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Srodiagnostic d'infection streptococcique par la

recherche d'anticorps anti-streptolysine O


(ASLO)





Elabor par : YASMERO





2O14










Plan de travail
Introduction
I. Dfinition
II. La biopathologie
III. Action de la streptolysine sur les hmaties
IV. Indication du dosage
V. Recommandations pranalytiques
VI. Techniques didentification
VII. Interprtation des rsultats
VIII. Variations pathologiques
Conclusion








I. Introduction :
1


Lors d'une infection, les bactries produisent, suivant leur capacit propre, diverses enzymes
renforant leur pouvoir pathogne. Staphylococcus aureus est probablement le germe le plus
richement dot. Toute fois ce streptocoque bta hmolytique du groupe A (SBHA) est un Cocci Gram
positif responsable de 10 40% des angines dorigine bactrienne,

II. Dfinition :
2


Les anticorps anti-enzymes streptococciques sont des anticorps dirigs contre les enzymes des
streptocoques hmolytiques des groupes A, C et G appartenant la classification de Lancefield. Ils
sont au nombre de 4 : ce sont les anticorps anti-streptolysine O (ASLO), les anticorps anti-
streptodornase B (ASD), les anti-streptokinase (ASK) et les anti-streptohyaluronidase (ASH). Dans notre
rapport nous nous intressons aux anticorps anti-streptolysine O.


III.
La biopathologie :
2


Les enzymes streptococciques sont des hmolysines ou autres produits extracellulaires scrts par
Streptococcus pyogenes (groupe A), responsables de la trs grande majorit des angines bactriennes,
mais aussi par les streptocoques des groupes C et G.

La streptolysine O est une toxine cytolytique ou une hmolysine labile en prsence doxygne,
scrte par de nombreuses souches de streptocoques du groupe A. Elle est trs immunogne,
permettant ainsi le dosage des anticorps quelle induit : les ASLO. Elle est capable de dtruire la
membrane du globule rouge ainsi que celle des polynuclaires et des plaquettes.











1
S. Ralandison, African Index Medicus, 2013
2
PRCIS DE BIOPATHOLOGIE ANALYSES MDICALES SPCIALISES ; AC ANTI-ENZYMES STREPTOCOCCIQUES,
Biomnis, 2012


IV. Action de la streptolysine sur les hmaties
GLOBULE ROUGE
Steptolysine O
1 2
1
3
2
1
4
2
1
5
4
6
6
7
6


V. Indication du dosage :
2

Diagnostics des affections post-streptococciques non suppuratives dues au streptocoque du groupe A,
la streptolysine O resposable du rhumatisme articulaire aigu ou RAA,

Ces affections sont issues dun processus immunologique li lexistence dune communaut
antignique entre des tissus de lorganisme et certains constituants des streptocoques du groupe A. La
bactrie nest jamais retrouve au niveau des lsions inflammatoires induites distance de linfection
streptococcique. Les symptmes cliniques ont en commun de se dclarer une plusieurs semaines
aprs linfection de dpart.

Rhumatisme Articulaire Aigu (RAA) :

Cest une complication rare, qui survient deux trois semaines aprs une angine streptococcique
Streptocoques du groupe A, non ou mal traite. Le risque de faire un RAA la suite dune angine est
de lordre de 1 3 % ; il concerne plutt les enfants entre 4 et 15 ans, issus de milieux dfavoriss, et
les sujets ayant dj fait un RAA. Elle est encore frquente dans les pays dAfrique du Nord et dans les
DOM-TOM.

- La maladie de Bouillaud ou forme clinique classique du RAA associe des manifestations
articulaires (grosses articulations) et cardiaques (dautant plus frquentes que le sujet est
jeune). Il semble que limmunit mdiation cellulaire (lymphocytes T cytotoxiques) joue un
rle majeur dans la pathognie des troubles cardiaques. Les arthrites seraient dues la
formation de dpts de complexes immuns circulants au niveau de la synoviale.

- La Chore aigu de Sydenham est une autre forme clinique isole de RAA, qui survient
tardivement, 1 6 mois aprs une pharyngite post-streptococcique et plus particulirement
chez les filles entre 5 et 15 ans. Elle est marque par un dbut progressif et insidieux avec
modification de lhumeur et hypotonie musculaire, suivie par de lataxie et des mouvements
choriques anormaux intenses et frquents. Elle volue spontanment vers la gurison avec
des rechutes possibles long terme.

- Les manifestations post-streptococciques actuelles sont souvent incompltes : il peut sagir
dune simple monoarthrite ou dune oligo-arthrite trs inflammatoire et douloureuse ou
encore de troubles isols du rythme cardiaque.

VI. Recommandations pranalytiques :

Le prlvement : Sang prlev sur tube sec. Srum non hmolys, non hyperlipmique et non
ictrique.

