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INTRODUCCIN
El colesterol es una biomolecula ampliamente distribuida en el organismo,
presente en todos los tejidos y sangre perifrica en forma libre o combinado con
un acido graso de cadena larga en forma de ester de colesterilo. Se presenta en
altas concentraciones en el hgado, medula espinal, pncreas y cerebro. El cuerpo
necesita determinada cantidad de colesterol para funcionar adecuadamente, pero
el exceso en la sangre, combinado con otras sustancias, puede adherirse a las
paredes de las arterias. Esto se denomina placa. Las placas pueden estrechar las
arterias o incluso obstruirlas.
Los niveles altos de colesterol aumentan el riesgo de enfermedades cardiacas.
Los niveles tienden a aumentar con la edad. El aumento no tiene sntomas ni
signos, pero puede detectarse con anlisis de sangre. Tiene que ver mucho si hay
antecedentes familiares, sobrepeso o consumo de comidas grasosas.
FUNDAMENTO
Ester de colesterol + H
2
O
colesterol esterasa
colesterol +acidos grasos
Colesterol + O
2

colesterol oxidasa
colesten-3.ona+H
2
O
2H
2
O
2
+fenol+4-aminoantipirina
peroxidasa
quinoneimina+H
2
O
OBJETIVO
Los estudiantes del curso de bioqumica II aprendern a cuantificar la
concentracin de colesterol de una muestra problema (suero humano) utilizando el
mtodo colorimtrico enzimtico (CHOP-PAP) para colesterol de RANDOX.
MUESTRA
Suero, plasma hepariniado, o plasma-EDTA
EQUIPO Y MATEIALES
Colormetro Celdas de plstico de 1cm
Micropipetas de 0.01 a 100 L,
de 100 a 1000 L y puntas
Un vaso de precipitados de 250
mL
1 pipeta serolgica de 1Ml 4 tubos de 13 x 100
Gradilla para tubos Mezclador (vortex



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REACTIVOS Y MUESTRAS PROBLEMAS
1. Reactivo enzima: peroxidasa > mL, colesterol esterasa > 0.15 U/mL,
colesterol oxidasa > 0.1 U/mL, 4-aminofenazona 0.30 mmol/L y fenol 6
mmol/L, en amortiguador de pipes 80 mmol/L, pH 6.8. contiene azida de
sodio 0.02%
2. Solucin patrn de colesterol 200 mg/dL (5.17 mmol/L)
3. Suero problema
METODO
1. Etiquete un tubo de ensaye con el nombre "problema" y otro con "patrn"
2. Agregue 1 mL del reactivo de enzima a los dos tubos de ensaye
3. Aplique 0.01 mL de la muestra problema y patrn a cada tubo
correspondiente, mezcle e incube durante 5 minutos a 37
4. Determine la OD
500
del tubo problema y del tubo patrn, contra el blanco de
reactivo antes de que transcurran 60 min y estime la concentracin de
colesterol en la muestra problema con las siguiente ecuaciones
Concentracin de colesterol =


x concentracin de patrn(mg/dL)
RESULTADOS
la OD
500
del tubo problema = 183
la OD
500
del tubo patrn= 248
Concentracin de colesterol =

x 200(mg/dL) = 0.7379 x 200 = 147.58 mg/dL

OBSERVACIONES
Al momento de mezclar las muestras con la enzima se noto una coloracin rosada
en cada uno de ellos, en el tubo problema se tio mucho de este color, mientras
que el tubo patrn, la tincin no fue tan marcada como en el tubo anterior.
Despus de sacar los tubos de la incubadora, se noto que ambos tubos tenan la
misma tincin rosa
DISCUSIN
Los valores obtenidos por nuestro equipo tal vez no sean iguales a los resultados
de los dems equipos debido a que utilizamos un tubo de suero diferente cada
equipo, por eso pueden variar los valores de cada equipo.
Los resultados obtenidos se encuentran dentro del rango de colesterol total en la
sangra, siendo los niveles menores a 200 mg/dL
3

