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Gentica Bsica

So Cristvo/SE
2011
Bruno Lassmar Bueno Valadares
Edilson Divino de Araujo
Silmara de Moraes Pantaleo
Projeto Grco e Capa
Hermeson Alves de Menezes
Diagramao
Nycolas Menezes Melo
Ilustrao
Bruno Lassmar Bueno Valadares
Edilson Divino de Araujo
Silmara de Moraes Pantaleo
Elaborao de Contedo
Bruno Lassmar Bueno Valadares
Edilson Divino de Araujo
Silmara de Moraes Pantaleo
V136g Valadares, Bruno Lassmar Bueno.
Gentica Bsica/ Bruno Lassmar Bueno Valadares,
Edilson Divino de Arajo, Silmara de Moraes Pantaleo.
- So Cristvo: Universidade Federal de Sergipe,
CESAD, 2011.

1. Gentica. 2. Hereditariedade. 3. Gentica de
populaes. I. Arajo, Edilson Divino de. II. Pantaleo,
Silmara de Moraes. III. Ttulo.
CDU 575
Copyright 2011, Universidade Federal de Sergipe / CESAD.
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Gentica Bsica
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NCLEO DE MATERIAL DIDTICO
Hermeson Menezes (Coordenador)
Marcio Roberto de Oliveira Mendona
Neverton Correia da Silva
Nycolas Menezes Melo
AULA 1
Bases cromossmicas da hereditariedade ............................................07
AULA 2
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel .. .......17
AULA 3
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos ............................... 33
AULA 4
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual ... 51
AULA 5
Estrutura dos cidos nucleicos . ........................................................ 65
AULA 6
Replicao do DNA e transcrio ...................................................................79
AULA 7
Cdigo gentico e traduo..............................................................113
AULA 8
Mutao e reparo do DNA.... ........................................................... 133
AULA 9
Regulao da expresso gnica ...... .............................................. 151
AULA 10
Princpios de Gentica de Populaes............................................ 167
Sumrio
BASES CROMOSSMICAS DA
HEREDITARIEDADE
META
Demonstrar a estruturao cromossmica e a organizao do material gentico durante o ciclo celular.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
conhecer a constituio do material de preenchimento do ncleo celular, a forma como a cromatina
se organiza durante a interfase e o processo de compactao do DNA e o comportamento dos
cromossomos durante as divises mitticas e meiticas.
PR-REQUISITO
Biologia celular.
Aula
1
8
Gentica Bsica
INTRODUO
Nesta aula iniciaremos o estudo da gentica com as bases cromossmi-
cas da hereditariedade. Vamos discutir como os cromossomos so consti-
tudos e sua relao com a molcula de DNA e os genes. Os conceitos aqui
estudados sero importantes para os contedos seguintes de hereditariedade.
CROMATINA
O ncleo das clulas preenchido por material gentico (DNA) as-
sociado a protenas responsveis pela compactao e organizao dos cro-
mossomos, e RNA produzido na atividade de expresso dos genes. Esse
material que preenche o ncleo denominado cromatina.
As molculas de DNA (que sero estudadas mais detalhadamente na
aula de estrutura dos cidos nuclicos) constituem, cada uma, um cromos-
somo da clula. Os cromossomos so visualizados apenas durante o perodo
de diviso celular. Durante a interfase, o DNA se encontra disperso no
ncleo, no sendo possvel individualizar os cromossomos.
A cromatina apresenta diferentes nveis de compactao, dependente da
atividade gentica da regio do DNA. Regies com maior atividade (sntese
de RNA para traduo de protenas) encontram-se mais dispersas e, por
esse motivo, menos coradas nas observaes microscpicas. Essas regies
recebem o nome de eucromatina. As regies de menor atividade encontram-
se mais compactadas, e por isso, tambm mais coradas, recebendo o nome
de heterocromatina. Essas diferenas de compactao devido atividade
de expresso gentica podem ser visualizadas na Figura 1.
Figura 1. Eletromicrograa destacando ncleo celular interfsico com regies mais coradas de
heterocromatina e menos coradas, com eucromatina (Fonte: adaptado de: http://www.biologia.
edu.ar/cel_euca/images/01541a.jpg).
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Bases cromossmicas da hereditariedade
Aula
1
Algumas regies da heterocromatina permanecem sempre compactadas
e sem atividade gentica. Essas regies recebem o nome de heterocromatina
constitutiva. Outras regies podem ser encontradas tanto sem atividade
como em atividade de expresso gnica, recebendo o nome de heterocro-
matina facultativa.
Genes localizados nas regies de eucromatina so responsveis por
codicar protenas importantes em todo o ciclo de vida da clula, como
exemplo, as enzimas envolvidas no metabolismo energtico. Na hetero-
cromatina constitutiva no encontramos genes em expresso. Esse mate-
rial gentico est relacionado histria evolutiva do organismo e ainda
fonte de inspirao para muitas pesquisas. As regies de heterocromatina
facultativa apresentam genes responsveis por diferenciar uma clula da
outra. Todas as clulas apresentam os mesmos genes, mas diferem pelos
genes que se encontram em expresso e os que se encontram inativados.
Na Figura 2 temos o exemplo de clulas do tecido conjuntivo responsveis
pela sntese de colgeno. Quando esto em atividade so denominadas
broblastos e apresentam ncleos grandes e pouco compactados (devido
a alta atividade gentica). Quando no esto mais em atividade, estas clu-
las so denominadas brcitos e apresentam ncleo menor e mais denso
(pouca atividade de sntese).
Figura 2. Fibroblastos (A) e bcitos (B) (Fonte: http://ht.org.ar/histologia/NUEVAS%20UNI-
DADES/unidades/unidad3/imagenes/hetm1.jpg).
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Gentica Bsica
COMPACTAO DO DNA
Durante a diviso celular, a cromatina que preenche o ncleo reduz
sua atividade de sntese e sofre um processo intensicado de compactao.
A compactao do DNA e individualizao dos cromossomos serve para
organizar o material gentico, facilitando a segregao na diviso da clula.
A compactao tem incio com o enovelamento do DNA em uma estrutura
composta por 8 protenas, um octmero de histonas (H2A, H2B, H3 e H4, cada
uma em dose dupla). O DNA d duas voltas em torno do octmero e, por fora,
acoplada a histona H1 (Figura 3). A esse complexo dado o nome de nucleossomo.
Figura 3. Representao de um nucleossomo, composto pelo octmero de histonas, DNA em duas
voltas e a histona H1 (Fonte: http://scienceblogs.com/transcript/upload/2006/08/nucleosome.gif).
A histona H1 tem um papel importante na compactao do DNA, ela
responsvel por xar o DNA ao octmero de histonas e ainda, de aproximar
um nucleossomo do nucleossomo seguinte. Esta aproximao faz com que
o DNA adquira agora a forma de um solenide (aspiral) (Figura 4).
Figura 4. Aproximao dos nucleossomos pela histona H1 formando o solenide (Fonte: http://3.
bp.blogspot.com/).
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Bases cromossmicas da hereditariedade
Aula
1
Alguns pontos do solenide vo se associar a protenas no histnicas,
formando um lamento em espiral com alas do solenide presas ao
mesmo. Essa estrutura de protenas no histnicas vo formar uma es-
queleto que determina a estrutura do cromossomo. A eletromicrograa
de um cromossomo na Figura 5 mostra sua superfcie irregular devido
presena dessas alas.
Figura 5. Eletromicrograa de cromossomo. Observar as alas em sua superfcie irregular (Fonte:
www.biomania.com.br/bio/Imagens/50122/Fig01.GIF).
ESTRUTURA DO CROMOSSOMO
A visualizao dos cromossomos ocorre no perodo de diviso celular.
Nesta faze o cromossomo visualizado com cromtides duplicadas, pois, j
ocorreu a duplicao do DNA durante a fase S da interfase. As cromtides
de um mesmo cromossomo so chamadas cromtides irms.
As duas cromtides so unidas por um ponto de constrio primria,
denominado centrmero. O centrmero tem um papel importante na
diviso celular, pois, nessa regio onde se encontra uma estrutura de pro-
tenas denominada cinetcoro, onde se ligam as bras do fuso. Pores de
cromossomos sem centrmero, originadas a partir de quebras, se perdem
durante a diviso celular por no sofrerem direcionamento.
O centrmero divide cada cromtide em brao curto (p) e brao longo
(q). Ainda podemos encontrar em alguns cromossomos regies de con-
strio secundria. Estas regies apresentam genes que sintetizam RNA
ribossomal (que ser estudado na aula de transcrio e traduo) e que, no
ncleo interfsico, correspondem regio organizadora do nuclolo. As
pores terminais, aps a constrio secundria, so denominadas de satlite.
As extremidades de cada cromtide tambm so muito importantes
para o cromossomo, pois tambm esto relacionadas manuteno de sua
estabilidade. Estas, recebem o nome de telmeros. A Figura 6 apresenta
esquematicamente essas estruturas citadas.
12
Gentica Bsica
Figura 6. Estrutura cromossmica (http://www.mundovestibular.com.br/materias/biologia/
citogenetica02.jpg).
DIVISO CELULAR
Existem dois tipos de diviso celular que, conseqentemente, originam
cada um, um tipo de clula. A mitose o tipo de diviso que origina as
clulas somticas que compem o corpo de um organismo, mantendo suas
caractersticas genticas como o mesmo nmero de cromossomos (2n) da
clula me para as clulas lhas; e a meiose, por sua vez, origina as clulas
reprodutivas com metade do nmero de cromossomos da clula me (n).
MITOSE
A mitose tem grande importncia para os seres vivos por possibilitar
a multiplicao celular que leva ao crescimento, reposio de clulas perdi-
das e tambm na reproduo assexuada de alguns organismos. A mitose
subdividida nas seguintes fases:
Prfase condensao dos cromossomos de forma que os mesmos
possam ser Individualizados. Formao das bras do fuso mittico e de-
saparecimento da membrana nuclear (carioteca).
Prometfase Organizao dos cromossomos entre as brilas do fuso
mittico e acentuao da compactao da cromatina.
Metfase Maior grau de condensao dos cromossomos e disposio
destes na placa equatorial da clula devido trao das bras do fuso.
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Bases cromossmicas da hereditariedade
Aula
1 Anfase Separao das cromtides e migrao dos cromossomos
para os plos da clula.
Telfase Descondensao da cromatina e reconstituio dos ncleos.
Citocinese Diviso do citoplasma e separao das clulas lhas.
As fases da mitose poder ser visualizadas na Figura 7.
Figura 7. Representao do ciclo mittico (http://www.virtual.epm.br/cursos/biomol/ciclo/gif/
ciclo.gif).
MEIOSE
Importante na formao dos gametas para os organismos que se repro-
duzem sexuadamente, assim, mantendo a quantidade de material gentico
na fuso dos gametas e possibilitando diversidade entre os organismos. Este
processo se constitui por duas etapas de diviso celular:
1 Diviso Meitica - Uma clula com 2n cromossomos (diplide)
origina duas clulas com n cromossomos, devido separao dos cromos-
somos homlogos.
Prfase I:
Leptteno: incio da condensao da cromatina.
Zigteno: maior grau de condensao, possibilitando individualizar os
cromossomos com o incio de aproximao dos homlogos.
Paquteno: cromossomos homlogos pareados, formando as ttrades.
Diplteno: visualizao dos quiasmas onde ocorre a recombinao de
partes das cromtides homlogas.
Diacinese: desaparecimento da membrana nuclear (carioteca) e dis-
posio dos cromossomos entre as brilas do fuso mittico.
14
Gentica Bsica
Metfase I:
Organizao dos cromossomos na placa equatorial onde os homlogos
se encontram, desta vez, pareados.
Anfase I:
Separao dos cromossomos homlogos que migram para os plos
da clula orientados pelos centrolos.
Telfase I:
Reorganizao do ncleo nos plos e diviso do citoplasma.
2 Diviso Meitica - Das duas clulas-lhas haplides resultaro 4
clulas tambm haplides por separao, agora, das cromtides irms.
Prfase II:
Corresponde ao nal da telfase I com o desaparecimento da mem-
brana nuclear.
Metfase II:
Posicionamento dos cromossomos na regio equatorial da clula.
Anfase II:
Separao das cromtides irms e migrao para os plos da clula.
Telfase II:
Reconstituio dos ncleos e diviso citoplasmtica (citocinese), com
a formao de 4 clulas lhas haplides e geneticamente diferentes entre
si devido recombinao de partes dos cromossomos homlogos ocor-
ridas na prfase I.
As fases da meiose esto representadas resumidamente na Figura 8.
Figura 8. Representao das fases da meiose (Fonte: http://4.bp.blogspot.com/).
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Bases cromossmicas da hereditariedade
Aula
1
RECOMBINAO GNICA
A recombinao gentica que ocorre durante a Prfase I da meiose tem
um importante papel evolutivo e adaptativo para as espcies. A recombina-
o durante a formao de gametas possibilita uma maior diversidade de
arranjos allicos. Alguns livros didticos ainda denominam a recombinao
meitica como crossing over (Figura 9). A recombinao meitica ser
estudada novamente na aula de ligao gnica e mapeamento cromossmico.
Figura 9. Recombinao gentica entre cromtides de cromossomos homlogos, promovendo diver-
sidade na formao de gametas (Fonte: http://www.accessexcellence.org/AB/GG/crossing.php).
CONCLUSO
Nesta aula importante ressaltar a idia da constituio cromossmica
e como ocorre a compactao do DNA para sua formao. Compare o que
ocorre na mitose e na meiose, veja as diferenas entre as clulas formadas
em cada um desses tipos de diviso celular.
O entendimento da hereditariedade estudada nas prximas aulas ser
mais fcil com uma boa compreenso dos conceitos aqui abordados.
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Gentica Bsica
RESUMO
Os cromossomos so resultado da compactao do DNA. Durante a
interfase, a cromatina se encontra dispersa preenchendo o ncleo da clula de
eucariontes. Durante a diviso celular, a cromatina sofre a compactao, o que
torna possvel a individualizao dos cromossomos. Na diviso mittica, o numero
cromossmico e as caractersticas genticas da clula so mantidas, enquanto na
meiose, ocorre a reduo do nmero de cromossomos para formao de gametas.
ATIVIDADES
1. Explique as etapas da compactao do DNA e relacione aos elementos
envolvidos na mesma:
2. Compare a diviso celular meitica e mittica quando ao resultado cro-
mossmico nas cluas lhas:
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo.
1. Denir eucromatina, heterocromatina constitutiva e heterocromatina
facultativa?
2. Descrever a morfologia dos cromossomos?
3. Explicar o processo de compactao do DNA?
4. Descrever as fases da mitose?
5. Descrever as fases da meiose?
6. Explicar a importncia da recombinao meitica?
PRXIMA AULA
Na prxima aula iremos falar sobre princpios bsicos da hereditar-
iedade propostos por Mendel e as variaes de mecanismos de herana.
.
REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
LEIS BSICAS DA HEREDITARIEDADE
E EXTENSES DAS LEIS DE MENDEL
META
Explicitar os princpios bsicos da hereditariedade propostos por Mendel e as variaes de
mecanismos de herana.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
compreender os princpios da segregao de alelos (1 lei) e segregao independente (2 lei);
compreender a relao de dominncia e recessividade entre alelos; denir conceitos de homozigose e
heterozigose, gentipo, fentipo e sua relao com o ambiente; interpretar as propores genotpicas
e fenotpicas de descendentes obtidos em um cruzamento; aplicar as regras de proporo e
probabilidade nos cruzamentos; conhecer um cruzamento teste; compreender casos de ausncia de
dominncia, alelos mltiplos, herana quantitativa, alelos letais e interao gnica.
PR-REQUISITO
Bases cromossmicas da hereditariedade e noes matemticas de proporo e probabilidade.
Aula
2
18
Gentica Bsica
INTRODUO
Nesta aula muitos conceitos de Gentica devero ser observados para
que voc tenha um melhor aproveitamento, como conceitos de genes,
alelos, dominncia, recessividade, gentipo e fentipo. A base desta aula a
realizao de cruzamentos onde sero observados os gentipos e fentipos
dos descendentes. Para tanto, importante que voc tenha compreendido
bem os conceitos de segregao na aula anterior sobre bases cromossmicas
da hereditariedade.
A compreenso dos diferentes mecanismos de herana vai lhe propor-
cionar uma interpretao matemtica da Gentica. Primeiramente impor-
tante compreender os mecanismos propostos por Mendel de segregao
dos alelos na formao dos gametas e a segregao independente de alelos
localizados em cromossomos distintos.
Os cruzamentos descritos por Mendel apresentam uma proporo
fenotpica de descendentes que caracterizam os princpios bsicos da he-
reditariedade. Os demais mecanismos de herana que sero estudados a
seguir (nesta e em outras aulas) podero obedecer a esses princpios, ou,
apresentar variaes nessas propores.
Figura 1. Representao dos cruzamentos realizados por Mendel, observando as propores entre
os fentipos de cor verde ou amarela das sementes.
Assim, vericou a existncia de fatores hereditrios que determinavam
essas caractersticas, sendo que estes fatores existiam aos pares nos organis-
mos, segregando na formao dos gametas. Assim, na fecundao, o novo
organismo recebia um desses fatores vindo de dada um dos parentais.
Entre esses fatores, um deles era dominante sobre o outro, denindo
com isso a dominncia e a recessividade. Mais tarde, esses fatores foram
denominados genes. Observe o esquema do primeiro cruzamento onde
so originadas apenas ervilhas amarelas na Figura 2:
19
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2
Figura 2. Diagrama representando o cruzamento entre ervilhas verdes
puras e ervilhas amarelas puras, resultando em 100% de descendentes
hbridos com fentipo amarelo.
Neste caso, as ervilhas verdes (vv) e amarelas (VV) cruzadas eram puras
e, nos cruzamentos, foram produzidos os hbridos (Vv) que apresentavam
a cor amarela devido a seu fator de hereditariedade ser dominante para
esta caracterstica.
Em seguida, em um auto-cruzamento dos descendentes da primeira
gerao (F1) originou a segunda gerao de descendentes (F2) com ervil-
has amarelas e verdes, respectivamente, na proporo 3:1 (Figura 3). Neste
cruzamento temos a demonstrao dos princpios da primeira lei de Mendel
que postula a segregao dos alelos na formao dos gametas.
Como podemos observar, para a manifestao da caracterstica da cor
verde das ervilhas, necessrio que estejam presentes os dois genes reces-
sivos (vv), enquanto para a caracterstica amarela existem ervilhas puras
(VV) e hbridas (Vv), devido a dominncia do gene para cor amarela. Na
gentica, o indivduo hbrido conhecidos como heterozigotos, e os indi-
vduos puros, homozigoto dominante e homozigoto recessivo.
Em um segundo momento, Mendel observou o comportamento de
duas caractersticas nos cruzamentos (Figura 4). Neste cruzamento so
obtidas as propores 9:3:3:1. A observao de duas caractersticas indepen-
dentes em um mesmo cruzamento demonstra os princpios da segunda lei
de Mendel que prope a segregao independente dos alelos na formao
dos gametas.
20
Gentica Bsica
Figura 4. Cruzamento entre ervilhas amarelas/lisas com ervilhas verde/rugosas.
A constituio gentica de um indivduo denominada gentipo, ou
seja, os genes que ele possui, dominantes ou recessivos, em homozigose
(puros) ou heterozigose (hbridos). Este gentipo produz um resultado
de expresso que denominado fentipo, sendo este, dependente das
condies ambientais e podendo ter sua manifestao alterada pelo ambi-
ente, por exemplo, a cor da pele de um indivduo claro que se torna mais
escura pela exposio ao sol.
Os genes esto localizados nos cromossomos e ocupam posies es-
peccas determinadas lcus. As variaes de um gene so denominadas
alelos e estes ocorrem aos pares nos indivduos, ocupando o mesmo lcus
no par de cromossomos homlogos.
Recordando a diviso celular, os cromossomos homlogos so aqueles que
se separam na formao dos gametas e que, na fecundao, o indivduo recebe
um lote de cada um dos pais que formaro novamente os pares de homlogos.
CRUZAMENTO TESTE
Um individuo que apresenta fentipo dominante para uma deter-
minada caracterstica pode ser tanto um homozigoto recessivo quanto
21
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2
um heterozigoto. Assim, para determinarmos seu gentipo necessrio
realizar o que chamamos de cruzamento teste que consiste em cruzar um
indivduo de fentipo dominante com outro de fentipo recessivo para a
mesma caracterstica.
O indivduo de fentipo recessivo s pode apresentar um gentipo
homozigoto recessivo, portanto, os descendentes deste cruzamento sero
100% com fentipo dominante e gentipos heterozigotos se o indivduo
em questo for um homozigoto dominante. Sendo um heterozigoto, o cru-
zamento resultar 50% de indivduos com fentipo recessivo e 50% com
fentipo dominante (sendo estes, heterozigotos). Observe os exemplos de
diagrama de cruzamentos teste na Figura 5.
Figura 5. Cruzamentos teste.
PROBABILIDADE NOS CRUZAMENTOS
Utilizando os conhecimentos da gentica possvel estimar a proba-
bilidade de um determinado evento acontecer, por exemplo, a freqncia
esperada de indivduos com determinada caracterstica, descendentes de
um dado cruzamento, ou ento, a possibilidade de nascimento de um ou
mais indivduo que apresente uma caracterstica em questo.
No cruzamento entre dois indivduos, ambos heterozigotos, as chances
de nascer um que apresente fentipo com a caracterstica recessiva de
ou 25% (Figura 6).
Figura 6. Propores observadas no cruzamento entre indivduos heterozigotos.
22
Gentica Bsica
DETERMINAO DA PROBABILIDADE DE MAIS
DE UM EVENTO INDEPENDENTE
Regra do ou
Ocorrncia de um ou outro evento: somam-se as fraes
Ex.: No cruzamento entre dois indivduos heterozigotos, qual a proba-
bilidade de gerar um indivduo de fentipo dominante, seja ele homozigoto
ou heterozigoto?
Gentipo homozigoto (AA) =
Gentipo heterozigoto (Aa) = + = + =
As chances de gerar um indivduo de fentipo dominante, seja ele
homozigoto ou heterozigoto, so de .
Regra do e
Ocorrncia de um evento e outro, necessariamente: multiplicam-se as fraes.
Ex.: Considerando o cruzamento de heterozigotos, qual a probabili-
dade de gerar um indivduo de caracterstica recessiva e outro dominante?
Fentipo recessivo (aa) =
Fentipo dominante (AA + Aa) = x = 3/16
As chances de gerar um indivduo com caracterstica dominante e outra
com caracterstica recessiva, so de 3/16.
AUSNCIA DE DOMINNCIA
Dominncia incompleta: um tipo de ausncia de dominncia onde
o indivduo heterozigoto apresenta fentipo intermedirio ao dominante
e ao recessivo.
Ex.: Flor de Mirabilis jalapa (conhecida como boca de leo) (Figura 7).
VV or vermelha
Vv or rsea
vv or branca
Figura 7. Flor boca de leo (Mirabilis jalapa) (Fonte: http://www.theora.com/).
23
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2
Co-dominncia: Outro tipo de ausncia de dominncia. Neste caso, o
indivduo heterozigoto manifesta as duas caractersticas.
Ex.: Pelagem do gado da raa Shorthorn
VV pelagem avermelhada
Vv tipo ruo (pelos brancos e avermelhados)
Vv pelagem branca
Figura 8. Gado da raa Shortorn apresentando a pelagem do tipo ruo (Fonte:
http://www.infoescola.com/pecuaria/gado-shorthorn/).
ALELOS MLTIPLOS
Considera-se alelos mltiplos a ocorrncia de mais de dois alelos para
um mesmo gene.
Ex.: determinao da cor da pelagem de coelhos onde existem 4 alelos
diferentes na espcie, mas, o indivduo possui apenas um par desses alelos
(Figura 9).
Nesta situao, os alelos ainda apresentam uma ordem de dominncia:
C
+
> c
ch
> c
h
> c
Fentipo Gentipo
Aguti
C
+
C
+
, C
+
c
ch
, C
+
c
h
, C
+
c
Chinchila
c
ch
c
ch
, c
ch
c
h
, c
ch
c
Himalaia
c
h
c
h
, c
h
c
Albino Cc
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Gentica Bsica
Figura 9. Coelhos com pelagem aguti, chinchilla, himalaia e albino (Fonte: http://crv.educacao.
mg.gov.br/sistema_crv/index).
GRUPOS SANGUNEOS
Um caso de alelos mltiplos na espcie humana a herana do sistema
ABO, onde existem os genes IA, IB, i. Sendo que entre os alelos IA e IB
tambm existe uma co-dominncia, pois ambos se expressam.
As clulas apresentam mecanismos de identicao em suas membra-
nas por meio dos antgenos que so expressos nas mesmas. Quando uma
clula em um organismo apresenta um antgeno estranho ao mesmo so
produzidos anticorpos de defesa que consideram estes elementos como
um corpo estranho.
Estes alelos IA e IB produzem antgenos que se expressam nas mem-
branas das hemcias, enquanto o alelo i no produz esses antgenos de
membrana.
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Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2
O fator Rh nos grupos sanguneos determinado por um outro gene
localizado em cromossomo diferente e, portanto, independente do lcus
de determinao do fator ABO.
Fentipo Gentipos
Antgeno de
membrana
Anticorpo Doa para Recebe de
A I
A
I
A
, I
A
i A Anti-B A e AB A e O
B I
B
I
B
, I
B
i B Anti-A B e AB B e O
AB I
A
I
B
A e B - AB A, B e O
O Ii - Anti-A e Anti-B A, B e AB O
Fentipo Gentipos
Antgeno de
membrana
Anticorpo Doa para Recebe de
Rh
+
RR, Rr Rh - Rh
+
Rh
+
e Rh
-
Rh
-
RR - Anti-Rh Rh
+
e Rh
-
Rh
-
Heritroblastose fetal: mulheres que apresentam fator Rh quando
casadas com homem Rh+ devem car atentas para essa questo. Tendo
um lho Rh+ ocorre o contato de sangue durante o parto fazendo com
que a mulher inicie a produo de anticorpos anti-Rh. Esses anticorpos so
capazes de atravessar a placenta, e no caso de outra gravidez seguinte com
lho Rh+, este seria espontaneamente abortado por rejeio do corpo da
me. Ciente dessa condio, estas mulheres devem procurar um mdico que
iniciar o tratamento para evitar que ocorra a heritroblastose fetal.
Falso O
Existe um gene que precursor da expresso dos antgenos de mem-
brana do fator ABO. Para que o indivduo expresse esses antgenos
importante que o indivduo tenha gentipo HH ou Hh. Indivduos com
gentipo hh no apresentam antgenos do fator ABO e pertencendo ao
grupo O, mesmo tendo os genes para antgenos A ou B. Este fenmeno
conhecido como efeito Bombaim.
INTERAO GNICA
Existem vrios casos onde os genes se interagem, havendo mais de um
par de alelos determinando uma nica caracterstica. Um exemplo clssico
de interao gnica encontrado na determinao do formato da crista de
galinhas (Figura 10).
26
Gentica Bsica
Fentipo Gentipos
Noz RREE, RrEE, RREe, RrEe
Rosa RRee, Rree
Ervilha rrEE, rrEe
Simples Rree
Figura 10. Diferentes fentipos para cristas de galinhas (Fonte: http://www.iped.com.br/sie/
uploads/18609.jpg).
PLEIOTROPIA
Ao contrrio da interao gnica, alguns alelos so responsveis
por mais de uma caracterstica, ocasionando assim casos de pleiotropia, que
ocorre algumas vezes devido aos genes para estas caractersticas estarem
localizados muito prximos em um mesmo cromossomo, ou ento por
uma caracterstica ser conseqncia da outra, como o caso do albinismo
(indivduos com ausncia de pigmentao na pele) que tambm determina
outras caractersticas como hipersensibilidade luz e maior predisposio
ao cncer de pele (Figura 11).
27
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2
Figura 11. Indivduo albino (Fonte: http://www.cecillethestoryteller.les.wordpress.com).