Les questions poser au patient :
- le patient a-t-il fait une infection streptocoques A prcdemment ? Si oui : date ?
- Nature des manifestations cliniques ?
- ge ?
- Sujet risque ?

Conservation et transport : Srum conserv + 4 C puis congel 20 C pendant 1 an.



VII. Techniques didentification
3


a. Principe de la dtection des anticorps anti-streptolysine O (ASLO)
Le principe repose sur la capacit des ASLO inhiber l'action de la SLO : c'est une raction de
neutralisation (de la SLO par les ASLO). Finalement la prsence d'ASLO sera prouve par l'inactivit de
la streptolysine O alors que l'absence d'ASLO sera montre par l'activit de la SLO.
- La neutralisation : Dans un premier temps, le srum dcomplment du patient est mis en
contact avec une prparation frachement prpare de SLO (car elle s'inactive rapidement au
contact de l'oxygne).

- La rvlation : Dans un deuxime temps, et car les immuns complexes ne sont pas visibles
directement, des hmaties sont rajoutes pour rvler l'activit ou au contraire l'inhibition de
la SLO.

Le milieu o la raction se droule devient rouge limpide. Celle-ci se fait dans les puits 1 8 dune
galerie contenant la streptolysine en quantit croissante, permettant ainsi une quantification des
anticorps sriques. Le titre correspond au dernier puits de la galerie ne prsentant pas de lyse.

























3
Jacques Labescat, Guide des examens complmentaires, 2008


LE PRINCIPE DE LASLO - LA NEUTRALISATION
Lorsque le srum contient des ASLO, ils
forment des immuns complexes en
s'associant la SLO, la rendant ainsi
inactive.
Lorsque le srum ne contient pas d'ASLO,
la SLO reste libre et active

















LE PRINCIPE DE LASLO - LA REVELATION
Si des immuns complexes ont t
forms, la streptolysine est
inactive. Les hmaties baignant
dans un tampon ASO isotonique
restent intactes. Elles sdiment
alors lentement au fond du tube
laissant le surnageant limpide.
Si aucun immun complexe n'a t
form, par absence d'ASLO, la
streptolysine est active. Les
globules rouges sont alors
hmolyss par la streptolysine O.
L'hmoglobine est libre et
envahit le milieu lui donnant une
couleur rouge uniforme.


b. Elments de la raction :

Srum frais ou conserv -20
Ractifs et contrles prts lemploi


Les srums tester :
















Les ractifs :






















Cest un srum de cheval additionn dazide de
sodium (inhibiteur des bactries Gram ngatif) qui
favorise sa conservation.
Il contient des ASLO un titre connu : 4OO
units/Ml
On y recherche les ASLO, capables de
neutraliser lactivit hhmolytique de
la streptolysine


Srums des
patients
Srums de
control positif
SLO
(Ractif 1)
Rducteur
(Ractif 2)
Il constitue lantigne capable
dhmolyser les Globules Rouge de
lapin



Il vite loxydation donc linactivation de la SLO
Tampon
phosphate-
NaCl ph 6,6
(Ractif 3)
GRL (hmaties
de lapin)

Il permet la ralisation du rducteur,
puis le mlange sert diluer les srums
titrer.
Son Ph et sa composition favorisent la
raction Ag-Ac et lactivit de la SLO




Elles constituent la cible spcifique de la SLO



c. Matriel:

Support de barrette
Centrifugeuse
Micropipettes rglables (5-50L)
Couvercles de microplaques adapts aux supports
Embouts correspondants
Portoir pour tubes hmolyse
Etuve ou bain thermostat 37C
Container de dchets contamins
Eau de Javel


Le support de barrette


d. Mode opratoire : (Selon ASL-Kit de bioMrieux) (biomrieux)
Diluer les srums tester au 1/100
me
dans le mlange tampon-rducteur : 10L de srum+
990 L de ractif
Prvoir le nombre de barrettes ncessaires et les placer sur un support
Pour chaque srum, rpartir 75 L de dilution dans chacun des 8 puits dune barrette partir
du repre rouge ASL
Agiter le support 1 min, par tapotement latral, pour dissoudre la streptolysine
Incuber 15 min temprature ambiante (18-25C)
Distribuer 75 L de suspension 2% de GRL dans chaque puits des diffrentes barrettes
Agiter doucement le support pour homogniser
Recouvrir pour viter la dessiccation, puis incuber:
o Soit 1h15 1h30 temprature ambiante
o Soit 45 min temprature ambiante, puis centrifuger 2 min 2000 tr/min
Effectuer la lecture.
e. La lecture :
Sortir chaque barrette du support et observer latralement pour noter la prsence ou labsence
dhmolyse dans chacun des puits.