CONCLUSIN
Mediante esta practica pudimos un examen de colesterol en la sangre mediante el
mtodo colorimtrico enzimtico. Para determinar la cantidad de colesterol que
contena el suero utilizado para esta prctica. Entre menor cantidad de colesterol
es mayor la tincin del tubo de ensaye con muestra y enzima
PREGUNTAS DE INVESTIGACIN
1. Investigar los niveles normales de colesterol
LDL: 70-130 mg/dL (los nmeros ms bajos son mejores)
HDL: ms de 50 mg/dL (los nmeros altos son mejores)
Colesterol total: menos de 200 mg/dL (los nmeros ms bajos son mejores)
Triglicridos: 10-150 mg/dL (los nmeros ms bajos son mejores)
2. Investigar cuales son los interferentes para este mtodo
Valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de bilirrubina hasta 5 mg/dl y de
triglicrido hasta 4,64 mmol/l, no interfieren en la prueba.
3. A que se le llama linealidad del mtodo?
Se refiere a la proporcionalidad entre la concentracin de analito y su respuesta
Define su aptitud para obtener resultados proporcionales a la concentracin de
analito.
4. Investigar la linealidad del mtodo de colesterol
El mtodo es lineal hasta una concentracin de colesterol de 19,3 mmol/l (750
mg/dl). Las muestras con concentraciones de colesterol superiores a sta, deben
ser diluidas 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 3
5. Investigar el valor clnico del colesterol
El colesterol sanguneo se presenta en forma de esterol libre y en forma
esterificada. El conocimiento del nivel lipdico plasmtico (colesterol y triglicridos)
junto con el de las lipoprotenas de alta y baja densidad (HDL y LDL) son de gran
ayuda en la deteccin de muchas condiciones ligadas a alteraciones metablicas
de alto riesgo. El desequilibrio del nivel de lipoprotenas plasmticas conduce a las
hiperlipoproteinemias, grupo de desrdenes que afectan los niveles de lpidos
sricos causantes de la enfermedad cardaca coronaria (ECC) y la
arterioesclerosis, en las que los niveles de colesterol son importantes en su
diagnstico y clasificacin.

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La ictericia de tipo obstructivo va acompaada por lo general de una tasa de
colesterol total elevada, con una fraccin normal de colesterol esterificado. La
diabetes, el hipotiroidismo y ciertas enfermedades renales exhiben el mismo tipo
de desequilibrio. Valores bajos de colesterol total con tasas normales de colesterol
esterificado se hallan en el hipertiroidismo y casos de malnutricin.

6. Describir la ruta metablica del colesterol
Un poco menos de la mitad del colesterol en el cuerpo se deriva de la
biosntesis de novo. Cada da, aproximadamente el 10% de la biosntesis del
colesterol se hace en el hgado, y aproximadamente 15%, en el intestino. La
sntesis del colesterol se hace en el citoplasma y los microsomas a partir del
grupo acetato de dos carbonos la acetil-CoA.
La acetil-CoA que se utiliza para la biosntesis del colesterol se deriva de
una reaccin de oxidacin (e.g., los cidos grasos o piruvato) en las
mitocondrias y es transportada al citoplasma por el mismo proceso que esta
descrito para la sntesis del cido grasos (vase la figura abajo). Acetil-CoA
tambin puede ser sintetizado a partir de acetato de citoslicas derivados de
citoplasma la oxidacin del etanol, que se inicia por la alcohol deshidrogenasa
citoplasmtica (ADH3). Todas las reacciones de la reduccin de la biosntesis
del colesterol utilizan NADPH como cofactor. Los intermediarios isoprenoides de
la biosntesis del colesterol se pueden ser dirigidos a otras reacciones de
sntesis, tal como para el dolicol (usado en la sntesis de glicoprotenas N-
ligadas, coenzima Q (de la fosforilacin oxidativa) o la cadena lateral del heme-
a. Adems, estos intermedios se utilizan en la modificacin con lpidos de
algunas protenas.

