales oA"idrilo segBn la siguiente ecuacin: ,-O,XO, DO

'l grupo "em de la "emoglobina posee esa actividad enzim(tica !ue puede catalizar la ruptura del perAido de "idrgeno. 6ientras no estn presentes otras sustancias org(nicas oAidantes esta actividad de la "emoglobina descompone el peroAido de "idrogeno en agua # oAgeno !ue al reaccionar con la bencidina la oAidaran formando un compuesto intensamente azul. 1a oAidacin de la bencidina es utilizada como prueba presuntiva para la identificacin de sangre. Hn resultado negativo eAclu#e la presencia de sangreL si la reaccin es positiva re!uiere como toda tcnica de orientacin del empleo de reacciones de confirmacin #a !ue se pueden obtener falsas reacciones positivas con otras
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sustancias !ue tengan actividad semejante a la de las peroAidasas o bien con otros materiales oAidantes.

Reactivos:

8encidina 'tanol +cido actico glacial 7eroAido de "idrogeno +gua destilada $olucin salina ,isopos de algodn 6aterial de laboratorio

7reparacin del reactivo: a5 $olucin de 8encidina 3 -9 gramos de 8encidina se disuelven en ).9 3 m1 de etanol # se a&aden a 9 a )3 gotas de (cido actico glacial. $e guarda en un frasco gotero (mbar # se mantiene en refrigeracin. b5 ,-O- al :*L se coloca en un frasco gotero (mbar. %cnica: ,umedecer un "isopo con agua destilada # frotarlo sobre la manc"a problema. +&adir al "isopo de ) a - gotas de solucin de 8encidina despus de unos momentos de observar !ue no d coloracin con esta poner la misma cantidad de peroAido de "idrogeno sobre el "isopo.

Interpretacin de resultados: 'n caso de ser positivo aparecer( r(pidamente una coloracin azul.

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T:!NI!A DE LA %ENOL%TALEINA O DE KASTLE- 5A;ER

Introduccin: 'sencialmente la rige el mismo principio !ue se se&alo para la reaccin de +dler: 1a diferencia estriba en !ue: a5 1a fenolftalena debe de ser reducida previamente a fenolftalena incolora # este reactivo por su labilidad debe ser guardado en refrigeracin en frasco (mbar. b5 $e trabaja en medio alcalino. c5 Calentar por un minuto a )33 UC. %ermolabilidad. $e "a confirmado !ue todas las peroAidasas vegetales se inactivan por calentamiento a)33 UC. + la misma temperatura las peroAidasas de origen animal son estables. Hn periodo corto de calentamiento 4un minuto a )33 UC5 es suficiente para diferenciar una de otra. %iempo 1as peroAidasas de origen animal son mu# establesL las manc"as de sangre "umana dan resultados positivos aBn despus de varios meses de "aberse producido. Cuando manc"as de la misma edad pero de origen vegetal son tratadas de esta manera dan resultado negativo. p, 1as peroAidasas de las plantas reaccionan en medio (cido pero no en medio alcalino por esta razn la tcnica de @astle;6a#er es m(s confiable. + pesar de esto deben efectuarse pruebas testigo sin a&adir agua oAigenada a muestras previamente calentadas a )33 UCL aBn as sigue siendo solamente una tcnica presuntiva. 'sta tcnica 8encidina. de la fenolftalena reducida es m(s sensible !ue la de la

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7reparacin del reactivo: a5 So/, i.n de feno/fta/e7na@ *ea ti?o Nenolftalena ,idrAido de potasio 7olvo de Yinc +gua destilada 'tanol 6ec"ero ,isopos de algodn antidad - 3 gramos -3 3 gramos -3 3 gramos )33 mililitros +gua oAigenada 7arrilla elctrica 6aterial de laboratorio

Fisolver estas sustancias # colocarlas a reflujo con el polvo de zinc "asta completa decoloracin. 'sta solucin madre deber( guardarse en un frasco (mbar en refrigeracin # deber( a&adrsele polvo de zinc. b5 $olucin de trabajo@ Filuir la solucin madre en etanol en la proporcin de ):9L esta solucin deber( estar en refrigeracin. c5 $olucin de agua oAigenada al : *. %cnica: ,umedecer un "isopo con solucin salina frotar la muestra problema # pasarlo a un tubo de ensa#o con - 3 mililitros de la misma solucin calentar un minuto a )33 UCL a&adir unas gotas de reactivo de fenolftalena esperar unos segundos # agregar agua oAigenada.

Interpretacin de resultados:

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'n caso positivo se obtendr( una coloracin rosa brillante.

