MTODOS MICROSCPICOS PARA LA

ESTIMACIN DE EDAD A LA MUERTE:

ANLISIS HISTOMORFOMTRICO

Desntolo, B.; Garca Mancuso, R.; Plischuk, M.;
Salceda, S.; Inda, A.

I TALLER NACIONAL DE BIOARQUEOLOGA Y PALEOPATOLOGA

La histomorfometra o histologa cuantitativa
(Robling y Stout, 2000) es la cuantificacin de la
microestructura del tejido seo. A travs del
recuento y medicin de las caractersticas
histomorfolgicas se puede obtener informacin
acerca del recambio seo (remodelacin), de la
microarquitectura y de la actividad celular
dinmica y esttica (Crowder y Stout, 2012).
La estimacin histolgica de la edad se basa en
el grado de remodelacin sea
Unidad Estructural Bsica (BSU)
u osteona
Fuchs et al. 2012
Dado que la remodelacin es un proceso que
transcurre durante toda la vida, desde el nacimiento
hasta la muerte, permite observar la asociacin entre el
nmero de osteonas y la edad cronolgica
constituyendo la base primaria de los mtodos
histolgicos de estimacin de edad (Stout 1989,
Robling y Stout 2008).
Robling y Stout, 2008
Robling y Stout, 2008
Robling y Stout, 2008
Robling y Stout, 2008
MATERIAL y MTODOS
La muestra analizada pertenece a la Coleccin
Lambre FCM- UNLP (Salceda et al. 2009 RAAB 11 (1):
133; Salceda et al., 2012 HOMO 63 (4).
Est integrada por 71 fmures de individuos adultos
con datos fehacientes de edad y sexo.
Las piezas que presentaron algn signo de
patologa fueron excluidas.


Sexo N = 71 Rango Media
Femenino 21 26 - 88 59.68
Masculino 50 22 - 91 58.67
ANLISIS HISTOMORFOMTRICO
I. Extraccin
II. Preparacin de la muestra
III. Observacin y cuantificacin de variables
histomorfomtricas.

I. EXTRACCIN

Las muestras se obtuvieron a partir de la
remocin de tejido cortical de la mitad
anterior de la difisis femoral, tal y como
sugieren estudios previos analizados
(Thompson 1979; Ericksen 1991, Maat et al.
2001, 2006; Keough 2007).
II. PREPARACIN DE
LA MUESTRA
Fueron procesadas por tcnica de desgaste
modificada en adecuacin a los estudios
histomorfomtricos (Vasallo y Restelli, 2000)
y siguiendo las recomendaciones de Maat y
col. (2001).

TCNICA DE DESGASTE MANUAL (Maat y col. 2001)

La misma consiste en la reduccin del espesor del
tejido duro (hueso) a fin de poder observarlo
microscpicamente:

Corte de lmina con sierra manual
Lavado
Pulido (piedra de afilar y lija al agua n 220)
Control peridico al microscopio
Espesor ptimo
Montaje
Secado (48 hs a 37 C aprox.)
III.EVALUACIN HISTOMORFOMTRICA
Para la observacin microscpica se emple
microscopio de campo claro Iroscope (Mod. BW 3T)
y los preparados se examinaron con objetivo 10X y
ocular 10X provisto de una grilla de 10 mm de lado y
acondicionada con una escala micromtrica (Zeiss).
Para el anlisis y cuantificacin de las variables se
seleccionaron cuatro campos microscpicos
subperiostiales.
VARIABLES
MICROESTRUCTURALES

n total de osteonas fragmentarias ost_frag
n promedio de lamelas por osteona lam_ost
promedio del dimetro del canal de Havers (m) hav_can
espacios de resorcin res_spac
porcentaje de osteonas fragmentarias % ost_frag
porcentaje del rea osteonal % ost_bone
porcentaje de hueso fragmentado % frag_bone
n total de osteonas tot_ost_mea
Kerley y Ubelaker 1978; Singh y Gunberg 1970; Ericksen 1991, Vasallo et al. 2000
DIFICULTADES






