Curso Validacion

Curso Taller : Validacin de
Mtodos de ensayo analticos con

aplicaciones de MINITAB y Excel

Expositor: Jos Camero Jimnez
Lima, Abril 2009
VALIDACIN
VALIDAR :
Confirmar el cumplimiento de los requisitos particulares
para un uso especificado propuesto, por medio del
examen y la presentacin de evidencias objetivas.
ISO 9000: 2005
Validacin de Mtodos de Ensayo:
Es un proceso mediante el cual se define requisitos
analticos, que aseguran que el mtodo de ensayo
bajo ciertas consideraciones ha desarrollado
capacidades consistentes con la aplicacin requerida.

(EURACHEM Guide. The fitness for purposse of analytical methods)
Gua para efectuar
Validacin de Mtodos de Ensayos
INDECOPI
Cuando es necesario validar
un mtodo de ensayo?
Un mtodo de ensayo se validad cuando es necesario
verificar que los parmetros ejecutados son los
adecuados para resolver un problema analtico en
particular. El laboratorio debe validar :

1. Los mtodos de ensayo no normalizados.

2. Los mtodos de ensayo normalizados modificados,
ampliados o aplicados a un alcance diferente al originalmente
establecidos en la norma.

3. Cuando se requiera demostrar la equivalencia entre dos
mtodos de ensayo.
PLANEAMIENTO DE VALIDACIN
PLANEAMIENTO DE
VALIDACION
1

Definir Objetivo
2

Definir parmetros
de validacin
3

Definir procedimiento
operacional
de validacin
4

Definir los
Ensayos de
validacin
5

Verificar
compatibilidad
de equipos
6

Caracterizar
materiales
7

Ejecutar ensayos
preliminares
8

Ajustar los
parmetros
de validacin
9

Ejecutar los
ensayos completos
10

Preparar
procedimiento
rutina
11

Definir
criterios
de
revalidacin
12

Definir tipo
y frecuencia
de verificacin de
control de calidad
PARMETROS DE VALIDACIN
3
Selectividad /
Especificidad
1
Veracidad
5
Linealidad
4
LDM y LCM
2
Precisin
8
Robustez
6
Rango de
Trabajo
7
Sensibilidad
9
Incertidumbre
1. Veracidad:
Grado de concordancia existente entre el valor medio obtenido de
una gran serie de resultados y un valor aceptado como referencia.

(ISO 5725 - 1)

2. Precisin:
Grado de coincidencia existente entre los resultados
independientes de un ensayo, obtenidos en condiciones
estipuladas.

(ISO 5725 - 1)

2.1 Exactitud:
Grado de concordancia existente entre el resultado del
ensayo y un valor aceptado de referencia.

(ISO 5725 - 1)

VERACIDAD
P
R
E
C
I
S
I
O
N

- +
+

-

3. Selectividad/Especificidad:
Es el grado por el cual un mtodo puede determinar un
analito particular dentro de una mezcla compleja, sin ser
interferido por otros componentes de la mezcla.

(EURACHEM Guide The fitness for purpose of analytical methods)

4. Lmite de Deteccin del Mtodo
(LDM) y Lmite de Cuantificacin
del Mtodo (LCM) :
4.1 LDM :
Es la menor cantidad de un analito en una muestra la cual
puede ser detectada pero no necesariamente cuantificada con
un valor exacto.


4. Lmite de Deteccin del Mtodo
(LDM) y Lmite de Cuantificacin
del Mtodo (LCM) :
4.2 LCM :
Es la concentracin mnima que puede determinarse con un nivel
aceptable de exactitud.


5. Linealidad:
Es la relacin entre la concentracin de analito y respuesta del
mtodo. Esta relacin, denominada comnmente curva patrn o
curva de calibracin.
Define la capacidad del mtodo para obtener los resultados de la
prueba proporcionales a la concentracin del analito.


6. Rango de Trabajo:
Es el intervalo entre la ms alta y ms baja concentracin del
analito de la muestra, para la cual se ha demostrado que el
mtodo analtico tiene un nivel apropiado de precisin,
veracidad y linealidad.

(Text on validation of analytical procedures. ICH Harmonized
Tripartite Guideline)

7. Sensibilidad:
Es el cambio en la respuesta de un instrumento de medida
dividido por el cambio correspondiente en el estmulo.