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Va de transporte de las unidades del acetil-CoA desde la mitocondria al
citoplasma para la biosntesis de lpidos y del colesterol. Observe que la
reaccin catalizada por la enzima mlica citoplsmica genera NADPH que se
utiliza para las reacciones biosintticas reductoras tales como las de la sntesis
del cido grasos y del colesterol. SLC25A1 es el transportador de citrato.
SCL16A1 es el transportador de piruvato.
El proceso tiene cinco pasos importantes:
1. Las acetil-CoAs se convierten en 3 hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-
CoA)
2. La HMG-CoA se convierte en mevalonato
3. El mevalonato se convierte en la molcula basada isopreno, el
isopentenil pirofosfato (IPP), con la prdida concomitante de CO
2

4. El IPP se convierte en escualeno
5. El escualeno se convierte en colesterol.

Va de la biosntesis del colesterol. La sntesis comienza con el transporte de la
cetil.CoA desde la mitocondria al citoplasma. El paso limitante ocurre en la
reaccin catalizada por la 3 hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) reducatasa,
(HMGR). Las reacciones de la fosforilacin son necesarias para solubilizar los
intermedios isoprenoides de la va. Los intermedios de la va son usados para la
sntesis de protenas preniladas, del dolicol, de la coenzima Q y de la cadena
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lateral del heme a. Colocar el cursor sobre los nombres de los metabolitos
intermedios para ver la estructura. PP = pirofosfato; rxn = reacciones.

7. Investigar a detalle 3 patologas relacionadas con el colesterol
1. Atherosclerosis
La aterosclerosis es el todo-demasiado-forma comn de las enfermedades del
corazn. Placas de colesterol y otras sustancias, muy similares a los tumores
pequeos, la forma en las paredes de las arterias y, finalmente, el pasaje de la
sangre pasa a ser obstruido. Menos flujo de la sangre significa menos oxgeno
para el msculo cardaco. Dolor en el pecho (angina de pecho) se produce,
generalmente tras el ejercicio o la emocin. Cuando el suministro de sangre est
completamente aislada, una parte del msculo cardaco muere-esto se conoce
como un ataque al corazn.
Qu es la aterosclerosis?
La aterosclerosis no es causada por la vejez. Cuando se examinaron las bajas del
campo de batalla durante la guerras de Corea y Vietnam, los soldados
estadounidenses haban aterosclerosis significativa en slo 18 o 20 aos de edad.
Sus homlogos de Asia, planteadas sobre una dieta que consiste principalmente
de arroz y hortalizas, haba mucho ms saludable arterias.
Las personas de edad tienen ms probabilidades de tener problemas de corazn
que las personas ms jvenes, ya que han tenido ms tiempo para caer en
hbitos no saludables, no porque tienen una tendencia hereditaria a la enfermedad
del corazn. Por lo general, el problema no se debe a la gentica, sino a los
hbitos de comer y de fumar. Su mdico puede decirle si usted es uno de slo un
5 por ciento de la poblacin con una verdadera tendencia gentica hacia las
enfermedades del corazn.
Muchos estudios han demostrado la conexin entre el colesterol y los problemas
cardacos. A partir de 1948, bajo la direccin de William Castelli, MD, la poblacin
de Framingham, Massachusetts, se ha vigilado a ver lo que influye en la tasa de
corazn disease.21 de Castelli estudio ha demostrado que existe un nivel de
colesterol por debajo de la cual, en esencia , La enfermedad de las arterias
coronarias no se produce. Framingham datos muestran que slo los pacientes con
niveles de colesterol de menos de 150 miligramos por decilitro (mg / dl) alcanzar el
menor riesgo de enfermedad arterial coronaria. En los primeros 50 aos del
estudio Framingham, slo cinco sujetos con niveles de colesterol de menos de 150
mg / dl desarrollado enfermedad arterial coronaria. Residentes de las zonas
rurales en las regiones en desarrollo de Asia, frica y Amrica Latina tienen por lo
general-los niveles de colesterol total de alrededor de 125-140, y que no se
desarrollan arteria coronaria disease.2

