VALIDACIN DE UN MTODO POR ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS PARA LA DETERMINACIN DE TRAZAS DE RANITIDINA Y AMLODIPINO LUEGO DE LA SANITACIN DE REAS O EQUIPOS

LAURA MILENA ECHEVERRY ZAPATA 1.037.605.405 JUAN DAVID BUSTAMANTE RODRIGUEZ 1.037.575.372 JUAN SEBASTIAN LOPEZ PORRAS 1.1128.281.870 FABRICIO ESTEBAN CASTRILLON SOSA 1.035.856.535

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACIA MEDELLN 2013

INTRODUCCION En la industria farmacutica se debe asegurar que los productos farmacuticos sean apropiados para el uso previsto, que renan los requisitos necesarios para autorizar su comercializacin, y que no sean riesgosos para el paciente debido a su inocuidad, calidad o eficacia inadecuadas. Segn las Buenas Prcticas de Manufactura (BPM) cada uno de los aspectos de la fabricacin de los productos farmacuticos debe ir acompaado de un nivel elevado de saneamiento e higiene, el cual debe incluir instalaciones, equipos, materiales y recipientes para la produccin, productos de limpieza y desinfeccin, y todo aquello que pueda ser fuente de contaminacin para el producto. El objetivo principal es disminuir los riesgos inherentes a toda produccin farmacutica, riesgos que no pueden detectarse mediante el control del producto terminado, como por ejemplo la contaminacin cruzada, la cual se genera del contacto con materias primas, productos intermedios, productos acabados, con otro material de partida o producto durante la produccin, por tal razn la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) establece en el reporte 32, que con el objeto de reducir al mnimo el riesgo de peligro mdico serio causado por la contaminacin cruzada, se debe contar con instalaciones independientes y autnomas para la fabricacin de ciertos productos farmacuticos, tales como los materiales altamente sensibilizantes (por ejemplo, la penicilina) o preparaciones biolgicas (por ejemplo, microorganismos vivos). Los procedimientos de limpieza tienen como objetivo eliminar cualquier residuo indeseable, que pueda alterar la calidad de los productos que se estn elaborando; esto incluye principios activos, excipientes, partculas, lubricantes, partes metlicas de los equipos y microorganismos. En estos procedimientos se deben indicar de manera clara e inequvoca, los pasos para limpiar tanto las reas como los equipos y debern incluir el proceso detallado desde la preparacin de los agentes de limpieza, cmo realizarla, hasta la elaboracin de la etiqueta de equipo limpio. La formacin del personal juega un papel primordial en la ejecucin de los procedimientos de limpieza, sobre todo cuando se realizan de forma manual, por lo cual es fundamental contar con un programa de entrenamiento del personal que incluya los aspectos de las BPM y en particular los relacionados con la limpieza.(3)(4) Los mecanismos mediante los cuales se logra eliminar los residuos de las superficies incluyen la accin mecnica, la disolucin, la accin detergente y reaccin qumica. La accin mecnica se refiere a cualquiera de las variedades de procesos no qumicos que pueden ejecutarse incluyendo cepillados, barridos y friccin. La disolucin emplea solventes orgnicos o agua para disolver los residuos y sta puede mejorar su actividad con el uso de aditivos. La clave de la accin detergente, es el uso de surfactantes usualmente en sistemas acuosos. Otro mecanismo son las reacciones qumicas, donde la naturaleza qumica del residuo cambia, usualmente por rompimiento de las molculas grandes transformndose en otras de menor tamao que pueden ser fcilmente eliminadas por la accin detergente. Para evaluar la efectividad de los procedimientos de limpieza se debe realizar un muestreo y posterior anlisis fisicoqumico y/o microbiolgico para la determinacin de los residuos o contaminantes. Generalmente se usan dos mtodos de muestreo: el mtodo de muestreo directo

