Q.

FMara tsaeet Palacios palacios

Guade prcticas de Farmacognosla y Fltoqumlca
PRCTICA N 08
DETERMINACiN DE FLAVONOIDES
8.1 FLAVONOIDES:
Los flavonoides, son compuestos fenlicos y son en su mayora pigmentos
responsables de la coloracin de numerosas flores y de algunos frutos. El
elemento comn de estos compuestos se han descrito varios millares de los
mismos, esta relacionado con un ncleo bsico: el 2-fenil cromano. Los
flavonoides se encuentras ampliamente distribuidos en el reino vegetal,
generalmente en la forma soluble de glicsidos. Sus propiedades
farmacolgicas estn asociadas con la reduccin de la permeabilidad
capilar. Entre estos tenemos a la rutina, la hesperidina y la quercetina.
FlavonoIs
HO
R R
2
Aglycone
At OH H Quercetin
OH
H H Kaempferol
OH OH . Myricetin
OCH
3
H Isorhamnetin
R
2
OH O
OBJETIVOS:
~ Determinar la presencia del flavonoide rutina y hesperidna.
~ Conocer las reacciones qumicas de identificacin para flavonoides.
8.2 DETERMINACiN DE LA RUTINA:
8.2.1 FUNDAMENTO:
La rutina es un flavonoide que tiene una mejor solubilidad en medio
alcohlico, que se caracteriza por dar positiva la prueba de Shinoda con una
variacin de color que depende del tipo de estructura, asimismo se
__________ ~- - - - - - - - - - - - ~- - - - ~~- - ~- - ~~- - - - - - - - - - - - - - - - - - - 65
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- -
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Gua de prcticas de Farmacognosia V Fltoqumica
determina sus grupos fenlicos con el F+3 y por dar fluorescencia frente a la
luz UV.
8.2.2 MUESTRA: Hojas de Ruta graveolans "Ruda"
8.2.3 MATERIALES Y REACTIVOS:
~ ter etlico
~ Equipo soxhlet
Beaker de 100y 250mL
Mg metlico
Tubos de ensayo
Alcohol etlico
> - H
2
S0
4
concentrado
~ HCI concentrado
> - FeCb 1%y EtOH
~ Lmpara de Luz UV
~ Alcohol amilico
Placas cromatogrficas
~ Acetato de Plomo 5%
8.2.4 EXTRACCiN
Fraccionar las hojas y proceder a un desengrasado en soxhlet con ter, con
el fin de eliminar las grasas, resinas y otros constituyentes. Al residuo
tratarlo posteriormente con agua caliente y decantar el lquido sobrenadante.
Concentrar el extracto acuoso y dejar en reposo por 5 das, tiempo en el
cual cristalizar la rutina. Si se desea purificar, efectuar cristalizaciones
empleando alcohol y por ltimo desecar.
8.2.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiN
> - Reaccin de Shinoda o Cianidina: Caracteriza compuestos de estructura
benzopirona Si la alcuota del extracto se encuentra en alcohol, se diluye
con 1mL de HCI concentrado y un pedacito de cinta de Mgo. Despus de la
reaccin se espera 5 minutos, se aade 1mL de alcohol amlico, se mezclan
fases y se deja reposar hasta que se separen.
o Si la alcuota del extracto os encuentra en agua, se procede de la
misma manera, a partir de la adicin del HCI concentrado.
o El Ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amlico se colorea
de amarillo, naranja, carmelita o rojo. Intensos en todos los casos.
> - Reaccin con el FeCb 1%: Utilizar una solucin acuosa de rutina, aadirle
gotas del reactivo de FeCb 1%.
~ __ ~~~,- ~ __ ~~~ __ ~~~~~ __ ~ __ ~~~ 66
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Gua de Prcticas de FarmaCOg/10Sia V FitOQumlca
> - Observar a la Luz UV con y sin vapores amonaco en un cromatograma
8.3 DETERMINACiN DE LA HESPERIDINA:
La hesperidina es un complejo ctroflavonolde que se encuentra en la
porcin blanca y coloreada de la cscara de naranja.
8.3.1 OBJETIVOS:
~ Determinar la presencia de hesperidina
8.3.2 FUNDAMENTO:
La Hesperidina, se caracteriza por ser soluble en alcohol diluido y como todo
flavonoide tiene fluorescencia frente a la Luz UV que se acenta en medio
alcalino.
