DISEO DE UNA PLANTA DE PRODUCCIN BIOLGICA DE CIDO SUCCNICO A PARTIR DE ACTINOBACILLUS SUCCINOGENES (GRUPO 6) PRIMERA ENTREGA

JOYCE ISABEL AGUILAR RIBERO (2103502) ADOL O ERLAI RODRIGUE! (20"3605) NINI JO#ANA OSPINA C#INC#ILLA (21003$") CRISTIAN GIO%ANY PALENCIA BLANCO (21035&")

P'()*+(',%I%IANA SANC#E! TORRES

UNI%ERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER ESCUELA DE INGENIERA .UIMICA BIOPROCESOS BUCARAMANGA ENERO 2/0201&

INTRODUCCIN Es evidente que actualmente estamos en medio de una problemtica ambiental de importante magnitud, el agotamiento de recursos, el cambio climtico, la contaminacin de los cuerpos de agua, contaminacin de suelos son solo algunas de las consecuencias que padecemos a diario, y aunque ya existen normativas de sostenibilidad hay que decir que vivimos en una sociedad en la que la conciencia ambiental es una filosofa que apenas est empezando a desarrollarse, es decir, se debe reconocer la necesidad de inculcar un cambio de pensamiento para as redefinir las rutas que se estn siguiendo en la bsqueda del desarrollo econmico y social, entendiendo que actualmente esto ya no se trata de una opcin sino que es una necesidad fundamental para garantizar la sostenibilidad del planeta. nivel internacional hoy en da las nuevas alternativas estn recibiendo una atencin creciente, desde el campo industrial se puede hablar del desarrollo y la implementacin de bio!procesos, la reutilizacin de desechos, el uso de biomasa como materias primas, en general, la implementacin de procesos que cumplan con esos criterios de sostenibilidad. "in embargo, en #olombia los compuestos qumicos que se necesitan en la industria como materias primas son obtenidos en su mayora de manera sint$tica, hoy por hoy, las empresas en #olombia mantienen lneas de produccin ba%o esquemas tradicionales y convencionales, que adems de generar impactos al ambiente, las pone adicionalmente en desventa%a en t$rminos de productividad y competitividad. ello se suma otra barrera que es que el pas tiene limitaciones importantes en materia de investigacin y generacin de conocimiento en produccin y consumo sostenible, incluido el dise&o de productos y servicios con criterios ambientales y el uso de materias primas que faciliten procesos de aprovechamiento de los residuos, rezagando as los procesos de innovacin tecnolgica y la transferencia de conocimiento. ' Enfocndonos en la industria nacional de plstico, segn #()* "+,#(", en t$rminos generales, el consumo de plstico en #olombia es ba%o en comparacin con pases desarrollados. )or e%emplo, un residente promedio de los EE.-consume cerca de '.. /g de plstico por a&o, mientras que en #olombia las cifras estn cerca de '0 a 1. /g por persona. Esta diferencia representa una gran oportunidad de crecimiento para los plsticos y los petroqumicos, as como para un rpido movimiento en los flu%os de consumo. "e afirma que 2la industria del plstico ha vivido, en promedio, un crecimiento de ms del 34 durante los ltimos 15 a&os. "e espera que el crecimiento contine siendo fuerte en el futuro.6 )ara