Outro exemplo clssico de pleiotropia o caso da cebola arroxeada,
que resistente infeco de um fungo, enquanto a cebola branca sus-
cetvel (Figura 12).
Figura 12. Cebolas roxas e brancas (Fonte: http://www.saude.abril.com.br/imagens/0312/20-
trocas-14.jpg).
28
Gentica Bsica
HERANA QUANTITATIVA
Para uma mesma caracterstica existem dois ou mais pares de genes
situados em cromossomos de pares distintos. Cada alelo dominante apre-
senta um efeito aditivo sobre o fentipo.
o tipo de herana observada em caractersticas como a cor da pele
(Figura 13), altura e cor dos olhos. Nesse tipo de herana cada caracter-
stica apresenta mais de dois fentipos. A relao entre alelos e fentipos
expressa pela frmula a seguir:
N de fentipos = N de alelos + 1
Figura 13. Diferena quantitativa na pigmentao da pele (Fonte: http://www.citasimundoevari-
ascaras.blogspot.com).
Negros: AABB.
Mulatos escuros: AABb, AaBB.
Mulatos mdios: AAbb, AaBb, aaBB.
Mulatos claros: Aabb, aaBb.
Brancos: aabb.
Onde temos:
N de classes = 5
N de alelos = 4
Vejamos o exemplo da cor da pele:
29
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2
As propores para cada classe podem ser calculadas construindo-se
o tringulo de pascal.
1
1 1
1 2 1
1 3 3 1
1 4 6 4 1
1 5 10 10 5 1
1 6 15 20 15 6 1
Havendo 5 classes fenotpicas, temos as
seguintes propores:
Negros: 1
Mulatos escuros: 4
Mulatos mdios: 6
Mulatos claros: 4
Brancos: 1
GENES LETAIS
Em alguns casos, determinados gentipos so letais para o indivduo,
alterando a freqncia esperada de descendentes para determinada carac-
terstica.
Ex.: foi detectado em alguns camundongos que no cruzamento entre
indivduos de pelagem preta, 100% dos descendentes eram pretos, enquanto
no cruzamento entre indivduos marrons, sempre encontravam em torno
de 33% de indivduos pretos, nunca havendo uma descendncia exclusiva
de indivduos marrons.
O gene A determina a cor marrom da pelagem nesses indivduos,
enquanto a, determina a cor preta. Os resultados observados nesses cru-
zamentos mostraram que no existiam indivduos marrons homozigotos
(AA), mas apenas heterozigotos (Aa).
Estudos posteriores mostraram que os indivduos de gentipo AA
morriam ainda no tero, mostrando que este gentipo era legal para os
camundongos. Assim, a freqncia esperada de descendentes nos cruza-
mentos entre camundongos marrons era de 1/3 de indivduos pretos para
2/3 com pelagem marrom (Figura 14).
30
Gentica Bsica
Figura 14. Diagrama representando o cruzamento para alelos letais.
CONCLUSO
Ao nal desta aula podemos concluir que as interpretaes matemticas
dos resultados obtidos nos cruzamentos facilitaram a compreenso dos
diversos mecanismos de herana. Ser muito importante essa compreenso
das propores de fentipos e gentipos entre os descendentes nos cru-
zamentos para que o contedo das prximas aulas (Ligao gnica e ma-
peamento cromossmico e herana ligada ao sexo) sejam bem assimilados.
RESUMO
Com a observao de cruzamentos realizados com ervilhas, Mendel
descreveu os princpios bsicos da hereditariedade, postulados como 1 Lei
de Mendel: segregao dos alelos na formao dos gametas, e 2 Lei de
Mendel: segregao independente dos alelos. Conceitos muito importantes
para a Gentica tambm foram descritos por Mendel, como a relao de
dominncia e recessividade. Variaes das leis de Mendel podem ser ob-
servadas diversas caractersticas em diferentes organismos, que no obede-
cem as propores descritas por Mendel, como nos casos de ausncia de
dominncia, alelos letais, alelos mltiplos, herana quantitativa e interao
gnica. Em alguns desses outros mecanismos a proporo de descendentes
encontrada nos cruzamentos pode diferir do que foi proposto por Mendel,
como no caso dos alelos letais onde um tipo de gentipo eliminado e
na ausncia de dominncia onde um terceiro fentipo determinado pelo
indivduo hibrido.
31
Leis bsicas da hereditariedade e extenses das leis de Mendel
Aula
2 ATIVIDADES
1. Esta atividade consiste em um jogo que aborda a determinao gentica
dos grupos sanguneos. Acesse o jogo pelo endereo a seguir, imprima,
leia as informaes, monte as peas e jogue com pessoas da sua famlia ou
at mesmo sozinho.
http://www.geneticanaescola.com.br/ano4vol1/MS11_004.pdf
2. Faa uma listagem relacionando diferentes mecanismos de herana abor-
dados na aula que voc encontra no jogo da atividade 1:
COMENTRIO SOBRE AS ATIVIDADES
1. O aprendizado de contedos de gentica pode ser facilitado por
meio da utilizao de recursos como jogos e modelos didticos. Essa
atividade ldica bastante til para rever conceitos e xar grande parte
do contedo estudado.
2. Esta atividade aborda diferentes contedos da aula de bases da
hereditariedade. Alem de rever, exercitar e fixar o contedo de
determinao gentica dos grupos sanguneos voc poder encontrar
exemplos de segregao independente, ausncia de dominncia, alelos
multiplos e interao gnica.
AUTOAVALIAO
Aps, estudar esta aula, consigo:
1. Explicar a relao allica de dominncia e recessividade?
2. Explicar como o ambiente pode inuenciar em um fentipo?
3. Conhecer a base citolgica para explicar a 1 e a 2 lei de mendel?
4. Descrever como so realizados cruzamentos testes e explique qual sua
nalidade?
5. Conhecer qual aspecto diferencia um caso de co-dominncia de outro
com dominncia incompleta?
6. Saber qual a inuencia de um alelo letal dominante na proporo espe-
rada de descendentes?
7. Conhecer no cruzamento de um casal de coelhos chinchila, no qual
foi gerado um coelho albino, qual o gentipo para esta caracterstica dos
parentais?
8. Dena o conceito de pleiotropia?
32
Gentica Bsica
PRXIMA AULA
Na prxima aula, sero estudados genes localizados em um mesmo
cromossomo, diferente, do que estudamos nessa aula (genes de segrega-
o independente). Tenha como base os conhecimentos desta aula de
cruzamentos e segregao de alelos e da aula anterior, da segregao de
cromossomos homlogos na meiose.
REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
LIGAO, RECOMBINAO E
MAPEAMENTO GNICOS
META
Discutir a importncia dos princpios que regem a origem da diversidade gentica a cada gerao
celular e a construo de mapas fsicos para a localizao de genes em cada cromossomo do
genoma.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
compreender a importncia dos mecanismos de ligao gnica e recombinao para a origem da
diversidade gentica nas populaes naturais;
construir mapas genticos.
PR-REQUISITOS
Antes de iniciar o estudo da Recombinao Gentica, o aluno dever fazer uma leitura sobre a As
Leis de Mendel em um livro de gentica Gentica consultando a bibliograa recomendada.
Aula
3
34
Gentica Bsica
INTRODUO
A diversidade biolgica de determinada espcie o conjunto de car-
actersticas morfolgicas e siolgicas que a torna capaz de responder s
mudanas ambientais. Essa diversidade originada pelos diferentes con-
juntos de alelos estocados nos diferentes indivduos de uma populao. As-
sim, quanto mais diversicada for esta populao, maior a variabilidade de
respostas s mudanas ambientais e, consequentemente a sua sobrevivncia.
Os mecanismos genticos que do origem a essa diversidade, a seg-
regao independente e a recombinao gnica, ocorrem durante a diviso
celular meitica, gerando os gametas.
Na segregao independente dos cromossomos (Fig. 1), ou 2 Lei
de Mendel, os cromossomos e seus genes podem combinar-se ao acaso,
gerando gametas com diferentes arranjos, como em um sorteio. As com-
binaes mais freqentes so as parentais; as menos freqentes so a de
gametas recombinantes, ou seja, com novas combinaes. As propores
esperadas sero 1:1:1:1.
No entanto, nem todos os genes se comportam de maneira indepen-
dente, pois quanto mais prximos estiverem no cromossomo maior a
probabilidade de serem herdados juntos. A nica maneira de separ-los por
meio do crossing-over ou recombinao gnica, que ocorre durante a prfase
da meiose I, permitindo que genes muito prximos no cromossomo possam
ser re-arrumados a cada diviso celular, gerando gametas com diferentes
combinaes. Mas, diferente da segregao independente de Mendel, na
recombinao gnica a proporo de recombinantes maior e a anlise dos
cruzamentos mostra uma proporo maior dessas combinaes.
Pode-se relacionar a freqncia de recombinantes produzida pelo
crossing over distancia entre os genes, mostrando o rearranjo de genes
ao longo de um cromossomo e permitindo construir mapas fsicos dos
cromossomos antes dos mapas moleculares, como veremos neste capitulo
35
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
Cada espcie de organismo deve conter de centenas a milhares de genes
e, geralmente, um nmero menor de cromossomos. Para entender essa
desigualdade as analises genticas mostram que cada cromossomo um
pedao de DNA, que carrega centenas ou poucas centenas de diferentes
genes que esto dispostos ao longo dele como contas em um colar
Os cromossomos so, por isso, chamados grupos de ligao, pois con-
tm um grupo de genes que so ligados juntos. O nmero de grupos de
ligao corresponde ao nmero de tipos de cromossomo de dada espcie.
Figura 2 Estrutura de um cromossomo evidenciando cromossomos ligados
P. exemplo, em humanos
Figura 3- Cariograma humano
36
Gentica Bsica
- 22 grupos autossmicos de ligao
- Um grupo de ligao do cromossomo X
- Um grupo de ligao do cromossomo Y
O termo ligao (linkage) tem dois signicados relacionados:
1. Dois ou mais genes podem estar localizados no mesmo cromossomo.
2. Genes que so muito prximos tendem a ser transmitidos juntos.
BREVE HISTRICO DOS ESTUDOS DE
RECOMBINAO
Logo aps a descoberta dos trabalhos de Mendel, em 1900, seus ex-
perimentos foram repetidos por vrios cientistas, utilizando-se de diferentes
modelos, animais e vegetais, para corroborar seus estudos. Assim, em 1905,
William Bateson e Reginald Punnett conduziram um cruzamento em ervilha
de cheiro envolvendo 2 traos diferentes:
- Cor da or e forma do gro.
- Esperavam uma proporo fenotpica de 1:1:1:1 na gerao F2.
- Encontraram resultados surpreendentes que no souberam explicar.
Figura 4 Experimento envolvendo ligao gnica em ervilhas
37
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
Entre os anos de 1910 e 1915, porm, os estudos de Thomas Hunt
Morgan e seus colaboradores em Drosophila melanogaster, mostraram
tambm, desvios da 2 lei de Mendel. Seus estudos associariam genes e
cromossomos denitivamente. A escolha desse organismo foi essencial
para os estudos de Morgan, uma vez que essas moscas so de pequeno
tamanho (3 a 4 mm), de fcil manuseio, tm um ciclo de vida muito
curto (aproximadamente 12 dias), alm de serem extraordinariamente
fecundas (cada fmea pode originar 200 a 300 descendentes ao longo
da sua vida), terem sexos facilmente distinguveis, apresentam grande
diversidade de formas e o seu caritipo possui apenas quatro pares de
cromossomas (trs autossmicos e um par de cromossomas sexuais).
Nesses estudos, Morgan e col. analisaram cruzamentos envolvendo 2
caracteres autossmicos: cor do olho e tamanho das asas em Drosophila.
Sabia-se que a cor do olho era determinada por um gene (vermelho ou pr-
pura), e o tamanho da asa (normal ou vestigial). O cruzamento de indivduos
de olhos vermelhos e asa normais com outro de olhos prpura com outro
de asas vestigiais gerava s indivduos com olhos vermelhos e asas normais:
Cor dos olhos: Vermelho- pr+ (dominante), pr- prpura (recessivo)
Forma das asas: normal- vg+ (dominante), vg- vestigial (recessivo)
P pr/pr. vg/vg X pr+ / pr+. vg+/ vg+
Gametas pr. vg pr+ vg+
Dibrido de F1 pr+/ pr . vg+/ vg
Cruzamento-teste pr+/ pr . vg+/ vg X pr/pr. vg/vg (testador)
O cruzamento teste, que serve para testar a segregao do geni-
tor dibrido em relao ao genitor recessivo (testador), mostrou uma
proporo diferente da mendeliana (1:1:1:1), revelando nmeros dife-
rentes de descendentes com combinaes parentais e recombinantes,
como segue:

pr+. vg+ 1.339
pr . vg 1.195
pr+ . vg 151
pr . vg+ 154
2.839
Esse desvio mostra que as 2 primeiras combinaes de genes es-
to ligadas. Observando-se o percentual de recombinantes na prole,
Morgan percebeu que o numero de indivduos era aproximadamente
igual (151 154), gerando um total de 305, que uma freqncia de
10,7 ou (305/2839) X 100.
~
38
Gentica Bsica
Com esses dados Morgan postulou que os genes estavam sica-
mente ligados no mesmo cromossomo e as combinaes so mantidas
juntas na prole.
Desse modo cou comprovado que os genes que esto juntos no
mesmo cromossomo no segregam de modo independente;
Mas se os genes esto ligados como mostra a alta proporo de
combinaes parentais, como aparecem as combinaes novas, re-
combinantes?
Morgan sugeriu que, durante a meiose, quando h o pareamento de
homlogos, os cromossomos podem trocar pedaos, em um processo
chamado crossing-over.
Esse processo permite a recombinao gnica. O crossing-over
ocorre durante a prfase I da meiose no estgio bivalente, onde
cromtides no-irms de cromossomos homlogos trocam pedaos
de DNA. Essa troca pode ocorrer em qualquer local entre 2 molculas
complementares de DNA, mas no constante.
Figura 5 Crossing-over e recombinao durante a meiose
A evidncia citolgica do crossing-over so os quiasmas-pontos de unio
entre as cromtides no-irms de cromossomos homlogos que trocaram
pedaos durante a meiose.
39
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
No h alterao nas seqncias de nucleotdeos no stio de troca; a
quebra e os eventos de religao ocorrem de uma forma to precisa que
no h perda, ganho ou alterao de um nico nucleotdeo.
O crossing-over ocorre no estagio de quatro cromtides, podendo ocorrer
de um a vrios crossing a cada diviso, por cromossomo.
A freqncia de recombinao no constante ao longo de todo o
genoma e inuenciada por efeitos tanto globais quanto locais. Ela pode
medir a fora da ligao entre os genes. Quanto mais prximos, mais rara
a separao e a recombinao, ou vice-versa. Para qualquer 2 genes, a
freqncia de recombinao nunca ultrapassa 50%; pois essa s alcanada
quando os genes esto muito distantes em um cromossomo ou estiverem
em cromossomos diferentes e se distribuem independentemente. Ou seja,
no esto ligados.
Figura 6- Distribuio cromossmica envolvendo dibridos com genes ligados
Quanto ao arranjo dos alelos dominantes e recessivos, h duas con-
guraes possveis: cis, quando os alelos dominantes esto no mesmo
cromossomo e trans quando em cada cromossomo localiza-se um domi-
nante e um recessivo.
Figura 7 Conguraes de ligao entre genes ligados
40
Gentica Bsica
FREQNCIA DE RECOMBINAO E MAPA
GENTICO
A contribuio mais importante dos estudos de Morgan e seus colabora-
dores foi relacionar a freqncia de recombinantes produzida pelo crossing
over distancia entre os genes, mostrando o rearranjo de genes ao longo
de um cromossomo, permitindo construir mapas fsicos dos cromossomos
antes dos mapas moleculares.
A distncia entre os genes determina a probabilidade da ocorrncia de
crossing. As freqncias de recombinantes para genes ligados variam de 0
a 50%, dependendo da distancia entre eles. Como j vimos, quanto mais
distantes mais suas freqncias se aproximam de 50%, o que diculta saber
de os genes esto ligados ou em cromossomos diferentes.
O mtodo bsico de mapeamento gnico foi desenvolvido por Alfred
Sturtevant, aluno de Morgan, que associou a distancia de genes a distancia
real entre eles nos cromossomos.
Usando a freqncia de recombinante encontrada por Morgan de 10,7 %
(ver acima) Sturtevant props utiliz-la como um ndice quantitativo da distancia
linear entre os genes pr e vg em um mapa de ligao.
Ele ento deniu uma unidade de mapa (u.m.) como a distancia entre
genes para a qual um produto de meiose em 100 recombinante. Ex: a
freqncia de recombinao (FR) de 10,7 ser 10,7 u.m. A unidade de cou
tambm conhecida como centimorgan (cM), em homenagem a Morgan.
O mapa geralmente representado de maneira linear, onde os locus
gnicos delimitam as distancias entre os genes.
Ex:
Porcentagem de recombinao entre genes A e B: 19%
Porcentagem de recombinao entre A e C: 2%
Porcentagem de recombinao entre B e C: 17%
A distncia entre A e B ser de 19 centimorgans, A e C, de 2 centim-
organs e B e C, de 17 centimorgans:
CRUZAMENTO TESTE DE 3 PONTOS

Pode-se calcular a freqncia de recombinantes e, conseqentemente,
a as distancias entre os genes por meio do cruzamento-teste dibrido, como
mostrado nos cruzamentos entre os genes pr e vg , e, de maneira mais
41
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
complexa, utilizando o cruzamento teste de 3 pontos. Essa metodologia
utiliza um cruzamento entre um tribrido e um testador triplo recessivo.
42
Gentica Bsica
Figura 8- Recombinao e formao de gametas em cruzamento-teste de 3 pontos.
A deteco de classes recombinantes duplas mostra que podem ocor-
rer crossing-over duplos. Um crossing-over em uma determinada regio
do cromossomo afeta a probabilidade de ocorrncia de outro crossing em
uma regio adjacente, ou seja, esses fenmenos no so independentes. Essa
interao chamada de interferncia. Se os crossings em duas regies so
independentes, ento, a frequncia de recombinantes duplos seria igual ao
produto das frequncias de recombinantes nas regies adjacentes
Interferncia (I): um crossing reduz a probabilidade de outro crossing
em uma regio adjacente
Coincidncia (C): proporo de recombinantes duplos observados em
relao ao esperado
43
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
Assim:
I = 1 C, em que:
C = (n observado de recombinantes duplos - FRDO/ n esperado de
recombinantes duplos - FRDE)
No exemplo de Drosophila:
FRDO = 8
FRDE = 0,064 x 0,132 = 0,0084 (8% de 1448 = 12)
I = 1 8/12 = 4/12 = 1/3 = 33%
C = 0 (interferncia completa, I = 1)
Nesse caso no so observados duplo recombinantes
C = 1 (ausncia de interferncia, I = 0)
Nesse caso o nmero de duplo recombinantes observado igual ao
nmero esperado de duplos recombinantes
CONCLUSO
O mapeamento de genes atravs de analise ligao serve para estimar
a posio relativa dos genes atravs da freqncia de crossing. Mas ainda
incompleto, pois no estabelece distancias em relao ao centrmero ou
telmeros, os marcos citolgicos de um cromossmico, para associar um
dado gene a um cromossomo. No entanto a analise conjunta de um gene
ligado a determinado cromossomo e seu mapa cromossmico ampliam a
analise gentica. Com o emprego das metodologias moleculares, os mapas
de ligao so associados a dados de mapas fsicos e tem fornecido infor-
maes valiosas sobre doenas e seus genes defeituosos. Essas associaes
permitiram construir um mapa mrbido (Figura 9))
44
Gentica Bsica
Mapa gentico humana, representando a associao entre genes e
doenas
Figura 9- Mapa gentico humano representando a associao entre genes e doenas (Fonte: www.educarchile.cl).
45
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
do genoma humano que tem ajudado muitas famlias com doenas
genticas raras a rastrear genes de doenas em suas famlias, auxiliando no
aconselhamento gentico e no prognstico dessas doenas. Alm dessa
aplicao, os mapas de ligao associados a outros tem auxiliado nos estudos
de logenia, na compreenso da diversidade entre espcies prximas, no
melhoramento gentico animal e vegetal e, em seu sentido mais amplo, na
compreenso da diversidade genmica de populaes naturais.
RESUMO
A formulao da teoria cromossmica da herana, associando genes a
cromossomos, foi um marco na Gentica que possibilitou o grande avano
que vemos hoje nas mais diversas reas biolgicas. A construo dos mapas
genticos, atravs da freqncia de recombinantes em cruzamentos utili-
zando diferentes espcies, nos ajudou a associar genes a locais especcos.
Essa grande estratgia associada a metodologias citogenticas e moleculares
atuais tm revelado uma gama enorme de diversidade, tanto visvel (fenti-
pos) quanto oculta, nos genomas de diferentes espcies.
Para a espcie humana, essa compreenso tem fornecido dados e met-
odologias essenciais que podem ajudar a pesquisa medica a fornecer dados
mais diretos a sociedade e impulsionado a construo de metodologias que,
em breve tempo, salvaro vidas.
EXERCCIO RESOLVIDO
Ex: Calculo de recombinao em cruzamento teste de 3 pontos (3
genes) em Drosophila:
- v: olhos vermilion.
- cv: ausncia de nervuras nas asas.
- ct: margens das asas cortadas.
P. v+v+ cvcv ctct x v v cv+cv+ ct+ct+

F.1 v+v cv+cv ct+ct x vv cvcv ctct
Distncia entre os 1 e 2 genes v e cv (crossing simples)
580
592
45
40
89
94
3
5
Total 1448
v cv+ ct+
v+ cv ct
v cv ct+
v+ cv+ ct
v cv ct
v+ cv+ ct+
v cv+ ct
v+ cv ct+
FR = (45+40+89+94)/1448
FR = 268/1448
FR = 0,1850 x 100
FR = 18,5 cM
46
Gentica Bsica
Concluso: Todos os locos esto ligados (situados no mesmo cromos-
somo), pois os valores de FR so menores que 50%.
Teste de trs pontos:
Locos FR (cM)
v e cv 18,5
v e ct 13,2
cv e ct 6,4
Observe que a soma de 13,2 e 6,4= 18,2 refere-se a soma entre os 1o
e o 2 genes e entre o 2 e o 3.
v ct cv
13,2 6,4
Com o cruzamento teste foi possvel determinar a ordem dos trs
genes no cromossomo.
As duas distncias no mapa, 13,2 cM e 6,4cM, somam 19,6 cM, que
maior que 18,5 cM (distncia calculada para v e cv) As duas classes mais
raras de gentipos correspondem a duplos recombinantes que surgem de
dois crossings.
Distncia entre os 1 e 3 genes v e ct (crossing simples)
D
Distncia entre os 2 e 3 genes v e ct (crossing duplos)
580
592
45
40
89
94
3
5
Total 1448
v cv+ ct+
v+ cv ct
v cv ct+
v+ cv+ ct
v cv ct
v+ cv+ ct+
v cv+ ct
v+ cv ct+
FR = (89+94+3+5)/1448
FR = 191/1448
FR = 0,1320 x 100
FR = 13,2 cM
580
592
45
40
89
94
3
5
Total 1448
v cv+ ct+
v+ cv ct
v cv ct+
v+ cv+ ct
v cv ct
v+ cv+ ct+
v cv+ ct
v+ cv ct+
FR = (45+40+3+5)/1448
FR = 93/1448
FR = 0,0640 x 100
FR = 6,4 cM
47
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
A deteco de classes recombinantes duplas mostra que podem ocor-
rer crossing-over duplos.
- Um crossing-over em uma determinada regio do cromossomo afeta a
probabilidade de ocorrncia de outro crossing em uma regio adjacente,
ou seja, esses fenmenos no so independentes. Essa interao chamada
de interferncia.
- Se os crossings em duas regies so independentes, ento, a frequncia
de recombinantes duplos seria igual ao produto das frequncias de recom-
binantes nas regies adjacentes.
Interferncia (I): um crossing reduz a probabilidade de outro crossing
em uma regio adjacente.
Coincidncia (C): proporo de recombinantes duplos observados em
relao ao esperado.
Assim:
- I = 1 C, em que:
- C = (n observado de recombinantes duplos - FRDO/ n esperado de
recombinantes uplos - FRDE).
- No exemplo de Drosophila:
- FRDO = 8.
- FRDE = 0,064 x 0,132 = 0,0084 (8% de 1448 = 12).
- I = 1 8/12 = 4/12 = 1/3 = 33%.
48
Gentica Bsica
C = 0 (interferncia completa, I = 1).
- Nesse caso no so observados duplo recombinantes
- C = 1 (ausncia de interferncia, I = 0).
- Nesse caso o nmero de duplo recombinantes observado igual ao nmero
esperado de duplos recombinantes.
ATIVIDADES
1. Analisando-se dois pares de genes em ligamento fatorial (linkage) rep-
resentados pelo hbrido BR/br, uma certa espcie apresentou a seguinte
proporo de gametas:
48,5% BR
48,5% br
1,5% Br
1,5% bR
Pela anlise dos resultados, pode-se concluir que a distncia entre os
genes B e R de:
a. 48,5 cM
b. 97 cM
c. 1,5 cM
d. 3 cM.
e. 50 cM
2. O daltonismo deutan um carter determinado por gene recessivo ligado ao sexo.
A doena retinitis pigmentosum (cegueira completa ou parcial) determinada por gene
dominante parcialmente ligado ao sexo. Uma mulher no daltnica e com retinite,
cuja me daltnica e sem retinite e o pai no daltnico e com retinite, homozigoto,
casa-se com um homem daltnico e sem retinite. Considerando que a distncia
entre os dois locos, no X, de 10 unidades de mapa? Responda:
a) Qual a proporo genotpica esperada na descendncia?
b) Qual a proporo fenotpica esperada na descendncia?
c) Se o casal deseja ter dois lhos, qual a probabilidade de ocorrer um me-
nino normal e uma menina normal, para as duas caractersticas?
49
Ligao, recombinao e mapeamento gnicos
Aula
3
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo saber:
1. O que caracteriza um gene ligado?
2. Quantos e quais arranjos um gene ligado pode ter?
3. Qual a funo do percentual de recombinao em um cruzamento para
a construo de um mapa gentico?
4. O que signica Interferncia?
5. O que signica Coincidncia?
PRXIMA AULA
Trataremos da herana ligada ao sexo e dos mecanismos de determi-
nao sexual
REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
Vdeos sugeridos
http://www.youtube.com/watch?v=f18U__0nBxQ&feature=PlayList&p
=36C97B9652CDB3E9&index=32
HERANA LIGADA AO SEXO E
MECANISMOS DE DETERMINAO
SEXUAL
META
Apresentar o mecanismo de herana de genes localizados nos cromossomos sexuais e os diferentes
mecanismos de determinao do sexo.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
compreender o mecanismo de herana dos genes estruturais localizados nos cromossomos
sexuais e conhecer exemplos de caractersticas determinadas por genes localizados no
cromossomo X; compreender o mecanismo de compensao de doses e explicar diferentes
mecanismos de determinao do sexo.
PR-REQUISITOS
Contedo das aulas de mecanismos de herana e bases cromossmicas da hereditariedade.
Aula
4
52
Gentica Bsica
INTRODUO
Na natureza, a maioria dos animais e muitas plantas, apresentam
diferena sexual, onde encontramos organismos masculinos e femininos.
Geralmente, essa diferenciao determinada por cromossomos especiais,
denominados cromossomos sexuais. As caractersticas determinadas pelos
genes presentes nesses cromossomos tambm tero padro de herana
diferente dos genes localizados nos demais cromossomos (autossomos).
Nesta aula vamos estudar a herana de caracteres genticos determi-
nados por genes localizados nos cromossomos sexuais, algumas variaes
e tambm os diferentes padres de determinao gentica do sexo.
