INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA

Investigacin sobre propiedades y aplicaciones de la enzima: D Xilosa
Isomerasa.

Materia: Ingeniera Enzimtica.


Profesor: Csar A. Jimnez Sierra.


Grupo: 4BM1.
.

Equipo:
Figueroa Romero Jorge Luis
Gordillo Alfonso Jos Pablo
Pealoza Figueroa Mara Victoria
Sosa Martnez Eduardo


Fecha de entrega: 04 de marzo del 2014

Enzima: Glucosa Isomerasa (D - Xilosa Isomerasa).
Histricamente cuatro enzimas han sido llamadas glucosa isomerasa. El primer reporte de la actividad de una glusoca
isomerasa apareci en 1937 en un artculo de Marshall y Kooi, mostrando que la D Xilosa Isomerasa de Pseudomona
hydrofila, contrario a los reportes anteriores, podra convertir glucosa en fructosa. Adems, Mrashall y Kooi indicaron
que cuando el arseniato fue usado en la isomerizacin, fue observada mayor eficiente la conversin de glucosa a
fructosa. La produccin de la Xilosa Isomerasa fue absolutamente dependiente de la presencia de una fuente de Xilosa
en el medio de crecimiento del microorganismo que la producira. Tambin se describi el pH y la temperatura ptima
de funcionamiento, los cuales fueron un pH de 8.5 y una temperatura que oscilaba entre 42 43 C. La importancia de
la D Xilosa Isomerasa radica en que es una enzima termoestable ya que el rango de temperaturas en las que puede
funcionar es desde los 43 hasta los 65 C, y adems la reaccin de isomerizacin de glucosa a fructosa no requiere
molculas energticas como ATP o NAD
+
, lo cual hace que esta enzima sea rentable para su comercializacin y
produccin. Su peso molecular ronda entre los 165,000 a 191,000 Da, y as mismo tiene requerimientos de iones
metlicos como Co
+2
, Mn
+2
, Mg
+2
, o bien Cr
+2
. La reaccin que cataliza esta enzima como se ha mencionado
anteriormente es la conversin de D - glucosa a D fructosa, como muestra la siguiente figura:







Clasificacin.
E.C. 5.3.1.5.
5 Isomerasas.
5.3 Isomerasas intromoleculares.
5.3.1 Interconversin de aldosas y cetosas.
5.3.1 Xilosa Isomerasa.
Nombre aceptado: Xilosa Isomerasa.
Nombre sistemtico: D-Xilosa aldosa-cetosa-isomerasa.
Otros nombres: D-Xylosa Isomerasa; D-xylose Cetoisomerasa; D-Xylosa Cetol-isomerasa.

Aplicaciones de la enzima D Xilosa Isomerasa.
La D - Xilosa isomerasa es capaz de isomerizar D - glucosa a D - fructosa, y su uso principal se encuentra en la
elaboracin de jarabe rico en alta fructosa. El jarabe rico en alta fructosa es una clase de almidn de azcar en forma de
lquido claro con un contenido de fructosa de aproximadamente 50%. La fructosa de alta concentracin es producida a
travs de un tratamiento bioqumico para el almidn, y se le considera una mezcla de fructosa y glucosa, de sabor dulce
incoloro y en estado lquido. El jarabe rico en alta fructosa es usado ampliamente como un edulcorante nutritivo en
bebidas, postres, mermeladas, etc. Contribuye por sus atributos funcionales y fsicos en aplicaciones de alimentos y
bebidas, como potenciador de sabor, para desarrollo de color y sabor, disminucin del punto de congelacin y
estabilidad osmtica.
Las materias primas ms comunes utilizadas para la produccin de dicho jarabe es el almidn de maz fabricado por el
proceso de molienda hmeda, o bien la yuca, el trigo o el arroz, y su produccin est compuesto por 3 procesos
principales:
1. Licuefaccin del almidn por la alfa-amilasa.
2. Sacarificacin del almidn por la accin combinada de amiloglucosidasa y una enzima desramificante.
3. La isomerizacin de la glucosa por la enzima D- Xilosa Isomerasa.
La industria de los jarabes de fructosa tom gran fuerza debido a que tienen una capacidad edulcorante 30% mayor que
la sacarosa, 2.5 veces mayor que la glucosa y es 2 veces ms soluble que sta. Se estima que en el 2008 la produccin
anual de jarabe de alta fructosa fue de 500 millones de toneladas anuales a nivel mundial.