por hisopado y el mtodo de muestreo indirecto por enjuague. El mtodo de muestreo directo es el comnmente usado, se realiza frotando un hisopo sobre un rea o superficie especfica, se debe tener en cuenta el material del hisopo, el cual debe ser inerte para evitar las interferencias en el anlisis, y especificar si se van a utilizar hisopos secos o hmedos, la manipulacin y la tcnica del hisopado son parmetros crticos de este proceso. La validacin se entiende como la accin de demostrar y documentar que cualquier proceso, procedimiento o mtodo conduce consistentemente a la obtencin de resultados reales y esperados. La Gua de Verificacin de Buenas Prcticas de Manufactura de la Organizacin Panamericana de la Salud, indica que para la fabricacin de productos segregados o altamente sensibilizantes y activos como son las hormonas se deben contar con procedimientos de limpieza de eficacia conocida. En el reporte 40 de la OMS, se indica que debe haber evidencia documental de que los procedimientos de limpieza son capaces de remover los residuos a niveles de aceptacin predeterminados, tomando en consideracin el tamao del lote, la dosis, la toxicidad y el tamao del equipo. Para la validacin de los procesos de limpieza deben tomarse en consideracin varios aspectos que incluyen las caractersticas del equipo o superficie que debe ser sometida al procedimiento de limpieza, los residuos que pudieran presentar riesgos de contaminacin cruzada, el lmite de aceptacin del residuo, la validacin del mtodo analtico, el mtodo de muestreo y debe considerarse el entrenamiento del personal sobre todo en los casos donde la limpieza se realiza de manera manual. Es preciso destacar que este proceso de validacin debe ser documentado, lo cual comienza con la elaboracin de un protocolo; que indica cmo ser validado el procedimiento de limpieza, debe incluir el objetivo, las personas responsables de ejecutar las pruebas y de aprobarlas, la descripcin de los materiales y equipos que forman parte del estudio, debe definir el perodo que debe transcurrir desde que finaliza la produccin hasta el comienzo de la limpieza, debe indicar el procedimiento de limpieza que ser evaluado, los procedimientos de muestreo y los puntos donde se realizarn, los mtodos de anlisis a emplear, indicando su lmite de deteccin y cuantificacin, los lmites de aceptacin incluyendo la justificacin de dichos lmites y cuando se debe revalidar, este protocolo debe ser aprobado por la gerencia de Aseguramiento de la Calidad de la empresa y luego de cumplir con todo lo expuesto en el protocolo de validacin se debe generar un informe final, el cual debe ser aprobado por la direccin de la planta. La industria farmacutica con el fin de satisfacer los requerimientos del mercado, se ha visto en la necesidad de fabricar diferentes familias de productos en una misma lnea de produccin debido al alto costo que involucra el diseo, desarrollo y mantenimiento de un rea de fabricacin dedicada a un solo tipo de producto farmacutico, as como tambin evitar los tiempos de paradas prolongados debido a la frecuencia de fabricacin de estos productos, por tal razn debe tomar las medidas necesarias para disminuir los riesgos de contaminacin cruzada y debe dejar evidencia de que los procesos de limpieza presentan eficacia comprobada.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL Validar un mtodo por Espectrofotometra UV-VIS que sea de buen desempeo y reproducible para la cuantificacin de trazas de ranitidina y amlodipino, despus del proceso de sanitacin de reas o equipos.

OBJETIVOS ESPECFICOS Realizar una curva de calibracin de ranitidina y amlodipino con el espectrofotmetro UV-VIS. Evaluar el mtodo mediante parmetros estadsticos como el lmite mnimo de cuantificacin (LMC) y de deteccin (LMD), exactitud, precisin, reproducibilidad y repetitividad. Verificar que los resultados obtenidos durante el desarrollo del mtodo sean acordes a las necesidades y cumplan con los parmetros establecidos. Realizar la validacin mtodo seleccionado para la cuantificacin de trazas de los productos propuestos. Aprovechar los espacios ofrecidos por laboratorios Laproff para crecer acadmicamente en el rea industrial enfrentndonos con retos que presenta el dia a dia la labor farmacutica y hacer de esta una gran experiencia en el inicio de las actividades laborales.

RANITIDINA La ranitidina es un antihistamnico H2 que acta reduciendo la secrecin de cido clorhdrico a nivel del estmago, mediante el bloqueo competitivo de los receptores H2 de la histamina. Est por tanto indicada en el tratamiento de las lceras gstricas y duodenales, de la enfermedad por reflujo gastroesofgico, y del sndrome de Zollinger-Ellison. La ranitidina se absorbe rpidamente en el tubo digestivo y las concentraciones plasmticas mximas se alcanzan unas 2 o 3 horas despus de su administracin por va oral. Los alimentos no alteran significativamente la absorcin. La biodisponibilidad de la ranitidina tras la administracin oral es de aproximadamente un 50%. El frmaco se absorbe rpidamente despus de una inyeccin intramuscular y la concentracin plasmtica mxima se alcanza al cabo de 15 min. Se une dbilmente, aproximadamente un 15%, a las protenas plasmticas. La semivida de eliminacin es de unas 2 o 3 horas y aumenta en caso de insuficiencia renal. Una pequea proporcin de ranitidina es transformada en el hgado a N-xido, S-xido y desmetilranitidina; el N-xido es el principal metabolito; pero solo representa un 4 a 6% de la dosis. Aproximadamente un 30% de una dosis oral y un 70% de una dosis intravenosa se excretan sin modificar por la orina al cabo de 24 horas, principalmente por secrecin tubular activa; parte del frmaco se excreta por las heces. La ranitidina atraviesa la barrera placentaria y se elimina por la leche materna. La ranitidina puede administrarse por va oral o parenteral, ya sea intravenosa o intramuscular. Aunque la mayora de los preparados contienen ranitidina clorhidrato, las concentraciones y las dosis se expresan en funcin de la base. Es conocida y comercializada como Ausran; Azantac; Azuranit; Digestosan; Gertac; Ranaps; Rani; Ranic; Ranihexal; Raniplex; Raniprotect; Ranitic; Ranopine; Ranoxyl; Rantec; Sostril; Ulcidine; Ulcirex; Ulsal; Xanomel; Zaedoc; Zandin(e); Zantac; Zantic; Zidac; su frmula molecular es C13H22N4O3S, HCL (PM=350.9) y su CAS 66357593.