T:!NI!A DE LEU!O 5ALA4UITA #ERDE Introduccin: $e basa al igual !ue las anteriores en una reaccin de oAidacin # reduccin. 1a estructura Qumica de esta sustancia recuerda a la de la fenolftalena. 'l prefijo IleucoJ se refiere a la forma reducida incoloraL la forma leuco puede ser preparada por reduccin de la mala!uita verde. Como en el caso de la fenolftalena la forma leuco puede ser oAidada por la accin de las peroAidasas para dar la forma oAidada verde. Reactivos: 7erborato de sodio 6ala!uita verde 2cido actico glacial $olucin salina +gua destilada 6aterial de laboratorio

7reparacin del reactivo: a5 $e prepara una mezcla slida !ue contenga: 3 :- gramos de perborato de sodio # 3 )3 gramos de mala!uita verdeL se mezclan perfectamente # se guardan en frasco color (mbar. 'sta mezcla dura un a&o sin perder su estabilidad. b5 'l solvente se prepara dilu#endo = = mililitros de (cido actico glacial : : mililitros de agua destilada. en

c5 7reparar el reactivo de trabajo inmediatamente antes de usarlo disolviendo la mezcla slida i5 en la solucin si en el reactivo recin preparado llegar( a observarse la m(s leve coloracin verde no deber( ser usado. %cnica: 1a manc"a sospec"osa se levanta con un "isopo "umedecido con agua destilada # se le agregan unas gotas del reactivo recientemente preparado.

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Interpretacin de resultados: 'n caso positivo se observar( una coloracin verde.

TE!NI!AS DE !ON%IR5A!ION
!RISTALES DE 9E5INA O DE TEI!95ANN

Objetivo: Que el alumno aprenda a realizar # confirme !ue las tcnicas colorimtricas afirmen !ue es sangre de origen "umana. Introduccin: 1a "emoglobina cuando es tratada con (cido actico se prepara inmediatamente de las protenas # del grupo prosttico. Furante la "idrlisis la globulina se desnaturaliza. 1a oAidacin del fierro del grupo "em se efectBa m(s r(pidamente en medio (cido !ue en medio alcalino. $i esta presente un "algeno inorg(nico como el cloro se formaran cristales insolubles de cloruro de ferriprotoporfirina o "emina: Reactivos: *ea ti?o Cloruro de sodio 8romuro de potasio Zoduro de potasio +cido actico 6icroscopio estereoscopico $olucin salina 7orta objetos antidad 3 ) gramos 3 ) gramos 3 ) gramos )33 mililitros +gua destilada Cubre objetos 6aterial de laboratorio

%cnicas: a5 Colocar la muestra problema en el centro de un cubre objetos # poner encima de ella un cubre objetos. b5 Feslizar entre cubre objetos por capilaridad unas gotas del reactivo de %eic"mann. c5 Calentar lentamente a baja temperatura el porta objetos "asta evaporacin.
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d5 Fejar enfriar # observar al microscopio. Interpretacin de resultados: 'n caso positivo se observaran cristales romboidales de color caf obscuro. PRUEBA DE TAKA;A5A $ 9E5O!RO5OGENO' Introduccin: %anto la Nerroprotoporfirina como la ferriprotoporfirina tienen la protena de combinarse con otros compuestos nitrogenados por medio de la globulina. %ales compuestos inclu#en otras protenas "idrAido de amonio cianuro nicotina # piridina # los productos resultantes se llaman "emocromgenos. 1os cristales pueden formarse tanto en medio acido como alcalinoL sin embargo el reactivo de %aEa#ama es de naturaleza alcalina. 'l "idrAido de sodio efectBa una "idrlisis alcalina liberando un grupo prosttico de la globulinaL el fierro del "em en ese momento se encuentra como in frrico 4D:5 debido a la formacin de la meta"emoglobina en el proceso de desecacin de la manc"a de sangre. 1a carga 4D:5 del fierro se neutraliza por el in O,. Calentando la glucosa 4a azBcar reducida5 se reduce el in frrico a ferroso 4D-5 # la piridina se combina con ste para formar un producto cristalino insolubleL el "emocromgeno o piridinprotoporfirina. 1a prueba es m(s sensible # sencilla !ue la de los cristales de "emina # no se dan casos de falsas reacciones positivas.

Reactivos: K ,idrAido de sodio K 7iridina K 0lucosa K +gua destilada K $olucin salina K7orta objetos KCubre objetos K 6aterial de laboratorio 7reparacin del reactivo: K K6ezclar: Hna parte de solucin saturada de glucosa.