(Text on validation of analytical procedures. ICH Harmonized
Tripartite Guideline)

8. Robustez:
Es la medida de la resistencia de un mtodo al cambio de
respuesta cuando se introducen pequeas variaciones en el
procedimiento.

9. Incertidumbre:
Un parmetro asociado con el resultado de una medicin, que
caracteriza la dispersin de los valores que podran ser
atribuidos razonablemente al mensurando.
(EURACHEM Cuantificacin de la Incertidumbre en Mediciones
Analticas )

DESARROLLO DE LOS
DETERMINACIN DE VERACIDAD
1 CASO : Repeticiones en Muestra de Referencia Certificada
(MRC)
MRC
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
...
Repeticin n
Se determina por :
Prueba T-Student.
Prueba de Wilcoxon.
(MRC)
Determinacin del nmero de repeticiones
( )
( )
( )
a
a
ref n
n
S
u t t
a
n a
2
2
2 / , 1
, 1
+ + >

|
o
a
n
2
a
S
o
:Sesgo del mtodo
:Varianza de repetibilidad
del mtodo
: Probabilidad de error tipo I
| :Probabilidad de error tipo II
t
: Factor de cobertura asociado a
una distribucin t-Student.
: Nmero de repeticiones.
Condicin:
ref
u
:Incertidumbre del material de referencia.
Prueba T-Student
( )
o
n x
t
erimental

=
exp
T experimental : Se determina de la siguiente manera:
Existe diferencia significativas si :
tabla erimental
t t )
exp
T tabla : Se determina de la siguiente manera:
|
.
|
\
|

=
2
1 , 1
o
n
tabla
t t
Repeticiones ppm Repeticiones ppm Repeticiones ppm
1 863 11 851 21 858
2 849 12 849 22 858
3 856 13 864 23 869
4 868 14 865 24 864
5 861 15 856 25 871
6 860 16 862 26 868
7 872 17 860 27 856
8 878 18 848 28 869
9 853 19 864 29 872
10 868 20 862 30 875
Determinacin de Fierro en MRC con 866 ppm
Ejemplo: Determinar veracidad en los siguientes
resultados de ensayo con una MRC de 866ppm de
fierro

Prueba de Normalidad
Av erage: 862.3
StDev : 7.91398
N: 30
Anderson-Darling Normality Test
A-Squared: 0.201
P-Value: 0.870
848 858 868 878
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
Fierro
Normal Probability Plot
Test of mu = 866.00 vs mu not = 866.00

Variable N Mean StDev SE Mean T P
Fierro 30 862.30 7.91 1.44 -2.56 0.016

T-Test of the Mean
Conclusin: Los resultados de las repeticiones no son veraces al 95%
de confianza.
Repeticiones %Grasa Repeticiones %Grasa Repeticiones %Grasa
1 8.57 11 8.21 21 8.35
2 8.58 12 8.53 22 8.29
3 8.54 13 8.55 23 8.45
4 8.22 14 8.28 24 8.31
5 8.27 15 8.48 25 8.21
6 8.53 16 8.22 26 8.52
7 8.46 17 8.22 27 8.56
8 8.46 18 8.4 28 8.57
9 8.27 19 8.22 29 8.36
10 8.39 20 8.38 30 8.23
Determinacin de %Grasa en MRC con 8.4%
Ejemplo: Determinar veracidad en los siguientes
resultados de ensayo con una MRC de 8.4% de grasa

Av erage: 8.38767
StDev : 0.134079
N: 30
A-Squared: 1.027
P-Value: 0.009
8.2 8.3 8.4 8.5
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
%Grasa
Test of median = 8.400 versus median not = 8.400

N for Wilcoxon Estimated
N Test Statistic P Median
%Grasa 30 29 187.0 0.517 8.390