HERANA DE CARACTERSTICAS
RELACIONADAS AO SEXO
A diferena cromossmica entre machos e fmeas promove tambm
a ocorrncia de um mecanismo de herana caracterstico para os genes lo-
calizados nestes cromossomos. Havendo uma diferena morfolgica entre
os cromossomos sexuais, regies homlogas e no homlogas sero en-
contradas nos mesmos (Figura 1). As regies no homlogas so chamadas
de regies diferenciais, pois apresentaro genes presentes apenas naquele
tipo de cromossomo, assim, esses genes no tero homlogos no outro
cromossomo sexual.
Figura 1. Representao dos cromossomos X e Y humanos, destacando as regies de homologia
e regio no homloga.
53
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual
Aula
4
A regio homloga entre X e Y so importantes por promover um
pareamento parcial entre esses cromossomos durante a diviso meitica,
o que garante sua segregao na formao dos gametas. Nas regies no
homlogas do cromossomo X, encontram-se genes de importncia estru-
tural, inclusive genes para algumas doenas que sero estudadas a seguir.
No cromossomo Y, em sua poro no homloga, encontramos genes
masculinizantes e de caractersticas exclusivas para o sexo masculino. Esses
genes so denominados holndricos.
HERANA LIGADA AO CROMOSSOMO X
Tambm conhecida como herana ligada ao sexo, engloba o estudo
de genes presentes no cromossomo X. Estes genes apresentam padro de
herana diferente do convencional, descrito pelas leis mendelianas, pois, nos
machos, se encontram em hemizigose. Como no cromossomo Y no existe
a regio de homologia para esses genes, os machos apresentam apenas um
alelo e vo expressar a caracterstica determinada por ele. Caractersticas
de expresso recessiva, basta um alelo presente no X para que a mesma se
expresse em indivduos do sexo masculino.
Nesses casos dizemos que a caracterstica foi transmitida pela me,
pois, o alelo responsvel est presente no cromossomo X herdado dela.
Vejamos alguns exemplos:
DALTONISMO
A percepo de cores pelo olho humano ocorre em clulas dos cones
que revestem a retina. Estas clulas detectam trs tipos de cores especcas:
azul, verde e vermelho (as demais cores so resultado da combinao real-
izada em nosso crebro). O tipo mais comum de daltonismo em humanos
o que no distingue as cores vermelho e verde. Os genes que determinam a
capacidade para a percepo destas cores esto localizados no cromossomo
X. Um exemplo de teste para daltonismo est na Figura 2.
Observao: O gene para deteco da cor azul est localizado no cro-
mossomo 7, portanto, tem padro de herana autossmica.
54
Gentica Bsica
Figura 2. Exemplo de teste para daltonismo. Indivduos daltnicos no conseguem visualizar o
nmero na gura.
Mulheres que apresentam um alelo Xd para o daltonismo tem fentipo
normal e so consideradas apenas portadoras, pois apresentam um alelo
normal XD que mascara a caracaterstica. Homens portadores de um alelo
Xd para o daltonismo j apresentam o fentipo daltnico, pois, seu outro
cromossomo sexual no apresenta a regio de homologia com a possibi-
lidade de haver um alelo normal para mascarar o daltonismo. Para uma
mulher ser daltnica, precisa possuir os dois alelos para esta caracterstica,
sendo o daltonismo uma caracterstica recessiva.
Veja o cruzamento (Figura 3) apresentando um casal formado por uma
mulher portadora (XDXd) e um homem normal (XDY). A possibilidade
de descendentes de 25% para mulher normal (XDXD), 25% para mulher
portadora (XDXd), 25% para homem normal (XDY) e 25% para homem
daltnico (XdY). Neste cruzamento possvel visualizar que, para carac-
tersticas ligadas ao cromossomo X, a me portadora quem transmite o
alelo defeituoso ao lho.
Figura 3. Cruzamento entre um homem normal XDY e uma mulher portadora do alelo para o
daltonismo XDXd. Os descendentes
55
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual
Aula
4
Nos heredogramas para caractersticas ligadas ao sexo usa-se represen-
tar o indivduo portador com um sinal diferente ao do indivduo normal.
Veja a representao deste padro de herana na Figura 4. Observe tambm
que homens que apresentam a caracterstica no a transmitem para seus
lhos do sexo masculino, mas, suas lhas sero todas portadoras do alelo
para a caracterstica.
Figura 4. Heredograma para representao de caracterstica ligada ao sexo (Fonte: http://www.
infoescola.com/ciencias/genetica/exercicios/).
HEMOFILIA
A hemolia uma doena caracterizada pela decincia na produo
de fatores de coagulao do sangue. Esta caracterstica determinada por
um gene presente no cromossomo X. Indivduos portadores do alelo XH
so capazes de produzir a protena responsvel pela coagulao do sangue,
enquanto o alelo Hh no produz essa protena.
DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE
Doena caracterizada pelo enfraquecimento e atroa progressiva dos
msculos, manifesta-se por volta dos quatro anos de idade, quando os
meninos comeam a apresentar diculdades em movimentos comuns do
cotidiano como se levantar de uma cadeira ou subir uma escada. A doena
progride lentamente at comprometer funes vitais, causando insucincia
cardaca e respiratria. Geralmente os indivduos com esta caracterstica
sobrevivem at por volta dos vinte anos de idade. Como estes pacientes
ao atingirem a idade frtil j se encontram muito comprometidos pela
doena, no chegam a se reproduzir e por esse motivo, no so encontradas
mulheres com distroa muscular, pois, para estas apresentarem a doena,
seria necessrio herdar um par de alelos defeituosos (Xd) do pai e da me.
56
Gentica Bsica
HERANA LIGADA AO CROMOSSOMO Y
Na poro diferencial do cromossomo Y no vamos encontrar genes
estruturais como encontramos no cromossomo X. Nesse cromossomo
encontramos apenas genes ligados a caractersticas exclusivas ao sexo mas-
culino, como o gene SRY que produz o fator de diferenciao testicular
(TDF), responsvel pela diferenciao embrionria do testculo.
Outra caracterstica tambm ligada ao cromossomo Y a ocorrncia
de plos nas bordas das orelhas (Figura 5), caracterstica no muito comum,
mas, exclusiva a indivduos do sexo masculino. Um homem que apresente
essa caracterstica vai transmiti-la a todos os seus descendentes do sexo
masculino.
Figura 5. Indivduo normal e indivduo com plos nas bordas das orelhas.
HERANA INFLUENCIADA PELO SEXO
Alguns genes localizados em autossomos tem comportamento dife-
rente dependendo do sexo do individuo, comportando a caracterstica,
hora como dominante, hora como recessiva, se o individuo for do sexo
masculino ou feminino.
Um exemplo para esse tipo de herana a calvcie, que no homem
uma caracterstica dominante, enquanto na mulher, recessiva (Figura 6).
57
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual
Aula
4
Figura 6. Calvcie caracterstica dominante no sexo masculino e recessiva no sexo feminino.
MECANISMO DE COMPENSAO DE DOSES
No incio do perodo embrionrio das fmeas de mamferos ocorre a
inativao aleatria de um dos cromossomos X em cada clula. Essa inati-
vao ocorre por meio da compactao do material gentico que ca visvel
como uma pequena regio de colorao mais densa no ncleo.
Essa inativao persiste por todas as mitoses, sendo transmitida s clu-
las lhas seguintes e, dessa forma, uma clula que anulou um cromossomo
X herdado do pai, vai gerar toda uma linhagem de clulas com este mesmo
cromossomo compactado. Por esse motivo de apresentarem linhagens uma
de clulas com inativao do cromossomo X paterno, e outra do X materno,
as fmeas so consideradas mosaicos de clulas.
Na visualizao microscpica, esse ponto do material gentico cor-
respondente ao cromossomo X anulado por compactao denominado
cromatina sexual ou corpsculo de Barr (Figura 7) e ca localizado prximo
membrana do ncleo. A cromatina sexual est presente apenas em clulas
femininas, pois, os machos apresentam apenas um cromossomo X no
sofrem inativao desse cromossomo.
Figura 7. Cromatina sexual presente em clulas femininas (Fonte: http://evolucionarios.blogalia.
com/historias/28254)
58
Gentica Bsica
Um exemplo do mecanismo de compensao de doses pode ser obser-
vado na pelagem de gatas (fmeas). A cor preta ou marrom das manchas
determinada por um gene localizado no cromossomo X e, dependendo
de qual cromossomo foi inativado em uma fmea heterozigota, a mancha
ter a cor determinada pelo alelo presente no X que permaneceu funcio-
nal. Apenas fmeas heterozigotas apresentaro as duas cores de manchas
(Figura 8), machos, por possurem apenas um cromossomo X e fmeas
homozigotas, apresentaro manchas de apenas uma cor.
Figura 8. Gatas apresentando o padro de colocao das manchas determinado pela inativao do
X (Fonte: http://www.infoescola.com/genetica/cromatina-sexual/).
DETERMINAO DO SEXO
Existem diferentes sistemas para determinao do sexo, entre eles,
podemos citar os que sero estudados a seguir:
SISTEMAS CROMOSSMICOS
A determinao do sexo por sistemas cromossmicos baseada na
ocorrncia de variaes de morfologia ou nmero nos cromossomos sexuais,
onde podem existir machos heterogamticos ou fmeas heterogamticas.
MACHOS HETEROGAMTICOS
Nestes sistemas de determinao sexual, os machos (heterogamticos)
formam gametas distintos, por tanto, quem determina o sexo do descen-
dente. As fmeas formam apenas um tipo de gameta.
59
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual
Aula
4
- Sistema XY/XX
Os machos formam gametas que apresentam, alm do lote de autos-
somos, cromossomos sexuais distintos, uns contendo o cromossomo Y
que determinara o sexo masculino, outros contendo o cromossomo X, que
determina o sexo feminino.
Este sistema encontrado em humanos e outros mamferos.
Clulas somticas Gametas
Macho 2 lotes de autossomos + XY
1 lote de autossomos + X
ou 1 lote de autossomos + Y
Fmea 2 lotes de autossomos + XX 1 lote de autossomos + X
- Sistema X0/XX
Os machos formam gametas que apresentam numero distinto de cro-
mossomos. A presena de um cromossomo X no gameta do macho, alm
dos autossomos, determina a formao de uma fmea e, sua ausncia, a
formao de um organismo macho. Ocorre em percevejos, gafanhotos e
baratas.
Clulas somticas Gametas
Macho 2 lotes de autossomos + X
1 lote de autossomos + X
ou 1 lote de autossomos
Fmea 2 lotes de autossomos + XX 1 lote de autossomos + X
FMEAS HETEROGAMTICAS
Agora, so as fmeas quem vo formar gametas distintos e determinar
o sexo dos descendentes. Para diferenciar dos sistemas de machos het-
erogamticos, os cromossomos sexuais nesta condio so denominados
como Z e W.
- Sistema ZW/ZZ
As fmeas formam gametas contendo ou o cromossomo Z, que deter-
minar a formao de um macho, ou o cromossomo W, que determina a
formao de uma fmea. Os machos formam apenas gametas portadores
do cromossomo Z, alem do lote de autossomos. Ocorre em borboletas,
mariposas, alguns peixes e aves.
60
Gentica Bsica
Clulas somticas Gametas
Macho 2 lotes de autossomos + ZZ 1 lote de autossomos + Z
Fmea 2 lotes de autossomos + ZW
1 lote de autossomos + Z
ou 1 lote de autossomos + W
- Sistema Z0/ZZ
Gametas das fmeas contendo o lote de autossomos mais o cromos-
somo Z determina a formao de um macho. Se o gameta da fmea, apre-
senta apenas o lote de autossomos, o organismo formado ser uma fmea.
Os gametas dos machos, todos apresentam o cromossomo Z alem do lote
de autossomos. Encontrado em galinha e alguns rpteis.
Clulas somticas Gametas
Macho 2 lotes de autossomos + ZZ 1 lote de autossomos + Z
Fmea 2 lotes de autossomos + Z
1 lote de autossomos + Z
ou 1 lote de autossomos
Tambm existem outras variaes nos sistemas de determinao do
sexo como exemplo:
SISTEMA HAPLOIDE-DIPLOIDE
o tipo de determinao de sexo comum em himenpteros (abelhas,
vespas, cupins). Nesse sistema, as fmeas so diplides, originadas de fe-
cundao da rainha (fmea frtil da colnia) pelo macho. J, os machos, se
desenvolvem por partenognese, a partir de ovos no fertilizados, sendo
estes, haplides.
Figura 9. Abelha rainha e operria (diplides), zango (haplide).
61
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual
Aula
4
SISTEMA DE BALANO GNICO EM
DROSOPHILA
No gnero Drosophila (Figura 10), encontramos um sistema peculiar
de determinao do sexo. Mesmo havendo a presena de cromossomos
sexuais X e Y (machos heterogamticos), vo ocorrer variaes de sexo
relacionadas proporo entre cromossomos X e autossomos.
Figura 10. Mosca das frutas, gnero Drosophila (Fonte: http://www.iayork.com/Images/10-24-07/
Drosophila.jpg).
Os machos apresentam 2 lotes de autossomos mais os cromossomos
sexuais XY. As fmeas, 2 lotes de autossomos mais XX. O ndice sexual (IS)
determinado pela razo entre o nmero de cromossomos X e o nmero
de lotes de autossomos. Assim, as fmeas apresentam IS = 1,0 e os machos,
IS = 0,5. Qualquer IS entre 0,5 e 1,0 determina um indivduo intersexo. IS
maiores que 1,0 determinam metafmeas e menores que 0,5, metamachos.
Machos: 2A + XY
Fmeas: 2A + XX
ndice Sexual (IS) = no. de cromossomos X
no. de conjuntos autossomicos
ndice Sexual em Drosophila
ndice Sexual (IS) Sexo
< 0,5 Metamacho
0,5 Macho
(0,5 - 1,0) Intersexo
1,0 Fmea
> 1,0 Metafmea
62
Gentica Bsica
DETERMINAO GENTICA DO SEXO EM
HUMANOS
Em humanos, apesar da existncia de cromossomos morfologicamente
distintos, a determinao do sexo ocorre devido presena de um gene
especico no cromossomo Y, o gene SRY. Este gene responsvel por pro-
duzir no perodo de diferenciao embrionria uma protena denominada
fator de diferenciao testicular (TDF), que promove a diferenciao dos
tecidos embrionrios da gnada indiferenciada em testculo. Na ausncia
deste gene e, consequentemente do TDF, a gnada embrionria se dife-
rencia em ovrio. Tambm o testculo que produzir fatores especcos
que diferenciaro os demais tecidos do aparelho genital masculino e sua
ausncia determina o desenvolvimento de estruturas femininas.
CONCLUSO
Ao nal desta aula voc deve conhecer exemplos de caractersticas
determinadas por genes localizados nos cromossomos sexuais, sabendo
explicar seu mecanismo de herana e diferenciar em que diferem da herana
autossmica mendeliana.
Tambm importante que tenha compreendido os diferentes sistemas
cromossomicos de determinao sexual.
RESUMO
Os genes localizados nos cromossomos sexuais apresentam um padro
de herana diferente dos autossomos devido ao macho apresentar apenas
um cromossomo X. Alelos recessivos no cromossomo X manifestam-se
em dose nica nos machos por no haver homologia no par sexual. Na
fmeas de mamferos a presena de dois cromossomos X compensada pela
anulao aleatria de um desses cromossomos por compactao, tornando
as fmeas mosaicos. Nos sistemas de determinao de sexo, encontramos
sistemas de machos heterogamticos (XX/XY, XX/X0) e de fmeas he-
torgamticas (ZZ/ZW, ZZ/Z0).
63
Herana ligada ao sexo e mecanismos de determinao sexual
Aula
4
ATIVIDADES
1. Assista ao lme leo de Lorenzo e explique o mecanismo de herana
da doena adenoleucodistroa apresentada nessa histria.
2. Uma mulher, em um exame oftalmolgico, foi diagnosticada com dalton-
ismo, mas, esta caracterstica se manifestava apenas em seu olho direito. Do
olho esquerdo, essa mulher apresentava viso normal. Com base nos con-
hecimentos estudados nessa aula, explique como esse fenmeno possvel:
COMENTRIO SOBRE AS ATIVIDADES
1. O filme leo de Lorenzo apresenta uma doena gentica (a
adrenoleucodistroa) ligada ao sexo. Todo o drama relacionado
ao contexto familiar desde a descoberta e progresso da doena
abordado de forma que sensibiliza a todos os que assistem. Neste
lme tambm so abordadas questes relacionadas tica e pesquisa
cientca.
2. Esta atividade estimular ao estudante a habilidade de contextualizar
o conhecimento estudado, exigindo o estabelecimento de relaes
conceituais estudadas nessa aula com o problema proposto.
AUTOAVALIAO
Aps ter estudado esta aula, consigo:
1. Montar o heredograma de famlia cujo casal de indivduos no daltnicos
tiveram 1 lho daltnico e uma lha normal, e determinar o gentipo do casal?
2. Saber se uma lha daltnica de um pai daltnico, tem que, obrigatoria-
mente, ter uma me tambm daltnica?
3. Saber qual a probabilidade de um casal normal que tem um lho hemof-
lico ter um lho do sexo masculino normal?
4. Explicar o que so genes holndricos?
5. Explicar por qual motivo as fmeas de mamferos so consideradas
mosaicos em relao inativao do cromossomo X?
6. Denir a diferena entre os sistemas de determinao do sexo de machos
heterogamticos e fmeas heterogamticas?
7. Explicar o que diferencia os gametas nos sistemas de determinao do
sexo XX/XY e XX/X0?
64
Gentica Bsica
PRXIMA AULA
A partir da prxima aula, iniciaremos o estudo da Gentica molecular.
Ser entendida a estrutura do material gentico e todo o funcionamento
dos genes. muito importante ter a idia da estrutura cromossmica e dos
mecanismos de herana, para que esses novos conceitos venham completar
efetivamente a compreenso da Gentica.
REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
ESTRUTURA DOS CIDOS
NUCLEICOS
META
Apresentar a estrutura molecular do DNA e RNA.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
conhecer as estrutura de um nucleotdeo; compreender as propriedades dos cidos nuclicos
relacionadas sua constituio molecular; compreender o sentido 5-3 na estrutura dos cidos
nuclicos; conhecer as diferentes bases nitrogenadas e a forma como interagem entre si;
diferenciar estruturalmente DNA e RNA.
PR-REQUISITOS
Conceitos de biologia celular e qumica de ensino mdio.
Aula
5
66
Gentica Bsica
INTRODUO
Bem vindo ao maravilhoso mundo da Gentica Molecular. A partir
desse captulo, voc vai conhecer detalhadamente a constituio molecular
dos cidos nuclicos (DNA e RNA) e assim, poder compreender suas
propriedades, como o comportamento destas molculas, a natureza da
informao gentica e a estrutura de um gene, conhecimentos de extrema
importncia para a compreenso de todo o funcionamento gnico e tambm
para o desenvolvimento das novas tecnologias da gentica.
Ser estudada a constituio dos nucleotdeos e a forma como se
encaixam e interagem entre si para compor as molculas dos cidos
nuclicos. Em seguida, sero apresentadas as diferenas estruturais entre
DNA e RNA, estendendo s suas propriedades funcionais relacionadas
sua estruturao molecular.
As informaes desta aula so a base para a compreenso de todo
o contedo de gentica molecular que ser estudado. Assim, ser muito
importante que dedique ateno especial a essa aula e que tambm faa
revises dos conceitos aqui apresentados sempre que for necessrio nas
aulas posteriores.
CONHECENDO O NUCLEOTDEO
Os cidos nuclicos so molculas orgnicas constitudas por polmeros,
uma cadeia de subunidades determinadas nucleotdeos. Assim, para com-
preender os cidos nuclicos, de suma importncia conhecer antes a
estrutura desses componentes que compem estas molculas.
Os nucleotdeos so compostos por fosfato (ou cido fosfrico), um
acar do tipo pentose (constitudo por seis tomos de carbono), e uma
base nitrogenada, como mostra a Figura 1. Os diversos tipos de nucleotdeos
so determinados por variaes nos acares e nas bases nitrogenadas.
Vejamos detalhadamente cada um desses componentes dessas subunidades
dos cidos nuclicos:
Figura 1. Exemplo de estrutura molecular de um nucleotdeo, evidenciando seus componentes:
fosfato (cidos fosfrico), pentose e base nitrogenada (Fonte: www.biomol.org/.../images/nucleo-
tideo1.jpg).
67
Estrutura dos cidos nucleicos
Aula
5
Fosfato (ou cido fosfrico): responsvel por conferir a caracterstica
cida aos cidos nuclicos, liberando H+ e adquirindo carga negativa (Figura
2). Antes de serem adicionados cadeia dos cidos nuclicos, os nucleo-
tdeos se encontram trifosratados. As ligaes entre os fosfatos liberam
grande quantidade de energia quando quebradas. Essa energia utilizada
na sntese dos cidos nuclicos que ser estudada mais detalhadamente na
aula de replicao do DNA.
Figura 2. Grupamento fosfato ou cido fosfrico.
Accar: do tipo pentose, constitudo por uma cadeia de forma c-
clica de 5 tomos de carbono. Estes carbonos so numerados de 1 a 5,
como mostram os exemplos na Figura 3. No carbono da posio 1 de um
nucleotdeo vamos encontrar a base nitrogenada e no carbono da posio
5, o fosfato. No carbono 2 vamos encontrar uma distino entre dois tipos
de aucares, a presena de um radical do tipo hidroxila (-OH) nos aucares
do tipo ribose, ou a ausncia desse radical na posio 2 dos aucares do
tipo desoxirribose. Esta diferena entre os aucares ribose e desoxirribose
tambm podem ser visualizados ainda na Figura 3.
Observao: a apstrofe na numerao dos carbonos do acar serve
para diferenciar da numerao dos tomos da base nitrogenada (que no
apresentam a apstrofe)
Os aucares do tipo ribose fazem parte da constituio dos cidos
ribunocleicos (RNA), enquanto os do tipo desoxirribose vo constituir os
cidos desoxirribunocleicos (DNA).
Figura 3. Estrutura molecular das pentoses (Fonte: adaptado de http://bioblogbiologia.blogspot.
com/2009_10_01_archive.html).
68
Gentica Bsica
O encaixe entre um nucleotdeo e outro acontece pela posio 3 de
um nucleotdeo com o fosfato da posio 5 do nucleotdeo seguinte, numa
ligao fosfodiester. Portanto, numa cadeia de um cido nuclico, dizemos
que estas apresentam duas extremidades denominadas pelas posies de
carbonos dos aucares como extremidade 5 e extremidade 3. Observe na
Figura 4 as ligaes fosfodiester entre os nucleotdeos e as extremidades
5 e 3.
Figura 4. Ligaes fosfodiester entre os nucleotdoeos constituindo a cadeia de um cido nuclico
(Fonte: http://www.enq.ufsc.br/.../genetica/dna022.gif).
Bases nitrogenadas: Compostas por Carbono, Nitrognio, Oxignio e
Hidrognio, as bases nitrogenadas apresentam duas classes, as bases pri-
cas (derivadas de purina) e as bases pirimdicas, derivadas de pirimidina
(Figura 5).
Figura 5. Bases nitrogenadas purina e pirimidina.
69
Estrutura dos cidos nucleicos
Aula
5
Entre as bases pricas, encontramos na constituio dos cidos nu-
clicos dois tipos principais de bases nitrogenadas, adenina (A) e guanina
(G). As bases pricas apresentam maior peso molecular, constitudas por
dois anis em sua estrutura (Figura 6). As bases adenina e guanina so
constituintes tanto de DNA quanto de RNA.
Figura 6. Bases pricas: adenina e guanina.
Entre as bases pirimdicas, encontramos na constituio dos cidos
nuclicos a citosina (C), comum tanto para DNA e RNA, a timina (T), pre-
sente apenas no DNA e a uracila (U), presente apenas no RNA. As bases
pirimdicas apresentam menor peso molecular e so constitudas apenas
por um anel em sua estrutura (Figura 7). Observe que a diferena entre a
timina e a uracila de apenas um radical metil (-CH3) presente no carbono
Figura 7. Bases pirimdicas: citosina, timina e uracila
ESTRUTURA DO DNA E RNA
Tanto o DNA quanto o RNA so polmeros, cadeias de nucleotdeos.
Sua sntese ser estudada posteriormente nas aulas de replicao e tran-
scrio e, para um aprendizado mais eciente, importante conhecer desde
j sua estrutura.
O RNA uma cadeia linear simples de nucleotdeos. O DNA, por sua
vez, uma cadeia dupla, tendo duas sequncias lineares paralelas e em sen-
tido oposto (antiparalelas). Esse sentido oposto determinado exatamente
pela direo das extremidades 5 e 3 da cadeia como mostra a Figura 8.
70
Gentica Bsica
Figura 8. Representao da estrutura de cadeia dupla com tas antiparalelas do DNA e da ta simples
de RNA (Fonte: adaptado de www.accessexcellence.org/AB/GG/nucleic.php).
No DNA as bases nitrogenadas de uma ta formam uma interao do
tipo pontes de hidrognio com as bases da ta paralela, conferindo molcula
de DNA um aspecto de escada retorcida, onde os degraus so formados pelos
pares de bases e os corrimos, pelas cadeias de fosfato e acar.
A estrutura de dupla hlice do DNA foi proposta em 1953 por James
Watson e Francis Crick (Figura 9) com base em estudos de difrao de
raios X realizados por Rosalind Franklin e Maurice Wilkins e em estudos
qumicos da molcula.
Figura 9. James Watson e Francis Crick com o modelo de estrutura proposto para o DNA em 1953
(Fonte: http://www.reproductive-revolution.com/watson_crick.html).
71
Estrutura dos cidos nucleicos
Aula
5
As duas tas do DNA se torcem em torno de um eixo central, deixando
externamente as cadeias de fosfato e aucar (desoxirribose), expostas ao
meio aquoso devido sua hidrolia, e internamente, as pores hidrofbicas
constituidas pelos pares de bases nitrogenadas, orientadas perpendicular-
mente ao eixo da ta.
Os pares de bases nitrogenadas formas estruturas praticamente planas
(achatadas) que se empilham internamente na estrutura retorcida da dupla
hlice de DNA, o que garante maior estabilidade molcula. Este empil-
hamento resulta em dois sulcos denominados sulco maior e sulco menor,
como demonstra a Figura 10. Cada seguimento do DNA que compreende
um sulco maior e um sulco menor constitudo por 10 pares de bases ni-
trogenadas e apresenta uma medida de 34 (1 = 0,1nm), de forma que a
distancia entre um par de bases e outro de 3,4 e a dupla hlice apresenta
um raio de 10.
Figura 10. Modelo tridimensional da dupla hlice de DNA (Fonte: adaptado de: http://commons.
wikimedia.org/wiki/File:A-DNA,_B-DNA_and_Z-DNA.png).
As bases nitrogenadas, como j foi apresentado, apresentam dois
tamanhos, sendo as pirimdicas menores que as pricas. No entanto, os
pareamentos ocorrem sempre entre uma base prica e uma base pirimdica,
e assim, os pares apresentam dimenses semelhantes, ocupando o mesmo
espao e permitindo uma uniformidade no raio da cadeia de DNA.
72
Gentica Bsica
COMPLEMENTARIDADE ENTRE AS BASESES
NITROGENADAS
Alm do tamanho das bases nitrogenadas, existe outra caracterstica
que garante a especicidade de pareamento entre as Timinas (T) com as
Adeninas (A) e das Citosinas (C) com as Guaninas (G), a formao das
pontes de Hidrognio.
As pontes de Hidrognio so interaes qumicas bastante resis-
tentes formadas por polaridades na molcula, envolvendo tomos muito
eletronegativos (O e N, presentes nas bases nitrogenadas) e outro, muito
eletropositivo (H). Consulte uma tabela peridica e veja a posio desses
elementos em relao eletronegatividade e eletropositividade.
A formao das pontes de Hidrognio entre s bases nitrogenadas
se deve presena de grupamentos ceto (C=O) e amino (C-NH2). Os
oxignios formando dupla ligao com o carbono no grupo ceto apresenta
uma polaridade negativa, devido presena de eltrons nessa posio,
enquanto os Hidrognios (mais eletropositivo), nos grupamentos amino,
tm seu eltron atrado fortemente pelo ncleo do Nitrognio (mais eletro-
negativo), cando assim com polaridade positiva. Atomos de nitrognio
presentes nas bases nitrogenadas (como na adenina e guanina) tambm
formam plos negativos.
