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ELECTROFORESI S CAPI LAR

Es una tcnica analtica instrumental que tiene por


objeto separar los distintos componentes de una
mezcla, basndose en la movilidad diferencial que
experimentan las especies inicas cuando son sometidas
a un campo elctrico muy intenso (10000 A 30000 V)
en el interior de un tubo capilar.
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CARACTERISTI CAS DE LA
ELECTROFORESI S CAPI LAR
Se desarrolla en columnas capilares de slice fundida de 25 a 125 m de d.i.
Se utilizan altos voltajes 10 a 30 kV.
Alta eficiencia y tiempos de anlisis cortos.
La deteccin se hace directamente en el capilar.
Pequeos volmenes de inyeccin (1 a 50 nL)
Gran variedad de aplicaciones.
Trabaja en medios acuosos.
Desarrollo de mtodos sencillo
Equipos fciles de usar y automatizados.
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+
+
+
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+
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+
+
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+
F
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j
o

E
l
e
c
t
r
o
o
s
m

t
i
c
o
Electroforesis Capilar
Tambin depende del nmero de cargas. Ejemplo: los que
tienen cargas ++ migran mas rpido que los de carga +
y los de carga ms rpido que los de carga =, asumiendo
que tiene tamaos similares.
Los solutos neutros migran con el flujo electroosmtico y no
se separan.
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Vial de Muestra Vial de Desechos
Fuente de
10 a 30 kV
Lmpara de
Deuterio
Detector
Capilar de Slice Fundido
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DEFI NI CI ONES
Flujo Electroosmtico: Se genera cuando un solvente con caractersticas
inicas o polares es sometido a un campo elctrico alto y este migra hacia
el ctodo o hacia el nodo.
La velocidad de migracin es grande; por ejemplo : Un disolvente
Tampn 50mM pH 8 migra hacia el ctodo en un capilar de 50 cm a una
velocidad aproximada de 5 cm/min. al aplicar un potencial de 25 kV.
Flujo Electrofortico: Es el desplazamiento generado por un in cuando
a este se le coloca en medio de un campo elctrico.
La velocidad de migracin del in depende del campo elctrico.
Movilidad Aparente: Tambin se conoce como la movilidad del de
migracin, esta depende de la intensidad del campo elctrico, de la carga,
el tamao del in y del flujo electroosmtico.
Electroferograma: Es la grfica similar a la generada en un
cromatgrafo, en la que se observan bandas correspondientes a cada in
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O Si
H
La superficie interna del capilar de la silice esta cubierta
por grupos Si-OH, los cuales son ionizados a SiO
-
a pH>2.
Tubo capilar de silice
fundida con los grupos
silanoles expuestos
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Si O
-
Disociacion de los grupos silanoles dejando la
carga negativa sobre la pared interna del
tubo capilar
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Flujo Electroosmtico Flujo Laminar
Efecto del perfil del flujo en el
ensanchamiento de banda
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La Carga negativa de la superficie es balanceada por
los iones positivos de la buffer, formando la llamada
doble capa electrica. Sobre la influencia del campo
electrico los iones positivos en la parte difusa de la
doble capa migran hacia el catodo; haciendo esto,
entran a formar parte del agua de hidratacin el cual
resulta en el flujo electrosmotico
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Tipos de Electroforesis Capilar
1. Electroforesis Capilar Convencional (HPCE o CE)
(CZE- Capilar Zone Electerophoresis)
Permite la separacin de iones, las especies ionicas salen juntas
2. Cromatografia Electrocintica Capilar (MECK)
Permite la separacin de molculas neutras
3. Electroforesis Capilar de Gel (CGE)
Permite la separacin de macromolculas biolgicasn segn su tamao
4. Electroforesis Capilar de isoelectroenfoque (CIEF)
Permite la separacin de proteinas segn su punto isoelectrico
5. Isotacoforesis (ITP)
Permite concentrar las muestras
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Electroforesis Capilar Convencional (HPCE o CE)
(CZE- Capilar Zone Electerophoresis)
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EOF REVERSO, UTI LI ZANDO UN
SURFACTANTE CATI ONI CO
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Es una modalidad de electroforesis que permite la separacin de molculas
neutras, as como tambin de iones, mediante la adicin de un tensoactivo
inico a suficiente concentracin para formar micelas.
E
O
F
Cromatografa Electrocintica Micelar (MECK) (I)
-
+
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ElectroforesisCapilar de Gel (CGE)
SeparacinBasadaen el Tamao
Matriz
polimrica t >
0
t =
0
Los componentes de menor tamao avanzan ms
rpidamente
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EnfoqueI soelctricoCapilar
(CI EF)
pH = 3 pH = 9
pI 3.90 5.01 6.05 7.81
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I SOTACOFORESI S (I TP)
Concentracinde la Muestraen el PropioCapilar
Iones
Traseros
Iones
Delanteros
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La separacin ser funcin de la lipofilicidad de la molcula.
polaridad soluto ==> tiempo estancia en micela
EOF
MICELA
SOLUTOS
O t
o
t
M
+
polar
-
polar
-
-
-
-
-
-
EPF
EOF
EOF MICELA
O t
o
t
M
+
Anodo
-
Catodo
Detector
Cromatografa Electrocintica Micelar (MEKC)
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A moderado pH (pH>3) el flujo
electrosmotico es generalmente mayor que
el flujo electroforetico causando que los
aniones migren tambien al catodo, en donde
el detector esta localizado.
A bajo pH, la electroosmosis es debil y los
aniones no pueden alcanzar el detector a
menos que la polaridad del equipo se
cambie en orden a cambiar la localizacion
del detector del final del capilar catodo al
final del capilar del anodo
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METODOS DE I NYECCI N DE
MUESTRA
+
-
Muestra
Muestra
Muestra
Muestra
Presin
Hidrodinmico
Vaco
Electrocintico
Sifn
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