1

A hisztamin, IL-5, IgE s TGF-beta1

vizsglata az orrpolipozits
patogenezisben

Doktori Tzisek

Dr. Jkti Adrienn


SEMMELWEIS EGYETEM
MOLEKULRIS ORVOSTUDOMNYOK
DOKTORI ISKOLA

ELMLETI S KLINIKAI IMMUNOLGIA



Tmavezet: Dr. Tth Sra Ph.D.









Budapest, 2008.
2
BEVEZETS

Az orrpolip az orrnylkahrtya jindulat
kitremkedse az orrjratokbl az orrregbe.
Multifaktorilis krkp, melynek pontos
patogenezise mai napig sem tisztzott. Jellemzje
a krnikus nylkahrtyagyullads, mely a polipok
2/3-ban az eosinophil sejtek felszaporodsval
jr. Az allergis-gombs s eosinophil sejtes
gyullads az utbbi idben eltrbe kerlt a
patogenezis kutatsban. Br az eosinophil polipos
betegek 1/3-nak allergis rhinitise is van, az
allergia mgsem tnik kroki tnyeznek. Az
utbbi idben vlt nyilvnvalv, hogy szmtalan
citokin (IL-4-6, 8, TGF-beta, GM-CSF stb.),
kemokin (eotaxin, RANTES) s adhzis
molekula (E- s P-Selectin, VCAM-1) vesz rszt a
polipkpzdsben. Az IL-5 emelkedett szintje
orrpolipzisban mr kimutatsra kerlt, mely
jelensg kapcsn felmerlt a hisztamin, mint
meditor szerepe. Az eosinophil sejtek
3
felhalmozdst s aktivldst az IL-5 vltja ki,
s tartja fenn. Keveset tudunk mg a hisztamin
orrnylkahrtyban s orrpolipzisban betlttt
szereprl. A szveti IgE orrpolipban jtszott
szerepe mg szintn feldertetlen. Az utbbi idk
kutatsai rtk le az IgE loklis felhalmozdst,
illetve Staphylococcus aureus enterotoxinok elleni
specifikus IgE molekulk jelenltt, felvetve ezzel
ezek szuperantign szerept a patogenezisben. A
ltens s aktv TGF-beta1 jelenlte, s szerepe a
polipkpzdsben s talakulsban szintn
tisztzsra vr.

CLKITZSEK

Vizsglataink sorn clunk volt az IgE, IL-5 s
TGF- 1 vizsglata a patogenezisben, illetve
meghatrozni, hogy a fenti citokinek mely
sejtekben s struktrkban vannak jelen a
polipszvetben. A TGF- 1 specilis
4
aktivldsi mechanizmust szintn
figyelembe vettk.
Az IL-5 felszabaduls egyik fontos meditora
valsznleg a hisztamin. Ezrt clunk volt a
hisztamin metabolizmus feltrkpezse
polipkpzds patogenezisben.
Clunk volt mg meghatrozni, hogy a
hisztamin mely hisztaminreceptorokon
keresztl fejti ki meditor szerept, illetve
megvizsglni a hisztamin eosinophil
gyulladshoz val viszonyt.
5
MDSZEREK

Anyagok

34 minta kerlt feldolgozsra az IL-5, IgE,
TGF-beta1, 15 a HDC, HNMT s 11 a
hisztaminreceptorok vizsglatakor.
Endoszkpos orrmellkreg-mtt kapcsn
eltvoltott polipszvetet hasznltunk. A
betegek vletlenszeren kerltek kivlasztsra.
Kontrollknt (n=9 az IL-5, IgE, TGF-beta1,
n=11 a HDC, HNMT s n=9 a
hisztaminreceptor vizsglatokhoz) orrsvny
mtt sorn eltvoltott als orrkagyl
orrnylkahrtyt hasznltunk. Allergia, vagy
egyb az orrnylkahrtya llapott befolysol
tnyez kizrsra kerlt.
A mintkat homogenizltuk, majd
felhasznlsig -20 C vagy -80 C troltuk, a
ksbbi ksrletektl fggen.
6
A vizsglatok tjkozott beleegyezssel s
etikai engedllyel trtntek.

