SEROLOGA DE FIEBRE TIFOIDEA, BRUCELOSIS Y MONONUCLEOSIS INFECCIOSA

UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO FILIAL JAEN

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA Especialidad de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

INTEGRANTES : MONTEZA FACHO AMPARO CASTRO RAMIREZ MARIBEL FLORES LOPEZ TANIA

Fiebre tifoidea (Salmonella).

Es

una enfermedad infectocontagiosa de alta prevalencia a nivel mundial, causada por la bacteria Salmonella typhi, se consideran patgenos entricos obligados. Los alimentos y el agua contaminados son los mecanismos de transmisin.

Cuadro clnico:
fiebre

alta constante (40), sudoracin profusa, gastroenteritis y diarrea, sarpullido de manchas aplanadas de color rosceo.

 La

prueba que se realiza en las reacciones febriles para deteccin de fiebre tifoidea es la reaccin de Widal. La reaccin de Widal, es un mtodo serolgico, rpido, barato, y ampliamente conocido para el diagnstico de la fiebre tifoidea; sin embargo, tiene grandes limitaciones por reacciones antignicas cruzadas con otras bacterias (principalmente enterobacterias, incluyendo Salmonellas no typhi), parsitos, virus y hongos, llevando con frecuencia al clnico a sobre diagnosticar sndromes febriles como fiebre tifoidea.

prueba de laboratorio:

Para deteccin de fiebre tifoidea es la REACCIN DE WIDAL falsos negativos: Antibioticoterapia temprana, la cual, retrasa la aparicin de anticuerpos (descrito principalmente con cloranfenicol) Utilizacin de corticosteroides Medicin temprana de anticuerpos (primera semana) Inmunodeficiencias adquiridas y congnitas. Portadores crnicos de Salmonella typhi. Relacionadas a estandarizacin de la prueba.

 Los

falsos positivos de la reaccin de Widal tambin han sido descritos en procesos no infecciosos, como enfermedades autoinmunes (artritis reumatoidelupus eritematoso sistmico) y hepatopatas crnicas, lo cual contribuye aun ms a su baja especificidad.

ANTIGENOS FEBRILES
INTRODUCCIN : Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo indica para diagnosticar enfermedades que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta) .

PRUEBA DE ANTGENOS FEBRILES

FUNDAMENTO: Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especifico. El titulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar.

REACTIVOS PROVISTOS:

ANTIGENOS FEBRILES SALMONELLA: Suspensin conteniendo los siguientes antgenos bacterianos: Antgeno Paratfico A (Salmonella, antgeno flagelar a) Antgeno Paratfico B (Salmonella, antgeno flagelar b) Antgeno Tfico H (Salmonella, antgeno flagelar d) Antgeno Tfico O (Salmonella, antgeno Somtico D)

 Muestra

: Suero Recoleccin : Debe obtenerse suero lmpido en forma estril.

MATERIAL REQUERIDO : -Placa de vidrio -Micropipetas -Tubos de vidrio -Varilla -Reloj

PROCEDIMIENTO:
1. MTODO DE AGLUTINACIN RPIDA EN PLACA.

Anotar el antgeno correspondiente en la placa de vidrio. Depositar en cada cuadro una gota (50ul) de suero del paciente para cada uno de los antgenos que se va a utilizar. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antgeno. Agitar suavemente la placa por rotacin (120 r.p.m) durante 2-3 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinacin utilizando una luz indirecta sobre fondo oscuro.

2.-TITULACIN RAPIDA EN PLACA.

Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma: Dividir una placa de vidrio en sectores. Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80ul,40ul,20ul,10ul,5ul de suero. Colocar 1 gota de Antgeno previamente agitado sobre cada gota de suero. mezclar con una varilla distinta para cada dilucin. Agitar la placa durante 2 minutos en forma circular. Observar la presencia de aglutinacin utilizando luz indirecta sobre fondo oscuro. Las diluciones del suero en la titulacin en placa equivalen apropiadamente a las de la prueba en tubo como se muestra a continuacin: . Volumen de Suero (ml) 0.08 0.04 0.02 0.01 0.005 Dilucin aproximada en la prueba en tubo. 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320

Interpretacin:
El

informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideracin la dilucin ms alta que se observe en la reaccin positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener ttulos diagnsticos hasta los 8 das despus de la fiebre.