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2. HIPERCOLESTEROLEMIA
Consiste en la presencia de colesterol en sangre por encima de los niveles
considerados normales. Este aumento, que se asocia a problemas coronarios,
depende de la dieta, el sexo, el estilo de vida y la sntesis endgena. De esta
manera, en la concentracin de colesterol en sangre intervienen factores
hereditarios y dietticos, junto a otros relacionados con la actividad fsica.
CAUSAS
Entre los factores que influyen en el incremento del nivel de colesterol se
encuentran:
Dietas inadecuadas: La ingesta abusiva de grasas animales o alcohol
ocasiona que el organismo consuma primero otros tipos de nutrientes
favoreciendo que el colesterol no se degrade y se acumule en las arterias.
Enfermedades hepticas, endocrinas y renales y la administracin de
ciertas sustancias aumentan la sntesis de la lipoprotena LDL, que
transporta el colesterol perjudicial para el organismo.
Hipercolesterolemia familiar: Se trata de una enfermedad hereditaria
ocasionada por un defecto gentico que impide que el colesterol LDL sea
degradado, con lo que los niveles de colesterol aumentan progresivamente.
En estos casos es frecuente la mortalidad temprana por infarto de
miocardio o el engrosamiento de las arterias causado por la arterosclerosis.
TIPOS DE HIPERCOLESTEROLEMIA
El volumen de colesterol circulante depende de su absorcin intestinal, la sntesis
endgena, la captacin tisular, el estado del metabolismo lipoproteico y la
excrecin biliar. En definitiva, el nivel de colesterol depender de los alimentos
ingeridos y la capacidad de absorcin de los receptores especficos. Asimismo, se
pueden distinguir dos tipos de hipercolesterolemia:
Primaria: derivada de problemas en los sistemas transportadores del
colesterol y factores genticos. En este tipo de hipercolesterolemia se
enmarcan las dislipidemias.
Secundaria: el aumento de colesterol se asocia a ciertas enfermedades
hepticas (hepatitis, colostasis y cirrosis), endocrinas (diabetes mellitus,
hipotiroidismo y anorexia nerviosa) y renales (sndrome nefrtico o
insuficiencia renal crnica). Adems, existen algunas sustancias que
pueden aumentar los niveles de colesterol LDL (colesterol de baja densidad
conocido como colesterol malo) favoreciendo el desarrollo de
hipercolesterolemia, como los esteroides anabolizantes, los progestgenos,
los betabloqueantes y algunas sustancias hipertensivas.
Formas graves
Existen numerosos trastornos que pueden ocasionar hipercolesterolemias graves,
si bien su desarrollo se debe normalmente a factores genticos. Dentro de las
formas ms importantes de colesterolemia se encuentran la hipercolesterolemia
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familiar, la hipercolesterolemia polignica grave, y la hipercolesterolemia familiar
combinada.
Hipercolesterolemia familiar: Consiste en un trastorno grave ocasionado por una
serie de mutaciones en el gen receptor de las lipoprotenas de baja densidad que
transportan el colesterol. Afecta a una de cada 500 personas y los expertos
estiman que ms de un milln de espaoles sufren hipercolesterolemia familiar,
aunque el 70 por ciento de ellos no estn diagnosticados ni en tratamiento. Existen
formas heterocigticas y homocigticas de la enfermedad. En la forma
heterocigtica el enfermo slo tiene la mitad del nmero normal de receptores LDL
y puede detectarse en neonatos.
En estos casos el nivel de colesterol se sita entre los 300 y 500 miligramos por
decilitro (mg/dl). La consecuencia de este trastorno es el desarrollo de enfermedad
coronaria precoz, que en los hombres aparece entre la cuarta y quinta dcada de
vida, y en las mujeres se manifiesta una dcada ms tarde. Segn los ltimos
estudios, el 75 por ciento de los hombres con hipercolesterolemia familiar que no
han sido tratados tendrn un infarto antes de los 60 aos, y las mujeres antes de
los 70. Adems de la dieta, esta forma de hipercolesterolemia requiere tratamiento
farmacolgico.
La mayor parte de los enfermos responden a una monoterapia con resinas, cido
nicotnico o estatinas, aunque en los casos graves es necesario dos o incluso las
tres sustancias de forma combinada. En la forma homocigtica se da una
ausencia casi total de la superficie celular que eliminan las LDL. Se da en uno de
cada milln de habitantes y los afectados tienen una concentracin de colesterol
que oscila entre los 700 y los 1.200 mg/dl. Provoca arterosclerosis precoz grave,
que puede manifestarse en las primeras dcadas de vida. La escasa actividad de
los receptores provoca que sean resistentes a las dietas y los frmacos destinados
a reducir los niveles de colesterol. Para tratar este trastorno se utiliza probucol,
aunque tambin se ha recurrido al trasplante heptico para proporcionar los
receptores LDL que faltan. Este tratamiento reduce el colesterol LDL y aumenta la