Wilcoxon Signed Rank Test
Conclusin: Los resultados de las repeticiones son veraces al 95% de
confianza.
2 CASO : Repeticiones en Muestra en un mtodo estandarizado y
el mtodo a validar.
Muestra
Se determina por :
Prueba T-Student dos muestras.
Prueba de Mann Whitney.
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
...
Repeticin n
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
...
Repeticin n
Mtodo Estandarizado
Mtodo a Validar
Determinacin del nmero de repeticiones
( )
( )
( )
a
a
n
n
S
t t
a
n a
2
2 / , 2 2
2
, 2 2
+ >

|
o
a
n
2
a
S
o
:Sesgo del mtodo
:Varianza de repetibilidad
del mtodo
: Probabilidad de error tipo I
| :Probabilidad de error tipo II
t
: Factor de cobertura asociado a
una distribucin t-Student.
: Nmero de repeticiones.
Condicin:
2 CASO : Repeticiones en Muestra en un mtodo estandarizado y
el mtodo a validar.
Pruebas para dos poblaciones
Varianzas desconocidas S
2
1
y S
2
2

H
0
:
1
=
2
H
a
:
1
=
2

H
0
:
1
-
2
= 0 H
a
:
1
=
2

Comparamos con 0.

Pero, cul es la desviacin estndar de
?

2 1
x x
2 1
x x
Varianza de :
Si las poblaciones son independientes:

As:
2 1
x x
) ( ) ( ) (
2 1 2 1
x Var x Var x x Var + =
) ( ) ( ) (
2 1 2 1
x Var x Var x x Var + = +
) ( ) ( ) (
2 1 2 1
x Var x Var x x DesvEst + =
2
2
2
1
2
1
n n
o o
+ =
)
1 1
( ) (
2 1
2
2
2
2
1
2
1
2 1
n n n n
x x Var + = + = o
o o
2
1
1
2
1
) (
1
1
1
x x
n
s
n
i
i

=

=
Pero
2
es desconocido, y debemos estimarlo!
Si slo tenemos las x el mejor estimador de
2
es:
Si slo tenemos las y, el mejor estimador de
2
es:
2
1
2
2
2
) (
1
1
2
y y
n
s
n
i
i

=

=
Varianza de :
2 1
x x
Estimar la varianza comn S
2
Combinamos los dos estimadores y tenemos

para estimar la varianza comn o
2
.

|
|
.
|
\
|
+
+
=

= =
2
1
2
1
2 1
2
) ( ) (
2
1
2 1
y y x x
n n
s
n
i
i
n
i
i
Prueba t para dos
poblaciones independientes
2 1
2 1 2 1
1 1
) ( ) (
n n
s
x x
t
+

=

(Varianza comn desconocida)
Con los supuestos de antes, t tiene una
distribucin t con n
1
+ n
2
- 2 grados de libertad.
Met. Valid Met. Stan. Met. Valid Met. Stan. Met. Valid Met. Stan.
499 501 510 492 499 493
491 502 490 504 504 505
511 504 499 500 493 499
501 500 495 506 498 491
511 510 507 502 506 482
518 481 492 500 495 496
502 501 507 502 498 486
505 512 505 510 501 489
503 523 495 497 500 495
497 506 495 516 500 496
Determinacin de Fierro en ppm en muestra no certificada
Ejemplo: Determinar veracidad en los siguientes resultados de
ensayo con una muestra no certificada analizada en 30
repeticiones por el mtodo a validar y un mtodo estandarizado
Av erage: 500.9
StDev : 6.61946
N: 30
A-Squared: 0.250
P-Value: 0.723
490 500 510
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
MetVal
Av erage: 500.033
StDev : 9.34947
N: 30
A-Squared: 0.258
P-Value: 0.696
480 485 490 495 500 505 510 515 520 525
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
MetStan
Two sample T for MetVal vs MetStan
N Mean StDev SE Mean
MetVal 30 500.90 6.62 1.2
MetStan 30 500.03 9.35 1.7

95% CI for mu MetVal - mu MetStan: ( -3.3, 5.1)
T-Test mu MetVal = mu MetStan (vs not =): T = 0.41 P = 0.68 DF = 58
Both use Pooled StDev = 8.10

