Exercices Dirigs : Enzymologie

2011-2012

QCM


I) Les affirmations suivantes, concernant la spcificit des enzymes sont-elles
vraies?

(1) les enzymes ont une grande spcificit vis--vis de leur substrat.
(2) Lenzyme nest pas modifie par la raction de transformation du substrat
en produit.
(3) Une enzyme augmente la vitesse dune raction dun facteur 10
6
par
rapport la mme raction non-enzymatique.
(4) La prsence de lenzyme change ltat initial et ltat final dune raction
enzymatique.
(5) Le site actif (ou centre actif) dune enzyme est la zone de la protine o se
fixe le substrat
(6) Une enzyme peut avoir plusieurs sites de fixation pour son substrat.
(7) Une enzyme peut tre utilise plusieurs fois pour effectuer la mme
raction.

II) Soit la raction enzymatique simple :


E est lenzyme, S le substrat et P le produit.
Si lon part du principe que la raction catalytique seffectue partir dun seul complexe
ES (complexe de Michaelis), et que dans les premiers instants de la raction : k-2 est
ngligeable, lquilibre k+1/k-1 trs rapide et k+2 ltape limitante.
Dans ces conditions, les affirmations suivantes concernant ltat stationnaire sont-
elles vraies ?

(1) Tant que la concentration en substrat est beaucoup plus importante que celle
de lenzyme (S saturant), tout lenzyme est sous forme ES.
(2) Quand tout lenzyme est complex par le substrat, la vitesse de formation du
produit est constante.
(3) La vitesse de formation du produit est constante jusqu disparition complte
du substrat.
(4) La vitesse de formation du produit est directement proportionnelle la
concentration de lenzyme.
(5) La vitesse de disparition du substrat est indpendante de la concentration en
enzyme.

III) Lorsque [S] = Km, la vitesse de raction enzymatique est peut prt de :

(1) 0,1 Vmax
(2) 0,2 Vmax
(3) 0,3 Vmax
(4) 0,5 Vmax
(5) 0,9 Vmax

IV) Lorsque [S] = 0,1 * Km, la vitesse dune raction chimique catalyse par une
enzyme ayant un comportement Michaelien est peu prt de :

(1) 0,1 * Vmax
(2) 0,3 * Vmax
(3) 0,5 * Vmax
(4) 0,7 * Vmax
(5) 0,9 * Vmax

V) Lorsque [S] = 10 * Km, la vitesse dune raction chimique catalyse par une
enzyme ayant un comportement Michaelien est peu prt de :

(1) 0,1 * Vmax
(2) 0,3 * Vmax
(3) 0,5 * Vmax
(4) 0,7 * Vmax
(5) 0,9 * Vmax

VI) Les affirmations suivantes sont-elles vraies ?
La vitesse dune raction enzymatique :

(1) prsente une relation linaire en fonction de quantits croissantes
denzyme.
(2) prsente une relation hyperbolique en fonction de quantits croissante
denzyme
(3) est maximale la concentration de NaCl 9
(4) est maximale pH = 7
(5) est sensible aux variations de temprature.
(6) est sensible la prsence dautres ligands que le substrat.

VII) Il existe trois modles simple dinhibition enzymatique : linhibition
comptitive, linhibition non-comptitive et linhibition anti-comptitive (ou
incomptitive).

Les affirmations suivantes sont-elles vraies ?
Dans le cas dune inhibition :

(1) comptitive, le substrat et linhibiteur se fixent sparment sur lenzyme
(2) comptitive, cest Km qui varie et v
max
qui reste fixe
(3) non-comptitive, linhibiteur peut se fixer avant le substrat
(4) non-comptitive, cest le Km et la v
max
qui varient
(5) anti-comptitive, linhibiteur peut se fixer avant le substrat.
(6) anti-comptitive, cest Km et v
max
qui varient

VIII) Lequel de ces composs pharmaceutiques, nest pas un inhibiteur
enzymatique ?

(1) Mthotrexate
(2) Pnicilline
(3) Sulfonilamide
(4) Iode
(5) Viagra

EXERCICES

Exercice 1 :

On tudie la constante de Michaelis dune enzyme avec plusieurs substrats de structures
voisines. Les rsultats sont les suivants :

A : 5 x 10
-4
M B : 3 x 10
-3
M C : 3,5 x 10
-4
M D : 6 x 10
-2
M E : 5,5 x 10
-2
M

Pour lequel de ces composes, A, B, C, D et E lenzyme a telle le moins daffinit.