8.3.3 MUESTRA: Cscara de Citrus sinensis "Naranja"
8.3.4 MATERIALES Y REACTIVOS:
~ Alcohol diluido
~ NaOH 1%
~ Beaker de 100 y 250MI
~ HC110%
~ Pipetas de 5MI
~ Tubos de Ensayo
~ Lmpara UV
> - CIFe3
~ Embudo
);> H
2
S0
4
concentrado
~ Papel Filtro
);> HN0
3
concentrado
~ HCI concentrado
~ NaOH 30%
> - NH
3
QP
~ Placas Cromatogrficas
8.3.4 EXTRACCiN:
Tratar 5 9 de la parte blanca de la cscara de naranja con una mezcla de 20
mL de alcohol diluido y 5mL de una solucin de NaOH 10%, dejar en reposo
24 h Y aadirle HCI al 10% hasta pH 5, con lo que se consigue precipitar la
hesperidina.
Dejar en reposo y filtrar, el lquido filtrado se vuelve a dejar en reposo, filtrar
nuevamente sobre el anterior y lavar el pp. hasta reaccin neutra.
__________ ~~- - ~~~- - ~- - ~~~- - ~- - ~~~- - - - - - - - - - - - - - - - 67
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cura de Prcticas de sarmaccancsra y Fitoqufmlca
Posteriormente secar el residuo, con lo que se consigue que cristalice la
hesperidina.
8.3.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiN:
> - Tratar mg del pp. ms gotas de H.
2
S04 concentrado, inicialmente da
coloracin amarillo rojizo, que por calentamiento pasa a rojo.
> Tratar mg del pp. ms gotas de Hel concentrado, da coloracin amarillo
intenso.
> Tratar mg del pp. ms gotas de NaOH 30 %, da coloracin amarillo naranja.
> - Reaccin de Shinoda similar a la Rutina
> - Observar la Fluorescencia a la lmpara UV con y sin vapores de NH
3
en un
cromatograma
8.4 RESULTADOS:
__________ ~~ __- - ~ - - - - ~~- - ~- - ~~~- - - - - - - - - - - - - - - - - 68
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8.6 CONCLUSIONES:
8.7 CUESTIONARIO:
~ Color de la fluorescencia de la rutina y la hesperidina
~ Qu color se observa con la rutina y la hesperidina despus de hacer la
reaccin de Shinoda.
~ Mencione otros tipos de flavonoides que existan y esquernatice su
estructura qumica.
~ De las reacciones de identificacin del (1) al (4) explique por se producen
los cambios y/o aparicin de las coloraciones.
~ A que cree que se deba que los flavonoides presenten fluorescencia.
~ Propiedades farmacolgicas de los flavonoides.
~ __ ~~~-, __ ~~~~ __ ~~ __ ~~~ __ ~~~~~ 70
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PRCTICA N 9
DROGAS CON CUMARINAS E IRIDOIDES
9.1 DROGAS CON CUMARINAS
Las cumarinas son derivados de la -benzopirona, es una lctona
cclica que se caracteriza por que dan fluorescencia frente a la Luz UV y que
se acenta en medio alcano. El nombre de cumarina proviene de
"coumarou' nombre verncula del "haba tonka" (Dipteryx odorata willd.), del
que se aisl en 1820. Casi todas las cumarinas se encuentran sustituidas en
7 por un hidroxilo.
Cumarina Fraxino
OCH
3
HO~
HCO~O~O
: 3 .
OBJ ETIVO:
~ Determinar la presencia de cumarinas en Plantas Medicinales
~ Observar la Fluorescencia a la Luz UV
9.1.1 FUNDAMENTO:
Las cumarinas se extraen con acetona tambin en medio alcohlico dando
soluciones coloreadas. La Reaccin de Baljet es para detectar grupos
lactnicos y la reaccin del hidroxamato es por el grupo carbonilo y la amina
formndose un compuesto condensado.