T. DESGASTE MANUAL
Deterioro del material.
Prdida de informacin.
Sesgo en la observacin
y cuantificacin.
Microfracturas y
microgrietas.
Restos con buen estado
de conservacin.
OBSERVACIN Y
CUANTIFICACIN
Poco precisa
Cambios en los oculares
Movimientos de la
platina
Limitada en cuanto a la
cuantificacin de ciertas
variables.
Imposibilidad de medir
el mismo campo.
SEGUNDA ETAPA
Debido a las dificultades especificadas
testeamos otra tcnica de preparacin para
hueso calcificado: la inclusin en medios
plsticos duros (resina epoxi)
Entrenamiento en el uso de programas
informticos para el procesamiento de
imgenes y cuantificacin de variables
histomorfomtricas.

TCNICA INCLUSIN EN RESINA

Procesamiento de las muestras
Infiltracin: la muestra se sumerge en un molde con resina
epoxi (Dicast LY 554 con endurecedor HY 554) 24 a 36 hs.
Pulido con abrasivos en polvo (carburo de silicio,
corindn, almina) de diferentes granulometras.
Secado: Horno a 35 C, 3 horas.
Obtencin de las secciones
Se realiza mediante sistemas de corte (disco diamantado),
desbastado y pulido (1 mm).
Montaje: la lmina se cubre con resina epoxi o un
adhesivo plstico fotosensible para evitar la formacin de
burbujas. Laboratorio Geolgico del Lic. Ricardo Ponti

EVALUACIN HISTOMORFOMTRICA

Fotomicroscopio Trinocular Nikon (Mod. Eclipse
E200) equipado con una cmara digital Nikon (Mod.
Coolpix S10).
Se seleccionaron y fotografiaron cuatro campos
microscpicos por seccin.
Las microfotografas se procesaron y analizaron con
un analizador de Imgenes, Software Image Pro
Plus 4.5 (Media Cybernetics).
T. Inclusin en resina
Mantiene la integridad
de la muestra, por lo
tanto no se producen
grietas ni hay perdida de
informacin.

Estabilidad de los
preparados durante
perodos largos de
almacenamiento.
Microfotografas
Documento verificable
permanente
libre de cambios de los
oculares y de
movimientos de la
seccin delgada, que
hacen confundir el
campo visual original.

DISCUSIN
Los mtodos microscpicos requieren ms
tiempo, equipamiento y mayor conocimiento
especfico de tcnicas histolgicas; adems,
implican destruccin parcial del material.
A diferencia de los mtodos macroscpicos, los
microscpicos son de gran utilidad aun cuando
los restos se encuentren fragmentados o
incompletos (Bednarek, 2008; Franklin, 2010).
Diferenciacin interespecfica entre hueso
humano-no humano.


En contextos arqueolgicos
Limitaciones en cuanto al rea de muestreo:
Desgaste superficial por agentes tafonmicos.

Alternativa:
Anlisis de la regin endostial (Hauser et al.
1980, Pfeiffer et al. 1995).
CONSIDERACIONES FINALES
Describir detalladamente la muestra de referencia (edad, sexo,
n, composicin tnica).

Identificar precisamente el hueso analizado y el rea
seccionada.

Considerar las tasas diferenciales de remodelacin para cada
pieza sea analizada.

Indagar sobre los factores que afectan la remodelacin, y
consecuentemente las estimaciones: sexo, actividad fsica,
variacin poblacional y condiciones patolgicas.

Considerar a la histomorfometra como un mtodo
complementario auxiliar de los anlisis macroscpicos.

CONSIDERACIONES FINALES
Validar los mtodos de estimacin de
edad en muestras independientes y de
edad conocida a fin de determinar su
exactitud y precisin.