octubre de 1..3, el sector present un crecimiento de su produccin real del 7,874 y las ventas presentaron una dinmica de crecimiento del 5,714. 1, 7 En #olombia se consumen anualmente 8. mil toneladas de plstico comn al a&o de las cuales solo el '.4 es biodegradable, actualmente las empresas en produccin de bioplsticos ms reconocidas son 9iopac/ que opera en #ali y 9ogot, y 9ioplast en :edelln, estas empresas aunque usan tecnologa +;) < ditivos )lsticos +otalmente ;egradables, por sus siglas en ingl$s= > se las adhieren a derivados del petrleo como el polifen u otros productos qumicos sint$ticos que causan da&o al medio ambiente sino estn en las condiciones adecuadas para que ocurran todas las venta%as de degradacin que ofrece el uso de esa tecnologa. fortunadamente existe una opcin diferente, el )9" poli$ster aliftico biodegradable con propiedades similares al )E+ que se obtiene a partir de la polimerizacin por condensacin del cido succnico 5, un cido dicarboxlico cuyos usos adicionales son la produccin de fertilizantes, en medicina y en la industria alimenticia. *a ruta petroqumica para la obtencin de cido succnico es la hidrogenacin cataltica del anhdrido maleico, y la posterior hidratacin del anhdrido succnico <" ?= @ . "in embargo, este procedimiento adems de contaminante es costoso ya que la dinmica del precio internacional del petrleo indica que su precio puede ser creciente a largo plazo, no obstante, recientes estudios a escala de laboratorio han demostrado que este cido se puede obtener de manera biolgica por fermentacin a partir de carbohidratos. ;ebido a eso el ob%etivo del presente traba%o es establecer el dise&o conceptual de una planta de produccin biolgica de cido succnicoA produciremos 7... +oneladas toneladas al a&o, $sta meta de produccin se fi%a basndonos en el consumo nacional de bioplstico con miras a competir por ser proveedor de las empresas productoras de este ecolgico material, el proceso se realizar a partir de Actinobacillus succinogenes un microorganismo productor de sal de succinato sobre un sustrato de ba%o costo que contiene hidratos de carbono, adems de otros nutrientes, iones de sodio y triptfano ba%o una presin parcial de #( 1 hasta que la mayora de los hidratos de carbono se convierten a succinato 3 la fuente de carbono que usaremos ser la sacarosa, sustrato abundante en el pasA dicho proceso consiste globalmente enB fermentacin anaerobia seguido de electrodilisis y por ultimo intercambio de iones para purificar. El ob%etivo de la planta es reducir la dependencia de recursos fsiles para ofrecer un producto ms econmico y de buena calidad, ofrecer compuestos qumicos menos txicos, y as mismo, impulsar a la industria plstica a apostarle a los nuevos procesos de produccin basados en tecnologa verde.

ESTADO DEL ARTE El cido succnico o butanodioico <#>C@(>= con peso molecular ''8..0 gDmol fsicamente es un polvo blanco con un pC entre 1,> a 1,8 <solucin acuosa al '4= y se puede encontrar durante los procesos de fermentacin del vino. Este compuesto se utiliza a nivel industrial en el tratamiento de agua, en la hidrogenacin, como aditivo alimentario, como regulador de p)C, agente floculante, precipitante y neutralizador, en la esterificacin y procesos de sntesis, en productos para soldadura y monom$ricos. )resenta un punto de ebullicin a 175E #, punto de fundicinDcongelacin de '85! '83 E#, densidad relativa de ',53 a 1. E#, solubilidad del agua a 87 gDl <a 15E#=, presin del vapor ......15 )a <15 E#=. Es poco soluble en agua, reacciona con metales, agentes reductores y oxidantes fuertes. )resenta incompatibilidad con bases, agentes oxidantes y reductores. "u pureza est entre 08!'.. 4. 8 Entre sus mltiples usos se incluye su empleo en la fabricacin de diversos bioplsticos, tales como poli$steres <por e%emplo, poli <succinato de butilenglicol= o )9"= o poliamidas, por co!polimerizacin con dioles o diaminas, respectivamente. dems, tambi$n reducirse catalticamente a ',>!butanodiol y utilizarse en la sntesis del poli$ster poli <tereftalato de butilenglicol= <)9+=, de un modo anlogo al ',7! propanodiol. 0

POSIBLES MICROORGANISMOS .UE SE PUEDEN USAR PRODUCCIN DE CIDO SUCCNICO

PARA LA

*a importancia de nuestro producto, aparte de que contribuye al desarrollo sostenible nacional desde su proceso de produccin, est como se mencion anteriormente en su variada aplicabilidad industrialB alimentaria, farmac$utica, agro y algunas industrias de productos renovables. )ara la produccin de cido succnico se han hecho varias investigaciones de algunos tipos de cepas que ayudan a me%orar el rendimiento del producto, entre esas estnB Escherichia coli recombinante, la Basfia succiniciproducens, la Actinobacillus succinogenes, succiniciproducens Anaerobiospirillum, succiniciproducens Mannheimia y Corynebacterium glutamicum. '. *a Escherichia coli es una de las cepas ms importantes puesto que contribuye en gran parte de los desarrollos biotecnolgicos de los ltimos a&os. )ara la elaboracin de cido succnico, el m$todo de fermentacin no es tan eficiente utilizando como fuente de carbono la glucosa, se nota que la produccin no es la