9.1.2 MUESTRA: Cichorium intybus "Achicoria" y Taraxacumoffinacinale "Diente
de Len"
____~~ __~~- - ~~~ __~- - ~~~- - ~~~~~- - - - - - - - - - - - - - - - - 73
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9.1.3 MATERIALES Y REACTIVOS:
Matraz de 250 mi NaOH 5%
Refrigerante Hel 0.5 mol/L
Embudo NaOH 2N
Tubos de ensayo cido actico glacial
NaOH 5% > NH
3
~ N03Ag 1N en acetona Clorhidrato de hidroxilamina en EtOH a110%
~ FeCb KOH 10%
Acido Pcrico 1% en EtOH
9.1.40BTENCfN:
Se toman 5 g de raz, fresca o desecada, triturada y pulverizada y se le
adiciona 50 mL de acetona ter de petrleo, se le somete a una extraccin
por reflujo por 30 minutos, obtenindose una solucin de color amarillo.
Filtrar.
9.1.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiN:
~ Reaccin de Baljet: Si la alcuota no se encuentra en alcohol, debe
evaporaras el solvente en un bao de agua y redisolverse en la menor
cantidad de alcohol (1 mI) se le adiciona 1 mI del reactivo de Baijet, formado
por cantidades iguales de NaOH 10% Y de Acido pcrico 1% en EtOH que se
deben mezclar en el momento del ensayo y llevar a BM hasta la aparicin
de una coloracin 6precipitado rojo (++y ++++) respectivamente.
> Ensayo de Hidroxamato frrico: Una alcuota se coloca en un tubo y se
aade 1 gota de clorhidrato de hidroxilamina en EtOH al 10%. Se aaden
gotas de KOH 10% en etanol y se calienta hasta burbujeo, se aaden unas
gotas de cido clorhdrico 0.5 mol/L y una gota de FeCh 1%. El desarrollo
de una coloracin violeta (+), claro (++), intenso( +-H-) indica presencia de
cumarinas.
~ Del extracto tomar unos 5 mi y aadirle 2 mi de una solucin de NaOH 5%,
se acenta la coloracin amarilla y se ve un tenue precipitado.
> - CCF.
o Sistema de solvente: CHCI
3
: AcOH:H
2
0 (4:1:1)
o Soporte : Silicagel G
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Q.FMara rsanet Palacios Palacios Guade PrctIcas de FarmacOgnosia V Fltoqumlca
o Revelador : Luz UV, Sol. de N03Ag 1N en Acetona,
NaOH 2N y EtOH(5:15) y AcOH glacial.
9.2 DROGAS CON IRIDOIDES:
Son monoterpenos que se caracterizan por un esqueleto biciclico
ciclopentapirnico, los iridoides toman su nombre de unas hormigas
australianas: el iridodial, es el compuesto ms sencillo del grupo, se aisl a
partir de Iridomirmex y en estos insectos desempea un papel de defensa.
Iridoide VaJ epotriato Loganina
OR
l
HO
Q-Gluc
Loganine
9.2.1 OBJ ETIVO
~ Determinar la presencia de iridoides en Plantas Medicinales
~ Detectar por cromatografa la presencia de iridoides
9.2.2. FUNDAMENTO:
Se fundamenta en una extraccin del iridoide en una especie vegetal fresca
y su posterior determinacin con vainillina en medio cido.
9.2.3 MUESTRA: Plantago major "Llantn" - Valeriana officinalis "Valeriana"
9.2.4 MATERIALES y REACTIVOS
Matraz de 250 mi Metanol etanol Q.P.
__________ ~- - - - ~- - ~~~~- - - - - - - - - - - - ~~- - - - - - - - - - - - - - - - 75
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~ Capilar de vidrio ~ Vainillina
~ Papel de filtro ~ HCI
~ Alcohol de 70 ~ Placas cromatogrficas
~ H2S04 concentrado
~ Ans aldehdo
~ cido actico glacial
~ Lmpara UV
~
9.2.5 EXTRACCIN
Macerar algunos gramos de hojas de Plantaga majar llantn" o raz de
Va/erana Off valeriana", recin recolectados y finamente triturados en
cantidad suficiente de alcohol de 70' para cubrir y dejar en reposo por
espacio de 48horas a temperatura ambiente. Filtrar.
9.2.6 REACCIONES DE IDENTIFICACiN
> - Tomar del extracto con un capilar y puntear en un papel de filtro unas 5 a 10
veces, dejando secar despus de cada adicin. Colocar en la mancha 1 2
gotas de la solucin reactivo de vainillina clorhdrica, calentar suaver:nente
por 5 minutos y observar la coloracin persistente que oscila entre la gama
del rosado al rojo en caso positivo.