A formao das pontes de Hidrognio ocorre sempre entre essas
regies, onde um Hidrognio com polaridade positiva atrado por um
plo negativo da base complementar.
O numero de pondes de Hidrognio especico entre as bases nitro-
genadas, ocorrendo a formao de duas pontes entre adenina e timina, e
trs pontes entre citosina e guanina. Mas, alm no numero de pontes, ainda
h outra caracterstica muito importante que torna ainda mais especco
o pareamento complementar entre as bases nitrogenadas, que o sentido
das pontes de Hidrognio. Consideramos os grupamentos amino, como
doadores de Hidrognio, e os Nitrognios e Oxignios (plos negativos),
como regies receptoras de Hidrognio. Observe na Figura 11 a presena
desses grupamentos que formam as polaridades e o sentido das pontes de
Hidrognio.
73
Estrutura dos cidos nucleicos
Aula
5
Figura 11. Estrutura molecular das bases nitrogenadas demonstrando a formao especca de
pontes de Hidrognio (Fonte: http://www.enq.ufsc.br/.../genetica/dna042.png).
Havendo essa especicidade de ligao entre as bases nitrogenadas,
podemos armar que existe uma relao de propores entre as mesmas.
O numero de timinas ser sempre igual ao de adeninas, e o numero de
guaninas, sempre igual ao de citosinas no DNA.
COMPARAO ESTRUTURAL E FUNCIONAL
ENTRE DNA E RNA
Podemos comparar os cidos nuclicos de DNA e RNA por trs dife-
renas estruturais:
O tipo de cadeia: o DNA apresenta cadeia dupla e uma molcula de
maior extenso, enquanto o RNA tem cadeia simples e apresentam cadeias
bem menores que as do DNA;
O tipo de acar: o DNA constitudo por desoxirribose, enquanto
o RNA, por desoxirribose.
74
Gentica Bsica
As bases nitrogenadas: H variao entre as bases pirimdicas de timina
(T) para o DNA e uracila (U) para o RNA. A citosina e as bases pricas
no sofrem variaes entre os dois tipos de cidos nuclicos.
Estas diferenas podem ser visualizadas na Figura 12.
Figura 12. Diferenas estruturais entre DNA e RNA (Fonte: adaptado de www.ibb.unesp.br/.../imagens/dna_rna.jpg)
Funcionalmente, o DNA desenvolve o papel de armazenamento da
informao gentica, sendo uma molcula muito estvel, enquanto o RNA,
com papel de expresso de genes estruturais e reguladores (que sero es-
tudados em aulas posteriores), so molculas mais instveis e com tempo
de vida curto dentro da clula.
A informao gentica armazenada, transmitida e expressa por meio
da sequncia das bases nitrogenadas na cadeia dos cidos nuclicos. Estas
sequncias vo determinar a informao gentica que codica todas as
caractersticas do organismo. O conceito de gene e a forma como ele se
manifesta sero estudados nas prximas aulas.
CONCLUSO
Ao nal desta aula, importante que voc verique se os objetivos
propostos realmente foram atingidos em seu aprendizado, pois, estas infor-
maes so fundamentais para a compreenso das prximas aulas.
Voc deve conhecer bem a estrutura dos nucleotdeos, especialmente
compreender a numerao dos carbonos do acar e em quais desses car-
bonos vamos encontrar a base nitrogenada, o cido fosfrico, onde teremos
a diferena entre uma ribose e uma desoxirribose e os pontos de ligao
entre um nucleotdeo e outro na cadeia.
75
Estrutura dos cidos nucleicos
Aula
5
A compreenso do sentido 5-3 tambm fundamental, pois o estudo
de toda atividade de sntese de cidos nuclicos depender de um bom
entendimento desse conceito.
Outra informao de extrema importncia que voc dever com-
preender a forma de interao especca entre as bases nitrogenadas,
a formao das pontes de Hidrognio. Este conhecimento facilitar sua
compreenso das alteraes genticas moleculares (mutaes) que tambm
sero estudadas em breve.
Com estas informaes bem denidas, voc ter um bom aproveita-
mento do contedo da gentica molecular.
RESUMO
A estrutura dos cidos nuclicos denida a partir da polimerizao de
nucleotdeos formando cadeias lineares. Os nucleotdeos so constitudos por
fosfato, acar e base nitrogenada. Os acares so do tipo ribose para RNA e
desoxirribose para o DNA. As bases nitrogenadas so classicadas como pricas
(adenina e guanina) e pirimdicas (citosina, timina e uracila). A base nitrogenada
timina especica de DNA e a uracila, para RNA. O DNA uma cadeia dupla
e o RNA, uma cadeia simples. No DNA as bases nitrogenadas interagem entre
si, formando pares especcos de timina com adenina, e citosina com guanina.
Esta especicidade entre as bases dada por sua conformao estrutural e
pelas pontes de hidrognio formadas entre as mesmas. A sequncia de bases
nitrogenadas o que determina o cdigo gentico.
ATIVIDADES
1. Extrao caseira de DNA.
Uma atividade prtica de fcil realizao a extrao caseira de DNA
vegetal. Esta atividade pode ser realizada em sua prpria cozinha, utilizando
material comum do seu uso dirio, como gua, detergente, sal, lcool, fru-
tos macios (banana, mamo ou morango), copo, funil, ltro de caf e saco
plstico e palito de churrasco.
Primeiramente, faa uma soluo em um copo de gua, com duas
colheres cheias de sal e quatro colheres de detergente. Amasse bem o
fruto dentro do saco plstico, adicione a soluo de gua, sal e detergente
e misture para homogeneizar. Com auxilio de um funil, ltre a soluo e
recolha o material liquido (ltrado) em um copo.
Adicione lentamente, deixando escorrer pela parede do copo, o lcool
(que deve ser utilizado gelado para obter melhor resultado).
Com o palito de churrasco, mecha lentamente a soluo em movimentos
circulares e ver a formao de uma nuvem esbranquiada na soluo
em torno do palito.
76
Gentica Bsica
Consulte o material disponvel nos endereos eletrnicos a seguir:
http://www.bioinfo.ufpb.br/difusao/pdf/extracaodednademorango.pdf
http://www.moderna.com.br/pnlem2009/fazendo/atividades/
ativ_bio3_amabis.pdf
Explique a funo de cada componente utilizado na soluo de extrao
de DNA (gua, detergente, sal e lcool):
2. Observe na Figura 7 do texto que a timina, em sua estrutura molecular,
apresenta 3 regies possveis para a formao de pontes de hidrognio,
sendo dois grupos ceto (C=O), que funcionam como receptores de Hi-
drognio e um hidrognio ligado um Nitrognio, o que confere a uma
polaridade positiva, funcionando como um ponto doador de H.
Explique por qual motivo, no possvel a interao por pontes de
Hidrognio entre uma timina e uma guanina:
COMENTRIO SOBRE AS ATIVIDADES
1. Veja como importante conhecer a estrutura do DNA, estudada
nessa aula, para saber explicar propriedades bioqumicas como a
solubilidade e precipitao. Esta prtica no muito diferente do que
realizado nos laboratrios de gentica molecular, apenas tomado
o cuidado com a utilizao de solues de reagentes mais especcos
para a obteno de resultados mais puros e quanticveis.
2. Respondendo a esta questo, voc poder observar o quanto
importante o conhecimento da estrutura qumica dos componentes
dos cidos nuclicos, assim, com a observao das estruturas das
bases nitrogenadas, ter maior percepo de suas diferenas e poder
relacion-las a suas propriedades.
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo:
1. Descrever a estrutura comum dos nucleotdeos?
2. Explicar o motivo estrutural do DNA apresentar cargas negativas e ter
carter cido?
3. Explicar como determinado na estrutura molecular dos cidos nuclicos
o sentido 5-3?
4. Diferenciar estruturalmente os dois grupos de bases nitrogenadas?
5. Explicar o que determina a especicidade no pareamento entre as bases
nitrogenadas?
77
Estrutura dos cidos nucleicos
Aula
5
6. Explicar por qual motivo em uma molcula de DNA as bases pricas
aparecem na mesma proporo que as bases pirimdicas, e ainda, por qual
motivo, as propores entre adenina e timina com as propores de citosina
e guanina, podem variar dependendo do seguimento do DNA?
7. Preencher o quadro a seguir com as caractersticas estruturais encontra-
das no DNA e no RNA, apontando em quais dessas caractersticas no h
distino entre eles?
DNA RNA
Tipo de cadeia
Tipo de acar
Bases pirimdicas
Bases pricas
PRXIMA AULA
Na prxima aula ser abordada a replicao do material gentico. Os
conceitos aqui estudados sobre a estrutura do DNA sero de extrema im-
portncia para a compreenso do novo contedo, especialmente a estrutura
dos nucleotdeos, com nfase no sentido 5-3.
REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro: Gua-
nabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
REPLICAO DO DNA E
TRANSCRIO
META
Apresentar os processos de replicao e transcrio do material gentico e fornecer as informaes
necessrias para o estudante compreender a base molecular da hereditariedade e da expresso
gnica.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
saber como ocorre o processo de replicao do DNA ao nvel molecular e relacionar esse evento
aos mecanismos de reproduo e formao de organismos multicelulares;
compreender como se d a passagem da informao contida no DNA para as molculas de RNA
pelo processo de transcrio;
entender a relao entre a transcrio e a expresso gnica;
conhecer a base comum da replicao e da transcrio em procariotos e eucariotos, bem como
entender as particularidades relacionadas a esses dois grupos.
PR-REQUISITOS
Conhecimento sobre a estrutura do material gentico.
Aula
6
80
Gentica Bsica
INTRODUO
Prezado estudante, nas aulas da disciplina de Biologia Celular certa-
mente voc deve ter estudado as caractersticas celulares, bem como a mitose
e a meiose, mecanismos de diviso celular. Tambm dever ter visto que
existe desde organismos que so formados por uma nica clula, tal como
as bactrias, at organismos multicelulares, como o prprio homem. Estima-
se que um homem adulto tenha cerca de 65.000.000.000.000 (sessenta e
cinco trilhes) de clulas, sendo a maior parte delas, clulas somticas que
formam juntas os diversos tecidos e rgos que compem o organismo.
Nessa aula veremos os mecanismos bsicos moleculares pelos quais uma
clula gera linhagens inteiras de clulas geneticamente idnticas, por meio
de um processo de replicao altamente preciso, ou ento como utiliza esse
mesmo mecanismo para gerar descendentes, tanto de forma assexuada
quando por mecanismos de reproduo sexuada. Entretanto, mesmo sendo
geneticamente idnticas, os nossos trilhes de clulas somticas no so
funcionalmente, nem morfologicamente, idnticas. Ento, como possvel
gerar diversidade e especicidade utilizando o mesmo material gentico
obtido por meio da replicao? Parte dessa resposta est no processo
de transcrio, que diz respeito ao modo pelo qual as clulas transmitem
s molculas de mRNA informaes especcas que sero utilizadas em
um processo posterior que dirige a produo das protenas, mecanismos
associados ao cdigo gentico e ao processo de traduo que sero abor-
dados no prximo captulo. Em resumo, veremos como os genomas so
conservados por meio da replicao que cria novas cpias genticas e como
as informaes genticas contidas no genoma so utilizadas por meio da
transcrio do genes.
REPLICAO
A replicao do material gentico, em procariontes e eucariontes,
realizada com grande preciso e velocidade. Uma bactria consegue adicio-
nar 30.000 nucleotdeos por minuto quando produz um novo lamento de
DNA, com uma margem mdia de um nucleotdeo adicionado errado para
cada bilho de nucleotdeos incorporados. Desse modo, quando dizemos
que gmeos univitelinos so geneticamente idnticos, de fato eles devem
ser idnticos, uma vez que a sua formao utilizou exatamente os mesmos
conjuntos haploides, paterno e materno, excetuando apenas as clulas que
podero ter mudado devido a erros de replicao ou outras mutaes (que
voc ver na aula 09).
81
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
Figura 1- Gmeos univitelinos: as gmeas idnticas Betty Richards e Jenny Pelmore numa foto de
infncia e, direita, comemorando seus 101 anos de vida em Manchester, na Inglaterra.
(Fonte: http://www.telegraph.co.uk).
Os mecanismos bsicos da replicao so atualmente bem conhecidos,
mas alguns detalhes ainda precisam ser elucidados, como quase tudo em
Biologia. Iniciaremos essa aula, examinando como o DNA se replica, en-
fatizando os mecanismos que garantem a preciso desse processo.
O EXPERIMENTO DE MESELSON E STAHL (1958)
Quanto James Watson e Francis Crick publicaram seu trabalho na
Nature em 1953 elucidando a estrutura do DNA, j havia nesse artigo
alguma indicao de que a replicao do DNA seria semi-conservativa,
onde a molcula de DNA de ta dupla seria formada por uma ta molde
antiga e uma ta nova complementar mas existiam duas outras hipteses
que tratavam do modelo de replicao da molcula de DNA. No modelo
conservativo a molcula antiga de ta dupla originaria uma ta dupla
completamente nova e no modelo dispersivo, este menos consistente,
argumentava-se sobre a possibilidade da ta dupla de DNA ser formada
por segmentos de ta antiga e de ta nova intercalados em ambas as tas
que formam a dupla hlice. Esses modelos precisavam ser cienticamente
testados e a comprovao de qual modelo estaria correto representou um
dos principais desaos cientcos imediatamente aps a publicao de
Watson e Crick sobre a estrutura da dupla hlice.
No ano de 1958 os pesquisadores Matthew Meselson e Franklin Stahl
elucidaram a questo por meio de um dos experimentos mais elegantes ao
longo da histria da biologia. Inicialmente esses pesquisadores precisavam
de um modo para distinguir o DNA velho do DNA novo. Para desenvolver
esse experimento eles utilizaram linhagens da bactria E. coli cultivadas
em meio de cultura. O meio de cultura para o crescimento de bactrias
possui nitrognio como um dos componentes bsicos sob a forma de
14N (nitrognio leve, normal). Meselson e Stahl ento cultivaram durante
muitas geraes uma linhagem de bactrias E.coli utilizando um tipo raro
de nitrognio pesado, o istopo 15N. Como o DNA apresenta bases ni-
82
Gentica Bsica
trogenadas, a produo de novas molculas de DNA durante o crescimento
bacteriano em meio de cultura, utilizaria necessariamente o 15N como nica fonte
de nitrognio e, como consequncia aps muitas geraes, todo o DNA bacte-
riano teria 15N na sua composio. Quando comparadas a molculas de DNA
normais, provenientes de bactrias cultivadas em meio contendo 14N utilizando
uma tcnica de gradiente de densidade em cloreto de csio (CsCl2) obtido por
centrifugao em alta velocidade, com DNA bacteriano contendo 15N, pos-
svel visualizar facilmente a diferena entre as molculas das duas linhagens em
funo da diferena na posio de equilbrio dos dois tipos aps a centrifugao,
em que as molculas contendo 15N formam uma faixa de DNA mais prxima
do fundo do tubo de ensaio em funo do maior peso molecular do istopo de
nitrognio (15N), enquanto o DNA contendo nitrognio normal (14N) aps a
centrifugao em gradiente de CsCl2 ca depositado em um ponto de equilbrio
superior ao do obtido pelo nitrognio pesado. Portanto, a tcnica de centrifugao
em gradiente de CsCl2 permite diferenciar facilmente as molculas de DNA que
contenham 14N ou 15N pela diferena de peso molecular.
Figura 2- Centrifugao em gradiente de cloreto de csio utilizando DNA pesado e leve.
Aps a obteno da linhagem de E.coli com DNA contendo 15N,
Meselson & Stahl reservaram uma amostra dessa linhagem e transferiam o
restante das bactrias do meio de cultura com 15N para um meio contendo
14N, e separando uma nova amostra de bactrias a cada nova gerao,
crescida em 14N, a cada 20 minutos. A amostras controle contendo bac-
trias criadas em 14N e as amostras obtidas do experimento (15N, 14N
20, 14N40, etc) foram separadas e, aps a extrao de DNA, as amostras
foram submetidas ao gradiente de centrifugao em CsCl2. Como seria de
se esperar as amostras controle com DNA 14N apresentaram e as amostras
contendo 15N apresentaram faixas distintas nas posies esperadas, con-
forme j demonstrado na gura 2. A amostra da primeira gerao nascida
em meio de cultura contendo 14N (20) apresentou uma faixa intermediria
no gradiente de cloreto de csio e na amostra obtida aps 40, existiam duas
faixas, uma na posio intermediria e outra na posio referente a faixa
14N, como demonstra a gura 3.
83
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
Figura 3- Experimento de Meselson e Stahl (1958)
84
Gentica Bsica
O experimento de Meselson e Stahl (1958), portanto, comprovou que
a replicao do DNA semi-conservativa. Esse resultado abriu novos
desaos na rea de pesquisa, especialmente relacionados a elucidao dos
mecanismos moleculares relacionados ao processo de replicao. Algumas
perguntas ainda estavam sem resposta naquele momento: Como iniciado
o processo de replicao da ta dupla de DNA? Existe um ponto especco
para a origem da replicao? Existe diferena no processo de replicao
entre eucariotos e procariotos? Quais so as molculas envolvidas nesse
processo e com elas participam desse processo? Os tpicos a seguir pro-
curam responder a cada uma dessas questes.
ORIGENS DA REPLICAO
No ano de 1963, estudos auto-radiogrcos do cromossomo de
E.coli mostraram que o cromossomo bacteriano uma estrutura circular
e que o processo de deselicoidizao da molcula de DNA e a replicao
semi-conservativa eram processos que ocorrem de forma acoplada, quase
simultaneamente interpretao dos pesquisadores paras as auto-radiograas
indicaram tambm que a replicao tem incio em um stio especco,
chamado de origem e ocorre de forma bidirecional ao redor do cromos-
somo circular, em um modelo denominado crculo rolante.
Figura 4- Auto-radiograa de um cromossomo bacteriano em processo de replicao. (a) Uma auto-radiograa do clssico
trabalho de Cairns (1963), com seu diagrama interpretativo acima direita. Os lamentos radioativos so mostrados com
linhas slidas e os lamentos novos so ilustrados como linhas tracejadas. (b) interpretao do processo de replicao
bidirecional chamado crculo rolante
(Fonte: http://schaechter.asmblog.org).
85
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
REPLICAO BIDIRECIONAL
Cairns em seus estudos considerou que a replicao teria uma nica
origem e formaria uma nica forquilha de replicao em movimento unidi-
recional ao redor do cromossomo circular. No entanto sabe-se atualmente
que a replicao em procariontes pode ter a formao de duas forquilhas
a partir de uma nica origem, com as duas forquilhas movendo-se em
sentidos opostos, ou seja, a replicao realiza um movimento bidirecional.
A replicao bidirecional foi descoberta em experimentos realizados
com vrus bacterianos da E. coli, denominados de fago lambda. O cromos-
somo do bacterifago lambda apresenta regies ricas em A:T onde ocorrem
as diferenciaes. Experimentos de Schnos e Inman (1960) demonstraram
que a replicao do cromossomo lambda parte de uma mesma origem em
movimento bidirecional.
No processo de desnaturao do DNA as pontes de hidrognio e as
ligaes hidrofbicas so quebradas quando expostas a altas temperaturas ou
pH cido por exemplo. Nessa quebra os lamentos do DNA so separados,
mas os pares de A:T so rapidamente desnaturados por possurem apenas
duas pontes de hidrognio, enquanto que os pares G:C so ligados por trs
pontes. As bolhas da desnaturao dos pares A:T podem ser vistas atravs de
microscopia eletrnica e assim utilizados como marcadores. Schnos e Inman
observaram as posies dessas bolhas em vrios rplicons e puderam demon-
strar as forquilhas em sentidos opostos ao redor do cromossomo circular.
A replicao bidirecional foi comprovada em outros organismos incluindo
eucariontes, mas a replicao bidirecional no se aplica a todas as espcies,
apesar de ocorrer na maioria, em colifagos, por exemplo, ela unidirecional.
Nos cromossomos eucariticos, que apresentam vrios stios de origem
de replicao existem diversos rplicons. O rplicon , portanto, o produto
da replicao gerado a partir de um stio de origem de replicao.
Figura 5a Diversas origens de replicao e diversos rplicons em eucariotos
86
Gentica Bsica
A origem da replicao em E.coli foi denominada de OriC. Foi obser-
vado detalhadamente que o OriC possui 245 pares de nucleotdeos em duas
diferentes seqncias conservadas repetidas. Assim uma seqncia de 13pb
est repetida trs vezes em tandem. As repeties so ricas em pares de A:T,
o que possibilita a formao da bolha de replicao, que uma regio
de separao do lamento. Uma zona de desnaturao a primeira etapa
essencial para a replicao de todo DNA bilamentar. Outro componente
do OriC conservado que entra em ao agora uma seqncia de 9pb com
quatro repeties intercaladas por outras sequncias. Estas sequncias so
na verdade stios de ligao a uma protena, denominada dna A, que d
inicio ao processo de formao da bolha de replicao.
Figura 5b Ilustrao do stio OriC em E. coli (ORIC)
(Fonte: www.ufrgs.br/depbiot/blaber/section2/img00004.gif).
Acredita-se que nos eucariontes as origens de replicao so seqncias
especcas de DNA.

DNA POLIMERASES
A sntese in vitro de DNA foi realizada primeiramente em 1952 por
Arthur Kornberg, que tambm acabou por identicar o que mais tarde seria
denominada de DNA polimerase I . A enzima DNA polimerase I entra em
ao somente na presena de ons Mg+ e da ta molde de DNA. De modo
geral as DNA polimerases so enzimas que auxiliam na sntese de qualquer
ta nova de DNA, sendo os novos lamentos produzidos no sentido de
5 3. Em bactrias, tanto a enzima DNA polimerase I quanto as DNA
polimerase II e III realizam polimerizao (adio de novos nucleotdeos)
87
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 e tambm funo exonuclesica (atividade de correo de erros), embora a
funo a DNA polimerase I seja mais especializada na funo exonuclesica,
fazendo a reviso tanto no sentido 5 3 quando no sentido 3 5. A
remoo dos primers parece ser a principal funo da DNA polimerase I,
enquanto e a sntese precisa de DNA a principal funo da DNA polim-
erase III. O que pode ser observado pela tabela a seguir:
Tabela. Funes das DNA polimerases em E. coli (PIERCE, 2004).
DNA
Polimerase
Polimeralizao
53
Exonuclease
35
Exonucle
ase
53
Principais Funes
I Sim Sim Sim remove e substitui
primers.
II Sim Sim No reparo do DNA:
reinicia a replicao
em DNA danificado,
parar a sntese.
III Sim Sim No alonga o DNA
A DNA polimerase III adiciona um nucleotdeo ao grupo 3-OH do primer.
REPLICAO EM EUCARIONTES
A replicao em eucariontes ainda no tem todos seus mecanismos
completamente elucidados, mas sabe-se que apresentam algumas diferenas
quando comparados replicao dos procariontes. As principais diferenas
so: origens mltiplas de replicao, maior nmero de polimerases, maior
diversidade de funes para DNA polimerases, montagem de nucleossomos
aps a replicao.
Como visto anteriormente em leveduras, algumas seqncias de DNA
(ARS) possuem a habilidade de se auto-reaplicar, o que possibilita a repli-
cao de qualquer lamento de DNA, uma vez que estejam ligados a uma
destas ARS. O complexo de reconhecimento de origem (ORC) liga-se a
ARS desenrolando o DNA. O DNA eucaritico possui muitas origens de
replicao e cada origem possui um ORC. O genoma precisa ser replicado
de forma a no repetir nenhum gene nem deixar que algum gene no seja
replicado. Assim em clulas eucariticas o inicio da replicao se d em
duas fases para maior controle do processo de replicao.
Na primeira fase as origens so aceitas para replicao por meio de um
fator de permisso da replicao que se liga a estas origens. Na fase seguinte
as protenas iniciadoras se ligam somente s origens permitidas ou ligadas
a seu fator de permisso, a partir de ento se tem a separao dos lamen-
88
Gentica Bsica
tos de DNA e o inicio da replicao nas origens permitidas. Ao passo
que a replicao se distancia da origem perde-se os fatores de permisso,
que s sero reativados depois da mitose ter sido completada e antecede a
reativao das protenas iniciadoras, evitando assim a replicao de trechos
que j foram replicados ou que se deixe de replicar algum fragmento.
Foram identicadas em clulas eucariticas aproximadamente 13 tipos
diferentes de DNA polimerases que atuam na replicao, recombinao e
no reparo do DNA. As DNA polimerases alfa iniciam a sntese ao reali-
zar atividade de primase, e a DNA polimerase delta atua completando os
lamentos de replicao contnua e descontnua. A DNA polimerase beta
est relacionada ao reparo e a recombinao de DNA nuclear. A DNA
polimerase gama atua na replicao do DNA mitocondrial e tambm na
replicao do DNA dos cloroplastos. A DNA polimerase psilon participa
do processo de replicao continua e descontnua, mas suas funes em
maiores detalhes ainda no so bem conhecidas. Ainda que seus papis no
estejam totalmente esclarecidos, acredita-se que as demais DNA polimerases
possibilitem a replicao transleso, que uma replicao que ultrapassa o
DNA danicado, alm de outras funes no reparo do DNA bem como
nos processos de replicao como um todo.
Tabela. Funes das DNA polimerases em eucariontes (PIERCE, 2004).
DNA Polimerase Atividade de
polimerase
53
Atividade de
Exonuclease 35
Funes
Alfa Sim No Inicio da sntese nuclear
e reparo do DNA.
Beta Sim No Reparo de DNA e
Recombinao de DNA
nuclear.
Gama Sim Sim Replicao de DNA
mitocondrial.
Delta Sim Sim Sntese de filamentos
leading e lagging,
reparo do DNA e
sntese transleso de
DNA.
psilon Sim Sim Reparo e replicao de
DNA nuclear.
Zeta Sim No Sntese de DNA
transleso.
Eta Sim No Sntese de DNA
transleso.
89
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 Teta Sim No Reparo do DNA.
Ioda Sim No Sntese de DNA
transleso.
Kapa Sim No Sntese de DNA
transleso.
Lambda Sim No Reparo do DNA.
Mi Sim No Reparo do DNA.
Sigma Sim No Replicao do DNA
nuclear, reparo do
DNA,e coeso de
cromtides irms.
EFEITO DE OKAZAKI
do conhecimento de vocs que a molcula de DNA formada por
uma hlice dupla, constituda de duas tas complementares que apresentam
polaridades opostas e por isso, so denominadas antiparalelas. Enquanto
uma tem sentido 35, a ta complementar encontra-se no sentido 53.
Para que um novo nucleotdeo seja adicionado durante a polimerizao a
DNA polimerase cliva o nucleotdeo trifosfatado (utilizado como matria
prima), liberando duas molculas de fsforo inorgnico, o que fornece a
energia necessria para a catlise da formao de uma ligao fosfodiester
entre a ligao livre, do nico fosfato restante no nucleotdeo, e a extremi-
dade 3-OH livre da desoxirribose da ta nascente. Assim, cada nucleotdeo
novo deixa uma extremidade 3-OH livre para os prximos nucleotdeos,
repetindo esse passo sucessivamente, enquanto estiverem na presena
da ta molde. Como as DNA polimerases iniciam a sntese a partir do
fragmento 3OH livre fornecido pelo primer, a ta nova 53 apresenta
uma sntese contnua dando origem ao lamento denominado leading, e
a ta nova no sentido 35 apresenta sntese descontnua originando o
lamento lagging. Quando a ta molde est no sentido 53 no pos-
svel fornecer DNA polimerase uma extremidade livre 3OH de forma
simultnea ao fornecimento da ta molde, uma vez que a extremidade livre
3OH encontra-se na extremidade oposta ta molde.
