Bonjour,

j'ai du utiliser une mthode rcemment pour le dosage des sucres totaux. Pour ma par
t j'ai utilis la mthode phnol-sulfurique. Voici le rsum de mon mmoire :
Les glucides en milieu acide sulfurique et chaud sont dshydrats en drivs du furfural
qui se combine facilement avec le phnol et donnent une coloration rose-saumon (l
e glucose fournit de l'hydroxyfurfural). L'absorbance est lue la longueur d'onde
de 490 nm par spectrophotomtrie. La coloration est permanente. Cette mthode est t
rs sensible puisqu'elle permet de dtecter des quantits de glucides pouvant atteindr
e 1 g.
Cette mthode permet la dtermination de la teneur en glucides totaux (sucres simple
s, sucres complexes et polyols). Une hydrolyse acide chaud (acide sulfurique 96%
dans un bain 90C pendant 5min) est ralise sur la calibration au glucose et les chan
tillons doser. Les glucides totaux librs sont quantifis par spectrophotomtrie UV (A=
492nm) aprs raction colorimtrique au phnol 5%.
La quantification des sucres totaux se fait par destruction des liaisons glycosi
diques des sucres complexes (polysaccharides) qui se convertissent alors en sucr
es simples (monosaccharides).
Lajout du phnol se fait directement aprs lajout de lacide sulfurique (aprs destruction
des sucres complexes).
La concentration des sucres totaux dans les chantillons doser a t calcule par rappor
t la calibration au glucose. Une calibration lamidon et la cellulose ont galement t
ralise pour vrifier la raction complte de la mthode (destruction des sucres complexes)
.
Dosage des sucres totaux
Le dosage des sucres totaux solubles est ralis par la mthode de Dubois et al.
(1956).

II.3.6.1 Principe
Les oses sont stables en milieu acide. Cependant sils sont chauffs en milieu acide

concentr, ils donnent des furfuraldhydes par cyclisation et dshydratation. Les furf
urals et
ses drivs ont la proprit de se condenser avec le phnol pour former des complexes
marron.

II.3.6.2 Mode opratoire
Dans une srie de tubes essai, 25 l dextrait sont additionns 0,5 ml de phnol (5
%) et 1,5 ml de solution dacide sulfurique concentre (H2SO4). Le mlange est chauff a
u
bain marie 100 C pendant 5 mn. Aprs refroidissement dans la glace fondante, la den
sit
optique est mesure 490 nm contre un blanc dans lequel 25 l dalcool 80 % remplace
lextrait brut. Un talon est construit grce une gamme (0 35 mg/ml) de concentration
dune solution mre de glucose 1 mg/ml (Fig. 8). Les quantits sont exprimes en mg/g de

poids frais et dtermines par la formule suivante :

a : coefficient directeur de la droite dtalonnage ;
Valcool : Volume dalcool en ml ;
Vextait : Volume dextrait en l ;
PF : poids frais du matriel vgtal ;
Dox : densit optique.
Incubation pendant 30 mn + centrifugation
1500 tours/min pendant 15 mn
3 ml dalcool 80 % (broyage
froid et filtration
1g de matriel biologique
Rsidu
Culot
limin
Fraction soluble
de
Dosage des sucres totaux
Il a t ralis, selon la mthode au
phnol-sulfurique [DUBOIS 1965], par la
mesure de labsorbance 490 nm, de 1
ml dchantillon en prsence de 1 ml de
phnol (10%) et 5 ml dacide sulfurique
concentr. La concentration en sucres
totaux a t dtermine grce une droite
dtalonnage.
Dosage des sucres totaux
Pour doser les sucres totaux dans les chantillons de
Gracilaria verrucosa, nous avons appliqu la mthode
de Dubois et al. (1956). En prsence de lacide
sulfurique et chaud, les glucides sont dshydrats en
drivs du furfural qui se combinent facilement avec le
phnol et donnent une coloration rose-saumon (le
glucose fournit de l'hydroxyfurfural). L'absorbance est
lue la longueur d'onde de 490 nm. La coloration est
permanente. Cette mthode permet de dtecter des
quantits de glucides pouvant atteindre 1 g. Pour
chaque chantillon dalgue, nous avons procd de la
manire suivante : 1ml de phnol 5% w/v (5 g de
phnol dans 100 ml deau distille glace), 1 ml
dchantillon est ajout. Le tout est homognis par
un vortex. Ensuite, on ajoute 5 ml de H2SO4 concentr.
Lensemble est incub dans un bain marie 100C
pendant 5 mn. A la sortie du bain marie, lchantillon
est stock pendant 30 mn lobscurit. Ensuite, la
lecture de labsorbance de lchantillon, la longueur
donde 490 nm, est ralise laide dun
spectrophotomtre (JANWAY 6405,UK).
Pour dterminer la courbe dtalonnage, dix solutions
talons de concentration allant de 0 70 mg/ml ont t
prpares partir d'une solution talon de fructose (
w/v), (1 ml pour chaque solution) ; l'eau physiologique
est utilise comme diluant. Labsorbance de chaque
concentration tant dtermine, la courbe dtalonnage
est ensuite tablie. La quantit de sucres Q (mg) que
renferme chaque chantillon est dtermine selon
lquation suivante : Q = 1*20*C. C tant la
concentration de sucres de lchantillon, dgage
partir de la courbe dtalonnage