CINTICA ENZIMTICA

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que son catalizadas por las enzimas.
El estudio de la cinticas de una enzima permite elucidar los detalles de su mecanismo cataltico, su papel en el metabolismo, cmo es controlada su actividad en la clula y cmo puede ser inhibida su actividad por drogas o venenos o potenciada por otro tipo de molculas.

CINTICA ENZIMTICA
Un sustrato es capaz de unirse al centro cataltico de la enzima que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie de pasos denominados mecanismo enzimtico.

CINTICA ENZIMTICA
Algunas enzimas pueden unir varios sustratos diferentes y liberar diversos productos, como es el caso de las proteasas al romper una protena en dos poli pptidos.

Aunque todos estos mecanismos suelen seguir una compleja serie de pasos, tambin suelen presentar una etapa limitante que determina la velocidad final de toda la reaccin.

CINTICA ENZIMTICA
Los mecanismos enzimticos pueden ser divididos en mecanismo de nico sustrato o mecanismo de mltiples sustratos.

Los estudios cinticos llevados a cabo en enzimas que solo unen un sustrato y la velocidad con la que lo transforma en producto.
Por otro lado, al estudiar una enzima que une varios sustratos, la cintica enzimtica puede mostrar tambin el orden en el que se unen los sustratos y el orden en el que los productos son liberados.

Principios generales
La reaccin catalizada por una enzima utiliza la misma cantidad de sustrato y genera la misma cantidad de producto que una reaccin no catalizada. (no alteran en absoluto)
1.- Sin embargo, al contrario que las reacciones qumicas, las enzimas se SATURAN.

Esto significa que a > cantidad de sustrato, > nmero de centros catalticos estarn ocupados, lo que incrementar la eficiencia de la reaccin, hasta el momento en que todos los sitios posibles estn ocupados. En ese momento se habr alcanzado el punto de saturacin de la enzima y, aunque se aada ms sustrato, no aumentar ms la eficiencia.

La velocidad de la reaccin va aumentando a medida que aumenta la concentracin de sustrato hasta que la enzima se satura.

Principios generales
Las dos propiedades cinticas ms importantes de una enzima son:
El Tiempo que tarda en saturarse con un sustrato en particular y La Mxima Velocidad de reaccin que pueda alcanzar. El conocimiento de estas propiedades hace posible hipotetizar acerca del comportamiento de una enzima en el ambiente celular y predecir cmo responder frente a un cambio de esas condiciones.

ENSAYOS ENZIMTICOS
Un ensayo enzimtico es un procedimiento, llevado a cabo en un laboratorio, mediante el cual se puede medir la velocidad de una reaccin enzimtica. Como las enzimas no se consumen en la reaccin que catalizan, los ensayos enzimticos suelen medir los cambios experimentados bien en la concentracin de sustrato (que va decreciendo), bien en la concentracin de producto (que va aumentando).

Curva de saturacin de una reaccin enzimtica. La pendiente representa, en el perodo inicial, la velocidad de la reaccin.

ENSAYOS ENZIMTICOS
Existen diversos mtodos para realizar estas medidas. La espectrofotometra permite detectar cambios en la absorbancia de luz por parte del sustrato o del producto (segn la concentracin de estos) La radiometra implica incorporacin o liberacin de radiactividad para medir la cantidad de producto obtenido por tiempo.

ENSAYOS ENZIMTICOS
Los ensayos espectrofotomtricos son los ms utilizados, ya que permiten medir la velocidad de la reaccin de forma continua. Por el contrario, los ensayos radiomtricos requieren retirar las muestras para medirlas, por lo que son ensayos discontinuos. Sin embargo, estos ensayos son extremadamente sensibles y permiten detectar niveles muy bajos de actividad enzimtica.

CARACTERSTICAS DE LA ACCIN ENZIMTICA

La caracterstica ms sobresaliente de los enzimas es su elevada especificidad. Esta es doble y explica que no se formen subproductos:
Especificidad de sustrato. El sustrato (S) es la molcula sobre la que el enzima ejerce su accin cataltica. Especificidad de accin. Cada reaccin est catalizada por un enzima especfico.