A sntese do lamento lagging tem sentido contrrio ao da deselicoidizao,
indo de encontro forquilha de replicao, o que faz a sntese desse lamento
ocorrer de forma fragmentada, j que o primer adicionado distncia de
algumas centenas de nucleotdeos da forquilha de replicao (para solucionar
a falta de ta molde) e a polimerizao se estende at voltar parte j replicada,
sendo necessrios vrios primers, sendo um para cada fragmento da ta lagging.
Assim a sntese do lamento lagging se d de forma descontnua em fragmen-
tos curtos que so denominados de fragmentos de Okazaki. A gura a seguir
ilustra a formao das tas lagging e leading durante o processo de replicao.
90
Gentica Bsica
Figura 6 Formao das tas lagging e leading durante o processo de replicao
(Fonte: HTTP:\\www.peleteiro.es).
O MECANISMO DE REPLICAO
O complexo de replicao pode ser resumido ao que ocorre durante
a formao de um rplicon.
A ABERTURA DA FITA DUPLA DE DNA
O passo inicial do processo de replicao a abertura da ta dupla de
DNA para que as tas de DNA unilamentares quem expostas para que
possam servir de molde para a produo das tas complementares. No
entanto, como a ta dupla de DNA est disposta em forma de hlice, a
replicao do DNA requer um mecanismo de deselicoidizao. A abertura
da ta catalisada por enzimas chamadas DNA helicases, sendo que a
91
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
Figura 7- Esquema representativo da abertura da ta de DNA evidenciando as funes das protenas
SSB e das helicases.
(Fonte:www.ufsm.br).
principal helicase decodicada pelo produto do gene dnaB. As helicases
utilizam molculas de ATP para catalisar a reao de quebra das pontes de
hidrognio que mantm unidas as bases nitrogenadas. Entretanto, as bases
nitrogenadas tendem a refazer as pontes de hidrognio, em funo da ani-
dade de ligao entre elas, forando a renaturao do DNA. Ento para a
manuteno da forma distendida, protenas de ligao denominadas SSB
so ligadas s tas de DNA unilamentar, formando diversos monmeros
da protena ligados cooperativamente ao longo da forquilha de replicao,
impedindo temporariamente o fechamento da molcula de ta dupla. As
protenas SSB que revestem as tas unilamentares de DNA, impedindo
a renaturao da molcula de DNA, so codicadas pelo gene ssb.
Relembrando a estrutura da molcula de DNA, estudada na aula an-
terior, observe que trata-se de uma dupla hlice onde cada volta completa
tem cerca de 10 pares de nucleotdeos de tamanho, isso faz com que du-
rante a abertura da molcula o DNA precise realizar um giro de 360 (uma
volta completa) a cada 10 nucleotdeos, sendo a velocidade de replicao
em torno de 30000 nucleotdeos por minuto. Rapidamente gerada uma
superelicoidizao em funo da velocidade de cerca de 3000rpm, gerando
uma fora contrria abertura da ta. Para impedir que a fora contrria de
superelicoidizao impea a abertura da molcula a enzimas, denominadas
topoisomerases, catalisam quebras transitrias nas ligaes fosfodiester
ao longo do eixo principal da molcula de DNA. Existem duas classes de
topoisomerases: tipo I e tipo II. As topoisomerases do tipo I so caracter-
92
Gentica Bsica
Figura 8 Adio de novos nucleotdeos pela DNA polimerase na extremidade 3OH livre da ta nova.
izadas por clivar apenas uma das duas tas de DNA. Essa quebra unilamentar
permite que a ta clivada gire em torno do eixo da molcula, desfazendo a
superlice e, consequentemente, permitindo que a abertura da ta dupla de
DNA possa continuar. A clivagem realizada pelas topoisomerases tipo I so
energeticamente mais ecientes. As topoisomerases do tipo II apresentam como
principal diferena a clivagem bilamentar do DNA, podendo remover ou at
mesmo introduzir superlices utilizando um mecanismo que requer energia.
A topoisomerase do tipo II mais bem caracterizada a enzima DNA girase.
SNTESE DE NOVOS FILAMENTOS DE DNA
Uma vez iniciada a formao da forquilha de replicao, a sntese de novos
lamentos imediatamente iniciada. As DNA polimerases formam o principal
grupo de enzimas no processo de replicao. Como detalhado anteriormente,
as DNA polimerases desempenham funes exonuclesicas (de reviso) e
funes polimersicas (gerao das novas tas complementares de DNA a
partir das tas molde). Para a realizao da funo de polimerizao sabemos
que as DNA polimerases precisam basicamente de tas molde unilamen-
tares, de nucleotdeos trifosfatados (desoxirribonucleosdeo 5 trifosfato),
que so as unidades bsicas para a produo do polmero e, nalmente, de
uma extremidade 3OH livre para que possam adicionar novos nucleotdeos.
93
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 As tas molde tornam-se disponveis com a desnaturao da ta dupla que
expe as duas tas unilamentares, os nucleotdeos trifosfatados so encontrados
livremente no citoplasma, mas a extremidade 3OH livre precisa ser fornecida
pela formao de uma pequena seqncia inicial complementar ta molde,
denominada primer. O primer um pequeno segmento de RNA produzido
por uma enzima da classe das RNA polimerases denominada Primase. Essa
enzima liga-se s tas molde utilizando-as para a ligao de ribonucleotdeos
complementares em um curto segmento iniciador de 10 a 12 nucleotdeos de
tamanho. No entanto, a polimerizao ocorre de forma diferente em relao s
duas tas molde complementares, em funo delas serem antiparalelas. Quando
a ta molde encontra-se no sentido 35, a polimerizao ocorrer de forma
contnua (como anteriormente descrito), uma vez que todos os pr-requisitos
para a ao da DNA polimerase so atendidos. No entanto, com relao ta
complementar, na orientao 53, a extremidade 3OH do primer est orien-
tada no sentido contrrio ao lamento molde. Para solucionar esse problema,
o primer inserido algumas centenas de nucleotdeos adiante, permitindo que
tanto a extremidade 3OH do primer, quanto um segmento da ta molde, estejam
simultaneamente disponveis DNA polimerase, permitindo a polimerizao no
nico sentido possvel de polimerizao dessa enzima, o sentido 53 da ta
nova. Nas bactrias a DNA polimerase III a principal responsvel pelo processo
de polimerizao e isso ocorre de forma simultnea nas duas tas, ainda que a
mecnica de polimerizao exiga da DNA polimerase a formao de alas em
funo da formao dos fragmentos de Okazaki na ta lagging. A DNA polim-
erase I, por sua vez, a principal enzima responsvel nas bactrias pela funo
exonuclesica, realizando essa funo de reviso, tanto no sentido 53 quanto
no sentido 35. A DNA polimerase I substitui os fragmentos de RNA (prim-
ers) durante a reviso, substituindo-o por um lamento adequado de DNA. No
entanto, as ligaes fosfodiester entre os fragmentos precisam ser estabelecidas
e isso realizado pela enzima DNA ligase. Aps o processo de reviso e ligao
dos fragmentos, os dois rplicons produzidos de forma semi-conservativa so
geneticamente idnticos.
94
Gentica Bsica
Figura 9 Principais etapas do processo de replicao
TRANSCRIO E PROCESSAMENTO DO RNA
OS TIPOS DE RNA
Apesar da existncia de diversos tipos de molculas de RNA e da verda-
deira revoluo que as molculas de RNA vem fazendo na rea de gentica,
especialmente em funo do desenvolvimento recente da epigentica, nessa
aula vamos tratar das quatro classes de RNAs especialmente relacionadas
expresso gnica. 1- O RNA mensageiro (mRNA), intermedirio que porta
a informao gentica levando-a aos ribossomos; 2- RNA de transferncia
(tRNA), pequenos RNAs dobrados sob a forma de trevo, cuja principal
funo o transporte de um aminocido para a sntese proteica no ri-
bossomo, servindo de intermedirio entre a informao gentica do mRNA
e o ribossomo; 3- RNA ribossomal (rRNA), componente estrutural dos
ribossomos, a estrutura complexa formada por rRNA e protenas e execu-
tam a traduo das protenas e; 4- RNAs nucleares (snRNA), componentes
estruturais do aparelho de processamento do mRNA, o spliceossomo.
95
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 RNA MENSAGEIRO
O RNA mensageiro ou mRNA foi descoberto na dcada de 1950 por
Franois Gros em estudos com bacterifagos da E. coli, por meio de uma
experimento conhecido como pulso-caa, nesse experimento Gis marcou a
uracila radioativamente e observou seus movimentos na sntese, e percebeu
que o RNA do fago tinha curta durao e estava associado aos ribossomos,
interpretou que esse RNA fosse um de transferncia de informaes entre
o DNA e os ribossomos, cunhando-o de mensageiro. O mRNA codica e
carreia as informaes genticas do DNA para os ribossomos. O mRNA
divide-se em trs regies: a regio5 que no codica a seqncia de amino-
cidos da protena; a regio codicante onde so encontrados os cdons, for-
mados por trs nucleotdeos que, em conjunto, determinam um aminocido
a ser includo na sntese e a regio 3 no traduzida em protena. Os RNAs
heterogneos nucleares (htRNA) so os produtos primrios da transcrio em
eucariotos. Vale lembrar que as clulas de bactrias no possuem htRNA j
que nestas a transcrio ocorre simultaneamente a traduo. O RNA heterog-
neo nuclear um precursor do mRNA maduro que est restrito ao ncleo
das clulas eucariticas e geralmente muito maior que o mRNA maduro,
em funo de ser formado por uma ta de RNA exatamente complementar
ta molde do DNA de origem, incluindo regies codicantes (Exons) e
regies no codicantes (introns). Voltaremos a esse tema quando tratarmos
do processamento do mRNA em eucariontes.
Figura 10- RNA heterogneo Nuclear (htRNA) precursor do mRNA em eucariotos
96
Gentica Bsica
RNA DE TRANSFERNCIA (TRNA)
O RNA de transferncia ou tRNA tem como funo fornecer amino-
cidos ao ribossomo para a produo de polipeptdeos segundo a leitura das
informaes genticas do mRNA. Cada tRNA possui anidade com um
nico tipo de aminocido ao qual se liga por intermdio da catlise pela
enzima Aminoacil Sintetase e o transporta do citoplasma ao ribossomo.
Os tRNAs apresentam sua estrutura tridimensional e em forma de trevo
com pontes de hidrognio intramoleculares contendo cerca de 70 a 90
nucleotdeos, portanto, bem menores que os mRNAs. Os tRNAs apre-
sentam tambm bases modicadas como a ribotinina, alm das famosas
(adenina, citosina, guanina e uracila). Essas bases modicadas tem origem
nas bases padro na transcrio por enzimas modicadoras de tRNA.
Esses nucleotdeos diferentes so geralmente derivados metilados dos
nucleotdeos comuns. Esses nucleotdeos metilados impedem a formao
de pares de bases, afetando a forma tridimensional da molcula. Existem
algumas caractersticas comuns na congurao tridimensional dos tRNAs.
A extremindade 3 apresenta sempre uma sequncia terminal CCA, que
pode se ligar covalentemente a um aminocido numa reao catalisada pela
enzima aminoacil sintetase. A ala do anticdon, por sua vez, umas das
estruturas encontradas no tRNA, nela encontra-se o anticdon formado
por uma trinca de nucleotdeos relacionado de forma complementar com
o cdon do mRNA e permite que o aminocido correto seja adicionado a
sua posio na sntese proteica.
Figura 11- Modelo estrutural do RNA de transferncia
(Fonte: www.emc.maricopa.edu).
97
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
RNA RIBOSSOMAL
O RNA ribossomal ou rRNA faz parte da constituio dos ribossomos
compondo suas unidades e subunidades e conjunto com diversas protenas.
Nos ribossomos encontra-se aproximadamente 80% de todo o RNA con-
tido na clula e neles que so montadas as protenas. Nos procariontes os
rRNAs interagem com mais de 50 protenas ribossmicas diferentes para
formar a complexa estrutura tridimensional do ribossomo. As classes de
rRNA procariticas so chamadas: 5S, 16S e 23S. Essa nomenclatura se d
em funo de sua densidade em gradiente de sedimentao em sucrose.
Nos ribossomos eucariticos os rRNA interagem com cerca de 80 protenas
diferentes, sendo as classes de rRNA eucariticos designados 5S, 5,8S, 18S
e 28S. O rRNA obtido por transcrio e o produto nal dos genes so
molculas de RNA.
Figura 12- Molculas de rRNA em ribossomos de procariontes e eucariontes
(Fonte: www.compbio.pbworks.com).
RNAS NUCLEARES (SNRNA)
Como componentes estruturais dos spliceossomos, esses pequenos
RNAs excisam os introns durante o processamento dos precursores de
RNA durante a fase de processamento.
98
Gentica Bsica
Figura 13 Modelos tridimensional de uma molcula de RNA cataltico (ribozima), evidenciando
o stio de catlise (1)
(Fonte: www.science.ca).
RIBOZIMAS
O RNA tambm pode desempenhar funo cataltica como as enzi-
mas, ou seja, nem toda enzima uma protena como pensvamos. Esse
fato foi descoberto por Thomas Cech (1981) em um estudo envolvendo
RNA ribossomal de protozorios, desde ento, diversas ribozimas tm sido
descobertas e estudadas, com destaque para os estudos de Sidney Altman,
o que levou Cech e Altman ao prmio Nobel em 1989. A descoberta das
habilidades catalisadoras de molculas de RNA sugere que o primeiro ma-
terial gentico tenha sido o RNA e no o DNA.
99
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
SNTESE DE RNA
A transcrio o mecanismo pelo quais todas as categorias de RNA,
vistas anteriormente, so sintetizadas. A transcrio utiliza uma ta de DNA
como molde e assemelha-se replicao, no entanto so copiados apenas
alguns trechos do DNA, como um gene ou alguns poucos genes. Pois seria
demasiadamente desnecessrio que a todo tempo que uma clula neces-
sitasse de uma protena especica tivesse que transcrever todo o genoma.
Assim a transcrio proporciona clula a oportunidade de selecionar quais
protenas sero produzidas segundo sua necessidade.
Para a transcrio so necessrios trs elementos bsicos:
1. O lamento molde de DNA que consiste em uma nica ta de DNA,
diferentemente da replicao que ocorre em ambas as tas da dupla hlice,
pois em qualquer trecho do DNA uma nica ta possui a informao a ser
transcrita, que a unidade de transcrio;
2. O substrato (nucleotdeos) o RNA constitudo de trifosfatos de ribo-
nucleosdeos (rNTPs) que so adicionados molcula por molcula ao grupo
3-OH somado ao fsforo orgnico, constituindo-se a como a matria prima
da transcrio (RNAn + rNTP RNAn+1 +PPi, onde PPi o fsforo);
3. O aparelho de transcrio constitudo de por uma gama de enzimas
e protenas que auxiliam, sintetizam e regulam o processo de transcrio.
AS RNA POLIMERASES
As RNA polimerases so enzimas semelhantes as DNA polimerases
da replicao. As bactrias possuem apenas um tipo de RNA polimerase.
A RNA polimerase bacteriana uma grande enzima constituda por
vrias cadeias polipeptdicas, ou seja, uma enzima multimrica. A RNA
polimerase bacteriana subdivide-se em quatro unidades (as cadeias polipep-
tdicas individuais, duas cpias da unidade alfa, uma cpia da unidade beta,
e uma cpia da unidade beta-primo) que compem o cerne da enzima. Ao
cerne da enzima ligam-se outras subunidades como os fatores sigma, for-
mando uma holoenzima, possibilitando que a RNA polimerase bacteriana
atue nas diferentes etapas da transcrio.
TRANSCRIO EM PROCARIONTES
Nos procariotos uma unidade de transcrio pode conter um ou vrios
genes que so transcritos simultaneamente (transcrio policistrnica). O
processo de transcrio pode ser dividido didaticamente em trs etapas:
(1) incio, (2) elongamento e (3) trmino e liberao da molcula de RNA.
Assim como na replicao, a sntese de RNA ocorre sempre no sentido
100
Gentica Bsica
53 da ta de RNA nascente. Considerando um ponto de referncia e
sabendo que a transcrio unidirecional.
INCIO
Na iniciao primeiramente o promotor reconhecido, depois h a
formao da bolha com separao dos lamentos do DNA, o promotor
determina o trecho do molde que deve ser transcrito e a freqncia dessa
transcrio, nessas etapas o promotor tem anidades especcas com a
RNA polimerase que varia com o tempo. O promotores bacterianos so
seqncias de DNA que so identicados pelo aparelho de transcrio e que
determinam o stio onde ter inicio a transcrio, qual dos dois lamento de
DNA so utilizados como molde, e qual o sentido da RNA polimerase. Nos
promotores so encontrados seqncias comuns que so denominadas de
seqncias de consenso, essas seqncias normalmente implicam em uma
funo importante. Alguns promotores bacterianos apresentam tambm
um elemento antecedente (upstream) que seria uma seqncia de consenso
a mais, estas geralmente catalisam o processo de transcrio.
Duas regies promotoras parecem estar conservadas em todos os
procariontes, denominada TATA box, que antecede a regio codicante
em 10 bases (-10) e outra na regio -35, ou seja, localizada a cerca de 35
pares de bases acima da regio codicante, caracterizada pelo sequncia de
consenso TTGACA e consiste numa regio relativa ao local de ligao da
RNA polimerase.
Figura 14- Regio promotora em procariontes
A holoenzima RNA polimerase utiliza a subunidade Fator Sigma
apenas no incio da transcrio. O fator sigma no executa nenhum papel
no elongamento da cadeia de RNA, sendo liberado do Cerne (complexo
formado pela holoenzima RNA polimerase sem o fator sigma). A principal
funo desempenhada pelo fator sigma a localizao dos stios promo-
tores e identicao da ta molde. Sem o fator sigma a transcrio torna-se
um evento aleatrio . Aps a identicao do promotor e da ta molde, a
holoenzima acoplada ao promotor, onde a RNA polimerase d inicio a
transcrio e desenrola o DNA.
101
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 ELONGAMENTO
O elongamento da cadeia de RNA catalisado pelo cerne da enzima
RNA polimerase aps a liberao da subunidade sigma, dentro da bolha de
transcrio, que um segmento de RNA que permanece aberto durante a
catlise da transcrio, tanto a abertura quanto o fechamento temporrio da
bolha catalisado pela RNA polimerase, alm da adio de ribonucleosdeos
trifosfatados complementares a ta de DNA molde.
TRMINO E LIBERAO
O trmino ocorre quando a RNA polimerase transcreve um sinalizador
de trmino ou nalizador que antecedem o ponto de trmino. Um dos
sinalizadores de trmino so denominado alas em grampo, em funo do
dobramento do transcrito sobre si mesmo em funo de uma regio rica
em CG de cerca de 40 nucleotdeos de extenso, reconhecida pela RNA
polimerase.
Figura 15 Sinal de trmino de transcrio denominado ala em grampo
Alguns eventos ocorrem durante a transcrio na regio nalizadora: a
RNA polimerase paralisa a sntese de RNA, a molcula de RNA liberta-se
da RNA polimerase, a molcula de RNA separa-se da ta de DNA e a RNA
polimerase separa-se da ta molde de DNA. Quando a RNA polimerase
para, uma protena com atividade de helicase desenrola o hbrido RNA-
DNA da bolha de transcrio dando m ao processo de transcrio, essa
protena conhecida como protena r.
102
Gentica Bsica
Figura 16- Processo de transcrio em procariotos
O PROCESSO DE TRANSCRIO EM
EUCARIOTOS
Em linhas gerais a transcrio em eucariotos segue o mesmo padro
do processo de transcrio em procariotos, mas diversos detalhes so dife-
rentes, como o caso das sequncias promotoras e das molculas de RNA
polimerase envolvidas. As RNA polimerases eucariticas dividem-se em
trs categorias diferentes (RNA plimerases I., RNA polimerase II, e RNA
plimerase III), responsveis por transcrever categorias diferentes de RNA,
como ilustrado na tabela a seguir.
Tabela 1 Funes das RNA polimerases eucariticas (PIERCE, 2004).
p ( , )
Tipo de RNA polimerase Tipo de RNA transcrito
RNA polimerase I Grandes rRNA
RNA polimerase II Pr-mRNA, alguns snRNA, e snoRNA
RNA polimeras III tRNA, pequeno rRNA, e snRNA
Ao contrrio da RNA polimerase procaritica, as RNA polimerases
eucariticas no podem iniciar a transcrio de forma autnoma. Todas as
trs RNA polimerases necessitam de fatores proteicos de transcrio para
iniciar a sntese de RNA. Esse fatores de transcrio devem se ligar de forma
apropriada a stios que se ligam a regio promotora do DNA, permitindo
o incio da transcrio. Cada uma dos tipos de RNA polimerase eucaritica
envolve diferentes fatores de transcrio. Os promotores reconhecidos pela
RNA polimerase II so formados por segmentos curtos e muito conser-
vados caracterizados pela sequncia TATAAAA, denominada TATA box,
localizada na posio -30pb. Esse promotor tem um importante papel no
103
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 posicionamento da RNA polimerase para o incio da transcrio. A segunda
regio promotora conservada o CAAT box, localizado geralmente prximo
regio -80pb, possuindo uma sequncia de consenso GGCCAATCT.
Alm dessas duas sequncias promotoras, existem ainda outras regies
conservadas relacionadas ao promotor em eucariotos, envolvendo ainda
diversos fatores basais de transcrio.
Complexos de transcrio envolvendo fator de transcrio e regies
promotoras tambm so necessrios para iniciar a transcrio pelas RNA
polimerases I e III. Os promotores dos genes transcritos por essas duas RNA
polimerases so bastante diferentes daqueles utilizados pela RNA polimerase II.
ELONGAMENTO
Inicialmente as RNA polimerases so liberadas de seus complexos de
iniciao e catalisam o elongamento da cadeia de RNA ao longo da regio
codicante utilizando os mesmos mecanismos j descritos para a transcrio
em procariontes. No incio do processo de elongamento dos precursores
dos mRNA eucariticos so modicadas pela adio de revestimentos de
7 metil guanosina, adicionados quando a cadei de RNA est com cerca de
30 nucleotdeos de comprimento, esse revestimento metilado e possui
uma rara ligao 55 trifosfato. Esse caput de Guanosina metilada na ex-
tremidade 5 importante para o incio do processo de traduo e como
proteo contra a degradao do RNA por nucleases.
TRMINO
As pontas 3 dos RNA transcritos pela RNA polimerase II so geradas
por clivagem endonucleoltica dos transcritos primrios e no pelo trmino
da transcrio. Os eventos de trmino de transcrio ocorre em vrios
stios que esto situados de 1000 a 2000 nucleotdeos aps o stio que ser
posteriormente ps a clivagem a ponta 3.
PROCESSAMENTO DE RNA
Os RNAs pr-mensageiro, ou RNA heterogneo nuclear, so os produ-
tos da transcrio. Vale lembrar que as clulas de bactrias no possuem
pr-mRNA j que nestas a transcrio ocorre simultaneamente a traduo.
104
Gentica Bsica
REVISANDO O CONCEITO DE GENE
Em geral o gene denido como um fator que determina nossas carac-
tersticas hereditrias, mas esse conceito no exatamente o que o gene , e
sim o que ele faz. O gene em sua estrutura um conjunto de nucleotdeos.
Como os genes codicam as protenas, e estas so feitas de aminocidos,
o conceito de gene tambm pode ser denido como uma seqncia de
nucleotdeos que determina uma seqncia de aminocidos. Assim de se
esperar anidades entre esses nucleotdeos e aminocidos, pensando nisso
Francis Crick (1958) armou que as protenas e os genes seriam colineares,
ou seja, o nmero de nucleotdeos em um gene seria proporcional ao nmero
de aminocidos que compem a protena sintetizada. A colinealidade
verdadeira para a maioria de bactrias e vrus, ainda que esses genes sejam
ligeiramente maiores que as protenas por causa das seqncias de suas
extremidades que codicam o incio e o trmino da transcrio. No entanto
o mesmo no pode ser aplicado aos genes eucariticos, inicialmente foram
sido considerados colineares, mas ao passo que a estrutura do DNA foi
sendo mais estudada, percebeu-se que o DNA de eucariontes era muito
maior do que o necessrio aparentemente.
Somente na dcada de 1970 foi realmente comprovado que o DNA
de eucariotos intercalado por seqncias que no codicam protenas.
Percebeu-se por microscopia eletrnica que o lamento de DNA a ser tran-
scrito muito maior que seu mRNA, e que o DNA apresentava seqncias
de nucleotdeos em forma de alas que no so transcritas, no possuindo
correspondentes no mRNA.
Assim a maioria dos genes eucariticos e alguns genes procariticos
apresentam alm das seqncias codicantes chamadas xons, seqncias
no-codicantes chamadas ntrons. Os ntrons e xons so transcritos em
RNA, mas ao nal da transcrio os ntrons so removidos por um me-
canismo chamado splicing e os xons so fundidos num RNA nal.
Figura 17- RNA heterogneo nuclear o o processo de splicing para a obteno do mRNA maduro
(Fonte: http://www.emc.maricopa.edu).
105
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6 O nmero e o tamanho de ntrons variam bastante de organismo para
organismo e de gene para gene, e est relacionado com complexidade do
organismo ou da clula. Bactrias possuem poucos e curtos ntrons enquanto
os genes da maioria dos animais so intercalados por vrios e longos ntrons.
O ntron pode ter de 200 a 50.000 nucleotdeos. Os tipos de ntrons mais
conhecidos atualmente, so:
Tabela 2. Tipos de ntrons (PIERCE, 2004).
Tipo de ntron Localizao Tipo de recomposio
Grupo I Alguns genes de rRNA Auto remoo
Grupo II Genes codificantes de
protenas em mitocndrias e
cloroplastos
Auto remoo
Pr-mRNA nuclear Genes codificantes de
protenas no ncleo
Spliceossmico
tRNA Genes de rRNA Enzimtico
Os ntron auto-recompostos do grupo I e IIpodem realizar sua prpria
remoo se a ajuda de enzimas ou proteinas, mas os ntrons do grupo I e
II realizam sua prpria remoo por mecanismos diferentes. Os ntrons do
grupo I dobram-se em nove hastes em conjunto com reaes de transesteri-
caes para a recomposio. Enquanto que os ntrons do grupo II realizam
reaes de transestericao formando uma estrutura em lao. Os ntrons
do pr-mRNA so os mais conhecidos e possuem mecanismos de remoo
semelhantes ao do grupo II, porm no conseguem se auto remover. Os
ntrons tRNA so encontrados nos genes de tRNA e seu mecanismo de
recomposio est relacionado a enzimas que cortam e ligam o RNA.
Aps a descoberta dos ntrons e maior detalhamento da estrutura do
DNA o conceito de gene j no pode ser o mesmo, visto que este no se
resume a codicao de protenas. O gene passa a ser denido como a
seqncia de DNA que codica uma molcula de RNA, e inclui toda a
unidade de transcrio ( como o promotor, seqncia codicante de RNA
e o nalizador).
O RNA HETEROGNEO NUCLEAR
A transcrio em clulas de procariotos ocorre paralelamente traduo,
enquanto que em clulas de eucariotos a transcrio e a traduo ocorrem
em tempo e espao diferentes. Essa separao da transcrio e da traduo
em estgios diferentes nos eucariontes d s suas clulas a oportunidade de
modicar o mRNA, para s depois traduzi-lo. Assim o transcrito inicial em
106
Gentica Bsica
clulas eucariticas passa por muitas modicaes, e denominado de htRNA.
A maioria dos htRNA eucariticos sofre adies e modicaes em
suas extremidades. Como a adio da cap5 na extremidade 5 e a adio
da cauda Poli A na extremidade 3. Essas adies ocorrem imediatamente
aps a transcrio, e consiste no caso da cap 5 na adio de um nucleo-
tdeo e metilao do nucleotdeo pela adio de um grupo metil (CH3), o
ribossomo ento reconhece a cap 5 e a ela se liga dando inicio a traduo.