Two Sample T-Test and Confidence Interval
Conclusin: Los resultados del mtodo son veraces al 95% de
confianza.
7.64 7.44 7.56 7.46 7.78 7.51
7.48 7.48 7.71 7.59 7.58 7.56
7.57 7.52 7.69 7.68 7.49 7.74
7.52 7.61 7.52 7.69 7.55 7.46
7.55 7.52 7.74 7.78 7.63 7.78
7.57 7.63 7.69 7.78 7.42 7.49
7.79 7.42 7.47 7.55 7.62 7.76
7.77 7.46 7.48 7.55 7.74 7.55
7.55 7.54 7.62 7.61 7.46 7.82
7.45 7.71 7.4 7.48 7.58 7.73
Determinacin de % Grasa en muestra no certificada
ensayo con una muestra no certificada analizada en 30
repeticiones por el mtodo a validar y un mtodo estandarizado
Av erage: 7.58733
StDev : 0.111446
N: 30
A-Squared: 0.408
P-Value: 0.326
7.4 7.5 7.6 7.7 7.8
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
MetVal
Av erage: 7.59667
StDev : 0.121267
N: 30
A-Squared: 0.801
P-Value: 0.034
7.4 7.5 7.6 7.7 7.8
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
MetStan
Mann-Whitney Confidence Interval and Test

Conclusin: Los resultados del mtodo son veraces al 95% de
confianza.
MetVal N = 30 Median = 7.5700
MetStan N = 30 Median = 7.5550
Point estimate for ETA1-ETA2 is 0.0000
95.2 Percent CI for ETA1-ETA2 is (-0.0700,0.0600)
W = 910.0
Test of ETA1 = ETA2 vs ETA1 not = ETA2 is significant at
0.9470
The test is significant at 0.9469 (adjusted for ties)

Cannot reject at alpha = 0.05

3 CASO : Repeticiones en diferentes muestras de un mtodo
estandarizado y el mtodo a validar.
Muestra
1
Se determina por :
Prueba T-Student de las
diferencias o Recta de
Regresin.
Prueba Wilcoxon de las
diferencias.
Repeticin 1
Repeticin 2
.
.
.
Repeticin n
Mtodo
Estandarizado
Mtodo a
Validar
Muestra
2
Muestra
n
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin n
50 52 324 330 120 116
58 59 60 58 142 148
68 70 74 72 174 169
75 74 486 490 202 198
278 281 146 151 246 251
224 226 165 169 284 291
381 385 83 79 358 349
428 434 90 88 401 396
336 330 102 104 468 471
76 80 112 114 500 496
Determinacin de un analito en ppm en 30 muestras no certificada
ensayo con 30 muestras no certificada analizada en 1 repeticin
por el mtodo a validar y un mtodo estandarizado
Av erage: -0.666667
StDev : 4.31783
N: 30
A-Squared: 0.805
P-Value: 0.033
-5 0 5
.001
.01
.05
.20
.50
.80
.95
.99
.999
P
r
o
b
a
b
i
l
i
t
y
Diferencia
Wilcoxon Signed Rank Test
Conclusin: Los resultados del mtodo son veraces 95% de confianza.
Test of median = 0.000000 versus median not = 0.000000

N for Wilcoxon Estimated
N Test Statistic P Median
Diferenc 30 30 188.5 0.371 -0.5000

Asumiendo que las diferencias son normales:
T-Test of the Mean
Test of mu = 0.000 vs mu not = 0.000

Variable N Mean StDev SE Mean T P
Diferenc 30 -0.667 4.318 0.788 -0.85 0.40

Regression Analysis
Predictor Coef StDev T P
Constant 0.472 1.453 0.32 0.748
Met.Val 1.00090 0.00558 179.29 0.000
Analysis of Variance

Source DF SS MS F P
Regression 1 620128 620128 32144.76 0.000
Residual Error 28 540 19
Total 29 620668

The regression equation is
Met.Stan = 0.47 + 1.00 Met.Val

DETERMINACIN DE PRECISIN
(MRC)
MRC
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
...
Repeticin n
Se determina por :
RSD de Horwitz.

RSD Horwitz
% 100
exp
=
x
RSD
erimental
o
RSD experimental : Se determina de la siguiente manera:
Existe diferencia significativa si :
Horwitz erimental
RSD RSD )
exp
RSD Horwitz : Se determina de la siguiente manera:
) log( 5 . 0 1
2
in Concentrac
Horwitz
RSD

=
Repeticiones ppm Repeticiones ppm Repeticiones ppm
1 863 11 851 21 858
2 849 12 849 22 858
3 856 13 864 23 869
4 868 14 865 24 864
5 861 15 856 25 871
6 860 16 862 26 868
7 872 17 860 27 856
8 878 18 848 28 869
9 853 19 864 29 872
10 868 20 862 30 875
Determinacin de Fierro en MRC con 866 ppm
Ejemplo: Determinar la precisin en los siguientes
resultados de ensayo con una MRC de 866ppm de
fierro