Mdszerek

IL-5 s TGF-beta1 ELISA
Szvettani vizsglat (Haematoxylin-eozin s
Pappenheim fests)
IL-5, TGF- 1 immunhisztokmia
HDC RT-PCR
HDC Western blot
Hisztamin RP-HPLC
Indirekt HDC immunhisztokmia
HNMT aktivits
H1, H2, H3, H4 Western blot
ECP ELISA

Statisztikai elemzsek

Mann-Whitney U prba s ktmints t-prbt
hasznltunk.
7

EREDMNYEK

Loklis IgE
IgE jelenltt nem sikerlt kimutatni egszsges
orrnylkahrtyban, mg polipszvetben igen.
rdekes mdon a nem allergis polipok relatv
nagy mennyisg IgE-t tartalmaztak, mely
azonban nem rte el a szignifikns szintet a
kontrollhoz kpest (p=0,08). Jval kisebb
mennyisgben volt jelen azonban a nem allergis
csoportban, mint az allergis polipokban.

Szrum IgE
A nem allergis polipos betegcsoportnl jelents
szint szrum IgE szintet talltunk a norml
populcihoz kpest (0,1-1,0 g/ml). Az allergis
polipos betegcsoportnl azonban szignifikns
mrtkben nagyobb mennyisg szrum IgE
szintet mrtnk. (p=0,007).
8
A szrum illetve szveti IgE szintek kztt
orrpolipban (r=0,76; p<0,05), fleg az allergis
csoportban (r=0,8; p<0,05) ers korrelcit
talltunk, ugyanez a nem allergis csoportban
gyengbb kapcsolatnak bizonyult (p=0,1).

IL-5
Az IL-5 emelkedett mrtkben volt jelen
polipszvetben, az allergis s nem allergis
betegcsoport kztt nem volt szignifikns
klnbsg. Kontrollban az IL-5 szintje nem
haladta meg a detektlsi kszbt (15 pg/ml). A
nem allergis polipok s a kontrollban mrt
rtkek kztt a klnbsg csak T-prbval
bizonyult szignifiknsnak (p=0,05), Mann-
Whithney prbval nem. Az IL-5 s szveti IgE
szintek kztt csak allergis polipos betegekben
talltunk szignifikns korrelcit (r=0,93; p<0,05).
Az IL-5 s szrum IgE szint kztt nem volt
kapcsolat.


9
TGF-beta1
Kontroll nylkahrtyban szignifikns mrtkben
magasabb TGF-beta1 szintet talltunk, az
allergis s nem allergis csoport kztt nem volt
klnbsg. A homogenizlst megelz, hvel
trtn aktivls utn sem polip (n=4), sem
kontroll (n=4) szvetben nem tudtunk TGF-beta1-
et detektlni, mg a nem aktivlt
referenciamintkban
(n=4) 78,79 pg/ml (polip) s 122,00 pg/ml
(kontroll) rtkeket kaptunk. Az eredmny akkor
sem vltozott, ha a homogenizls utn vgeztk
az aktivlst.

Pappenheim fests
Nagyobb szmban talltunk eosinophil sejteket
polipszvetben kontroll nylkahrtyhoz kpest a
Pappenheim szerint megfestett metszeteken.

IL-5 immunhisztokmia
10
Immunhisztokmia sorn - fknt eosinophil
sejtekhez ktve jelents IL-5 pozitivitst
kaptunk.

TGF-beta1 immunhisztokmia
A TGF-beta1-t fknt eosinophilekhez s
makrofgokhoz ktve talltunk polipszvetben,
dominnsan a lamina propria terletn, mg
kontroll nylkahrtyban egyltaln nem sikerlt
pozitivitst kimutatni.

HDC RT-PCR
A HDC gnexpresszi polipszvetben
szignifikns mrtben magasabbnak bizonyult
kontroll nylkahrtyhoz kpest (p=0,07).