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Hna parte de solucin de "idrAido de sodio al )3 *. Hna parte de piridina. Fos partes de agua destilada. Hna vez preparada la mezcla se guarda en frasco (mbar. 1a solucin debe de prepararse antes de utilizarse.

%cnica: a5 Colocar una pe!ue&a cantidad de muestra problema en un porta objetos # un cubre objetos. b5 Feslizar por capilaridad unas gotas del reactivo entre el porta objetos # cubre objetos c5 Calentar el porta objetos a baja temperatura durante :3 segundos.

Interpretacin de resultados: Observar al microscopio. 'n caso positivo se observaran cristales romboidales de color rosa alrededor de la muestra.

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E!ER'"$AC"($

E% )RUP# *A$)U+$E# E$ *A$)RE ,RE*CA por el

sistema AB# C#$ ,"$E* ,#RE$*E*.

F'%'R6IC+CI[C 'C 71+C+

'sta prueba se realiza en una placa poli;eAcavada limpia # seca colocando una gota de sangre con suero "emoclasificador +nti;+L otra gota de sangre con una gota de suero "emoclasificador +nti;8 # se mezcla con un palillo distinto para cada mezcla de gotas. $e inclina suavemente la placa "acia adelante # atr(s en movimientos sucesivos # despus de aproAimadamente minutos se observa la aglutinacin !ue se pueda producir.

R'$H1%+FO$. ).; 1os glbulos del grupo O no son aglutinados por ningBn suero. -.; 1os glbulos del grupo + son aglutinados por el +nti;+ pero no por el suero +nti;8. :.; 1os glbulos del grupo 8 son aglutinados por el suero +nti;8 pero no por el suero +nti;+. <.; 1os glbulos del grupo +8 son aglutinados por ambos sueros.

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DETER5INA!I&N DEL GRUPO SANGU6NEO EN 5AN!9AS DE SANGRE SE!A %\CCIC+$ F' +8$ORCI[C;'1HCI[C 7+R+ F'%'R6IC+CI[C 0RH7O F'1 $I$%'6+ +8O 'C 6+CC,+$ F' $+C0R' $'C+. Objetivo: Que el alumno aprenda a determinar el grupo sanguneo del sistema +8O en muestras de sangre seca mediante la tcnica de absorcin;elucin Introduccin: 1a tcnica tiene como fundamento un primer proceso de absorcin especifica entre la manc"a problema # su anticuerpo "omlogoL despus de !ue la absorcin es completa el eAceso de anticuerpo se elimina con lavados con solucin salina fra. 'l complejo antgeno;anticuerpo se disocia por calentamientoL al diluir el anticuerpo # ponerlo en contacto con eritrocitos de propiedades antignicas conocidas se puede observar finalmente la presencia o ausencia de aglutinacin. Reactivos: %cnica: ). $eleccionar dos tubos de ensa#e de )- A .9 mm por cada muestra inclu#ente para testigos # marcarlos como + # 8 respectivamente. -. Colocar los tubos marcados + : gotas de suero anti;+ diluido # en los tubos marcados 8 : gotas de suero anti;8 diluidoL meterlos al refrigerador "asta su uso. ,emoclasificadores 4O + 8 +8 R,5 $olucin salina 6etanol Centrifuga 8a&o 6aria %ela cabeza de Indio +plicadores de madera ,isopos de algodn 6aterial de laboratorio F'1

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:. Colocar cada muestra de telas con sangre en tubos de ensa#e de ):A)33 mm # fijarlas con metanol durante -3 min. despus de este tiempo sacarles # dejarlas secar 4inclu#endo testigos5. <. Cortar dos fragmentos de cada muestra 4:mm5 # colocar cada uno en los tubos con suero diluido indicados en el punto -. 9. Con a#uda de un aplicador de madera picar la tela para !ue absorba el suero. =. Fejar en refrigeracin por )- "rs. .. 1avar con solucin salina fra 43.G9*5 : veces. G. Fel Bltimo lavado eliminar el sobrenadante # a&adir a cada tubo dos gotas de solucin salina. /. Colocar los tubos en ba&o mara a 9=UC durante )9 min. )3. $acar con cuidado los fragmentos de tela con a#uda de un aplicador de madera. )). +gregar en los tubos marcados + - gotas de la suspensin de glbulos rojos grupo + # en los tubos marcados 8 - gotas de glbulos rojos grupo 8. 6ezclar. )-. Centrifugar )3 min. a :333 r.p.m. ):. Fesprender el botn de las clulas del fondo de cada tubo agitando suavemente e inclinando el tubo "asta posicin "orizontal # observar la presencia o sustancia de aglutinacin.