7.91
862.3
0.918%
866
5.8%
Desviacin Estandar
Promedio
RSD experimental
MRC
RSD Horwitz
RSD Horwitz
Conclusin: Los resultados del mtodo son precisos.
DETERMINACIN DE PRECISIN
2 CASO : Repeticiones en Muestra en un mtodo
estandarizado y el mtodo a validar.
Muestra
Se determina por :
Prueba F.
Prueba de Levene.
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
...
Repeticin n
Mtodo Estandarizado
Mtodo a Validar
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
...
Repeticin n
Prueba F
) , (
) , (
2
2
2
1
2
2
2
1
exp
S S Min
S S Max
F
erimental
=
F experimental : Se determina de la siguiente manera:
Existe diferencia significativa si :
Tabla erimental
F F )
exp
F tabla : Se determina de la siguiente manera:
) 1 , . , . ( o
=
r denomidano gl numerador gl Tabla
F F
5 6 7 8 9 10 11 12 13
95% Conf idence Interv als f or Sigmas
2
1
480 490 500 510 520
Resultados
F-Te
Test Stati sti c: 1.995
P-Val ue : 0.068
t Levene's Te
Test Stati sti c: 1.626
P-Val ue : 0.207
Factor Lev els
1
2
Homogeneity of Variance Test for Resultados
REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
DE LOS RESULTADOS DE ENSAYOS
DEFINICIONES

Condiciones de Repetibilidad

Condiciones en las que un mismo operador obtiene resultados
de ensayo independientes con el mismo mtodo en muestras
idnticas en el mismo laboratorios y utilizando el mismo equipo
dentro de pequeos intervalos de tiempo.

( ISO 5725-1, 3.14)

Condiciones de Reproducibilidad

Condiciones en las que se obtiene resultados de ensayo con el
mismo mtodo en muestras idnticas, con operadores diferentes y
utilizando equipos diferentes.

( ISO 5725-1, 3.18)

Desviacin Estndar de Repetibilidad ( Sr)

Es la desviacin Estndar de los resultados de ensayo obtenidos
en condiciones de repetibilidad.
Se calcula como :

= =
=
p
i
i
p
i
i i r
n S n S
1 1
2
) 1 ( ) 1 (
Desviacin Estndar de Reproducibilidad ( SR )
Es la desviacin Estndar de los resultados de ensayo obtenidos
en condiciones de reproducibilidad.
Se calcula como :

2 2
(
L r R
S S S + =
Donde :
SL : Desviacin estndar de los Laboratorios.

n S S S
r d L
) (
2 2 2
=
( )
(
=

= =
p
i
p
i
i i d
y n y n
p
S
1 1
2
2
2
1
1
Ratio de Precisin :

Es la relacin de la desviacin estndar muestral con la
repetibilidad del grupo, que tendr que ser menor a un valor de
referencia de 2,88 para considerar sea aceptable.

r
S
S
Ratio =
Desviacin Estndar Relativa :

Es medido con el coeficiente de variabilidad o desviacin
estndar relativa, que son definidos y utilizados como medidas de
la dispersin de resultados de ensayo en condiciones de
repetibilidad o de reproducibilidad.

Desviacin Estndar
Relativa :
% 100 *
m
S
RSD
R
R
=
% 100 *
m
S
RSD
r
r
=
Desviacin Estndar Relativa de
Reproducibilidad
Desviacin Estndar Relativa
de Repetibilidad
LABORATORIOS ENSAYOS
A 7.76 7.88 7.9
B 8.02 7.88 8.67
C 7.74 8.01 8.01
Laboratorios Promedios Globales Desviacin estndar n
A 7.847 0.076 3
B 8.190 0.422 3
C 7.920 0.156 3
=
I I
Y n T
1
2
2
=
I I
Y n T

=
I
n T
3
2
4
=
I
n T

=
2
5
) 1 (
i I
S n T
p T
T
S
r
=
3
5
2
(
=
4
2
3
3
2
3
2
1 3 2
2
) 1 (
) 1 ( T T
p T
S
p T
T T T
S
r l
2 2
(
L r R
S S S + =
T1 71.871
T2 574.134
T3 9.000
T4 27.000
T5 0.416
S
2
r
0.069
S
2
L
0.055
m 7.986
S
r
0.263
S
2
R
0.125