Otra aplicacin de esta enzima es la produccin de etanol, ya que la D Xilosa Isomerasa cataliza la isomerizacin de
tanto la glucosa como de la xilosa. Esta propiedad de la enzima es usada en la isomerizacin de xilosa a xilulosa, la cual
puede ser al final fermentada a etanol por levaduras. La bioconversin de biomasa renovable a azcares fermentables y
etanol es importante en el rpido reemplazo de esta fuente de energa por lo combustibles fsiles. La biomasa para
produccin de etanol consiste en celulosa (40%), hemicelulosa (30%) y lignina (30 %). La viabilidad de esta aplicacin
radica en que la biomasa pueda ser hidrolizada de celulosa o hemicelulosa a glucosa y xilosa y su subsecuente
fermentacin a etanol. Pero el inconveniente de este mtodo es que muchos microorganismo pueden fermentar xilosa
en etanol, pero su poca tolerancia al etanol los hace malos productores, o bien microorganismos que pueden fermentar
y tolerar bien el etanol, no pueden fermentar xilosa. En la industria de los biocombustibles, tenemos como ejemplo a
Zymomonas mobilis en la produccin de etanol a partir de biomasa, el cual puede fermentar glucosa, fructosa y
sacarosa, pero xilosa y arabinosa no. Por ello se han realizado diversos trabajos para lograr que este microorganismo
pueda fermentar azcares como xilosa y arabinosa mediante la introduccin y expresin de cuatro genes de Escherichia
coli: xilosa isomerasa (xylA), xilulosa cinasa (xylB), transcetolasa (tktA) y transaldolasa (talB), logrando la obtencin de la
cepa modificada Z. mobilis (pZB5) capaz de fermentar xilosa y producir etanol con un rendimiento del 86%. Las enzimas
xilosa isomerasa y xilulosa cinasa convierten a la xilosa en xilulosa-5-fosfato, intermediario en la va de las pentosas
fosfato, y posteriormente la transcetolasa y la transaldolasa convierten a la xilulosa-5-fosfato en intermediarios de la va
ED (ruta del ceto-desoxi-fosfogluconato).

Por ltimo tenemos una aplicacin mdica, en la cual esta enzima se utiliza para tratar los niveles altos de grasa en la
sangre, debido a que la fructosa, excesiva en los alimentos actuales no puede ser descompuesta por el organismo y es
absorbida por l en el intestino delgado, puede conllevar niveles altos de grasa en la sangre. Para transformar esa
fructosa excesiva en glucosa el cuerpo precisa la enzima xilosa isomerasa. Algunos medicamentos en forma de cpsulas
entregan al organismo precisamente esa enzima y puede con ello transformar la fructosa excesiva de los alimentos en el
intestino delgado en glucosa, que es absorbida como nutriente primario.

Fuente de obtencin de la D Xilosa Isomerasa.

La obtencin de D - Xilosa Isomerasa es a partir de microorganismos que sean capaces de cecer en un medio con xilosa.
Muchos organismos comerciales producen glucosa isomerasa intracelularmente. La enzima puede ser recuperada de
dos formas: recuperada del organismo con la enzima atrapada en la masa celular; y la recuperacin de la enzima en la
forma soluble despus de la lisis de las clulas. Hoy en da muchas cepas de microorganismos son usadas
comercialmente y no requieren D-xilosa como un inductor. U.S. Patente 3,645,848 da a conocer que la cepas NRRL B-
3726, NRRL B-3737, y NRRL B-3728 de las especies de Arthrobacter son capaces de producir isomerasa utilizando glucosa
en vez de D-xilosa como la nica fuente de carbohidrato en el medio. Estas enzimas han mostrado ser D-xilosa
isomerasas en vez de fosfoglucosa isomerasas como el producto de conversin aldosa-cetosa en ausencia de arseniato.
Otro organismo capaz de producir glucosa isomerasa en ausencia de D-xilosa incluye al gnero Actinoplanes, la cepa
mutante del inusual B. coagulans y S. olivochromogenes.