O cap5 torna o mRNA mais estvel, sendo a sua formao iniciada an-
tes mesmo do trmino da transcrio, como descrito anteriormente. Na
extremidade 3 de genes eucariticos a RNA polimerase II transcreve se-
qncias depois da regio codicante, para reparar esse efeito, corta-se o
material codicado em excesso e adiciona-se a cauda poli A em seu lugar
num mecanismo chamado de poliadenilao. A cauda poli A assim como a
cap5 proporciona ao mRNA maior estabilidade durante o perodo em que
est disponvel para a traduo. Os mRNA eucariticos que no passam
pela poliadenilao e no recebem a adio da cauda poli A utilizam outra
estratgia para obter maior estabilidade auxilio de uma ribonucleoproteina
(snRNP) conhecida por U7.
PROCESSO DE RECOMPOSIO DE RNA
O processo de recomposio de RNA a remoo dos ntrons vistos
anteriormente quando discutimos sobre o conceito de gene. Para a recom-
posio so necessrias trs estruturas dos ntrons:
1. Stio de corte 5 extremidade do ntron;
2. Stio de corte 3- extremidade do ntron;
3. Ponto de ramicao um nucleotdeo adnina localizado a 18 ou 40
nucleotdeos do stio de corte 3.
Para o processo de recomposio ocorrer necessria formao de
um complexo de protenas e molculas de RNA (snRNPs e RNA nucleares),
a esse complexo d-se o nome de spliceossomo. Inicialmente os xons
anteriores e posteriores so separados por um ntron onde o mRNA
cortado liberando os xons, a extremidade 5 do intron ligada ao ponto de
ramicao, dobrando o ntron em forma de lao e um nucleotdeo guanina
da sequncia de consenso do stio de corte se liga por transestericao ao
ponto de ramicao por um nucleotdeo adenina. A prxima fase consiste
ligar no corte do stio de corte 3 e uma ligao covalente entre ponta
3 do xon 1 e a ponta 5. O ntro ento liberado e volta a conformao
linear rompendo-se do ponto de ramicao e em seguida digerido por
enzimas nucleares.
107
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
Figura 18- Spliceossomo
(Fonte http://www.phschool.com/science/biology_place/biocoach/images/transcription).
A recomposio ocorre no ncleo celular antes que esse atinja o cito-
plasma. No ncleo mecanismos como a transcrio e recomposio ocorrem
provavelmente nos mesmos stios, de forma bastante ordenada. impor-
tante ressaltar que no spliceossomo ocorrem interaes que dependem do
pareamento de bases entre molculas diferentes de RNA, mRNA, snRNA
imprescindveis recomposio.
Interao Ao
U1 + stio de corte 5 Induz ntron a remoo, sempapel direto na
recomposio.
U2 + ponto de ramificao Formao do lao.
U2 + U6 Mantm a ponta 5 do ntron prxima do
ponto de ramificao.
U6 + ponto de corte 5 Posiciona a ponta 5 do ntron prxima ao
ponto de ramificao.
Tabela. Tipos de interaes que ocorrem no spliceossomo (PIERCE, 2004).
108
Gentica Bsica
U5 + ponta 3do primeiro xon Ancora o xon ao spliceossomo e justape as
pontas do xon para a recomposio.
U5 + ponta 3 de um xon e ponta 5 do outro Justape as pontas do xon para a
recomposio.
U4 + U6 Libera U6 para o ntron, sem papel direto.
Existem ainda processos alternativos de recomposio, que possibilitam
as clulas produzir mRNA diferentes a partir da mesma seqncia, podemos
citar como exemplos: a recomposio alternativa que recompe o pr-mRNA
em mais de um modo resultando em mRNAs com seqncias diferentes; e o
multiplos stios de corte 3, no qual dois ou mais stios de corte e poliadenilao
esto presentes produzindo mRNAs de tamanhos diferentes.
Vale ressaltar que alm dos processos de recomposio o mRNA ainda
pode ser alterado de edio do RNA que tambm ocorre aps a transcrio
e altera a seqncia de aminocidos codicada pelo gene pela ao de
RNA guias ou gRNAs que por possurem similaridades com a seqncia
do mRNA acabam pareando-se as suas bases, adicionando cortando ou
deletando o mRNA segundo o molde do gRNA.
CONCLUSO
A molcula de DNA passa pelo processo de replicao para garantir a
hereditariedade das clulas, possibilitando o desenvolvimento de organismos
pluricelulares e as diversas formas de reproduo, utilizando um processo
muito preciso envolvendo diversas molculas que garantem a replicao
semi-conservativa do DNA. Por outro lado, podemos concluir que no
processo de transcrio que o DNA realmente inicia a realizao de sua
funo de fornecimento de informaes genticas que determinam as car-
actersticas das protenas e, participando efetivamente do material gentico
na formao do organismo.
RESUMO
A estrutura do DNA proposta por Watson e Crick levou-os a propor um
modelo para a replicao do DNA. Em 1958 os pesquisadores Meselson e
Stahl conseguiram comprovar que a replicao ocorre realmente de forma
semi-conservativa. A replicao envolve sempre um stio inicial chamado
origem de replicao, sendo o produto da replicao iniciado pelo stio de
origem denominado rplicon. Bactrias possuem geralmente apenas um
stio de origem de replicao, tendo apenas um rplicon. No entanto, em
eucariotos existem diversos pontos de origem e, consequentemente, vrios
rplicons. Em termos moleculares, a abertura da ta de DNA realizada
109
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
por enzimas que catalisam o rompimento das pontes de hidrognio, de-
nominadas DNA helicases. Essas enzimas iniciam, portanto, uma bolha de
replicao, que estabilizada temporariamente pela adio cooperativa de
protenas SSB nos lamentos simples, permitindo a exposio fsica das
molculas unilamentares para o processo de replicao. medida que se
processa a abertura da ta, gerada uma grande fora contrria de toro
em funo do movimento giratrio da ta, resultando em superelicoidizao.
As topoisomerases resolvem o problema da superelicoidizao promovendo
clivagens nas molcula de DNA que passa a girar livremente e elimina a ten-
so de toro. Diversas molculas esto envolvidas no processo de replica-
o, mas as enzimas DNA-polimerases so principais molculas envolvidas,
desempenhando as funes de exonucleoltica e de polimerizao. Existem
diferentes tipos de DNA polimerases, no entanto, todas necessitam de uma
extremidade 3OH livre, de nucleotdeos trifosfatados como matria prima
e de uma ta molde unilamentar de DNA para que possam desempenhar
a funo de polimerizao no sentido 5 3. Para o fornecimento das ex-
tremidades iniciais 3OH livre, uma enzima denominada primase produz
uma pequena molcula de RNA iniciador denominado Primer e, em funo
das tas de DNA serem antiparalelas, uma das tas precisa de apenas um
primer (Fita leading), enquanto a ta, cujo molde unilamentar de DNA
est no sentido 5 3, produzida de forma fragmentada, necessitando de
diversos primers, formando os fragmentos de Okazaki (Fita Lagging). Aps
o processo de reviso da ta, os fragmentos so unidos covalentemente pela
enzima DNA ligase. Esse processo garante que as tas de DNA repliquem
de forma semi-conservativa gerando molculas de ta dupla geneticamente
idnticas de forma muito precisa. A expresso gnica, por outro lado,
diz respeito a funo decodicador de protenas realizadas pelos genes.
Para iniciar esse processo, os genes presentes no DNA so transcritos em
molculas de RNA de diversos tipos pelas enzimas RNA polimerases. A
transcrio dirigida por regies especcas de sinalizao do DNA de-
nominadas promotores, utilizadas pelas RNA polimerazes para delimitar
o incio da regio codicante. As etapas de transcrio so denominadas:
incio, elongamento e trmino. Nos procariontes geralmente as molculas
de RNA no so processadas e os mecanismo de transcrio e traduo
so praticamente simultneos. Nos eucariontes existe o processamento
de molculas de RNA precursoras, como o caso do RNA heterogneo
nuclear, que recebe um caput de Guanosina metilada na extremidade 5, uma
calda de poliadenina e a retirada dos introns e reunio do exons, realizada
em um complexo sistema de processamento denominado splicing.
110
Gentica Bsica
ATIVIDADES
1. A replicao do DNA um mecanismo enzimaticamente muito rigoroso,
pois um nmero muito pequeno de erros condio bsica da sobrevivncia
da espcie. Por que so adicionados erros na replicao?
a) porque a enzima incorpora bases trocadas com baixa freqncia;
b) porque as bases so quimicamente modicadas por enzimas celulares
e transformam-se assim umas nas outras logo depois do processo de rep-
licao;
c) porque a tautomeria de bases confunde a enzima na hora da sntese;
d) porque o mecanismo de reviso induz mutaes;
e) porque radicais livres na clula modicam quimicamente as bases recm-
incorporadas, antes que sejam metiladas.
2. Complete: Cada aminocido levado aos ribossomos para a sntese
de polipeptdeos pelo pareamento de bases entre o __________ de uma
molcula de aminoacil-RNAt e o __________ de um RNAm.
3. Com base nos eventos ocorridos na replicao do DNA, relacione a
segunda coluna de acordo com a primeira:
DNA pol I ( ) Junta os fragmentos de Okasaki
Forquilha de replicao ( ) Curtos segmentos de RNA
5- 3 ( ) Remove os primers e substitui por DNA
DNA ligase ( ) Desenrola o DNA
Primer ( ) Direo da replicao
Fragmentos de Okasaki ( ) Sintetiza DNA na ta contnua e
descontnua
Helicase ( ) regio onde est ocorrendo a replicao
DNA pol III ( ) Curtos fragmentos de DNA na
ta descontnua
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo:
1. Comparar eucariotos e procariotos em relao a organizao gnica, o
transcrito primrio e o RNAm maduro.
2. Explicar porque numa famlia de genes a estrutura de introns e exons
dos genes (como o caso da globina) est preservada para todas as cpias
funcionais. Entretanto, observa-se muito mais conservao entre seqncias
de exons do que de introns ente os mesmos genes?
3. Explicar porque noventa e cinco por cento das protenas humanas tm
entre 150 e 800 aminocidos, mas seus genes tm entre 10 e 100 kb?
4. Explicar porque as molculas de RNAt devem ter, concomitantemente,
caractersticas estruturais particulares e comuns.
111
Replicao do DNA e transcrio
Aula
6
PRXIMA AULA
Na prxima aula voc vai acompanhar o mecanismo de traduo da
informao contida no DNA e as propriedades do cdigo gentico.
REFERNCIAS
EMERSON A. CASTILHO MARTINS, E.A.C., MACIEL-FILHO, P.R.
Mecanismos de expresso gnica em eucariotos, Revista da Biologia
www.ib.usp.br/revista volume 4 junho de 2010.
GRIFFITS, A. J. F. e Col Introduo gentica Editora Guanabara
Koogan, 9a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
SNUSTAD, D. P. Fudamentos Gentica - Editora Guanabara Koogan,
6a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
CDIGO GENTICO E TRADUO
META
Descrever o cdigo gentico envolvendo suas caractersticas gerais e mecanismos de funcionamento.
Apresentar o processo de traduo, demonstrando como as sequncias de nucleotdeos so
decodicadas em sequncias de aminocidos nos ribossomos.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
entender como foi decifrado e qual a funo desempenhada pelo cdigo gentico no processo de
expresso gnica;
identicar as principais caractersticas do cdigo gentico;
entender o processo de traduo e sua relao com a informao gentica de um organismo.
PR-REQUISITO
Conhecimento sobre a estrutura do material gentico, noes bsicas de bioqumica.
Aula
7
114
Gentica Bsica
INTRODUO
Prezado estudante, o assunto dessa aula representa um dos mais fasci-
nantes captulos da gentica por decifrar um dos grandes enigmas da bio-
logia, que explica como a informao gentica armazenada no DNA, por
meio da sequncia de pares de nucleotdeos, pode determinar o fentipo de
um organismo, ou seja, nessa aula voc vai concluir a ideia da colinearidade
entre genes e protenas. Portanto, essa a continuidade da histria iniciada
nas aulas anteriores, que trataram da estrutura do material gentico e da
estratgia utilizada pela clula para produzir molculas intermedirias de
RNA por meio da transcrio. Nessa aula entenderemos o cdigo gen-
tico, uma vez que a linguagem qumica entre cidos nucleicos e protenas
diferente. Enquanto as unidades formadoras dos cidos nucleicos so
os nucleotdeos, nas protenas tais unidades so os aminocidos. Depois
de entendermos o cdigo gentico, podemos passar para o mecanismo de
traduo propriamente dito. Nessa etapa veremos como as protenas so
formadas a partir das informaes provenientes das molculas de RNA
mensageiro, bem como se d a participao de outros tipos de RNA nesse
processo que ocorre nos ribossomos envolvendo diversas macromolculas.
AS PROTENAS E O MATERIAL GENTICO
Antes de passar ao cdigo gentico vamos nos aprofundar um pouco
mais o nosso conhecimento sobre as protenas. Cerca de 15% do peso do
contedo celular formado por protenas. Lembrando que a gua representa
em mdia outros 70% do peso corporal dos organismos, logo podemos
concluir que, excetuando a gua, as protenas formam os componentes
mais abundantes da massa corporal, desempenhando funes vitais para
os seres vivos. Desempenham papel estrutural, enzimtico, de transporte,
hormonais, dentre outros. Isso explica em parte a ideia dos cientistas do
incio do sculo XX, at a dcada de 1940, que pensavam que as protenas
eram o material gentico e no o DNA, como sabemos hoje.
As protenas estavam associadas a maioria dos erros inatos do me-
tabolismo, diversas doenas eram reconhecidas pela ausncia ou modica-
es em protenas. Em indivduos albinos falta a melanina, enquanto nos
pacientes com anemia falciforme a molcula de hemoglobina diferente,
na fenilcetonria o organismo no consegue metabolizar a fenilalanina
por falta de uma enzima. Isso sem falar na cor da pele, dos olhos, tipo de
cabelo. Todas essas caractersticas fenotpicas nos remetem s protenas.
Alm disso, sendo as protenas to diversicadas com seus 20 tipos de
aminocidos e sendo to importantes para todos os seres vivos, parecia
muito lgico que as protenas fossem mesmo o material gentico. Por
outro lado, os cidos nucleicos nessa poca representavam um candidato
115
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
sem votos. Como uma estrutura to simples, contendo apenas 4 tipos de
unidades (os nucleotdeos) poderia gerar toda a informao necessria para
dar conta de toda a diversidade gentica dentro e entre as espcies? Ento,
quando na dcada de 1950 cou comprovado, sem nenhuma sombra de
dvida, que candidato azaro O DNA era o material gentico, mas
sobrou uma grande dvida para a comunidade cientca: uma vez que so
os cidos nucleicos que contm as informaes genticas, como eles esto
relacionados sequncia de aminocidos das protenas?
Vamos entender melhor esse questionamento, vejam a estrutura qumica
de um nucleotdeo e compare-o com a estrutura de um aminocido padro.
Figura 1
Lembre-se como as unidades dos nucleotdeos se ajustavam facilmente
entre si, como visto na aula de replicao e transcrio, mas agora quando
observamos um aminocido, sua estrutura qumica diferente, sendo for-
mada por um carbono assimtrico, um grupo carboxila, um grupo amino,
um hidreto e um grupo lateral R, que varia de aminocido para aminocido
como veremos adiante. Outro aspecto a ser analisado o nmero de uni-
dades diferentes na formao de protenas e nos cidos nucleicos. Enquanto
nos cidos nucleicos existem apenas quatro tipos de nucleotdeos (A,C,T,G
no DNA e A,U,G,C no RNA), as protenas so formadas comumente por
20 diferentes tipos de aminocidos. Ento, se os cidos nucleicos portam as
informaes genticas e as protenas so formadas a partir das instrues
provenientes do material gentico, como essa informao repassada?
Vem da a analogia com um cdigo, o cdigo gentico. Entretanto, antes
de falar do cdigo gentico vamos saber um pouco mais sobre a estrutura
das protenas.
ESTRUTURA PROTEICA
As sequncias de aminocidos ligadas covalentemente so denominadas
polipeptdeos. Essas estruturas so formadas por at 20 tipos diferentes de
aminocidos, que so mostrados na gura 2.
116
Gentica Bsica
Figura 2.
Como voc pode perceber nas guras anteriores, os aminocidos dife-
rem entre si apenas quanto aos grupos laterais (R). Essa nica diferena
bastante signicativa, uma vez que as bioqumicas so completamente
alteradas a depender do tipo de grupamento R est presente em cada ami-
nocido. Essas cadeias laterais podem ser classicadas em quatro tipos:
1- hidrofbicos ou apolares; 2- hidroflicos ou polares; 3- cidos ou nega-
tivos; e 4- bsicos ou de carga positiva. Essa diversidade estrutural explica
a enorme diversidade funcional das protenas.
Em termos estruturais, quando dois ou mais aminocidos so ligados
eles formam uma estrutura denominada peptdeo. Essa ligao covalente,
denominada de ligao peptdica, ocorre por meio de uma reao de desid-
ratao. A gura 3 ilustra a formao de uma ligao peptdica para a for-
mao de um dipeptdeo. Estruturas envolvendo menos de 10 aminocidos
so denominadas oligopeptdeos e estruturas maiores que podem chegar a
milhares de aminocidos, com o o da seda, so denominados polipeptdeos.
117
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
Figura 3 Ligao peptdica entre 4 aminocidos.
(Fonte: http://allchemy.iq.usp.br/).
Ento, como observado na gura 3, as protenas so polmeros forma-
dos pela reao de condensao entre aminocidos: o grupo amino de um
dos aminocidos se liga ao carboxila do outro, havendo eliminao de uma
molcula de gua e a formao de uma ligao peptdica (grupo amida).
Considerando os 20 aminocidos, numa protena formada por um pep-
tdeo com 50 unidades, teramos 2050 combinaes possveis. Observem
que mesmo em oligopeptdeos podemos ter bilhes de combinaes dife-
rentes. Isso equivale mais ou menos a dizer: quantas palavras diferentes
voc pode inventar utilizando o alfabeto inteiro?
A sequncia de aminocidos representa apenas a chamada estrutura
primria das protenas. Um protena pode ter ainda outros nveis estruturais:
a estrutura secundria, diz respeito s relaes espaciais entre os aminoci-
dos; a estrutura terciria refere-se a forma de dobramento tridimensional
das protenas, enquanto a estrutura quaternria est relacionada a juno
de dois ou mais polipeptdeos para formar uma estrutura complexa multi-
mrica. A gura 4 ilustra os nveis estruturais das protenas.
118
Gentica Bsica
Figura 4- Nveis estruturais das protenas.
(Fonte: http://www.cientic.com).
A estrutura primria de um polipeptdeo determinada genetica-
mente durante o processo de traduo que veremos a diante nessa aula. A
maioria das molculas de polipeptdeos se dobrar espontaneamente em
funo das caractersticas bioqumicas estabelecidas em suas estruturas
primrias, de tal modo que o pH, a temperatura, sais e outros compostos
tambm podem mudar a estrutura proteica levando a desnaturao da
protena. No o nosso objetivos aqui nos aprofundar nessas questes
estruturais das protenas, mas caso voc queira se aprofundar no tema,
voc pode utilizar o seguinte endereo da revista eletrnica do depar-
tamento de qumica da UFSC na internet:http://www.qmc.ufsc.br/
qmcweb/artigos/proteinas.html.
O CDIGO GENTICO
A simples lgica nos diz que, se os pares de nucleotdeos so letras
de um cdigo, ento a combinao das letras poderia formar palavras que
representariam os diferentes aminocidos. Desde o nal da dcada de 1950
vrios pesquisadores reconheceram que, apesar de estar claro que o material
119
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
gentico formado pelos cidos nucleicos, existiria uma colinearidade entre
DNA e protenas (ou seja, de que as protenas tivessem suas sequncias
de aminocidos determinadas pelos genes) ainda era muito difcil decifrar
como seria possvel um sistema com 4 unidades bsicas no DNA poderia
decodicar 20 tipos diferentes de aminocidos. Com a descoberta do RNA
mensageiro intermedirio, a pergunta passou a ser: como a sequencia de
4 nucleotdeos do mRNA poderia especicar a sequncia de aminocidos
de um polipeptdeo?
A descoberta do cdigo gentico foi uma tarefa rdua de dezenas de
pesquisadores, iniciada na dcada de 1960. Uma das primeiras perguntas a
serem respondidas seria a de quantos nucleotdeos seriam necessrios no
mRNA para decodicar um aminocido, ou seja, quantos nucleotdeos teria
um cdon e que cdons especicam quais aminocidos?
Essas perguntas levaram a uma onda frentica de pesquisas, comparada
a uma corrida, entre pesquisadores. Em 1966 grupos de pesquisa liderados
por Marshall Nirenberg e pelo indiano Har Gobind Khorana decifraram,
com outros pesquisadores dos EUA, da Inglaterra e da Frana, a srie
completa de "palavras" do cdigo gentico. Tambm foge ao nosso objetivo
aqui detalhar todos os passos que levaram a decifrao do cdigo gentico,
mas caso voc esteja interessado em maiores detalhes sobre esse assunto,
navegue para o seguinte endereo: http://cienciahoje.uol.com.br/colunas/
por-dentro-das-celulas/vida-e-informacao
AS CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO
1. Cada cdon no mRNA formado por 3 nucleotdeos
Desde 1954 os cientistas especulavam que os cdons deveriam conter
um mnimo de trs nucleotdeos, uma vez que cada posio do mRNA s
pode ser ocupada por um nucleotdeo e considerando que temos apenas
quatro nucleotdeos (A,U,C,G), teramos apenas quatro cdons para os 20
aminocidos diferentes. Se o cdon fosse uma combinao de dois nucleo-
tdeos (por ex., AU, CG, etc.), teramos 42=16 cdons possveis, nmero
insuciente para codicar os 20 tipos de aminocidos. Com trs nucleotdeos
por cdon teramos 43=64 cdons possveis, nmero mais que suciente
para codicar os 20 aminocidos diferentes. A expectativa terica logo se
conrmou quando em 1961 Francis Crick, usando mutaes em bactrias,
conrmou que cada cdon representado por uma trinca de nucleotdeos.
2. O cdigo gentico redundante
Essa foi uma constatao obvia logo que se conrmou o cdon em
trincas, umas vez que 64 combinaes excedia o nmero de 20 aminocidos,
o que fortalecia a hiptese de que mais de um cdon poderia ser utilizado
para decodicar o mesmo aminocido. Francis Crick em seus trabalhos
sugeriu que o cdigo gnico seria redundante. Pelo menos alguns dos ami-
120
Gentica Bsica
nocidos deveriam ser especicados por duas ou mais trincas diferentes.
Se apenas 20 trincas fossem usadas e sendo as outras 44 sem sentido por
no codicarem nenhum aminocido, ento a maioria das mudanas na
matriz de leitura deveria produzir palavras sem sentido para o processo de
sntese de protenas. Se fosse este o caso, ento a supresso das mudanas
de matriz de leitura do RNA mensageiro raramente, ou nunca, funcionaria.
Entretanto, se todas as trincas, ou combinaes de nucleotdeos, especicas-
sem aminocidos, ento as palavras mudadas resultariam simplesmente na
alterao de aminocidos nas protenas. Assim Crick percebeu que muitos
aminocidos devem ser codicados por mais de um cdon, caracterizando
assim a redundncia do cdigo gentico. Apenas o triptofano e a metionina
so codicados por um s cdon. Os demais so especicados por dois,
trs ou at mesmo por seis cdons, como o caso de alguns aminocidos,
tal como a leucina. Cdons que especica mais de um aminocido so ditos
sinnimos, ou seja, so cdigos diferentes que tem o mesmo signicado.
3. O cdigo gentico no tem superposio
Cada nucleotdeo no mRNA pertence a apenas um cdon, mas existem
algumas raras excees de superposio em microrganismos.
4. O cdigo gentico no tem pontuao
No existem vrgulas ou outra forma de pontuao dentro das regies
codicantes nas molculas de mRNA que forneam informaes espec-
cas que diferenciem um cdon de outro adjacente. Durante a traduo os
cdons so lidos sequencialmente. Isso faz com que mutaes gnicas,
como a adio ou deleo possam mudar a matriz de leitura do mRNA,
podendo mudar completamente a sequncia de aminocidos da protena
ou mesmo determinar a formao de uma protena truncada (parcial). Em
funo do cdigo gentico ser em trincas, mutaes que deletem ou insiram
3 ou mltiplos de 3 nucleotdeos, geralmente geram danos apenas pontuais
na protena formada, enquanto uma nica deleo de um nucleotdeo levar
a completa mudana de matriz de leitura do ponto mutado em diante.
5. O cdigo gentico ordenado
Essa informao implica em dizer que o os cdons que determinam
o mesmo aminocido ou aminocidos com propriedades qumicas semel-
hantes geralmente so muito parecidos, diferindo entre si geralmente por
apenas um nucleotdeo. Muitas vezes o nucleotdeo diferentes o ltimo da
trinca, o que levou a formulao da hiptese de oscilao. Essa hiptese foi
sugerida por Crick e diz que o terceiro nucleotdeo da trinca se liga durante
o pareamento de bases de forma menos rgida e isso est relacionado tanto
a redundncia, quanto a ordenao, alm de limitar a relao entre cdons
e tRNAs especcos.
6. O cdigo gentico quase universal
Essa uma caracterstica muito importante e diz respeito a conservao
do cdigo gentico, ou seja, o seu signicado o mesmo na maioria dos
121
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
seres vivos, salvo algumas poucas excees no cdigo das mitocndrias,
leveduras e em alguns microrganismos. Essa universalidade um dos prin-
cipais argumentos a favor da hiptese de uma nica logenia para os seres
vivos, ou seja, todos somos parentes em maior ou menor grau, uma vez
que todos os seres vivos compartilham o mesmo cdigo gentico.
7. O cdigo gentico possui cdon de incio e cdons de nalizao
Toda traduo comea e termina com cdons especcos de sinalizao.
O aminocido iniciador no processo de traduo a N-formilmetionina.
Os cdons nalizadores no decodicam aminocidos e indicam o nal
do processo de traduo tanto em procariontes quanto em eucariontes.
Uma das primeiras indicaes da existncia de cdons nalizadores veio
em 1965 do trabalho de Brennet com fago T4. Bennet analisou algumas
mutaes (m1-m6) em um nico gene que controla a protena do capsdeo
do fago. Estes mutantes tinham duas coisas em comum. Primeiro, a protena
do capsdeo de cada mutante era uma cadeia polipeptdica mais curta que
a do tipo selvagem. Segundo, a presena de uma mutao supressora (su)
no cromossomo hospedeiro faria com que um fago desenvolvesse uma
protena de capsdeo do comprimento de cadeia normal (tipo selvagem),
a despeito da presena da mutao m. Brenner examinou as extremidades
das protenas encurtadas e compassou-as com a protena tipo selvagem,
registrando para cada mutante o aminocido seguinte que seria inserido para
continuar a cadeia tipo selvagem. Estes aminocidos para seis mutaes
eram glutamina, lisina, cido glutmico, tirosina, triptofano e serina. No
h um padro imediatamente bvio para estes resultados, mas Brenner de-
duziu brilhantemente que alguns cdons para cada um destes aminocidos
so similares, pois cada um pode mutar para o cdon UAG por uma nica
mudana em um par de nucleotdeos do DNA. Ele postulou, portanto,
que UAG o cdon nalizador (de trmino), um sinal para o mecanismo
traducional de que a protena agora est completa. UGA foi o primeiro
cdon nalizador a ser decifrado. Os cdons UAG e UAA tambm so
cdons nalizadores e, em geral, so chamados de cdons sem sentido,
porque no determinam nenhum aminocido.
O CDIGO COMPLETO
A gura a seguir mostra a relao dos 64 codons aos seus respectivos
aminocidos ou sinais de trmino.
122
Gentica Bsica
Figura 5- Cdigo gentico
(Fonte: http://www.ufpe.br/biolmol/Genetica-Medicina/sintese_proteica.htm).