Brucelosis (Brucella abortus).

La

Brucelosis (conocida tambin como fiebre de Malta, fiebre ondulante, enfermedad de Bang o fiebre del Mediterrneo) es una Zoonosis es decir una enfermedad que es transmitida de los animales al humano causada por bacterias del genero Brucella. La enfermedad se adquiere por ingerir alimentos contaminados o mantener un estrecho contacto con el ganado.

 La

brucelosis en el hombre se transmite por la ingesta de leche, y sus productos derivados contaminados, no pasteurizados, por contacto con productos y desechos como tejidos o excreciones de animales enfermos, y por inoculacin de brucelas o inhalacin del polvo de corrales o mataderos, donde stas se encuentran.

Cuadro clnico:
Es una enfermedad que se auto limita o se vuelve crnica. Muchos pacientes padecen infecciones asintomticas. La forma aguda de la brucelosis se caracteriza por fiebre que en la mayora de los casos es alta e intermitente (ondulante), presentndose generalmente por la tarde/noche acompaada de cefalea intensa frontal y occipital, y diaforesis. En bazo, hgado, ganglios linfticos aparecen ndulos granulomatosos que pueden evolucionar hasta convertirse en abscesos.

En la forma crnica
Las manifestaciones ms comunes son:

Sndrome febril: habitualmente de poca intensidad en la mayora de los casos; Osteoarticulares: poli o monoartritis, grnulos seos, abscesos. Psquicas: sndrome depresivo, nerviosismo, irritabilidad. Digestivas: esplenopahetomegala, hepatitis. Neurolgicas: meningobrucelosis, polineuritis, sndrome citico, sndrome radicular. Hematolgicas: anemia hemoltica, anemia ferropriva. Respiratorias: bronquitis, neumona

Diagnstico:

El diagnstico de certeza se establece aislando al microorganismo a partir de cultivos de sangre, mdula sea u otros tejidos. Los mtodos serolgicos como las reacciones febriles slo aportan un diagnstico presuntivo. Existen varios mtodos serolgicos para el diagnstico de Brucelosis como el Rosa de Bengala, 2-mercapto-etanol, y la reaccin de Huddleson, esta ultima es la utilizada en la prueba de reacciones febriles.

prueba de laboratorio:
Reaccin de Huddleson
Es una reaccin de aglutinacin rpida en placa donde se enfrentan cantidades decrecientes del suero a investigar con cantidades constantes de antgeno y se observa la presencia o no de aglutinacin. Existe una escala de ttulos, establecida por convencin, que permite la expresin de resultados. Se utiliza una suspensin Antgenos de B. abortus al 3-10% de grmenes en fenol, con verde brillante y cristal violeta para la bsqueda de anticuerpos.

interpretacin:
Se

deben tomar en consideracin los aspectos clnico-epidemiolgicos de cada caso, hay que considerar los falsos positivos y falsos negativos. El tratamiento del paciente sospechoso o confirmado debe indicarse bajo vigilancia mdica, o por personal debidamente capacitado.

Rosa de Bengala:

Utiliza como antgeno en una suspensin bacteriana a la que se ha aadido el colorante rosa de bengala, enfrentndola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximacin diagnstica en pocos minutos con una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado grado de correlacin con la seroaglutinacin y, por su simplicidad, es muy til como prueba de despistaje inicial o screening. Sus falsos negativos se limitan a enfermos con procesos de pocos das de evolucin y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

Prueba de Coombs:

Es de gran inters para el diagnstico de la brucelosis crnica. Se utiliza para demostrar la presencia de anticuerpo aglutinantes y no aglutinantes, fundamentalmente IgG. El suero de Coombs (inmunoglobulina humana)
Se encargara de facilitar la aglutinacin de los anticuerpos no aglutinantes del suero problema, fijados a la suspensin antignica de B. abortus. El ttulo obtenido es, por ello, como mnimo el de la aglutinacin y generalmente es mucho ms elevado, tanto ms cuanto mayor es el tiempo de evolucin de la enfermedad. Pueden persistir en ocasiones de forma prolongada y con titulacin elevada, incluso en pacientes con tratamiento adecuado y buena evolucin clnica.

MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
Es

una enfermedad benigna producida por el virus Epstein-Barr (EBV) . El 50% de los nios se infectan por EBV antes de los 5 aos, y hasta el 95% de la poblacin adulta se encuentra infectada.

Sntomas clnicos:
La

trada caracterstica de los sntomas es fiebre, dolor de garganta y linfadenopatas (inflamacin de los ganglios linfticos, especialmente en el cuello). Generalmente est presente la fatiga y puede continuar durante varios meses.

Transmisin:

La mononucleosis infecciosa se transmite por contacto prximo de persona a persona. La saliva es el mtodo principal de transmisin. La mononucleosis infecciosa toma su nombre comn de "enfermedad del beso" de esta forma prevalente de transmisin entre adolescentes y jvenes, y les afecta con mayor frecuencia entre los 15 y 17 aos. Sin embargo, la infeccin puede desarrollarse a cualquier edad.

Diagnstico serolgico de la Mononucleosis infecciosa

El

diagnstico serolgico de la infeccin por EBV comprende una serie de pruebas no especficas como la deteccin de anticuerpos heterfilos, as como unas pruebas especficas para EBV relacionadas con la respuesta de anticuerpos en funcin del tiempo frente a varios antgenos producidos durante el ciclo de vida del virus.

Diagnstico de Laboratorio:

la mayora de las pruebas serolgicas ms comnmente usadas para diagnosticar la infeccin EBV detectan anticuerpos IgG e IgM anti-VCA, e IgG antiEBNA.
Puede hacerse por 2 tcnicas: 1) indirecta: respuesta serolgica y 2) directa: demostracin del virus, sus antgenos o DNA viral.

prueba de aglutinacin en placa con neutralizacin segn davidsohn

FUNDAMENTO : La deteccin de anticuerpos heterfilos es la prueba fundamental para el diagnstico de MNI. Los anticuerpos heterfilos asociados a la mononucleosis infecciosa se detectan por su capacidad de aglutinar los eritrocitos de caballo, neutralizando simultneamente los anticuerpos no asociados a mononucleosis(anticuerpos Forssman)con extracto de rin de cobayo. La aglutinacin se visualiza macroscpicamente.

PROCEDIMIENTO:
PRUEBA CUALITATIVA

Colocar 1 gota (50ul) de muestra inactivada en uno de los crculos de la placa limpia y seca. Agregar 1 gota (50ul) de reactivo homogenizado. Mezclar con palillo de madera hasta obtener una suspensin uniforme. Observar macroscpicamente el resultado dentro de los dos minutos. Observar los resultados sobre un fondo negro y ligeramente por encima de un haz luminoso horizontal.

PRUEBA CUANTITATIVA :

Los sueros positivos segn la prueba anterior pueden titularse efectuando diluciones seriadas : Colocar en una serie de tubos 200ul de solucin fisiolgica. Agregar al primer tubo 200ul de la muestra inactivada y mezclar. Transferir 200ul de esta dilucin al segundo tubo y mezclar, continuando de esta forma las diluciones hasta el ltimo tubo. Las diluciones as obtenidas equivalen a 1:2 ; 1:4; 1:8; 1:16 etc. Tomar una gota de cada dilucin y realizar segn la prueba cualitativa

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS : Negativo : Suspensin homognea Positivo : Aglutinacin que aparece dentro de los dos minutos. se califica de 1 a 4 (+). Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos heterfilos asociados a la mononucleosis infecciosa. Titulo : Se expresa como la inversa de la mxima dilucin a la que se produce aglutinacin visible macroscpicamente. Se considera como reaccin positiva para MNI en diluciones mayores de 1/16

GRACIAS POR SU ATENCION