~ CCF
o Sistema de solvente: BuOH:AcOH:H20 (63:10:27)
o Soporte: Silicagel G
o Revelador: Vainillina Clorhdrica al 2%
Anisaldehdo en medio clorhdrico
AcOH:HCI (2:8)
Lmpara UV
9.3 RESULTADOS:
__________~- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~- - - - - - - - - - - - - - - - - - - 76
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9.5 CONCLUSIN:
9.6 CUESTIONARIO:
~ Qu color de fluorescencia tiene la cumarina y cuando se aade
vapores de amonaco que cambios se observa?
~ Qu otras especies vegetales contienen glicsidos cumarinicos e
iridoides?
~ Importancia teraputica de las cumarinas y los iridoides
__________ ~- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~- - - - - - - - - - - - - - - - - - - 78
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PRCTICA N 10
DROGAS CON TANINOS GLlCOS y CATQUICOS
COOH
OG OH
08~OG
~OH
HO
lB
0,- - - -
,\ ~
,\\\
HO OH
G
- ,
OH Tanino glico

OH
I
cido glico
G OH
Catequina
10.1 OBJ ETIVOS:
~ Extraer los taninos de una droga vegetal
~ Caracterizar a los taninos mediante reacciones qumicas de identificacin y
diferenciacin
~ Cuantificar espectrofotomtricamente los taninos en plantas medicinales
10.2 FUNDAMENTO:
Los taninos son sustancias de composicin quirrca cornpieja, que a\
degradarse o hidrolizarse se obtienen polifenoles relativamente simples. En
general son polmeros de alto peso molecular que forman soluciones
coloidales en medio acuoso. Por su naturaleza fenlica reaccionan con las
sales de fierro dando coloraciones azules o verdes, tienen capacidad de
reducir al permanganato, forman complejos con cationes divalentes como el
Pb+
2
, Hg+
2
.
10.3 MUESTRAS:
Vainas de Caesalpnea spnosa "tara" -
Raz de Krameria triandra "ratania del Per"
Hojas de Piper elongatum "matico"
__________ ~- - - - - - - - - - - - - - - - ~~- - - - __ - - - - ~ - - - - - - - - - - - - - - - 81
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10.4
MATERIALES Y REACTIVOS:
Tubos de Prueba
~ FeCb 1%
Matraz de 250 mL
~ KMn041%
Refrigerante
Acetato de Pb 5%
Cocina elctrica
Acetato de Hg 5%
Papel de Filtro
Solucin de gelatina
Embudo
Solucin de alcaloides
10.5 EXTRACCiN:
Preparar extractos etanlicos al 50 % de las muestras con 48 horas de
anticipacin, con agitacin permanente con la finalidad de extraer los taninos
de las muestras y puedan ser utilizadas en las determinaciones cualitativas,
de diferenciacin y de cuantifcacin.
REACIONES CUALITATIVAS DE IDENTIFICACiN:
Filtrar los extractos y concentrar para reducir el volumen y prep~rar una
batera de tubos de prueba y realizar las siguientes reacciones:
REACCiN DE COLORACiN CON EL CLORURO FRRICO:
Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas del reactivo de FeCb
1%; observar el color que se forman:
> - Color azul-negruzco: Taninos glicos
> - Color verde-azulado: Taninos catquicos
REACCiN DE XIDO REDUCCiN:
Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas del reactivo de KMn04
1%. La reaccin es positiva si desaparece el color violeta del permanganato
REACCiN DE PRECIPITACiN:
Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas de los reactivos de
Acetato de Plomo 5%, Acetato de Mercurio 5%, Acetato de Cu 5%. Observar
.~ __ ~~ __ ~~ __ ~~~ __ ~ __ ~~~ __ ~ __ ~~~ 82
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la formacin de precipitados por la formacin de complejos metlicos o
tanatos de Pb, Hg Y Cu; respectivamente.
REACCiN DE DIFERENCIACiN: REACCiN DEL FORMOl
ClORHIDRICO O REACCiN DE STIASNY
Los taninos glicos o catquicos se hidrolizan en medio cido y de forrnol.