O RNA TRANSPORTADOR (TRNA)
Os tRNAs so formados por sequncias pequenas, com 70 a 90
nucleotdeos. Existe de um a quatro molculas de tRNA para cada um dos
aminocidos e, como o nome sugere, o RNA transportador o responsvel
direto pelo transporte de aminocidos para a sntese proteica. A sequncia
completa de nucleotdeos do tRNA de uma espcie de levedura foi publi-
cada ainda em 1965. Isso foi possvel em funo do pequeno tamanho da
molcula, quando comparado aos outros polmeros de cidos nucleicos. As
molculas de tRNA precisam atender a trs caractersticas fundamentais: 1.
possuir uma regio denominada anticdon para se parear ao cdon espe-
cco do mRNA; 2. possuir um stio de ligao para a enzima aminoacil-
tRNA sintetase correta para poder ser ativado pelo aminocido correto e;
3. cumprir sua funo de adaptador, ligando-se aos stios apropriados no
ribossomo.
123
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
O TRNA RECONHECE O CDON
o RNA Transportador ou seria o prprio aminocido que reconhece-
ria o mRNA que codica um aminocido? Um experimento muito convin-
cente respondeu a esta pergunta. No experimento, um aminoacil- tRNA
(AA-tRNA), o cisteinil- tRNA (tRNAcis, o tRNA especco para cistena)
carregado com cistena foi tratado com hidreto de nquel, que converteu a
cistena (enquanto ainda ligada ao tRNACis) em outro aminocido, a alanina,
sem afetar o tRNA: Cistena-tRNACis-hidreto de nquel alanina-tRNACis.
A protena sintetizada com esta espcie hbrida sempre tinha alanina
onde espervamos cistena. Assim, o experimento demonstrou que os ami-
nocidos no reconhecem o cdon. Eles so inseridos na posio adequada
porque os tRNA funcionam como adaptadores que conhecem os cdons
de mRNA e inserem seus aminocidos apropriadamente. Esperaramos
portanto, encontrar algum stio no tRNA que reconhecesse o cdigo do
mRNA por pareamento complementar de bases. Esse stio denominado
anticdon. A ligao do anticdon do tRNA ao cdon do mRNA segue as
regras da ligao complementar e antiparalela, ou seja, o cdon do mRNA
lido de 5' para 3' por um anticdon pareado em orientao invertida (3'-5'
). O mRNA, portanto, especica a sequncia de aminocidos agindo por
intermediao do tRNA.
Figura 6- Ajuste entre um cdon do mRNA e o anticdon do tRNA
124
Gentica Bsica
A LIGAO DO AMINOCIDO AO TRNA
Para que seja possvel a ocorrncia da traduo, os ribossomos precisam
receber os aminocidos especcos carreados pelo RNA transportador (ou
RNA de transferncia). A relao entre o cdon do mRNA e o anticdon
do tRNA mediada pelo ribossomo uma etapa fundamental da traduo. O
tRNA pode estar sob duas formas, descarregado, ou seja, sem estar ligado ao
seu aminocido especco ou sob a forma carregada, pronto para participar
do processo de traduo. Para o tRNA sair do estado descarregado para o
estado carregado, necessrio que a ligao com o aminocido seja catalisada
por uma enzima especca denominada Aminoacil tRNA Sintetase. Uma c-
lula normal tem em mdia de 30 a 50 molculas diferentes de tRNA. Apesar
de cada tRNA poder se associar a apenas um dos 20 tipos de aminocido,
todo tRNA apresenta na sua extremidade 3 a sequncia CCA de nucleo-
tdeos, sendo que a ligao do grupo carboxila do aminocido se dar com
a extremidade 3do tRNa no grupo hidroxila do nucleotdeo Adenina. Essa
ligao ser catalisada por uma dos 20 tipos de Aminoacil tRNA Sintetase
presentes na clula, cada uma especca para um determinado aminocido e
para os tRNAs que decodicam esse mesmo aminocido (Figura 7).
Figura 7 Ligao do tRNA ao aminocido numa reao catalisada pela enzima Aminoacil tRNA
sintetase.
125
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
Figura 8 Ligao do tRNA ao aminocido numa reao catalisada pela enzima Aminoacil tRNA sintetase.
RIBOSSOMOS
Os ribossomos so estruturas complexas encontradas geralmente associadas
s membranas internas celulares formadas na proporo aproximada de 50% de
RNA ribossomal e 50% protenas. Os ribossomos durante o processo de traduo
do mRNA possuem duas subunidades de tamanhos diferentes, chamadas sub-
unidade maior subunidade menor, ligadas entre, mas que se dissociam ao nal
do processo de traduo. Esta organizao bsica comum entre procariontes
e eucariontes, entretanto, as molculas de rRNA e protenas signicativamente
diferentes, o que possibilita diferenciar os ribossomos dos dois grupos. O RNA
ribossomal produzido a partir da transcrio do DNA; nos eucariontes esse
processo ocorre no nuclolo, que uma regio especializada do ncleo para a
produo de molculas de rRNA. Essas molculas so produzidas na forma de
precursores bem maiores que, de forma parecida com o que o ocorre com o
mRNA, so processadas em rRNA que ainda sofrem metilaes, processo que
parece proteger o rRNA da degradao pelas ribonucleases no citoplasma. Os
genes que decodicam o rRNA geralmente esto presentes em muitas cpias
nos genomas de todos os organismos estudados at hoje. Essa redundncia
importante em funo da grande quantidade de ribossomos nas clulas.
Os ribossomos presentes em clulas procariticas possuem uma sub-
unidade maior com coeciente de sedimentao em gradiente de densidade
de 50S (Svedberg) e outra menor com 30S. A estrutura completa, com o
arranjo das duas subunidades nos procariontes apresenta coeciente de
sedimentao 70S. Nos eucariontes, a subunidade maior tem coeciente
60S e a menor 40S, formando uma estrutura de 80S quando as duas partes
encontram-se associadas. A gura a seguir mostra em detalhes os compo-
nentes que formam os ribossomos de clulas procariticas e eucariticas.
126
Gentica Bsica
Como pode ser observado na gura seguinte, os ribossomos possuem
trs importantes stios de ligao. O stio A, ou stio aminoacil, liga o tRNA
que chega carregado com um aminocido (Aminoacil-tRNA), enquanto o
stio P ou stio peptidil, liga o tRNA que est associado cadeia crescente
de aminocidos. O stio E, ou stio de sada liga-se ao tRNA descarregado,
que parte.
Figura 9- Stios ribossmicos
TRADUO
Diversos componentes so requeridos para a sntese de protenas me-
diada pelos ribossomos. Estes incluem todos os aminocidos, o mRNA a
ser traduzido, os tRNA, ribossomos, molculas fornecedoras de energia e
fatores proteicos necessrios iniciao, alongamento e trmino da cadeia
polipeptdica. A traduo o processo pelo qual o mRNA fornece um
molde para a sntese de um polipeptdeo.
Podemos separar didaticamente o processo de traduo de protenas
em trs etapas distintas. Iniciao, alongamento e trmino. Examinemos
cada uma destas etapas em detalhes, usando os procariontes como exemplo.
INICIAO
Alm do mRNA, dos ribossomos e das molculas especcas de tRNA,
o processo requer a participao de vrios fatores, chamados de fatores de
iniciao IF1, IF2 e IF3. em E. coli e na maior parte dos outros organismos
procariontes, o primeiro aminocido em qualquer novo polipeptdio sintetiza-
do a N-formilmetionina. Ele inserido por um tRNA iniciador chamado de
tRNAfMet. Este tRNA iniciador tem o anticdon normal de metionina, mas
insere N-formilmetionina ao invs de metionina (Em eucariontes o amino-
cido iniciador a metionina). Em E. coli, AUG e GUG, e em raras ocasies
UUG, servem como cdons iniciadores. Quando uma destas trincas esta
presente na posio iniciadora, ela reconhecida pelo N-formilMet-tRNA,
e a metionina aparece como o primeiro aminocido da cadeia.
127
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
STIO DE LIGAO DO RIBOSSOMO
Como o cdon correto de iniciao selecionado dentre os cdons
AUG e GUG em uma molcula de mRNA? John Shine e Lynn Dalgarno
foram os primeiros a observar que os verdadeiros cdons de iniciao eram
precedidos da sequncia que se pareava bem como a ponta 3 do rRNA 16s
S presente na subunidade menor do ribossomo. Essa sequncia de ajuste
inicial do ribossomo ao primeiro cdon denominada Shine-Delgarno em
homenagem aos dois pesquisadores.
Figura 10 Ajuste inicial do mRNA subunidade menor do ribossomo atravs da sequncia de
Shine-Delgarno (shine-delgarno.jpg)
1. A primeira etapa da iniciao a ligao do mRNA subunidade 30S.
A ligao estimulada pelo fator de iniciao IF3. Quando no esto par-
ticipando da sntese de protenas, as subunidades ribossomais existem sob
a forma livre. Elas se juntam em ribossomos completos como resultado
do processo de traduo.
2. O fator de iniciao IF2 liga-se a GTP e ao fator de iniciao fMet-tRNA
ao complexo de iniciao, levando o fMet-tRNA para o stio P (peptidil)
do ribossomo.
3. Uma protena ribossomal quebra o GTP ligado a IF2, ajudando a ativar
a montagem das duas subunidades ribossomais. Neste estgio, os fatores
IF2 e IF3 so liberados.
ALONGAMENTO
As etapas do alongamento so auxiliadas por trs fatores proticos:
EF-TU, EF-TS e EF-G, as etapas so as seguintes:
1.O fator do alongamento EF-TU serve de mediador da entrada do ami-
noacil-tRNA no stio A. Para isto, o EF-TU-GTP ativado se liga ao tRNA.
Em seguida, a hidrlise de GTP do complexo para GDP ajuda a ativar a
ligao do aminoacil-tRNA ao stio A, quando EF-TU liberado, deixando
o novo tRNA no stio A.
128
Gentica Bsica
2.O fator de alongamento EF-Ts o mediador da liberao de EF-Tu-GDP
do ribossomo e a regenerao de EF-Tu-GTP.
3.Na etapa de translocao, a cadeia polipeptdica do peptidil-tRNA
transferida para o aminoacil-tRNA na stio A, em uma reao catalisada
pela enzima peptidiltransferase. O ribossomo ento se move um cdon
mais adiante ao longo do mRNA (na verdade o mRNA que se move pelo
ribossomo que geralmente est ancorado a alguma membrana), indo no
sentido 53. Esta etapa medida pelo fator de alongamento EF-G e
ativada pela quebra de um GTP em GDP. Esta ao libera o tRNA descar-
regado do stio P e transfere o peptdil-tRNA recm-formado do Stio A para
o stio P, deixando o stio P livre para a ligao do novo tRNA carregado
com outro aminocido. Essa etapa se repete sucessivamente, envolvendo a
formao da ligao peptdica pela enzima peptidil transferase e a liberao
do tRNA do stio A para o stio P, at que o stio a seja ocupado por uma
trinca que determine um sinal de trmino.
TRMINO
Na discusso inicial do cdigo gentico, descrevemos os trs cdons de
trmino da cadeia UAG, AUU ou UGA. Curiosamente estas trs trincas no
so reconhecidas por um tRNA, mais por fatores proteicos, chamados de
fatores de liberao, que so abreviados por RF1 e RF2. O RF1 reconhece as
trincas UAA e UAG, e o RF2 reconhece UAA e o UGA. Um terceiro fator
RF3, tambm ajuda a catalisar o trmino da cadeia. Quando o peptidil-tRNA
esta no stio P, os fatores de liberao, em resposta aos cdons de trmino
de cadeia, ligam-se ao stio A. O polipeptdio ento liberado do stio P, e
os ribossomos se dissociam em duas subunidades, em uma reao ativada
pela hidrlise de uma molcula de GTP. As etapas da traduo podem ser
observadas na gura a seguir. No entanto, paara voc entender o processo
de traduo com maior facilidade, sugerimos que voc procure algumas
animaes que podem ser encontradas facilmente na internet. Uma dessas
animaes pode observada seguindo a url: http://www.brookscole.com/
chemistry_d/templates/student_resources/shared_resources/animations/
Quando entrar na pgina, escolha a guia Protein Synthesis Animation and
Exercise.
129
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
Figura 11- Etapas do processo de traduo
130
Gentica Bsica
CONCLUSO
O cdigo gentico explica como quatro nucleotdeos controlam a
informao para determinar a sequncia de aminocidos no processo de
formao das protenas. Existe uma colinearidade entre genes e protenas e
a traduo a efetivao dessa relao, quando a informao gentica levada
pelo RNA mensageiro decodicada na forma de um polipeptdeo, ou seja,
a ligao entre gentipo e fentipo uma protena: a maioria dos genes afeta
o fentipo codicando protenas. A corrida cientca iniciada na dcada de
1950 levou a total decifrao do cdigo gentico, ao conhecimento de suas
propriedades e ao reconhecimento dos fatores envolvidos no processo de
traduo. Nessa aula foi possvel observar o papel desempenhado pelos
ribossomos, pelo mRNA, tRNA e rRNA, suas caractersticas e como es-
sas unidades esto envolvidas com a produo de protenas. Porm, uma
importante propriedade do cdigo gentico, sua universalidade, deve ser
lembrada. Essa propriedade gera um importante registro do elo que liga
todos os seres vivos e nos remete a uma origem ancestral comum, uma
vez que no por acaso que compartilhamos um mesmo sistema, sendo o
cdigo gentico algo to especco, deixando claro que pertencemos todos,
das bactrias s plantas e animais, mesma rvore da vida.
RESUMO
O cdigo gentico e a traduo mostram como a informao gentica
armazenada no RNA mensageiro que foi transcrito pelo DNA, pode deter-
minar a sequncia de aminocidos de uma protena e participar na formao
do fentipo de um organismo. Cerca de 15% do peso do contedo celular
formado por protenas, que por sua vez, desempenham funes vitais
para os seres vivos. A unidade formadora das protenas o aminocido,
sua estrutura qumica formada por um carbono assimtrico, um grupo
carboxila, um grupo amino, um hidreto e um grupo lateral R, que varia de
aminocido para aminocido, conferindo a eles diferentes propriedades
bioqumicas. As sequncias de aminocidos ligadas covalentemente so
denominadas polipeptdeos. Essas estruturas so formadas por at 20
tipos diferentes de aminocidos e possuem uma enorme diversidade nos
seres vivos. O cdigo gentico o modo pelo qual a informao gentica
armazenada na sequncia de nucleotdeos de um gene. As caractersticas
do cdigo gentico podem ser resumidas em algumas propriedades: o c-
digo gentico formado por trincas de nucleotdeos no mRNA , ou seja, 3
nucleotdeos decodicam um aminocido especco; redundante porque
mais de um cdon pode especicar o mesmo aminocido e a relao entre
o cdon e o aminocido se d pelo tRNA que carrega um aminocido es-
pecco adequado ao seu anticdon; o cdigo gentico quase universal,
131
Cdigo gentico e traduo
Aula
7
ou seja, serve para todos os seres vivos, com exceo de alguns cdons;
no sobreposto, ou seja, possui apenas uma matriz de leitura que estab-
elecida pelo cdon de iniciao, que geralmente recebe a n-formil metionina
em bactrias (ou a metionina em eucariontes). O processo de traduo
compreende as fases de incio, alongamento e trmino e cada mRNA pode
ser simultaneamente traduzido por vrios ribossomos e muitas protenas
ainda no esto prontas ao nal da traduo, existindo a possibilidade de
que sejam modicadas por mecanismos ps-traducionais.
ATIVIDADES
1. Baseando-se na lista de cdons e aminocidos abaixo, quais das seguintes
armaes so corretas?
AGU = serina AGC = serina
AAU = asparagina AAC = asparagina
AUG = metionina AUA = isoleucina
a) o cdigo gentico degenerado
b) a alterao de um nico nucleotdeo no DNA que dirige a sntese destes
cdons poderia levar substituio de uma serina por uma asparagina no
polipeptdeo.
c) a alterao de um nico nucleotdeo no DNA que dirige a sntese destes
cdons necessariamente levaria substituio de um aminocido no poli-
peptdeo codicado.
d) um tRNA com o anticdon ACU se ligaria a um ribossomo na presena
de um destes cdons.
2. Responda:
a) Em procariotos, a maioria da cadeias polipeptdicas so iniciadas com o
aminocido ______, cujo cdon ______.
b) Num sistema de sntese de protenas in vitro, que permita o incio e
trmino da sntese em qualquer sequncia de RNA, que peptdeo seria
produzido pelo poli-ribonucleotdeo 5'-UUUGUUUUUGUU-3' ? Indique
qual o aminocido N-terminal e o C-terminal do polipeptdeo obtido.
c) O cdon AUG funciona tanto para iniciar uma cadeia polipeptdica
quanto para dirigir a incorporao de uma metionina em posies internas
de uma protena. Quais os mecanismos de seleo do cdon AUG para a
iniciao da traduo em procariotos?
3. O antibitico Cloranfenicol se liga ao ribossomo 50S e inibe a atividade
da peptidil-transferase, enquanto o cido fusdico se liga ao fator de elon-
gao G (EF-G) e inibe a liberao de EF-G do complexo EF-G/GDP;
as Quinolonas se ligam subunidade A da DNA girase (topoisomerase) e
impede o superenrolamento do DNA, impedindo assim a sntese de DNA.
Que efeito (s) voc esperaria em um tratamento anti-bacteriano, usando
cada um destes antibiticos?
132
Gentica Bsica
AUTOAVALIAO

Aps estudar esta aula, consigo:
Explicar
1.Como algumas aminoacil-tRNA sintetases podem atingir elevado grau de
preciso nas reaes, mesmo sem ter um mecanismo hidroltico de reviso ?
2. Explicar porque as molculas de tRNA devem ter, ao mesmo tempo,
caractersticas estruturais comuns aos outros RNAs e particulares?
PRXIMA AULA
Na prxima aula compreenderemos os mecanismos geradores de mu-
taes no material gentico e suas conseqncias
REFERNCIAS
GRIFFITHS AJF, MILLER JH, SUZUKI DT, LEWONTIN RC, GEL-
BART WM. 2009. Introduo Gentica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 794p.
PIERCE BA. 2004. Gentica: um enfoque conceitual. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 758p.
SNUSTAD DP, SIMMONS MJ. 2008. Fundamentos de Gentica. 4 ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 903p.
MUTAO E REPARO DO DNA
META
Discutir os principais mecanismos geradores de mutao e suas conseqncias, assim como o papel
dos mecanismos de reparo do DNA na manuteno da estabilidade e sobrevivncia dos organismos.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
compreender a importncia da preciso dos processos biolgicos para a sobrevivncia dos
organismos;
compreender a funo e importncia das mutaes gnicas na gerao da variabilidade,
entender a origem e efeito das mutaes sobre o funcionamento celular;
dompreender o funcionamento dos diversos sistemas de reparo do DNA para a manuteno da
estabilidade do material gentico.
PR-REQUISITOS
Para alcanar os objetivos propostos o aluno dever recorrer aos seus conhecimentos de sobre
estrutura e funcionamento do DNA, comsultando as aulas anteriores e a bibliograa indicada.
Aula
8
134
Gentica Bsica
INTRODUO
A continuidade, preciso e delidade dos processos biolgicos so essen-
ciais para a manuteno da vida. No entanto, o material biolgico est inserido
no meio ambiente onde os indivduos sobrevivem e precisam responder a ele.
As respostas geradas pelos organismos ao meio podem causar danos
ao material gentico e ao funcionamento dos processos biolgicos. No en-
tanto, os erros no material gentico gerados sejam de maneira espontnea
ou induzida, tornam-se o motor da evoluo, uma vez que fornecem novas
combinaes ao genoma das espcies.
Mutaes so alteraes herdveis na seqncia no material gentico, que
fornecem grande variabilidade ao conjunto gnico de uma populao.
O termo mutao tem 2 signicados, pois tanto o processo quanto o
efeito. Como processo descreve os mecanismos geradores de alteraes no
material gentico, como o efeito dessas alteraes no organismo afetado.
IMPORTNCIA
Durante o ciclo de vida tanto de clulas quanto de organismos, a diversi-
dade gentica e seus fentipos so geradas por 2 mecanismos: a recombinao
gnica e a mutao. Os dois processos so essenciais para a sua sobrevivncia,
mas, cada um deles representa um papel na gerao da diversidade.
A recombinao um processo mais ou menos constante durante a
formao dos gametas (Meiose) e tem o papel de rearranjar o conjunto
gnico de um organismo, gerando novas combinaes a partir de um mate-
rial pr-existente, fornecido pelos conjuntos gnicos dos genitores.
Com a mutao, o repertrio de genes pode ser alterado, gerando
novas verses do material pr-existente. Do ponto de vista evolutivo, novas
verses gnicas geram novos fentipos (ou opes), e , consequentemente,
no numero de respostas que um organismo possa dar ao seu meio. Por isso
as mutaes so o motor da evoluo!
importante lembrar que as mutaes so raras e o so por um bom
motivo: os processos biolgicos, especialmente o funcionamento do ma-
terial gentico, deve ser preciso. Seus efeitos vo depender do perodo de
desenvolvimento, do tipo de clula e de sua dominncia.
As mutaes podem ocorrer em qualquer clula, somtica ou germi-
nativa; a diferena, no entanto, est no efeito a longo prazo. As mutaes
somticas ocorrem em clulas somticas e o efeito vai depender do perodo
de desenvolvimento: quanto mais cedo, mais divises essas clulas sofrero,
levando o defeito para um numero maior de clulas. Se o defeito ocorre em
uma clula germinativa, seus efeitos reetem diretamente na prole.
135
Mutao e reparo do DNA
Aula
8
As alteraes no material gentico podem se dar tanto no numero como
na estrutura dos cromossomos (cromossmicas), bem como na estrutura
de genes individuais (gnicas). Quando as mutaes ocorrem em stios
especcos de genes so denominadas
MUTAES DE PONTO (INSERES E
DELEES DE NUCLEOTDEOS)
Atualmente, o termo mutao utilizado apenas para mutaes de
ponto ou gnicas.
No Quadro 1 esto resumidos os principais tipos de mutao.
Tipos de Mutaes de ponto
Figura 2- Deleo
136
Gentica Bsica
Figura 3- Insero
Todas essas mutaes de ponto resultam em erros na matriz de leitura
das trincas de nucleotdeos no RNAm e seus aminocidos. Observem que o
erro na matriz ocorre a partir da deleo ou insero do nucleotdeo errado.
Figura 4- Mutao na Matriz de Leitura
137
Mutao e reparo do DNA
Aula
8
Em relao aos seus efeitos, a mutao pode ser 1) positiva do ponto de
vista evolutivo, quando gera novas combinaes gnicas; 2) Neutra, quando
altera a seqncia de regies no codicantes no alterando a funo gnica;
3) Silenciosa, quando ocorre sobre genes inativos; 4) Negativa, quando
prejudica a funo de genes ativos; 5) Letal, quando leva a morte celular.
BASE MOLECULAR DAS MUTAES
A ecincia na passagem da informao gentica durante a replicao
do DNA depende do correto pareamento de bases, onde A pareia com T
e G com C. Quando ocorrem alteraes nesse pareamento, a replicao
pode conter erros que alteram a seqncia de nucleotdeos.
Varias formas de Mutaes espontneas que podem ocorrer no DNA:
1. Tautomerizao, um processo espontneo e na maioria das vezes re-
versvel, onde os tomos de hidrognio se movem de sua posio nas
bases, gerando pareamentos incorretos. Quando mudanas tautomricas
envolvem a substituio de uma purina (A ou G) por outra purina na ta
complementar, ocorre uma transio; quando a substituio envolve uma
purina por uma pirimidina (T ou C) temos uma transverso (ver gura 5)
Figura 5 - Tautomerizao
138
Gentica Bsica
EX: Figura 6 tautmeros
Embora os tautmeros sejam reversveis, seus efeitos se reetem nas
prximas replicaes, como mostra a gura abaixo:
2. Desaminao das bases, so alteraes nas bases do DNA por substi-
tuir um grupamento amina (- NH2) por uma hidroxila (-OH). Da mesma
forma que na tautomerizao, as bases desaminadas comportam-se como
bases no usuais e fazem pareamentos errneos (ex: H C), como mostra
a gura 8 ao lado:
Figura 7 Conseqncias do uso de tautmeros
139
Mutao e reparo do DNA
Aula
8
3. Depurinao: erro na replicao do DNA forma stios sem a presena
purinas. Essas leses so resultantes de radiao ionizante, radicais livres
ou ao de agentes alquilantes que desestabilizam a ligao N-glycosidica,
causando mutagnese e carcinognese.
Figura 9 - depurinao
DANO OXIDATIVO NO DNA
Espcies reativas de oxignio (EROs) so formadas e degradadas por
organismos aerbicos. No entanto, quantidades excessivas levam ao au-
mento do estresse oxidativo.
As EROs incluem um grande nmero de molculas quimicamente
reativas e derivadas do oxignio, como exemplo o nion radical super-
xido (O2.-), o perxido de hidrognio (H2O2) e o radical hidroxil (.OH).
Figura 10.
140
Gentica Bsica
MUTAES INDUZIDAS
O efeito do meio ambiente sobre os organismos pode ser avaliado
por aumentos nas taxas de mutaes em organismos expostos a agentes
mutagnicos ambientais, tanto fsicos (Raios X e radiao UV) quanto
qumicos (drogas, poluentes ambientais, xenobiticos etc).
Sua ao se d geralmente por mimetizar a estrutura de bases nitroge-
nadas, gerando delees ou inseres, por alterao na estrutura tridimen-
sional do DNA ou por transposio de elementos moveis (Transposons)
para diferentes locais no DNA.
AO DAS DROGAS SOBRE O DNA
1. Anlogo de bases:
Ex: 5- Bromouracila (anlogo de Timina)
Figura 11
141
Mutao e reparo do DNA
Aula
8
Efeitos sobre a replicao
Figura 12
2. Agentes alquilantes: adiciona grupos Etil ou Metil s bases.
Figura 13
142
Gentica Bsica
3. Agentes desaminantes: Ex: Acido Nitroso
Figura 14
4. Corantes Acridnicos : intercala entre as bases.
So compostos com estruturas planas que se intercalam entre as bases
nitrogenadas do DNA, produzindo adies ou delees de um par de
nucleotdeos.
Figura 15
143
Mutao e reparo do DNA
Aula
8 EFEITO: MUDANA NO QUADRO DE LEITURA,
POR INSERO NO DNA
AO DE AGENTES FSICOS SOBRE O DNA
1. Radiaes ionizantes: raios X, ,, .
Induzem a formao de ons reativos e radicais livres, bem como pro-
vocam alteraes nas bases e quebras na cadeia do DNA (de uma ou ambas
as tas) podendo originar aberraes cromossmicas.
Figura 16
2. Radiaes no-ionizantes: raios ultravioleta.
Embora no possuam energia suciente para ionizar o DNA, carregam
energia suciente para alterar a molcula. A mais conhecida ao da radiao
UV no DNA a induo de dmeros de pirimidina. Trata-se da induo
de ligaes carbono-carbono entre pirimidinas adjacentes, sendo mais co-
mum com a timina. Isto resulta na distoro da molcula ou ligaes entre
molculas adjacentes, o que temporariamente pra a replicao do DNA.
144
Gentica Bsica
AO DE ELEMENTOS GENTICOS DE
TRANSPOSIO (TRANSPOSONS)
Transposons so seqncias de DNA que tem a propriedade de mover-
se de um local para outro dentro do genoma, e so por isso denominados
Elementos geneticos moveis. Sua insero na estrutura de um gene pode
causar deleo ou perda de bases. Se o transposons se retira do interior de
um gene, este pode recuperar sua funo. Do mesmo modo, se ele insere
em um gene, nucleotdeos so adicionados a ele tendo como conseqncia
a perda de funo. Devido a esse modo de ao, os transposons so con-
siderados agentes mutagnicos.
J foram descritos em bactrias, plantas e em mamferos. Sua origem,
no entanto, ainda objeto de discusso.
Ex: Figura 18.
145
Mutao e reparo do DNA
Aula
8
Em humanos, todos os tipos de mutaes descritas aqui so possveis.
No entanto, h outros tipos associados especicamente a doenas humanas;
uma delas, que tem recebido ateno especial nos ltimos anos, a repetio
expandida de trinucleotdeos.