deseada. )or cada mol de glucosa fermentada, se producen slo ',1 moles de cido frmico, .,'!.,1 moles de cido lctico y .,7!.,> moles de cido succnico. '' ;ebido a esto los estudios experimentales revelan que se necesita grandes cantidades de sustrato para poder obtener una cantidad base de cido succnico. *a E. coli puede usar diferentes sustratos, por e%emplo la sacarosa para producir cido succnico 71,3 g D * con una productividad de .,7> g D l D h. '' Cay que tener en cuenta que esta cepa puede mutarse para me%orar sus condiciones y que esto tenga alguna relevancia en la produccin de cido succnico. *a Ssucciniciproducens aAnaerobiospirillum es una bacteria que produce de manera natural acido succnico en cantidades moderadas, pero esta cepa no tolera altas concentraciones salinas y adems se inhibe mediante concentraciones moderadas de producto ''. *a Basfia succiniciproducens produce acido succnico, esta cepa realiza el metabolismo con una gran variedad de fuentes de carbono en acido, el desarrollo del proceso es muy similar que el de la E. coli con la venta%a que en la industria petroqumicas el medio ambiente sera muy bien recompensado siendo esto una alternativa para conservar nuestros ecosistemas. En Espa&a adelantan convenios entre algunas empresas como 9 "+ y #":, ellas esperan realizar una planta de produccin de cido succnico basado en la fermentacin y aseguran que este proyecto tiene como nico inter$s generar alternativas usando fuentes renovables. '1 *a Actinobacillus succinogenes es una cepa que puede usar varias fuentes de carbono en condiciones anaerobiasB xilosa, glucosa, fructosa, manitol, sorbitol, celobiosa y sacarosa, esta ltima que se extrae de la ca&a de azcar y la melaza. *a sacarosa es una fuente de carbono de amplio uso en la industria de bioprocesos, esto para resaltar q no solo la glucosa es una fuente de carbono para el desarrollo de biocombustibles. '7 *a fermentacin en feed!batch se llev a cabo en las mismas condiciones como la fermentacin por lotes con una concentracin inicial de sacarosa de 5. g D *, el crecimiento celular puede no ser inhibido cuando la concentracin de sacarosa fue inferior a 5. g D *, cuando la sacarosa en promedio fue menor a 1. g D *, una solucin de @.. g D * de sacarosa fue necesaria para mantener la concentracin de sacarosa entre 1.!5. g D *. *a sacarosa fue a&adida mediante una bomba peristltica a un caudal de 5>. ml D h. -n total de '.. g D * de sacarosa se

aliment durante todo el proceso. Estos experimentos se llevaron a cabo por triplicado. '7 *as dems cepas proporcionan producen acido succnico lo hacen en peque&as cantidades. *uego de una detallada investigacin sobre los diferentes tipos de microorganismos que se pueden usar para obtener acido succnico, hemos llegado a la conclusin de que la cepa elegida es la Actinobacillus succinogenesA entre sus principales propiedades esta que cuenta puede utilizar con una variedad de fuentes de carbono que no disminuyen su rendimiento sino que lo mantienen, esto es un gran beneficio ya que no se limita con un sustrato en especfico. *a sacarosa sera una fuente de carbono ideal ya que gracias al clima privilegiado de nuestro pas, y al contrario de lo que sucede en el resto del mundo <con excepcin de CaFi y el norte de )er=, la ca&a de azcar se puede sembrar y cosechar durante todos los meses del a&o, contamos con 117.0.5 hectreas sembradas en ca&a para azcar de las cuales, el 1>4 corresponde a tierras propias de los ingenios y el restante 3@4 a ms de 1.... cultivadores de ca&a '> lo que nos facilitara usar esta materia prima de forma directa. *as condiciones de crecimiento utilizando sacarosa, son muy efectivas. +anto la produccin como el rendimiento fueron ms altos que los experimentos hechos por otro tipo de cepa. *a densidad ptica de c$lulas mxima fue de '',@ a '. h, y luego disminuy hasta el final de la fermentacin. '5 ELECCIN DE LAS MATERIAS PRIMAS )ara elegir el sustrato adecuado, es decir, el de mayor rendimiento y mayor oferta nacional, en el proceso de bio!produccin del cido succnico se consult a fondo en informes de experimentos realizados a escala de laboratorio donde usan Actinobacillus succinogenes como biomasa. *as fuentes de carbono analizadas fueron la xilosa, glucosa, sacarosa, manitol, celobiosa y la fructuosa '@A sin embargo las ms abundantes son la glucosa y sacarosa. ;urante el proceso de fermentacin utilizando glucosa, la concentracin del cido succnico logro un 53.' gD* con un rendimiento del 3'.54, en cambio, cuando se utiliz la sacarosa, se obtuvo una concentracin del cido succnico de @..5 gD* con un rendimiento del 81.04 '3 . )or lo tanto, basndonos en los resultados de esos experimentos optamos por la utilizacin de sacarosa como materia prima para la bio!produccin del cido succnico. SACAROSA *a sacarosa es un disacrido muy abundante en la tierra y se extrae principalmente de la ca&a de azcar y la remolacha azucarera. +iene una utilidad muy importante en la industria como endulzante para alimentos y como fuente de