Reproducibilidad del grupo
S
2
R =
S
2
r
+ S
2
L

S
2
R =
0.125
S
R =
0.353

Ratio de Precisin

Ratio de Precisin de los laboratorios
Laboratorios Desviacin estndar Ratio de Precisin
A 0.076 2.090
B 0.422 11.634
C 0.156 4.302
Desviacin Estndar Relativa
Desviacin estndar relativa
Laboratorios Desviacin estndar Promedios Globales RSD
A 0.076 7.847 0.965
B 0.422 8.190 5.147
C 0.156 7.920 1.968
La desviacin estandar relativa bajo condiciones
de reproducibilidad y repetibilidad es
como sigue :
RSD R = (SR/m)*100% = 1.85%
RSD r = (Sr/m)*100 % = 0.5%
LABORATORIOS ENSAYOS
A
24.760 24.800 24.770
B
25.260 25.300 25.230
C
25.180 25.210 25.150

Laboratorios Promedios Globales Desviacin estndar
A
24.777 0.021
B
25.263 0.035
C
25.180 0.030

T1
225.660
T2
5658.454
T3
9.000
T4
27.000
T5
0.005
S
2
r

0.001
S
2
L

0.067
m
25.073
S
r

0.029
S
2
R

0.068

Reproducibilidad del grupo
S
2
R =
S
2
r
+ S
2
L

S
2
R =

0.068
S
R =

0.261

DETERMINACIN DE
SELECTIVIDAD / ESPECIFICIDAD
Prueba de Especificidad :
Se realiza muy frecuentemente en tcnicas instrumentales
como : espectrofotometra de UV o cromatografa lquida.

Por ejemplo para tcnicas cromatogrficas, se debe de
comparar visualmente los cromatogramas en los diferentes
parmetros importantes como : resolucin, retencin relativa
( factor de separacin), etc.

Espectro de una muestra
de Harina de Pescado
con 500 ppm de
Histamina.

Espectro de la solucin
de muestra de Harina de
pescado con 500 ppm de
Histamina mas blanco
reactivo
DETERMINACIN DE
Prueba Visual de Especificidad
DETERMINACIN DE
Prueba de Selectividad :
Las interferencias pueden aumentar o reducir la seal. La
prueba consiste en verificar que las interferencias no afectan
significativamente la seal.

MRC
+
Estndar 1
MRC
+
Estndar 2
MRC
+
Estndar 3
MRC
+
Estndar 4
MRC
+
Estndar 5
MRC
+
Estndar 6
MRC
+
Estndar 7
Resultado 1
Resultado 2
Resultado 3
Resultado 4
Resultado 5
Resultado 6
Resultado 7
Valores Esperados Valores Observados
Valores Esperados Valores Observados
=
DETERMINACIN DE SELECTIVIDAD
Se determina por :
Prueba T para la
diferencias.
Prueba Wilcoxon para
las diferencias.
Prueba Chi - Cuadrado

PRUEBA CHI-CUADRADO
Por lo general, los resultados en un experimento, casi no
coinciden con los valores predichos por la teora o el modelo en
el cual se est trabajando. Esto es as por las fluctuaciones
aleatorias en las mediciones o error en la medicin. El problema
es poder determinar si esas diferencias se deben al azar, o bien
no se ajustan al modelo terico estudiado, en cuyo caso este
deber ser modificado y vuelto a investigar.
Para verificar este hecho utilizamos pruebas estadsticas como la
Prueba de Chi-cuadrado.
Estadstico de Contraste:
=
k
i
i
i i
E
E O
X
1
2
2
) (
Oi : Frecuencia Observada.
Ei : Frecuencia Esperada
K : Nmero de Categoras.
PRUEBA CHI-CUADRADO
) 1 , 1 (
2
r k
X
o
Estadstico de Tabla:
Posee una distribucin Chi Cuadrado con un (1-o)% de
confianza y k-r-1 grados de libertad. Donde r son los
parmetros calculados de los datos para poder estimar los
valores observados.
PRUEBA CHI-CUADRADO
Criterio:
Se acepta la hiptesis nula, siempre y cuando el valor de
tabla sea mayor o igual al estadstico de contraste.
PRUEBA CHI-CUADRADO
Ejemplo .- Se leen concentraciones estndares de 50,
100, 150, 200, 250 adicionadas con blancos reactivos de
un analito por absorcin atmica. Estimar si cumple la
especificidad el mtodo de ensayo.
Concentraciones
Esperado Observado Sumando
50 49.8 0.0008
100 100.98 0.009604
150 148.5 0.015
200 201.8 0.0162
250 250.9 0.00324