Exercice 2 :

Si une enzyme transforme 25
o
C 100 mol de substrat par minute, on peut admettre
priori, qu 85
o
C, elle en transformera par minutes :

A = 600 B = 300 C = 100 D = 10 E = 0

Exercice 3 :

Une cintique enzymatique peut tre reprsente graphiquement en portant
respectivement Vi en ordonne et Vi/S en abscisse. En utilisant lquation suivante :
Vi = Vmax Vi / S . Km
(dduite de celle de Michaelis et Menten et dont elle emprunte les mmes symboles), on
obtient un graphique du type reprsent ci-dessous pour un substrat en labsence
dinhibiteur.

(1) quel est le paramtre, dsign par son symbole, qui est mesur lintersection de
la droite et de laxe des ordonnes ?
(2) quel est celui mesur lintersection de la droite et de laxe des abscisses ?
(3) La pente de la droite tant le troisime paramtre, citer uniquement celui ou ceux
qui varie (nt) en prsence dun inhibiteur comptitif.
(4) La pente de la droite tant le troisime paramtre, citer uniquement celui ou ceux
qui varie (nt) en prsence dun inhibiteur non-comptitif.

Exercice 4:

Dans la figure reprsente ci-dessous, la droite I reprsente une tude cintique obtenue
avec une certaine concentration denzyme. Laquelle des droites reprsentes sur cette
figure pourrait correspondre la cintique obtenue dans les mmes conditions
exprimentales mais une concentration denzyme deux fois moindre.


Exercice 5:

Le foie du rat contient deux enzymes, lhexokinase (HK) et la glucokinase (GK),
capables de phosphoryler le glucose suivant la raction :
Mg
2+

Glucose + ATP Glucose-6-phosphate + ADP

On mesure la vitesse initiale (V1 pour HK, V2 pour la GK et V reprsente lactivit
phosphorylante totale) en fonction de la concentration en glucose, la concentration en
ATP tant maintenue constante. Les rsultats, exprims en UI par g de foie, sont reports
dans le tableau ci-dessous.

(1) Dduire de ce tableau les constantes cintiques Km et Vmax des deux enzymes
(2) Sachant que la concentration intracellulaire hpatique de glucose est de 5 mM,
calculer en pourcentage de Vmax, les vitesses initiales des ractions catalyses
par les deux enzymes.
(3) Indiquer laquelle de ces deux enzymes est susceptible dintervenir efficacement
en cas dlvation de la concentration en glucose au del de 5 mM. Justifier votre
rponse.
(4) On mesure lactivit phosphorylante totale V en prsence de glucose-6-phosphate
(G-6-P) la concentration de 5 mM. On obtient les rsultats suivants :
- pour [glucose] = 0,5 mM, V = 0,03 UI/g
- pour [glucose] = 150 mM, V = 1,00 UI/g
Quen dduisez vous ?
(5) La cintique de lHK en absence ou en prsence de G-6-P donne les rsultats
suivants en reprsentation de Lineweaver-Burk :


Quen dduisez vous ?

Glucose (mM) 0,05 0,1 0,5 1 5 10 15 150 500 1500
V1 (HK) 0,10 0,15 0,23 0,29 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30
V2 (GK) 0,01 0,01 0,03 0,06 0,25 0,50 0,60 1,00 1,00 1,00
V = V1 + V2 0,11 0,16 0,26 0,35 0,55 0,80 0,90 1,30 1,30 1,30
Exercice 6:

On tudie lactivit de la -galactosidase sur orthonitrophnyl--D-galactopyranoside
(ONPG). Le protocole opratoire est le suivant :
Dans un tube on introduit :

1 ml de solution dONPG 2 mmol/l
1 ml de solution tampon pH = 7
mettre au bain marie 37oC pendant 5 minutes
ajouter 1 ml de prparation enzymatique 1 mg/ml
mettre au bain marie 37oC pendant 10 minutes
ajouter 1 ml de NaOH 1 M (afin de stopper la raction)

On mesure alors la vitesse de la raction enzymatique, et le rsultat est de 0,091 mol
dONPG transform par minute et par ml denzyme.