carbono en la produccin de etanol por la levadura S. cerevisiae '8, en la produccin de cido ctrico por la Aspergillus niger '0 y para la produccin de cido succnico por la Actinobacillus succinogenes 1.. "e ha observado que la sacarosa tiene efectos beneficiosos en la proteccin de las c$lulas en la degradacin por calor, a altas presione y en la deshidratacin 1'. Este disacrido est conformado por dos monosacridos, glucosa y fructuosa. Estos dos estn unidos por un enlace glucosdico entre el tomo de carbono ' de la glucosa y el tomo de carbono 1 de la fructuosa 11

P'(12*3,3*+ )2+24(567824,+ ;ensidad Grmula molecular )unto de fusin "olubilidad )eso molecular Estado de agregacin pariencia

17

'.50 gDcm7 #'1C11('' >55 H "oluble en agua 7>1,7 gDmol "lido #ristales blancos

*a sacarosa es fina, incolora, inodora y tiene un sabor dulce.

DI9IDO DE CARBONO

El dixido de carbono es un gas incoloro de olor fuerte y sabor cido. Es un componente de la atmsfera en peque&a proporciones <aproximadamente > partes por '.....=. "e obtiene de la combustin de hidrocarburos, de la fermentacin y de la respiracin animal. *as plantas lo utilizan para la fotosntesis de los carbohidratos. *a presencia de dixido de carbono en la atmsfera impide que una parte de la energa radiante que recibe la +ierra vuelva al espacio, produciendo el llamado efecto invernadero. El dixido de carbono se utiliza como refrigerante, en extintores de incendio, inflado de botes y chalecos salvavidas, fabricacin de goma espuma y plsticos, elaboracin de bebidas gaseosas y fertilizantes para plantas de invernadero y tambi$n para insensibilizar al ganado antes de la matanza. 1> #omo parte del ciclo del carbono, plantas, algas y cianobacterias usan la energa lumnica del "ol para fotosintetizar carbohidratos a partir del dixido de carbono y el agua, expulsando oxgeno como desecho de la reaccin. "in embargo, las plantas no pueden hacer la fotosntesis por la noche o en oscuridad, desprendiendo una cantidad menor de dixido de carbono debido a la respiracin celular. El dixido de carbono es una materia prima fundamental ya que se utiliza para eliminar el oxgeno antes de la inoculacin debido a que el Actinobacillus succinogenes es una bacteria anaerobia. 15 P'(12*3,3*+ )2+24(567824,+ ;ensidad Grmula molecular )unto de fusin )unto de ebullicin "olubilidad )eso molecular Estado de agregacin Iravedad especfica Ias incoloro
1@

'.8>7 gDcm7 #(1 '0>,3 H 1'@ H "oluble en agua >> gDmol Ias ',57 a 1' E#

CARBONATO DE MAGNESIO El carbonato de magnesio es un slido blanco que existe en la naturaleza como mineral. El :g#(7 es utilizado en compuestos a prueba de fuego y extintores, cosm$ticos y dentfricos. (tras aplicaciones son de material de relleno, supresor de humo en plsticos, agente reforzante en goma de neopreno, como agente de secado, laxante y para retener el color en las comidas. dicionalmente, el carbonato de magnesio de alta pureza es utilizado como anticido y como aditivo para la sal de mesa, para que escurra me%or. 13 Es una materia prima importante en el bio!proceso de produccin del cido succnico debido a que controla el pC del medio. Es un excelente neutralizador de un medio acido. 18 )ropiedades fisicoqumicas. 10 ;ensidad Grmula molecular )unto de fusin "olubilidad )eso molecular Estado de agregacin Iravedad especfica Es un slido blanco 1,058 gDcm7 :g#(7 @17 H "oluble en agua 87,7'> gDmol "lido ',57 a 1' E#