La ranitidina es un polvo cristalino blanco o amarillo plido. Fcilmente soluble en agua, bastante soluble o poco soluble en etanol anhidro, muy poco soluble en cloruro de metileno. Su punto es de fusin: 133-134C. Presenta un mximo de absorcin UV en solucin acuosa a 313nm.

AMLODIPINO La amlodipino es un calcioantagonista (bloqueador de los canales lentos del calcio o antagonista de los iones calcio) del grupo de las dihidropiridinas, que impide el paso de los iones calcio a travs de la membrana al msculo liso y cardiaco. La accin antihipertensiva de la amlodipino es debida a un efecto relajador directo del msculo liso vascular. El mecanismo exacto, por el que la amlodipino alivia la angina, no se ha determinado plenamente, pero este frmaco reduce la carga isqumica total mediante las dos acciones siguientes: mediante una dilatacin de las arteriolas perifricas, reduciendo as la resistencia perifrica total (postcarga), frente a la que trabaja el corazn. Como la frecuencia cardiaca permanece estable, este desahogo del corazn reduce el consumo de energa del miocardio, as como sus necesidades de oxgeno. Y mediante la dilatacin de las grandes arterias coronarias, as como las arteriolas, tanto en las zonas normales, como en las isqumicas. Esta dilatacin aumenta el aporte de oxgeno al miocardio en pacientes con espasmo de las arterias coronarias (angina variante o de Prinzmetal), y contrarresta la vasoconstriccin coronaria inducida por el tabaco.(1) El amlodipino es un polvo cristalino que posee un punto de mxima absorcin a una longitud de onda de 239 nm en el espectro UV.(2)

METODOLOGIA FASE I: MTODO DE ANLISIS Realizar un barrido espectrofotomtrico en la regin ultravioleta de ambos principios activos (Amlodipino Ranitidina) en forma de principio activo, producto terminado y placebo con 4 solventes (agua, metanol, etanol, acetonitrilo) de caractersticas diferentes, con el fin de evaluar su comportamiento en trminos de mejor solubilidad y mximo pico de absorcin, pera cada uno de estos experimentos se contara con el blanco apropiado. Teniendo en cuenta cada uno de los espectros se realizara una comparacin entre los picos mximos del principio activo, placebo y producto terminado, para identificar las posibles interferencias y el aumento de la absorcin por el comportamiento de ellos en la muestra. FASE II: VALIDACION DEL METODO Realizar una curva de calibracin (absorbancia Vs Concentracin) para obtener mediante regresin lineal la ecuacin de la lnea recta y verificar la linealidad de los datos mediante el coeficiente de determinacin de los datos (R2). Para la realizacin de esta curva de calibracin se consideraran las siguientes concentraciones 4,6,8,10,16 y 20ppm, de forma tal que el mximo nivel permitido (MNP) de trazas quede dentro de dicho rango (se realizaran 3 rplicas por cada punto).

Preparacin de las diluciones:

Para la preparacin de la solucin madre, iniciamos pesando 5 mg del principio activo, adicionarlos a un baln volumtrico de 250 ml y llevar a volumen con el solvente que mejor resolucin muestre en el espectro-UV. Esta solucin tendr una concentracin de 20 ppm.