A- Parmi les propositions de rponse concernant les affirmations suivantes, indiquer
laquelle est vraie.

1- Le temps t pendant lequel sest droul la raction enzymatique est de 10
minutes.
2- La mme raction enzymatique, ralise dans des conditions identiques mais
temprature de 80oC, prsente une vitesse proche du double.
3- La mme raction enzymatique, ralise dans des conditions identiques mais
avec une concentration double denzyme (soit 2 mg/ml) prsente une vitesse
moiti moindre.
4- La vitesse mesure au terme de la raction correspond la vitesse initiale.
5- Au terme de la raction, la quantit dONPG transforme est 0,91 mol/ml
denzyme.

Propositions de rponse :

a) 1 + 2 + 3
b) 2 + 3 + 5
c) 1 + 4 + 5
d) 1 + 3 + 5
e) aucune de ces propositions nest exacte.

B- On recommence lexprience mais en utilisant des solutions dONPG de
concentrations variables. Les vitesses de ractions pour chaque concentration
figurent dans le tableau ci-dessous :

[ONPG]
mmol/l
0,25 0,5 0,75 1 2 5 10 15 20
Vi
mol/min/ml
0,027 0,045 0,070 0,083 0,091 0,11 0,14 0,14 0,14

Dterminer daprs ce tableau et sans construire de courbe, la vitesse initiale
maximale (Vmax) de la raction enzymatique exprime en UI/l, ainsi que la constante
de Michaelis (Km) en mol/l.

C- On ralise la mme exprience quen B mais en prsence dun compos inhibiteur
I. les vitesses de raction obtenues en prsence de I figurent dans le tableau ci-
dessous :

[ONPG]
mmol/l
0,25 0,5 0,75 1 2 5 10 15 20
Vi
mol/min/ml
0,012 0,033 0,060 0,071 0,080 0,095 0,12 0,12 0,12

(1) Dterminer daprs ce tableau et sans construire de courbe, la vitesse initiale
maximale (Vmax) de la raction enzymatique exprime en UI/l, ainsi que la
constatnte de Michaelis (Km) en mol/l, en prsence de I.
(2) En dduire la nature de linhibiteur I.
(3) Calculer le pourcentage dinhibition lorsque la concentration en ONPG est 2
mmol/l.


Exercice 7:

La phosphatase alcaline (PAL) hydrolyse les monoesters de lacide phosphorique. Le
substrat utilis pour cette tude cintique est le paranitrophnyl phosphate de sodium
(PNPP). Le produit de la raction, le paranitrophnol (PNP), est jaune en milieu alcalin et
prsente un maximum dabsorption 410 nm, ce qui permet un dosage
spectrophotomtrique. La raction est effectue pH 10 selon le schma suivant :

La vitesse initiale de la raction a t mesure pour des concentrations variables en
substrat en prsence et en labsence de -glycrophosphate. Les rsultats exprimentaux
sont donns dans le tableau ci-dessous (les vitesses initiales sont donnes en units
arbitraires)


Concentration du substrat
(mol/l)
Vitesse initiale sans
-glycrophosphate
Vitesse initiale en prsence
de b-glycrophsphate la
concentration de 2.10
-3
M
1.10
-4
83.10
-5
51.10
-5

2.10
-4
132.10
-5
88.10
-5

5.10
-4
200.10
-5
154.10
-5


(1) a partir des valeurs exprimentales ci-dessus, tracer, pour lenzyme
tudie la courbe 1/V = f (1/[S]) en absence de -glycrophosphate.
Dterminer les valeurs de Km et Vmax.
(2) Tracer sur le mme graphique que prcdemment la courbe 1/V = f (1/[S])
en prsence de -glycrophosphate. En dduire comment le -
glycrophosphate se comporte vis--vis du PNPP.

Exercice 8:

Une enzyme (Km = 2.10-4 M) est essaye en prsence de son substrat la concentration
2.10-4 M et dun inhibiteur comptitif la concentration de :
2,5. 10-3 M (Ki = 2,5.10-3)
(1) la Vmax(sans inhibiteur) est de 55 M/min. Calculer Vi, vitesse initiale de la raction
en prsence de linhibiteur.
(2) calculer Vo, vitesse initiale de la raction en absence dinhibiteur. En dduire le
pourcentage dinhibition.