CARACTERSTICAS DE LA ACCIN ENZIMTICA

La accin enzimtica se caracteriza por la formacin de un complejo que representa el estado de transicin. E+S ES E+P El sustrato se une al enzima a travs de numerosas interacciones dbiles. Este centro es una pequea porcin del enzima, constituido por una serie de aminocidos que interaccionan con el sustrato.

Para expresar el comportamiento del complejo mediante una expresin matemtica Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, desarrollaron un razonamiento que se basaba en asumir ciertos supuestos:

1:La primera etapa de la reaccin enzimtica es la formacin rpida del complejo ES mediante una reaccin reversible. En este supuesto se puede definir una constante ks (constante de disociacion) que es la inversa de ka (constante de asociacion).

Ks =

[E libre] [S] [ES]

(1)

Donde [E libre] =[E total] [ES]. Se utilizan los valores de ks en lugar de los de ka, porque los primeros tienen unidades de concentracin y esto permite comparar su valor con el de la concentracin de sustrato. Cuanto mas fuerte sea la unin de la enzima al sustrato menor ser el valor de la ks.

k1 E S k-1 ES

Sustituyendo el valor de [E libre] en la ecuaion (1) por [E libre] =[E total] [ES] y despejando, obtenemos que:
[E total] [S] [ES]= (2)

ks

[S]

2:en una segunda etapa mucho mas lenta (kcat <<< k1) el complejo ES se transforma en producto y enzima libre en una o varias reacciones. En este caso la velocidad depende de la concentracin de complejo enzimasustrato [ES] y de la constante de velocidad de la etapa mas lenta que se denomina kcat (constante catalitica):
(3)

Combinando las reacciones (2 ) (3), y simplificando,podemos calcular la velocidad de la reaccin

Que describe la velocidad de reaccin como una funcin hiperblica en funcin de [S].
Cuando [S] tiende al infinito, toda la enzima se encuentra como complejo ES, por lo que se puede considerar que: Vmax =k cat [E] Combinando esta ecuacin con lo anterior obtenemos: Vmax [S] V0= ks [S]

CARACTERSTICAS DE LA ACCIN ENZIMTICA

1. Aqu se puede sealar, que muchas vitaminas funcionan como coenzimas; y realmente las deficiencias producidas por la falta de vitaminas responde ms bien a que no se puede sintetizar un determinado enzima en el que la vitamina es la coenzima.

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

TEMPERATURA: las enzimas son sensibles a la temperatura

pudiendo verse modificada su actividad por este factor. Los rangos de temperaturas ptimos pueden llegar a variar sustancialmente de unas enzimas a otras.

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La T. Influye en la actividad. El punto ptimo representa el mximo de actividad. A temperaturas bajas, los enzimas se hallan "muy rgidos" y cuando se supera un valor considerable (mayor de 50:) la actividad cae bruscamente porque, como protena, el enzima se desnaturaliza.

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

pH : el rango de pH ptimo tambin es muy variable entre diferentes enzimas. Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta ver modificada su carga elctrica al aceptar o donar protones, lo que modificar la estructura de los aminocidos por tanto la actividad enzimtica.

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

El pH puede afectar de varias maneras:

El centro activo puede contener aminocidos con grupos ionizados que pueden variar con el pH. La ionizacin de aminocidos que no estn en el centro activo puede provocar modificaciones en la conformacin de la enzima. El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.

Algunos enzimas presentan variaciones peculiares. La pepsina del estmago, presenta un ptimo a pH=2, y la fosfatasa alcalina del intestino un pH= 12

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Concentracin salina: al igual que en los casos anteriormente mencionados, la concentracin de sales del medio es crucial para una ptima actividad enzimtica. Una elevada concentracin o una ausencia de sales en el medio pueden impedir la actividad enzimtica, ya que las enzimas precisan de una adecuada concentracin de iones para mantener su carga y su estructura.

GRACIAS