Algunos otros organismos productores de esta enzima se muestran en la siguiente tabla:
Gnero. Especie.
Streptomyces. bobilai, flavovirens, echinatus, achromogenes, phaeochromogenes, fradiae,
roseochromogenes, olivaceus, californicas, venuceus, virginal, olivochromogenes,
venezulae, wedmorensis, griseoleus, glaucescens, bikiniensis, albus, rubiginosus.
Lactibacillus Brevis, manniftopocus, pentoaceticus, gayonii, plantarum.
Brevibacterium pentoso aminoacidicum, imperiale, incertum
Pseudomonas Hydrophila
Leuconostoc Mesenteroides
Aerobacter Aerorigenes, levanicum
Bacillus Coagulans, stearothermophilis
Escherichia Coli
Aspergillus Oryzae
Mycobacterium sp.
Nocardia asteroides, dassonvellei, corallia
Microellobospora Flavea
Arthbacter sp.
Actinoplanes Missouriensis
Thermopolyspora sp.
Pseudonocardia sp.
Streptosporangium albus, vulgare
Curtobacterium sp.
Flavobacterium Devorans

Modificaciones Pos-traduccionales de la enzima Xilosa Isomerasa.
La estructura de la D Xilosa Isomerasa tiene la
siguiente estructura:

Estructura de la D - Xilosa Isomerasa a
0.86 Angstrom.



Las protenas pueden sufrir numerosas modificaciones qumicas en su estructura que tienen importantes efectos
moduladores y pueden conllevar el "encendido" o "apagado" de su funcin biolgica, alterar su localizacin celular, su
capacidad para interaccionar con otras protenas o determinar que la protena debe ser degradada.
Estas modificaciones que ocurren en las protenas una vez sintetizadas se denominan modificaciones postraduccionales
y pueden tener lugar mediante mecanismos enzimticos o no enzimticos. La naturaleza de estas modificaciones puede
ser muy variada. Las protenas pueden sufrir oxidaciones, glicosilaciones o unin de azcares, acetilaciones, roturas de
su cadena o protelisis, unin de molculas lipdicas, fosforilaciones, unin covalente de otras protenas pequeas como
la ubiquitina, etc. En la D Xilosa Isomerasa se encontraron las siguientes modificaciones postraduccionales:






Mg
+2
(In magnesio) - No. De Aminocido 36, 58, 71, 163, 208, 212.
Mn
+2
(In manganeso) - No. De Aminocido 181, 245.
-0H (Grupo hidroxilo) 217, 220, 257, 287.
Otra plataforma que se propone para la enzima.
La plataforma que proponemos es poder obtener una levadura que fermente no slo glucosa o sacarosa, sino tambin
xilosa para la produccin de etanol a partir de biomasa vegetal, ya que es necesario que tal biomasa sea pretratada para
formar una mezcla de azcares simples (monosacridos), esto a travs de levaduras cmo Candida utilis o
Saccharomyces cerevisae. Usaramos la levadura Saccharomyces cerevisiae es el microorganismo que generalmente se
usa para el proceso de fermentacin, a travs del cual los azcares son convertidos en etanol. Pero existe el problema es
que esta levadura slo puede usar la glucosa de esta mezcla para hacer etanol, mientras que otros azcares, como la
xilosa, no pueden ser aprovechados en el proceso. Por ello se propondra introducir genes en la levadura que le
permitan convertir la xilosa en glucosa, por ejemplo incorporar en la levadura el gen de la enzima xilosa isomerasa de la
bacteria Clostridium phytofermentans en S. cerevisiae; as la levadura puede aprovechar tambin la xilosa, mejorando el
rendimiento del proceso de produccin de etanol a partir de fuentes celulsicas. Ejemplo de ello se tiene en el Instituto
de Biociencias Moleculares de la Universidad de Frankfurt, donde un grupo de investigadores estudian esta posibilidad.
Bibliografa.
- Protein Data Bank. D - Xilosa Isomerasa a 0.86 Angstrom. Revisado el 01 de marzo del 2014 de
http://www.rcsb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=1MUW.
- Consejo Argentino para la Informacin y el Desarrollo de la Biotecnologa.
Levaduras que fermentan xilosa. Revisado el 01 de marzo del 2014 de
http://www.argenbio.org/index.php?action=notas&note=4591.






A) Aminocido 36.
B) Aminocido 58.
C) Aminocido 71.
D) Aminocido 36.
E) Aminocido 163.
F) Aminocido 181.
G) Aminocido 208.
H) Aminocido 212.
I) Aminocido 217.
J) Aminocido 220.
K) Aminocido 245.
L) Aminocido 257.
M) Aminocido 387.
A) B) C) D) E) F) G) H) J) K)
L)
M)
I)