%onsideraciones t-cnicas, )sta t-cnica re.uiere de un tiempo apro/imado 01 &oras para su proceso,

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T:!NI!A DE ABSOR!I&N-IN9IBI!I&N PARA LA DETER5INA!I&N DE LOS %A!TORES R9 EN 5AN!9AS DE SANGRE SE!A. Objetivo Que el alumno aprenda a determinar el factor R" en muestras de sangre seca mediante la tcnica de absorcin;in"ibicin Introduccin: 'l material antgeno se pone en contacto con su anticuerpo a fin de efectuar su absorcin especfica. 'l complejo antgeno;anticuerpo se disocia a :. ]C. 'l anticuerpo en el sobrenadante se pone en contacto con eritrocitos con propiedades antignicas conocidas dando como resultado una aglutinacin de las clulas !ue poseen el antgeno F. %cnica: ). $eleccionar un tubo de ensa#e de )-A.9 mm por cada muestra inclu#endo para testigos # marcarlos con el nBmero de la muestra. -. Colocar en cada tubo un agota de solucin salina # un agota de suero comercial anti;F # mezclar perfectamente 4emulsin5. :. Cortar un fragmento de cada muestra 4:mm5 # colocar cada muestra en su tubo correspondiente. <. Con a#uda de un aplicador de madera picar la tela para !ue se absorba el suero. 9. Colocar los tubos en ba&o mara a :.UC durante -3 min. =. $acar con cuidado los fragmentos de tela con a#uda de un aplicador de madera. .. +gregar en los tubos dos gotas de la suspensin de los glbulos rojos conocidos # mezclar ligeramente. G. Incubar -3 min. a :.UC sacar los tubos del ba&o # agitar ligeramente. /. Centrifugar )3 min. a :333 r.p.m. )3. Fesprender el 8oton de clulas del fondo de cada tubo agitando suavemente e inclinando el tubo "asta posicin "orizontal # observar la presencia o ausencia de aglutinacin. 'O23: los puntos - : < se realizan por separado para cada muestra.

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1os reactivos de esta %\CCIC+ F' +8$ORCI[C;'1HCI[C 7+R+ F'%'R6IC+CI[C F'1 0RH7O F'1 $I$%'6+ +8O 'C 6+CC,+$ F' $+C0R' $'C+ se utilizar( para la de N+C%OR'$ R,.

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Cuando se trabaja en un laboratorio eAiste el peligro potencial de un A!!IDENTE en virtud de las sustancias # elementos !ue se utilizan # la posibilidad de cometer algBn error al realizar un eAperimento. SUSTAN!IA PELIGROSA A ERROR 9U5ANO B A!!IDENTE 7or eso cuando se trabaja en el laboratorio deben tenerse presente una serie de reglas o consejos !ue disminu#en # en algunos casos logran evitar los accidentes. %omo primera regla4 para empe(ar a traba+ar: E% %U)AR E !RABA-# EBE E*!AR E$ #R E$

's conveniente no olvidar estas REGLAS C !ONSEDOS ent*e ot*os E,e de-e ono e* de a ,e*do a /a =*( ti a E,e se ?a>a a *ea/iza* : ./ "$ "CAC"#$E* si0a todas las indicaciones 1ue le 2an sido dadas. 3/ E*!U "E CA A !&C$"CA A$!E* E C%A*E A2orrar tiempo y evitar errores y accidentes innecesarios 4/ *E)UR" A E *U* C#'PA5ER#* El laboratorio es un lu0ar para trabajar con seriedad. 6/ C#'U$"CAR %#* ACC" E$!E* al pro7esor. 8/ 9ER!" # E *U*!A$C"A* !rabaje con precaucin. Avisar al pro7esor si al0o se derrama. :/ PREPARAC"($ E ;C" #* "%U" #* $unca a0re0ue a0ua sobre un cido. A0re0ue siempre el cido concentrado< en pe1ue=as cantidades< sobre el a0ua y a0ite continuamente. >/ *U*!A$C"A* C#RR#*"9A* 'anipule las mismas con m?imo cuidado. @/ $U$CA C#'ER< BEBER # ,U'AR ni apoyar comida sobre la mesada del laboratorio. A/ CABE%%# %AR)# Atarse el cabello para evitar accidentes con los reactivos< 7ue0o. .B/ *U*!A$C"A* C#RR#*"9A* E$ C#$!AC!# C#$ P"E% y/u #-#* %avar inmediatamente con abundante a0ua. ../ %"'P"ECA E% 'A!ER"A% !odo el material 1ue se utiliza debe ser limpiado al 7inalizar el prctico a 7in de evitar contaminaciones y/o reacciones no deseadas en posteriores e?perimentos.

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