CAMPUS CIENCIAS DE

LA SALUD
EDUARDO HERNANDEZ
BERNAL
TÉCNICAS DE PREPARACIÓN DE
MUESTRAS PARA OBSERVARLAS
AL
MICROSCOPIO .

Al observar una
estructura al
microscopio
óptico o al
electrónico, la
luz o los
electrones
atraviesan la
muestra, dando
lugar a la
formación de
imágenes que
son ampliadas
por las lentes del
microscopio.


En el caso de la
microscopía óptica
las muestras deben
tener un grosor de 5-
8 μm
 aproximadamente, y
para microscopía
electrónica, valores
entre 20 y 40 nm. Es
necesario, por tanto,
cortar el material
que ha de ser
estudiado en "lascas"
muy finas.


La preparación del material
biológico muerto, para su estudio al
microscopio óptico o al electrónico,
consta de cuatro pasos
fundamentales.
 -1ro. La fijación.
 -2do. La inclusión.
 -3ro. El corte.
 -4to. La coloración.

 FIJACIÓN
 Se detiene el

proceso de autolisis


 FIJACION QUIMICA:
 Se utilizan sustancias como el
formol que actúan sobre los
componentes celulares con el
fin de mantener las
estructuras a estudiar lo mas
naturales posibles.
 FIJACION FISICA:
Por calor: aplicamos calor de manera que se produce
la coagulación de las proteínas. No es buena ya que las
células se destruyen.

 Por frío: se congela el tejido con dióxido de carbono o

N liquido. Es mejor que la anterior pero se pueden
formar cristales.
INCLUSIÓN
Para que el material tenga la suficiente fuerza al


cortarse se sustituye el agua que contiene por una

sustancia que le de rigidez y que evite que se
deforme. Estas sustancias son la parafina para la
microscopia óptica y las resinas sinteticas para la
microscopia electrónica.

 INCLUSION EN PARAFINA


 1.- se deshidrata el tejido con la ayuda de

alcoholes.


 2.- Aclaramiento: se sustituye el alcohol por

un liquido intermediario (hidrocarburo
bencenico “silol)
 3.-Impregnación: el tejido se coloca en parafina
liquida(a 60 º C)


 4.-Inclusión: se saca el tejido de la parafina y lo

ponemos en el fondo de un molde metálico y lo
rellenamos de parafina liquida colocándolo a
temperatura ambiente de manera que la
parafina se solidifica quedando el bloque
realizado y preparado para el corte.

CORTE
el corte se realiza equipos especiales, los cuales
presentan una cuchilla que corta "lascas" del
material.
Para microscopía óptica se utilizancuchillas de

acero y el equipo recibe el nombre de

micrótomo

En microscopía electrónica se utilizan


los ultramicrótomos, que emplean

cuchillas de vidrio o diamante.

1.-microscopio
estereoscópico
2.-aparato de
iluminación
3.-muestra
4.-centro de
comando
5.-portaobjetos
6.-manivela
COLORACIÓN
 Los colorantes que
corrientemente se emplean para
la observación de láminas
histológicas, son sales neutras
que presentan radicales ácidos o
básicos, es decir, colorantes
ácidos y básicos.


Una coloración de uso corriente en histología es la
hematoxilina y eosina (H/E) que emplea ambos tipos de
colorantes. Con esta coloración se observa que el núcleo
se tiñe con el colorante básico (azul), y el citoplasma se
colorea con el colorante ácido (rosado).
fibra
colágena de
tejido
conjuntivo
Impregnación
argénica
 En el microscopio electrónico
No se utilizan colorantes, no se
observan colores solo blancos, grises
y negros. Se utilizan sales de metales
pesados para contrastar el tejido.
tejido
Fotografía tomada con microscopio electrónico de los tubos de un
macrofito.