VIII. Interprtation des rsultats :
4

Le rsultat du patient ne peut tre valid que si le rsultat du tmoin srum est correct.
o Discussion du tmoin srum (puits N8)
Composition : GR de lapin + srum dilu (absence de SLO)
Il vrifie la qualit de la suspension de GRL et le comportement du srum vis--vis des GRL, en
labsence de SLO.
Rsultat correct attendu : absence dhmolyse. Les rsultats des autres puits peuvent alors
tre interprts.
En cas de rsultat anormal : il y a hmolyse. Cela peut correspondre deux ventualits :
o Lanomalie ne concerne quune ou quelques barrettes de la srie : cela signifie que le
srum correspondant au tmoin anormal contient des substances provoquant
lhmolyse des GRL. Tous les puits de la barrette prsentent une hmolyse et le
rsultat obtenu pour ce srum nest pas valide.
o Lanomalie concerne toutes les barrettes de la srie et tous les puits : cela signifie que
les GRL sont hmolyss spontanment, donc non utilisables. Les rsultats obtenus
avec le srum de contrle et les srums des patients ne sont pas valides. Il faut
recommencer toute la srie avec une autre suspension de GR.
o Dtermination du titre des srums
A partir du repre "ASL" indiqu sur la barrette, noter le dernier puits de GR entirement sdiments
donc non hmolyss : il correspond la plus grande quantit de SLO pouvant tre neutralise par les
Ac contenus dans le srum dilu. Dans ce puits, le nombre dU.ASLO est nombre dU.SLO.

4
Biomrieux
La lecture
- Surnageant incolore
- Colut rouge de GR intacts
= hmolyse nulle (HN)
SLO totalement neutralise
(=intacte)
nbre U.ASLO nbre U.SLO
- Surnageant ros, limpide
- Petit culot rouge de GR
intacts
= Hmolyse partielle -HP)
SLO partiellement
neutralise (partiellement
active)
nbre U.ASLO < nbre U.SLO
- Surnageant ros, limpide
- Absence de culot
= Hmolyse totale (HT)
SLO non neutralise
(=active) nbre U.ASLO = 0 ou
nbre U.ASLO << nbre U.SLO


Le tableau ci-dessous donne la correspondance entre le numro du puits ( partir du repre "ASL"
indiqu sur la barrette) et le titre du srum en U.ASLO/mL.
N du puits 1 2 3 4 5 6 7 8
Titre en U.ASLO/mL
ou nature du tmoin
1OO 2OO 3OO 4OO 6OO 8OO 12OO T srum

Interprtation :

En fonction du contexte clinique, en cas de rsultat ngatif ou douteux la fois pour les ASD et les
ASLO, on peut tre amen vrifier la srologie sur un second prlvement environ 15 jours plus
tard.


IX. Variations pathologiques
5


Les ASLO apparaissent environ 10 jours aprs le dbut dune infection aigu, slvent pour atteindre
leur maximum entre la 3e et 4e semaine puis diminuent pour revenir la normale entre 3 et 6 mois.
Une rinfection entrane une nouvelle lvation des ASLO selon une cintique acclre. Leur dosage
est donc utile au diagnostic des complications post-infectieuses des streptococcies pharynges. En
revanche, leur augmentation est faible voire nulle aprs une infection cutane, car la streptolysine O
est inactive par le cholestrol de la peau.
Les seuils pathologiques danticorps sont variables en fonction des kits, des fabricants et des units
proposes : un titre > ou gal 200 UI/ml chez ladulte est considr comme positif. Il existe des faux

5
Marchou B., Gandois J.M., Bonnet E., Infections Streptocoques. Encycl Med Chir, Elsevier Paris
l'interprtation
srodiagnostic positif
si titre 2OO
U.ASLO/mL
Srodiagnostice ngatif
si titre < 2OO
U.ASLO/mL
Srodiagnostic douteux
si titre = 2OO
U.ASLO/mL


positifs lis des ractions croises avec les streptocoques des groupes C et G, mais aussi dans un
certain nombre de circonstances pathologiques : mylomes, lupus, rhumatismes inflammatoires
comme la polyarthrite rhumatode, certaines atteintes hpatiques avec cholestase, syndromes
nphrotiques et quelques hyperlipoprotinmies.

Le sujet sain possde un taux danticorps qui varie selon certains facteurs tels que lge ou la saison.
Par ailleurs, 20 30 % des sujets ayant fait une infection streptocoques A ne produisent pas dASLO.


X. Conclusion :

Linterprtation du taux de lASLO doit tre prudente et doit tenir compte de diffrents paramtres
autres quune infection streptococcique. Llvation du taux dASLO doit tre toujours associe aux
autres critres cliniques et/ou biologiques.

Une mauvaise interprtation de lASLO est lourde de consquence car par exemple le diagnostic dun
RAA impose une conduite tenir rigoureuse, en particulier du point de vue cardiologique