respuesta a los frmacos hipocolesterolemiantes. Sin embargo, requiere un
estrecho control del rgano trasplantado, para lo que se necesita una
inmunosupresin continuada.
Hipercolesterolemia polignica grave: Se caracteriza por un nivel elevado de
colesterol-LDL causado por factores genticos y ambientales. Est asociada a un
mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares y cerca del siete por ciento de los
familiares de primer grado de pacientes con una hipercolesterolemia polignica
presentan concentraciones importantes de colesterol LDL. El nivel suele ser
superior a 220 mg/dl. El tratamiento se basa en la administracin de resinas, cido
nicotnico y estatinas. Generalmente no es necesaria la administracin combinada
de las tres sustancias.
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Hiperlipemia familiar combinada: En este trastorno los afectados presentan
niveles muy elevados de colesterol o de triglicridos. Se desconoce si la causa se
encuentra en uno o varios factores genticos y no existen rasgos clnicos que
permitan diagnosticarla. El colesterol total se sita entre los 250 y 350 mg/dl,
mientras que los triglicridos sufren importantes variaciones. El tratamiento
consiste en una reduccin de peso y de la ingesta de grasas saturadas y
colesterol. Para controlar los niveles altos de triglicridos puede administrarse
cido nicotnico.
DIAGNSTICOS
Tras realizar la exploracin fsica y establecer el nivel de colesterol en sangre se
deben determinar los factores que influyen en su aumento, como la dieta, la
administracin de algn frmaco, o la presencia de alguna enfermedad, y los
factores genticos y de riesgo que favorecen el desarrollo de enfermedades
coronarias asociadas a la hipercolesterolemia. La hipercolesterolemia secundaria
tambin puede detectarse mediante anlisis de orina, midiendo la concentracin
srica de tirotropina, glucosa y fosfatasa alcalina.
TRATAMIENTOS
Generalmente todas las personas que sufren hipercolesterolemia deben realizar
un tratamiento diettico para reducir el nivel de colesterol LDL, aumentar su
actividad fsica y eliminar los factores de riesgo que puedan favorecer el desarrollo
de patologas asociadas. El tratamiento farmacolgico se reserva para los
pacientes que tienen un riesgo muy elevado de padecer enfermedades
cardiovasculares, formas graves de hipercolesterolemia, dislipemias secundarias
graves o que no han respondido al tratamiento diettico. Una vez establecido el
tratamiento hay que realizar controles peridicos de la concentracin de colesterol
en sangre.
Tratamiento diettico: Su principal objetivo es evaluar los hbitos alimenticios del
paciente y establecer una dieta individualizada en cuyo cumplimiento deben
implicarse seriamente no slo el paciente sino tambin los mdicos y la familia del
afectado. De esta manera se intenta alcanzar el mximo cumplimiento del
tratamiento. Una vez identificados los alimentos con alto contenido en grasas
saturadas y colesterol que ingiere habitualmente el enfermo, se evalan otros
factores de riesgo modificables que puedan asociar la hipercolesterolemia con
otras patologas.
En la dieta, ha de tenerse en cuenta que las caloras procedentes de las grasas no
deben superar el 30 por ciento del total de la dieta. Se recomienda que las grasas
no superen el 30 por ciento del total de la dieta, que aproximadamente el 10 por
ciento de las caloras procedan de las grasas saturadas, otro 10 por ciento de las
poliinsaturadas y un 10 por ciento de las monoinsaturadas. En todo caso el
colesterol debe ser inferior a 300 mg diarios.
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Existen tres factores que influyen especialmente en el aumento de colesterol:
cidos grasos saturados o grasas saturadas, ingesta elevada de colesterol y
desequilibrio entre el consumo de caloras y el gasto energtico.La dieta debe ser
pobre en grasas saturadas y colesterol, rica en cidos grasos monoinsaturados,
fibra vegetal e hidratos de carbono. Generalmente la dieta reduce en un 30 por
ciento la ingesta de grasas, sustituyendo el consumo de grasas saturadas por el
de insaturadas. Asimismo, deben controlarse otros factores como el sobrepeso o
la diabetes.
Tratamiento farmacolgico: Las sustancias ms utilizadas para reducir la
concentracin de colesterol en sangre son las resinas, el cido nicotnico y las
estatinas. Asimismo, pueden utilizarse derivados del cido lbrico, probucol o la
terapia hormonal sustitutiva con estrgenos.
Vacuna: De momento no existe una vacuna que pueda frenar la concentracin de
colesterol y, en consecuencia, la formacin de placas arterioesclerticas.
Numerosas investigaciones intentan estimular la produccin de anticuerpos
naturales especficos contra el colesterol, consiguiendo de esta manera una
inmunizacin anticolesterol. Sin embargo, la mayor parte de los especialistas se
muestran escpticos.