X
2
0.044844
X
2
Tabla 9.487729
=
k
i
i
i i
E
E O
X
1
2
2
) (
CONCLUSIN:
Se tiene evidencia para poder afirmar que el mtodo es
especfico.
PRUEBA CHI-CUADRADO
DETERMINACIN DEL LDM y LCM
Blanco 1
Blanco 2
Blanco 3
Blanco 4
Blanco 5
Blanco 6
Blanco 7
( ) cos , 1
cos
blan n
blan
S t x LDM + =
o
Lmite de Deteccin del
Mtodo
cos
cos
blan
blan
S k x LCM + =
Lmite de Cuantificacin del
Mtodo
Donde
k = 5, 6 10
DETERMINACIN DE LA LINEALIDAD
Conc. 1
Conc. 2
Conc. 3
Conc. 4
Conc. 5
Respuesta
Equipo 1
Respuesta
Equipo 2

Respuesta
Equipo 3

Respuesta
Equipo 4

Respuesta
Equipo 5
X
Y
Demostrar :
1. La relacin entre
X e Y existe.
2. La relacin sea
lineal.
3. Los residuos de
la regresin debe
estar libre de
tendencias.
1. La relacin entre X e Y existe.
Se determina por el coeficiente de correlacin ( r ).

El r para considerarlo adecuado debe ser mayor a
0.999
(Comit Nrdico de Alimentos NMKL Procedimiento de Validacin)

( )( )
( ) ( )

= =
=

=
n
i
n
i
i i
n
i
i i
y y x x
y y x x
r
1 1
2 2
1
2. La relacin sea lineal.
% 100 1 %
(
+
=
i
i
bx a
y
desviacin
Puede determinarse de las siguientes maneras :
Si todas las desviaciones son menores al 5%

(FAO Gua de Validacin)
Demostrar en el anlisis de varianza de
la regresin que los coeficientes lineales
son significativos.

0
0
=
=
b
y
a
Analysis of Variance

Source DF SS MS F P
Regression 1 0.28417 0.28417 3091.96 0.000
Residual Error 4 0.00037 0.00009
Total 5 0.28453

3. Los residuos de la regresin debe estar libre de
tendencias.
1 2 3 4 5 6
-0.01
0.00
0.01
Index
R
e
s
i
d
u
o
s
Plot of Residuos
-0.010 -0.005 0.000 0.005 0.010 0.015
95% Conf idence Interv al f or Mu
-0.01 0.00 0.01
95% Conf idence Interv al f or Median
Variable: Residuos
A-Squared:
P-Value:
Mean
StDev
Variance
Skewness
Kurtosis
N
Minimum
1st Quartile
Median
3rd Quartile
Maximum
-9.0E-03
5.35E-03
-9.4E-03
0.153
0.913
3.33E-05
8.57E-03
7.35E-05
0.187499
0.454023
6
-1.2E-02
-6.3E-03
-7.0E-04
7.15E-03
1.30E-02
9.03E-03
2.10E-02
1.02E-02
95% Conf idence Interv al f or Mu
95% Conf idence Interv al f or Sigma
95% Conf idence Interv al f or Median
Descriptive Statistics
DETERMINACIN DEL
RANGO DE TRABAJO
DETERMINACIN :
Desde el LCM hasta la mxima concentracin
donde se ha demostrado linealidad.
DETERMINACIN DE SENSIBILIDAD
DETERMINACIN :
La sensibilidad es cuantificada mediante el coeficiente de
sensibilidad que es determinado de la siguiente manera :

Siendo el coeficiente de sensibilidad la pendiente de la recta
de calibracin ( b ).