HDC Western blot
A HDC-t fehrjeszinten szintn (p=0,07)
szingifikns mrtben magasabbnak talltuk
polipszvetben kontroll nylkahrtyhoz kpest

11
HDC immunhisztokmia
Tbb HDC pozitv sejtet tudtunk polipszvetbl
kszlt metszeten kimutatni, mint kontroll
nylkahrtyban.

HNMT aktivits
A HNMT aktivits (p=0,02) szignifikns
mrtkben emelkedett volt polipszvetben
kontrollhoz kpest.

Hisztamin HPLC
A hisztamintartalomban nem talltunk
szignifikns klnbsget polipszvet s kontroll
nylkahrtya kztt.

Hisztaminreceptorok
A H1 s H4 receptorok szintje magasabbnak
bizonyult polipszvetben a kontrollhoz kpest (H1
receptor p=0,045; H4 receptor p<0,001). A H2 s
H3 receptorok szintjben nem talltunk
szignifikns klnbsget.

12
ECP
Az eosinophil cationic protein (ECP)
koncentrcijt szignifikns mrtkben (p=0,002)
magasabbnak talltuk polipszvetben (962,0
ng/ml) kontrollhoz (27,7 ng/ml) kpest.
Sem a H1 receptor s ECP szint kztti korrelci,
sem a H1 s H4 receptor szintek kztti korrelci
nem bizonyult szignifiks mrtknek, mg a H4
receptor s ECP kztti korrelci jelents
korrelcis tendencit mutatott, br csak 10 %-os
szignifikanciaszinten (r=0,52; p<0,1).

KVETKEZTETSEK

1. Az IL-5 kulcsszerepet jtszik az eosinophil
sejtek felhalmozdsban, s aktivldsban,
mely folyamat mind allergis, mind nem-
allergis utakon aktivldhat.

2. Az azonnali tpus szisztms allergis reakci
valsznleg nem jtszik szerepet az orrpolip
13
patogenezisben, de a szveti IgE termels
lehet loklis allergis mechanizmus
kvetkezmnye. Az IL-5 s TGF- 1 f
forrsai az eosinophil sejtek s a makrofgok.

3. A TGF-beta1 fontos szablyoz faktornak
tnik az orrpolip patogenezisben. Az
egszsges orrnylkahrtya integritsnak
fenntartsrt egyb tnyezk mellett a
TGF-beta1 felels. Ezen mikrokrnyezet
radiklisan megvltozhat eddig ismeretlen
triggerek ltal kivltott loklis immunolgiai
s allergis mechanizmusok hatsra, amely
polipkpzdshez vezethet.

4. A megvltozott hisztaminmetabolizmus, mint
az IL-5 felszabadulst stimull tnyez,
fontos szerepet jtszhat a polipkpzdsben.

5. gy tnik, hogy a H4 receptornak fontosabb
szerepe van a hisztaminhats kzvettsben
orrnylkahrtyban, mint a H2 s H3
14
receptoroknak. Az orrpolipzisban jl ismert
s jelents eosinophil-felhalmozds
elkpzelhet, hogy hisztamin-medilt, ezltal a
hisztamin lehet a kapcsolelem a loklis
allergis reakci s az eosinophil gyullads
kztt. A H4 receptor orrpolipzisban jtszott
szerepnek pontosabb tisztzsa a jvben
felvetheti a H4 antagonistk esetleges klinikai
alkalmazst az orrpolipzis kezelsben.



SAJT PUBLIKCIK JEGYZKE

1. Hirschberg A, Jkti A, Darvas Z, Almay K,
Rpssy G, Falus A. The pathogenesis of nasal
polyposis by immunoglobulin E and
interleukin-5 is completed by transforming
growth factor-beta1. Laryngoscope 2003 Jan;
113(1): 120-4.

15
2. Jkti A, Schwelberger H, Darvas Z, Pli Z,
Bsze S, Falus A, Hirschberg A. Histamin
metablism is altered in nasal polyposis.
Inflamm Res 2004 Mar; 53 Suppl 1: S93-4.

3. Jkti A, Hellinger E, Hellinger A, Darvas Z,
Falus A, Thurmond RL, Hirschberg A.
Histamine H4 receptor expression is elevated
in human nasal polyp tissue. Cell Biol Int 2007
Nov; 31(11): 1367-70.