3. ARTERIOESCLEROSIS
Es una afeccin en la cual la placa se deposita a lo largo de las paredes de las
arterias. Placa es una sustancia pegajosa compuesta de grasa colesterol calcio y
otras sustancias que se encuentran en la sangre. Con el tiempo, esta placa se
endurece y angosta las arterias. Eso limita el flujo de sangre rica en oxgeno y
puede llevar a problemas graves como
Enfermedad de las arterias coronarias. Estas arterias llevan sangre a su
corazn. Cuando se bloquean, usted puede sufrir una angina o un ataque
cardaco.
Enfermedades de las arterias cartidas. Estas arterias llevan sangre a su
cerebro. Cuando se bloquean, usted puede sufrir un ataque cerebral
Enfermedad arterial perifrica. Estas arterias estn en sus brazos, piernas y
pelvis. Cuando se bloquean, usted puede sufrir adormecimiento, dolor y a
veces infecciones.
Generalmente, la arterioesclerosis no presenta sntomas hasta que una arteria se
estrecha demasiado o totalmente. Mucha gente no sabe que sufre esta condicin
hasta que tiene una emergencia mdica.
Un examen fsico, diagnstico por imgenes y otro tipo de pruebas diagnsticas
pueden revelar si usted sufre de arterioesclerosis. Los tratamientos incluyen
medicamentos, procedimientos mdicos y ciruga. Un cambio en el estilo de vida
tambin puede ayudar. Esto incluye una dieta sana, ejercicio, mantener un peso
saludable, dejar de fumar y manejar el estrs.