X
Y
in Concentrac
spuesta
ad Sensibilid
c
c
=
c
c
=
Re
DETERMINACIN DE LA ROBUSTEZ
Se determina por :
Prueba de Anlisis de Varianza.
Prueba de Youden - Steiner.

Prueba de Anlisis de Varianza.
VARIACIN G.L. SS MS F
ENTRE GRUPOS k-1 SSA SSA/(k-1) MSA/MSE
DENTRO GRUPOS
ERROR
(n-1)k SSE SSE/k(n-1)
TOTAL kn-1 SST
Como el valor experimental de F es mayor que el
tabular, podemos concluir que al menos una de
las variaciones influye en los resultados.
( ) o = 1 , , 1 k kn k tabular
F F
Factores
Repeticiones
A B C D E F G
Resultados
1 + + + + + + + Y
1

2 + + - + - - - Y
2

3 + - + - + - - Y
3

4 + - - - - + + Y
4

5 - + + - - + - Y
5

6 - + - - + - + Y
6

7 - - + + - - + Y
7

8 - - - + + + - Y
8

Prueba de Youden - Steiner.
Los efectos de los factores se calculan de la
siguiente manera:
Donde :
8 7 6 5
4 3 2 1
Y Y Y Y Y
Y Y Y Y Y
A
A
+ + + =
+ + + =
+
4
+

=
A A
A
Y Y
Ef ecto
El efecto es significativo si :
r A
S Efecto 24 . 2 >
FACTORES DE VARIABILIDAD :
FACTOR A : Tiempo de Extraccin
Estndar ( A ) 2 minutos
Variable ( a ) 1 minuto
FACTOR B : Tiempo para pasar el extracto a la columna
Estndar ( B ) Pasar el extracto el mismo da
Variable ( b ) Pasar el extracto 24 horas despues, refrigerndolo.
FACTOR C: Tipo de columna
Estndar ( C ) Columna en forma de tubo recto
Variable ( c ) Columna con dos diametros interiores
FACTOR D: Tiempo de Reaccin de Derivatizacin
Estndar ( D ) 3.5 minutos
Variable ( d ) 4 minutos
FACTOR E: Tipo de lectura
Estndar ( E ) Lectura segn mtodo
Variable ( e ) Lectura despues de 1 hora expuesta a la luz.
FACTOR 1 2 3 4 5 6 7 8
A o a A a a A a A A a
B o b B B b b B b B b
C o c C C C c c C c c
D o d d D D D d d D d
E o e E e E E E e e e
Resultado 988 966 972 980 982 966 978 968
S
r
9.93
RESULTADOS DE LAS COMBINACIONES PARA EL ANALISIS
DE ROBUSTEZ DE YOUDEN STEINER
Valor Observ. Valor Tabla
Factor1 6 22.244
Factor2 7 22.244
Factor3 -4 22.244
Factor4 -2 22.244
Factor5 11 22.244
El Factor no Influye
Conclusin
Los efectos no son significativos.
DETERMINACIN DE LA
INCERTIDUMBRE
Conceptos previos
CORRECCION
RESULTADO
INCERTIDUMBRE
ERROR SISTEMATICO
CONOCIDO
ERROR SISTEMATICO
ERROR
( DE UNA MEDIDA)
ERROR PERMANENTE
ERROR ALEATORIO
ERROR SISTEMATICO
DESCONOCIDO
ESQUEMA ILUSTRATIVO DE LA
CONTRIBUCIN DE ERRORES
ALEATORIOS Y SISTEMTICOS EN EL
CONCEPTO DE INCERTIDUMBRE
MUESTRA
PROCESO ANALITICO
INCERTIDUMBRE DE :
HERRAMIENTAS METROLOGICAS
PATRON
MATERIAL VOLUMETRICO
EQUIPOS DE MEDIDA
CALIBRACION GENERAL
CALIBRACION METODOLOGICA
UNA ETAPA DEL PROCESO
UNA PESADA
UNA DILUCION
ELCONJUNTO DEL PROCESO
VALIDACION
RESULTADOS + INCERTIDUMBRE
DETERMINACIN DE LA
INCERTIDUMBRE GLOBAL
2
R
S k U =
Donde k se conoce como factor de cobertura y se
estima con el valor de 1.96, asumiendo una
distribucin normal con un 95% de nivel de
confianza.
Muchas gracias,
jcamero@cerper.com

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