E9TRACTO DE LE%ADURA El Extracto de levadura es un extracto soluble que se obtiene por extraccin acuosa de c$lulas de levadura autolizadas. Es un producto rico en vitaminas especialmente del comple%o 9, aminocidos y otros factores de crecimiento. Es utilizado en la preparacin de medios de cultivo como excelente fuente de nutrientes. 7. El extracto de levadura contiene una cantidad de forma natural del cido glutmico o glutamato monosdicoA esto se produce a partir de un ciclo de fermentacin cido!base, y slo se encuentra en algunas levaduras. dems es una materia

prima importante para el medio de cultivo de la Actinobacillus succinogenes para la produccin de cido succnico. 7' SUBPRODUCTOS DEL PROCESO *os principales subproductos de este proceso sonB ETANOL- El etanol o alcohol etlico <#1C@(= se presenta a condiciones normales de presin y temperatura como un lquido incoloro e inflamable con un punto de ebullicin de 38,>E#. Jste tiene muchos usos en la industria, pero los principales usos y los ms conocidos actualmente son los del etanol como combustible de los vehculos automotores y como ingrediente para las bebidas alcohlicas. dems se usa tambi$n en el sector farmac$utico como excipiente de algunos medicamentos y cosm$ticos <es el caso del alcohol antis$ptico 3.K I* y en la elaboracin de ambientadores y perfumes=. 71 *a produccin de alcohol carburante <etanol anhdrido= en #olombia fue de aproximadamente 7@1 millones de litros en el a&o 1.'1. Esto significa un aumento del 3,>4 con respecto a la produccin registrada para el a&o 1.'' en el cual se produ%eron 773 millones de litros. #omparado al a&o 1.'., el aumento de produccin llega a ser del 1>,74 de los 10' millones de litros reportados.

+otal Lentas 1.''B 75',.8 :illones de *itros +otal Lentas 1.'1B 7@8,>> :illones de *itros
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ACIDO RMICO- El cido metanoico, tambi$n llamado cido frmico <#C1(1=, es un cido orgnico de un solo tomo de carbono, esta como lquido, incoloro, de olor irritante, con punto de ebullicin de '..,3 E# y de congelacin de 8,> E# y es completamente soluble en agua. El cido frmico se utiliza en la industria textil como secante para te&ido, acabado de textiles y como agente reductor. +ambi$n en el tratamiento del cuero, manufactura de fumigantes, insecticidas, refrigerantes, disolvente para perfumes, lacas, galvanizado, medicina, cervecera <antis$ptico=, plateado de vidrios, formiato de celulosa, coagulante del ltex natural, flotacin de minerales, plastificante de resinas vinlicas, aditivo para pienso de animales <alimento para los animales=, es el principal uso que se le puede dar a este acido ya que permite que el alimento que va destinado para el ganado se conserve en el invierno y retenga sus nutrientes con el tiempo, adems que se utiliza en la industria avcola adicionada al alimento para matar la salmonera. En la industria de los saborizantes y perfumes se adiciona en la formulacin ya que se forman algunos $steres que dan una nota caracterstica. 7> ACIDO AC:TICO- El cido ac$tico, cido metilencarboxlico o cido etanoico <#1C>(1=. Es un lquido y se puede encontrar en forma de ion acetato. Jste es un cido que se encuentra en el vinagre, siendo el principal responsable de su sabor y olor agrios. *os usos del cido ac$tico son muchos y muy variados. "e produce alrededor de @,5 millones de toneladas de cido ac$tico en el mundo cada a&o y es uno de los

reactivos qumicos ms importantes. "e utiliza en muchos procesos industriales, tales como en la fabricacin de acetato de celulosa que se utiliza en la industria del cine y acetato de polivinilo que se utiliza para hacer pegamentos para madera. *os usos ms comunes de cido ac$tico sonB ;isolvente para muchos procesos industriales En la fabricacin de las fragancias y perfumes En la fabricacin de fibras sint$ticas y textiles En la fabricacin de tintas y colorantes En los anlisis de laboratorio clnico en el que se utiliza para probar la sangre. En la fabricacin de botellas de bebidas alcohlicas +ratamiento para las infecciones de odo externo donde se ayuda a prevenir el crecimiento de hongos y bacterias En la fabricacin de cauchos y plsticos En la fabricacin de pesticidas El cido ac$tico es aprobado como un aditivo alimentario
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7@

DIAGRAMA DE LUJO DEL PROCESO

BIBLIOGRA IA

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