Solucin de 16 ppm: tomar 4 ml de la solucin madre, adicionarlos en un baln volumtrico 5 ml y llevar a volumen con el solvente. Solucin de 10 ppm: tomar 5 ml de la solucin madre, y adicionarlos en un baln volumtrico de 10 ml y llevar a volumen con el solvente. Solucin de 8 ppm: tomar 2 ml de la solucin madre, adicionarlas en un baln volumtrico de 5 ml y llevar a volumen con el solvente. Solucin de 6 ppm: tomar 3 ml de la solucin madre, adicionarlos en un baln volumtrico de 10 ml y llevar a volumen con el solvente. Solucin de 4 ppm: tomar 1 ml de la solucin madre, adicionarlos en un baln volumtrico de 5 ml y llevar a volumen con el solvente. La determinacin del MNP en trazas, se define en cada una de las industrias farmacuticas, para la liberacin de reas o equipos se puede realizar por pruebas de lavados o de superficie. Si se desea hacerlo por pruebas de lavados el MNP ser de 10 ppm, el cual es un valor generalizado en las guas y procedimientos de referencia. Si se desea realizar por superficie se tienen 2 alternativas en la primera se debe conocer el rea superficial y de los equipos en la cual entra el contacto el principio activo a analizar o una segunda opcin donde solo requerimos conocer el tamao de lote mas pequeo que se produce en la empresa o en la linea de produccin de inters y la concentracin mnima teraputica de administracin diaria. Si optamos por la segunda opcin utilizaramos la siguiente formula: (CmT x 1 x L) / 1000 = MNP CmT: Concentracin mnima teraputica L: Tamao de lote 1000: Factor de seguridad para formas farmacuticas orales Se determina que en el producto siguiente no debe aparece ms de una milsima parte de la concentracin mnima teraputica del producto anterior, pues en este valor no se considera ni sensibilizante ni toxico. Luego la siguiente formula: (MNP (Ug/cm2) x 100 cm2) / Vol. dilucin Hisopo (mL) = ppm 100 cm2 = rea superficial de recuperacin (definido por el laboratorio, entre ms grande ms sensible el mtodo)

Vol. dilucin hisopo = Cantidad de buffer utilizado, definido por el laboratorio, se recomienda 5 para no requerir un lmite de deteccin muy bajo Indicacin teraputica Amlodipino: 5 mg Indicacin teraputica ranitidina: 150 mg Luego se preparan las muestras en el solvente seleccionado y se realiza la lectura a la longitud de onda de mximo absorbancia y por extrapolacin se cuantifica la cantidad de principio activo presente en las muestras analizadas.

Durante la validacin se evaluaran los siguientes parmetros:

a. SELECTIVIDAD: Es la capacidad de un mtodo analtico para medir solamente lo que se pretende que se mida. CRITERIO DE ACEPTACION: ausencia de interferencias von la seal del analito b. LINEALIDAD: Es la capacidad de un mtodo analtico para dar resultados que son directamente proporcionales a la concentracin del analito dentro de un intervalo.

c. PRECISION: Relacionada con la disposicin de las medidas alrededor de su valor medio o

central y corresponde al grado de concordancia entre ensayos individuales cuando el mtodo se aplica repetidamente a mltiples alcuotas de una muestra homognea. REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea por un solo analista, usando los mismos instrumentos y mtodos de intervalos cortos de tiempo. REPRODUCIBILIDAD: Grado de concordancia entre los resultados analticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea por dos o ms analistas o instrumentos diferentes, usando el mismo mtodo en diferentes das.

d. EXACTITUD: Es la cercana del valor analtico al "valor verdadero" de concentracin del

compuesto de inters en el material bajo examen. Es la concordancia entre la mejor estimacin de una cantidad y su valor real. En la prctica la cercana a un estndar de algn tipo se toma como medida de exactitud.

e. SENCIBILIDAD: Es el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la concentracin del analito. Es la pendiente del intervalo de trabajo y cuanto mayor sea esta, mayor es la sensibilidad del mtodo. f. LIMITE DE DETECCIN: es la concentracin ms baja a la cual puede detectarse el analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales establecidas.

g. LIMITE DE CUANTIFICACIN: es la concentracin ms baja a la cual el analito puede cuantificarse con una precisin y veracidad aceptables bajo las condiciones experimentales establecidas. h. ROBUSTEZ: Es la medida de la capacidad del mtodo analtico de permanecer inalterado por pequeas, pero deliberadas variaciones (efecto de cambio en las condiciones) en los parmetros del mismo, proporcionando un ndice de su confiabilidad durante su uso normal. BIBLIOGRAFIA 1. http://reference.medscape.com/drug/norvasc-amlodipine-342372 2. Clarke's Analysis of Drugs and Poisons.(SOFTWARE) 3. F. Pino Prez, D. Prez Bendito. Anlisis de elementos traza por espectrofotometra de absorcin molecular uv visible. [Sitio en Internet] Acceso septiembre 2 de 2013. Disponible en: http://books.google.com.co/ 4.Fourman GL, Mullen MV. Determining cleaning validation acceptance limits for

pharmaceutical manufacturing operations. Pharm Technol 1993. Pag. 54-60.