Los taninos glicos permanecen en solucin, mientras que los taninos
catquicos se polimerizan formando una sustancia insoluble de color rojo
llamado flobafeno o tanino rojo.
10.6 MATERIALES Y REACTIVOS:
~ Matraz de 250 mL ~ Embudo
~ Beaker ~ HCI concentrado
~ Refrigerante
>
Formol al 38-40%
~ Cocina elctrica ~ Pipetas de 5,10 mL
>
Papel de Filtro
~ FeCb
"
10.7 PROCEDIMIENTO:
Tomar unos 50 mL de la muestra problema al 40%, aadir unos 5 mL de
HCI concentrado y 10 mL de Formol al 38-40% y llevar a ebullicin por unos
30 minutos en un sistema de reflujo. Los taninos glicos no forman
precipitados. Los taninos catquicos forman precipitados insolubles de color
rojo. Enfriar y filtrar la solucin, tomar una alcuota del filtrado y aadirle
gotas del reactivo de FeCI3 en presencia de acetato de sodio al 5%. Si se
forma una coloracin azul oscura, indica la presencia de taninos glicos o
elgicos.
10.8 CUANTlFICACIN DE TANINOS POR ESPECTROFOTOMETRIA:
MTODO DEL CIDO FOSFOMOllBDICO
Se fundamenta en la capacidad reductora del tanino sobre el cido
fosfomolbdico que en medio alcalino da una coloracin azul que puede ser
ledo al espectrofotometro a 700 nm.
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: Etanol
: Balanza Analtica
> Erlenmeyer
~ Na
2
C0
3
: cido tnico
: Pi eta de 5mL, 1 mL 2 mL
: Equipo de reflujo
>
Tungstato de sodio
>
Acido fosfomolbidico
: Embudo
>
Papel de Filtro
>
Fiola de 50mL
10.8.1 MATERIALES Y REACTIVOS:
10.8.2 PROCEDIMIENTO
Pesar 10g de la droga en polvo, se lleva a un frasco cnico de 1000 mL con
500 mL de alcohol al 50%. Mantener en agitacin durante 6 horas en un
agitador magntico, dejar en reposo por 8 horas, luego volver a agitar por 30
minutos y filtrar. Se transfieren 3 mL del filtrado a un matraz aforado y se
diluye con agua destilada hasta enrase (SOLUCIN MUESTRA).
Se prepara un juego de 4 matraces aforados de 50 mL cada uno y se rotula
como B (blanco), S (referencia), M
1
y M
2
(muestra problema) y se procede
de la siguiente manera:
REACTIVOS B P M1 Y M2
Solucin Muestra -
- 1.0mL
Solucin de Referencia - 3.0 mL -
Agua destilada 5.0 mL 2.0 mL 4.0 mL
Reactivo para taninos 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL
Se agita, se deja en reposo por 5 minutos
Solucin de Na2C03 20% 1.0 mL 1.0mL 1.0mL
Se completa con aqua destilada hasta enrase y se mezcla bien.
Leer la absorbancia de la solucin de referencia y las muestras a 700 nm en
un trmino no mayor de 2 minutos.
10.8.3 CLCULOS:
o/ T . AmpxStxlOOO 100
/0 anmos == . x
AstxMpx(IOO - %H)
__________~- - - - - - - - - - - - - - - - ~~- - - - - - - - - - ~- - - - - - - - - - - - - - - - - - - 84
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Amp = absorbancia de la muestra problema
Ast = Absorbancia del estndar
St = masa del estndar (g)
Mp = masa de la muestra problema (g)
%H = porcentaje de humedad de la droga
10.9 RESULTADOS:
__________ ~~- - ~~~- - ~- - ~~~- - ~~~~~- - - - - - - - - - - - - - - - 85
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10.12
~
~
~
~
~
CUESTIONARIO:
Reacciones qumicas de las pruebas de identificacin para los tar;
..
Mencione otros mtodos de cuantificacin de los taninos
Cules son las propiedades medicinales de los taninos?
Cules son las especies medicinales que poseen taninos?
Propiedades medicinales del Piper angustifolium "rnatico"?
____~~- - ~~- - ~~~~~- - ~~~- - ~~~~~- - - - - - - - - - - - - - - - - 87
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