As seqncias repetidas de um a seis vezes so conhecidas como
repeties simples em tandem (essas so denidas como uma sequncia
de DNA que se repete uma atrs da outra, p. ex. AACT pode se repetir
vrias vezes: AACTAACTAACTAACTAACT...) e esto dispersas por todo
o genoma humano.
As seqncia repetidas trs vezes, ou repeties de trinucleotideos, esto
associadas a doenas herdadas e podem se expandir. J foram encontradas
na Sndrome do X frgil e em doenas neurolgicas como a Doena de
Huntington, Distroa Miotnica e outras. O numero de repeties est as-
sociada a gravidade destas, e sua instabilidade em clulas somticas e entre
geraes, causa o fenmeno da antecipao, onde h aumento da gravidade
quanto mais cedo aparecem as repeties em geraes sucessivas.
O mecanismo de expanso ainda desconhecido.
Figura 19.
146
Gentica Bsica
Ex: Figura 20.
MECANISMOS DE REPARO DO DNA
Como j dito no inicio deste capitulo, a sobrevivncia dos organismos
depende da estabilidade do seu material gentico. Estando os organismos
mergulhados em seu meio ambiente, as respostas a ele depender de me-
canismos que os proteja de danos irreversveis. Nesse contexto, os mecanis-
mos de reparo tm a funo de reparar danos espontneos ou induzidos,
sofridos pelo DNA para que a informao gentica seja passada para as
prximas geraes de clulas e de organismos.
Durante a replicao do DNA, as polimerases tm um papel funda-
mental no reparo de leses, mas alem desse mecanismo geral, inmeros
outros esto presentes na maquinaria celular de bactrias at humanos. So
altamente conservados evolutivamente, o que demonstra sua importncia
na sobrevivncia dos organismos. Entre os mecanismos conhecidos, h
aqueles dependentes de luz (fotorreativos) existentes somente em bactrias
e aqueles existentes tambm em humanos, como reparo por exciso, reparo
pos-replicao e outros.
Reparo por fotorreativao feito pela enzima DNA-fotoliase, que age
quando a luz UV gera dmeros de Timina no DNA de bactrias. A enzima
se une ao dmero no escuro e quando a molcula se expe a luz ( por meio
de um fton), desfaz o dmero.
147
Mutao e reparo do DNA
Aula
8
REPARO POR EXCISO
Nesse caso, o reparo acontece em 3 etapas:
1. uma endonuclease (DNA glicosilases) de reparo reconhece a (s) base (s)
danicada, liga-se a ele e a excisa;
2. uma DNA polimerase preenche o espao usando a ta complementar
integra como molde;
3. a enzima DNA ligase fecha a falha deixada pela DNA polimerase para
completar o processo.
Figura 21.
Ex: Figura 22.
148
Gentica Bsica
REPARO PS-REPLICAO
Aqui o reparo de pareamentos incorretos se d depois da replicao e requer
a existncia de um sistema que seja capaz de reconhecer as bases mal pareadas,
determinar quais das bases a incorreta e, por m, eliminar a base incorreta e
sintetizar o novo segmento sem erro. As enzimas responsveis por esse tipo
de reparo so produtos dos genes mutH, mutL, mutS e mutU. Pra distinguir
a hlice com erro da integra o sistema reconhece a Adenina (A) da seqncia
GATC da ta integra pela presena de metilao (Metilase de Adenina).
Figura 23.

CONSEQNCIA DAS MUTAES
A maioria das mutaes so deletrias e em razo disso nenhuma
espcie pode permitir que elas se acumulem em uma freqncia alta nas
clulas germinativas. Embora a freqncia de mutao observada seja
baixa, imagina-se que o numero basico de proteinas essenciais que qualquer
organismo pode codicar esteja em torno 60.000. Assim, uma freqncia
de mutao dez vezes maior limitaria um organismo a cerca de 6000 genes
essenciais. Neste caso, a evoluo provavelmente pararia em um organismo
menos complexo que uma mosca de frutas.
A taxa de mutao (aproximadamente 1 mudana de nucleotideo
por 109 nucleotideos a cada replicao), exatamente a mesma seja em
bactrias ou em humanos. Devido a esta preciso, a sequencia do genoma
humano (aproximadamente 3 109 pares de nucleotdeos) alterada por
149
Mutao e reparo do DNA
Aula
8 cerca de 3 nucleotideos a cada ciclo celular, permitindo que a informao
gentica passe corretamente de uma gerao para a outra, evitando tambm
mudanas nas clulas somticas que levem ao cncer.
Ainda assim, as mutaes ocorrem, assumindo seu papel no processo
evolutivo, amplicando a variabilidade genmica e as chances de adaptao
das espcies ao seu meio. No seu lado negativo elas esto envolvidas na
gerao de muitas doenas, entre elas o cncer.
CONCLUSO
As respostas geradas pelos organismos ao meio podem causar danos
ao material gentico e ao funcionamento dos processos biolgicos. No en-
tanto, os erros no material gentico gerados sejam de maneira espontnea
ou induzida, tornam-se o motor da evoluo, uma vez que fornecem novas
combinaes ao genoma das espcies.
RESUMO
Mutaes so alteraes herdveis na seqncia no material gentico,
que fornecem grande variabilidade ao conjunto gnico de uma populao.
O termo mutao tem 2 signicados, pois tanto o processo quanto o
efeito. Como processo descreve os mecanismos geradores de alteraes no
material gentico, como efeito mostra as alteraes no organismo afetado.
A sobrevivncia dos organismos depende da estabilidade do seu mate-
rial gentico. Estando os organismos mergulhados em seu meio ambiente, as
respostas a ele dependero de mecanismos que os proteja de danos irrever-
sveis. Nesse contexto, os mecanismos de reparo tm a funo de reparar
danos espontneos ou induzidos, sofridos pelo DNA para que a informao
gentica seja passada para as prximas geraes de clulas e de organismos.
ATIVIDADES
1. Use a tabela do cdigo gentico para encontrar a seqncia do pequeno
polipeptdio codicado nesta mensagem:
5'- AUGUUCAAGAUGGUGACUUGGUAAAUC-3'
a) Qual a seqencia aminocidos resultante se o 1G nesta mensagem
mudar para A?
b) Qual seria a seqncia aminocidos se o 1 C fosse mudado para U ?
c) E se o 1 C fosse mudado para G?
d) E se o ltimo G fosse mudado para A ?
2. Assinale a alternativa correta, levando em conta os cidos nuclicos, a ocor-
rncia de mutaes e as conseqentes mudanas do ciclo de vida da clula.
a) O DNA constitudo por cdons, que determinam a seqncia de bases
150
Gentica Bsica
do RNA mensageiro, necessria formao dos anticdons, responsveis
pela produo das protenas.
b) No caso de uma mutao acarretar a transformao de um cdon em
outro relacionado ao mesmo aminocido, no haver alterao na molcula
protica formada, nem no metabolismo celular.
c) A mutao altera a seqncia de aminocidos do DNA, acarretando al-
teraes na seqncia de bases do RNA mensageiro e, conseqentemente,
na produo das protenas.
d) As mutaes atuam diretamente sobre as protenas, provocando a des-
naturao dessas molculas e, conseqentemente, a inativao delas.
e) Quando algumas protenas so alteradas por mutaes, suas funes no
metabolismo celular passam a ser realizadas pelos aminocidos.
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo:
Denir
1. O que mutao?
2. Diferenciar a transio e a transverso de bases nitrogenadas.
3. Distinguir as atividades mutagnicas dos seguintes agentes: 5-bromoura-
cila brometo de etdio, calor, e radiao ultravioleta.
4. Descrever as diferenas e as semelhanas entre o reparo por exciso de
bases e o mecanismo de fotoreativao.
5. Explicar por que a mutao um importante mecanismo evolutivo.
PRXIMA AULA
Na prxima aula, o aluno compreender os mecanismos que controlam
a expresso gnica em eucariotos e procariotos.
REFERNCIAS
ALBERTS B, JOHNSON A, LEWIS J, et al - Molecular Biology of the
Cell. 4th edition. New York: Garland Science; 2002.
GRIFFITS, A. J. F. e Col Introduo gentica Editora Guanabara
Koogan, 9a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
SNUSTAD, D. P. Fundamentos de Gentica - Editora Guanabara Koogan,
6a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
Mutaes Gnicas- Eduardo Dias. http://genetica.ufcspa.edu.br/biomedic/
conteudo/genetica_molecular/mutacgen.PDF. Texto acessado em 23/01/2010
REGULAO DA EXPRESSO
GNICA
META
Apresentar dos principais mecanismos reguladores da expresso gnica em Eucariotos e Procariotos.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
conhecer os mecanismos gerais de regulao utilizados por Procariotos e Eucariotos;
relacionar as diferenas entre os mecanismos utilizados pelas duas categorias de organismos;
entender a importncia dos mecanismos apresentados para a sobrevivncia dos organismos.
PR-REQUISITOS
Para alcanar os objetivos propostos o aluno dever rever as aulas de estrutura e funcionamento
do DNA (Transcrio e traduo), como tambm utilizar a bibliograa indicada para aprofundar seus
conhecimentos.
Aula
9
152
Gentica Bsica
INTRODUO
Cada clula que compe nossos rgos e tecidos contm o mesmo
complemento de DNA conhecido como genoma pessoal. Para nossas
clulas tornarem-se clula da pele ao invs de clula capilar, certos genes
tem que ser ligados ou desligados. Este processo de comutao da expresso
gnica denominado regulao gnica. Alguns genes, como os das protenas
ribossomiais, devem ser continuamente expressos em todas as clulas para
manter a produo de protenas. Outros genes, no entanto, esto ativos
somente em clulas ou tecidos especcos. P. ex. o gene da opcina, o qual
codica a protena que ajuda a recepo de cor no olho, s est expresso
nas clulas da retina do olho.
Todos esses processos so precisamente regulados separadamente e
em conjunto para que os organismos se desenvolvam obedecendo suas
necessidades dirias e temporais.
O controle da expresso gnica em organismos cujo material gentico
o DNA um processo coordenado e muito preciso. O metabolismo
celular, as respostas dos indivduos ao ambiente, a expresso dos genes
responsveis por cada perodo do desenvolvimento, todos dependem de
uma regulao conjunta e orquestrada.
Cada organismo vivo tem a capacidade de ligar e desligar seus genes
em momentos diferentes do seu ciclo de vida e sob certas condies. Isto
ocorre continuamente em nossos corpos sem a nossa interferncia e,
mesmo, conscincia. Este processo de regulao gnica similar em todos
os organismos, aumentando em complexidade medida que subimos na
cadeia evolutiva. Na maioria dos organismos esta regulao ocorre no nvel
da transcrio do DNA, durante a sntese do RNAm.
Para compreender a regulao precisamos primeiro entender a estrutura
dos genes em Procariotos e Eucariotos.
ESTRUTURA DO GENE
A estrutura geral dos genes de Procariotos e Eucariotos muito semel-
hante, uma vez que nos dois casos h seqncias reguladoras que antecedem
a regio codicante e seqncias terminadoras que delimitam o nal do
gene. Assim um gene, seja qual for sua origem, tem inicio e m (gura1).
153
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9
Figura1.
Nos Procariotos, a estrutura mais simples e contm uma regio codi-
cante inteira, sem interrupo. Evolutivamente, essa estrutura mostrou-se
a mais eciente para um grupo de organismos que no tem diviso entre
ncleo e citoplasma, e seu DNA est mergulhado em seu citoplasma, em
um local denominado Nucleide (gura 2).
Figura 2.
154
Gentica Bsica
Nesse ambiente, a expresso gnica (transcrio e traduo) ocorre ao
mesmo tempo, j que esse organismo unicelular est mergulhado em seu
meio e precisa dar respostas rpidas para sua sobrevivncia (ver gura 3).
Figura 3.
Nos eucariotos, havendo 2 compartimentos separados, h diviso de
trabalho entre ncleo e citoplasma. Figura 4
Figura 4.
Alm disso, um mesmo DNA est presente em diversos tipos celula-
res, tornando a expresso dos genes tecido-especico. No se espera, em
indivduos normais, que uma protena essencial ao sistema nervoso seja
produzida no fgado! Figura 5
155
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9
Figura 5.
Diferentes categorias de genes se expressam durante a vida de um
organismo eucarioto. As principais so:
- Genes de manuteno (housekeeping) Expressos em todas as clulas. So
responsveis pela rotina metablica comum a todas as clulas.
- Outros genes se expressam medida que a clula entra em um perodo
de diferenciao.
- Alguns so expressos todo o tempo em clulas diferenciadas. P. ex. Uma
clula do plasma expressa continuamente os genes para anticorpos.
- Alguns so expressos somente em condies de mudana do ambiente
extracelular. P. ex., a chegada de um hormnio pode ligar ou desligar certos
genes.
A expresso gnica ocorre, ento, em vrios nveis. (Figura 6).
Figura 6.
156
Gentica Bsica
Geralmente, na maioria dos organismos o controle da expresso gnica
se d na transcrio, o que compreensvel, pois melhor parar o processo
antes da produo da mensagem que depois!
CATEGORIAS DE MECANISMOS REGULADORES
I. Ligao e Represso da ao gnica em resposta a mudanas ambientais-
Procariotos.
- Funcionam como interruptores, pois ligam e desligam genes de acordo
com as respostas dos procariotos as mudanas ambientais, ajustando seu
metabolismo rapidamente ao crescimento e reproduo.
II. Circuitos Pr-programados de expresso gnica - Eucariotos.
Em eucariotos, a expresso de genes funciona de maneira semelhante
aos procariotos, mas devido aos diferentes tipos celulares e as diferentes
fases do desenvolvimento o ligar e desligar de genes obedece a uma pro-
gramao, que se inicia no zigoto, continua durante a vida dos indivduos
e, mesmo na morte, o circuito tem seu papel.
REGULAO GNICA EM PROCARIOTOS:
CONSTITUTIVA, INDUZVEL E REPRESSVEL
Como todos os organismos, procariotos como as bactrias, possuem
genes constitutivos, ou de manuteno, que produzem protenas ribossmi-
cas, RNAt, e outros, que mantm o metabolismo ativo. Outros genes so
sazonais, ou seja, s so ligados quando em resposta a condies am-
bientais.
Em seu metabolismo elas sintetizam aminocidos, vitaminas, carboi-
dratos etc. Durante seu crescimento elas podem usar qualquer carboidrato:
glicose, sacarose, galactose ou lactose como fonte de energia. Se h glicose,
ela a usa em seu metabolismo sem ligar ou ativar nenhum gene temporrio.
Mas se a lactose for a nica fonte de carbono, ela sintetiza 3 enzimas, a
-galactosideo permease e a -galactosidase, que metabolizam a lactose.
A -galactosideo permease carreia lactose do meio externo para dentro
da bactria.
A -galactosidase cataliza a quebra da lactose em glicose e galactose,
aucares de maior energia.
-galactosideo transacetilase, funo ainda desconhecida.
Para quebrar a lactose, a bactria utiliza um sistema de induo e re-
presso gnicas, ou seja, quando no h glicose, o acar de maior energia,
ela utiliza lactose que esteja disponvel, ligando genes para quebr-lo e,
quando o acar no estiver mais disponvel, desligando-os. A presena
157
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9 da lactose induz a clula bacteriana a produzir as enzimas necessrias para
quebr-la; ento a lactose o Indutor da expresso gnica. Os genes das
enzimas so induzveis.
A induo ocorre no nvel da transcrio. Ela altera a taxa da sntese
de enzimas, mas no a atividade delas.
A regulao da expresso gnica (induo, ou ativao de genes e a
represso, ou o desligamento de genes) feita por genes reguladores, que
atuam por meio de mecanismos de controle positivo e negativo (ver gura 7).
Nos mecanismos de controle positivo, o produto do gene regulador
necessrio para ligar a expresso de um ou mais genes estruturais (que
produzem protenas).
Nos mecanismos de controle negativo, o produto do gene regulador
necessrio para desligar a expresso dos genes estruturais.
Os produtos do gene regulador so chamados de ativadores, ligando genes
no controle positivo, e repressores desligando genes no controle negativo.
Figura 7.
158
Gentica Bsica
O MODELO DO OPERON
Em 1961, dois cientistas, Franois Jacob e Jacques Monod propuseram
um modelo, para explicar a utilizao de lactose por E. coli: o Modelo do
Operon. Nesse modelo, um conjunto de genes reguladores e estruturais,
agindo coordenados, controla a produo de enzimas responsveis pela
degradao da Lactose.
Os genes que constituem o Operon so:
I P O Z Y A
I (produz uma protena repressora) na ausncia de Lactose, o operon
est desligado por tal protena. A protena repressora produzida pelo gene
I se liga ao operador, impedindo a ligao da RNA polimerase.
Obs: Lembre que, em qualquer gene, a expresso gnica comea quando
a RNA polimerase se liga ao promotor do gene e sintetiza um RNA que
contem a regio a regio codicante do gene (ver Aula de transcrio)
P (Promotor) o promotor a seqncia que reconhecida pela RNA
polimerase, onde se inicia a transcrio. Ela antecede a regio codicante
dos genes.
O (Operador) Seqncia que faz parte da regio promotora e respon-
svel pela ligao da protena repressora, impedindo a transcrio. Quando
o operador est desreprimido, a RNA polimerase passa por ele em direo
ao genes estruturais (ZYA).
Z - produz enzima B-galactosidase, que quebra a lactose em glicose e
galactose.
Y - produz a enzima -galactosideo Permease, transporta via membrana,
a lactose do meio externo para dentro da clula bacteriana.
A - produz a enzima -galactosideo transacetilase participa do controle
positivo do operon.
CONTROLE DA EXPRESSO GNICA EM
PROCARIOTOS: O PAPEL DO PROMOTOR
A regio promotora de qualquer gene localiza-se a 5, antes da regio
codicante, controlando a ligao da RNA polimerase, quando os genes
precisam ser transcritos. Numa analogia, se a RNA polimerase fosse um
carteiro, o promotor o endereo do gene!
Por conveno, os nucleotdeos que vem antes da regio codicante
so enumerados com sinal negativo e a partir da regio codicante com
sinal positivo (gura 8).
159
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9
Figura 8.
Em procariotos, o promotor possui duas regies conservadas evoluti-
vamente (que esto presentes em diferentes espcies e chamadas seqncias
de consenso), que precedem a regio codicante: a seqncia a cerca de 10
nucleotdeos da regio codicante (-10) chamada TATA Box e a seqncia
-35 (TTGACA). Essas seqncias podem variar de gene para gene, mas
alguns nucleotdeos se repetem em diferentes genes.
A subunidade sigma da RNA polimerase reconhece primeiro a regio
-35 e depois desliza em direo a -10.
A seqncia -10 rica em A-T e facilita o desenrolamento localizado
do DNA, necessrio para a sntese de uma nova cadeia de RNA.
No modelo operon, o indutor da transcrio de seus genes a Alo-
lactose derivada da lactose em uma relao catalizada pela B-galactosidase,
o qual se associa ao repressor e inibe-o, deixando o promotor livre para a
interao com a RNA polimerase e conseqente transcrio do gene (Jacob
e Monod, 1961).
Veja vdeos sobre o funcionamento do Operon Lac no link indicado
nas referencias bibliogracas
AO DO OPERON POR CONTROLE NEGATIVO
Como j dito, o Operon Lac induzvel, pois seus genes s so tran-
scritos na presena de Lactose. Na sua ausncia, a protena reguladora de
I deixa o sitio O reprimido.
Quando a Lactose est presente, ela liga-se ao repressor, muda sua
conformao e ele sai do operador. A liberao deste stio faz com que a
RNA polimerase se ligue ao operador e inicie a transcrio dos genes Z,
Y e A, que sero em seguida traduzidos nas 3 enzimas: B-galactosidase,
B-galactosideo permease e B-galactosideo transacetilase.
160
Gentica Bsica
Figura 9.
AO DO OPERON LAC POR CONTROLE
POSITIVO
Pode acontecer de estarem presentes na clula bacteriana tanto Glicose
quanto Lactose, e a glicose degradada preferencialmente. A presena da
glicose impede a induo do Operon Lac, ou outros operons envolvidos
no catabolismo dos carboidratos. Esse fenmeno chamado represso
catablica e assegura que a glicose seja metabolizada quando presente,
preferencialmente a outras fontes de energia menos ecientes.
A represso catablica do operon Lac e outros so mediadas por uma
protena reguladora, chamada CAP (protena ativadora de catablito) e uma
pequena molcula de AMP cclico (AMPc), que s funcionam juntas, em
um complexo:CAP-AMPc.
O promotor Lac contm dois stios de ligao separados, um para
RNA-pol e outro para o complexo CAP-AMPc.
A glicose em grandes impede a formao do AMPc, por que ela im-
pede a adenilciclase de form-lo, Mas, a medida que a glicose degradada,
a concentrao de AMPc vai aumentando e ele pode ento se ligar a CAP,
formando o complexo. Esse complexo se liga ento ao promotor Lac e
amplia o numero de RNAm e, conseqentemente enzimas para degradar
a lactose.
161
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9 Uma pergunta comum : se a lactose est presente, o operon est
desreprimido e est produzindo as enzimas; ento, porque precisa do
complexo CAP-AMPc?
A resposta que o promotor Lac dito fraco, pois ele no se liga (ou
encaixa) ecientemente a RNApol, e a produo de enzimas quando s a
lactose est presente de cerca de 2%. Quando o complexo CAP-AMPc se
liga ao operador ele aumenta a ecincia de ligao do promotor fazendo
com que o encaixe seja perfeito e a produo de protenas aumente muito.
Alem do Operon Lac, outros operons esto presentes em E. coli
(Arabinose, Trptofano e outros). O modelo do Operon Lac foi essencial
para compreendermos como genes so ligados e desligados. Essa com-
preenso ajudou a entender mecanismos similares em Eucariotos, como
veremos em seguida.
REGULAO GNICA EM EUCARIOTOS
Vimos anteriormente que a expresso de genes eucariotos regulada
por circuitos pr-programados, onde toda as clulas de organismos multi-
celulares tem o mesmo DNA mas, com exceo dos genes constitutivos,
cada gene atua de maneira espacial e temporal. P. ex. as Hemoglobinas do
adulto humano s so produzidas depois que a hemoglobina fetal diminui
sua quantidade, aos 6 meses de vida.
Em humanos, dos 25.000 a 30.000 genes codicados pelo Projeto
Genoma, cerca de 3% codica protenas. No entanto, o nmero de pro-
tenas produzidas excede largamente o nmero de genes. Este fato pode
ser explicado tendo em considerao o seguinte:
Os genes de eucariotos so interrompidos! Em um segmento de
DNA correspondente a um gene que codica uma determinada protena,
encontra-se regies codicadoras (chamadas Exons) alternando-se com
regies no-codicadoras- os introns (gura 10).
Figura 10.
162
Gentica Bsica
O transcrito resultante no funcional e s poder ser traduzido se for
devidamente montado, descartando-se os introns e unindo-se os exons
em seqncia ordenada. Este tipo de modicao do transcrito primrio
denominado "splicing" (cortar e colar; montagem) e ocorre dentro do
ncleo. O transcrito processado e pronto para migrar para o citoplasma
recebe o nome de RNA mensageiro.
Os exons codicam sequncias de aminocidos, designadas domnios,
que podem fazer parte de mais do que uma protena. Diferentes combina-
es de exons formam diferentes protenas.
A regulao em eucariotos tem vrias caractersticas a considerar:
1. Ncleo e citoplasma em eucariotos esto separados por membrana, sendo
o trabalho compartimentalizado tambm. No ncleo produz-se RNA, que
montado na maneira de um RNAm ; este vai para o citoplasma (reticulo
endoplasmtico) para ser traduzido;
2. Como j visto na aula de transcrio, eucariotos tm 3 tipos de RNA
polimerase: I, II e III, para cada tipo de RNA;
3. H modicaes ps-transcricionais: retirada dos introns e modicao
das extremidades 5e 3do RNAm;
4. A regulao da expresso gnica sofre a ao de sinais intra e extrace-
lulares.
5. As protenas reguladoras que controlam a transcrio so os fatores de
transcrio, muitos deles com domnios caractersticos para interagir com
o DNA.
MONTAGEM ALTERNATIVA DE RNA
A maioria dos genes eucariticos tem introns. Cada um deles precisa
ser removido para que o RNAm contenha apenas a seqncia codicante
que ser traduzida em aminocidos.
A formao do RNAm feita por enzimas especicas (Spliceossomos),
que corta os introns separadamente ou em conjunto. Quando um corte de
introns leva um exon junto, a recomposio forma uma protena diferente,
ampliando o leque das alternativas que um RNAm pode formar, como
mostra a gura 11 ao lado:
163
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9
Figura 11.
O controle da expresso gnica em eucariotos mais complexo do
que em bactria, pois a passagem do ncleo para o citoplasma, a resposta
a sinais ambientais internos e externos e a comunicao celular impem a
ao coordenada de todos os elementos envolvidos.
CONTROLE DO PROMOTOR E ELEMENTOS
PRXIMOS
Boa parte desse controle se d no promotor e nas regies proximais a
ele. Uma vez que em diferentes tipos celulares diferentes genes se expres-
sam, a estrutura do promotor tem que reetir esse critrio espacial.
Como em baterias o promotor tem que sinalizar o inicio do gene
para a RNA polimerase, assim como a regulao a distncia, por meio de
elementos proximais a ele.
PROMOTOR
Como j visto em bactrias, contm seqncias de consenso (-35 e -10)
que sinalizam o inicio da transcrio para a RNA pol. Aqui, no entanto, a
seqncia -35 assume diferentes arranjos, pois mais tecido especica, ou
seja, cada gene em cada tecido pode ter uma seqncia um pouco diferente
para identicar onde ele est (corao, pele, etc).
ENHANCER (AMPLIFICADOR)
Seqncia que est acima (upstream) do promotor, a milhares de nucleo-
tdeos distante dele e que tem a funo de ser a regio onde os fatores de
transcrio se ligam para ampliar a produo de RNA. Por isso, os fatores
de transcrio que se ligam a ele so chamados ativadores de transcrio.
164
Gentica Bsica
SILENCIADOR
Outra seqncia de nucleotdeos que age a distancia do promotor e,
ligando-se a fatores de transcrio, silenciando genes. Os fatores de tran-
scrio que se ligam ao silenciador so chamados repressores.
As guras 12 e 13 ilustram esses elementos.
165
Regulao da Expresso Gnica
Aula
9 REGULAO GNICA POR HORMNIOS
Duas categorias de hormnios so importantes na regulao gnica
em eucariotos:
1. Hormnios esterides (progesterona e estrognio) molculas pequenas
lipossolveis, que atravessam a membranas celulares.
Quando entram na clula interagem com receptores hormonais, no
citoplasma ou ncleo, formando um complexo, e interage com o DNA, se
comportando como fatores de transcrio. (gura 14).
Figura 14
CONCLUSO
Os mecanismos apresentados nesse capitulo demonstram as diferentes
estratgias utilizadas por organismos pro e eucariotos para expressar ou
reprimir genes ou conjuntos de genes em resposta ao seu ciclo de vida e
as exigncias do ambiente.
Embora os mecanismos em cada categoria de organismo sigam os
mesmos princpios, o nvel de complexidade de cada um deles obedece as
relaes de cada organismo com seu meio, como vimos no uso da lactose
por bactrias e o papel dos hormnios em eucariotos.
RESUMO
Os mecanismos citados neste capitulo so representativos de uma gama
de outros existentes em Procariotos e Eucariotos. A compreenso desses
mecanismos tem ajudado a entender a complexidade de estratgias utilizadas
pelos organismos para responder as diferentes demandas do seu ambiente.
166
Gentica Bsica
ATIVIDADES
1. A clula muscular cardaca e a esqueltica tm a mesma origem porm
so diferentes, tanto do ponto de vista estrutural como funcional. Ao longo
do processo de diferenciao das clulas do mesmo organismo ocorre
a) duplicao de alguns genes.
b) perda dos genes no expressos.
c) expresso diferencial dos genes.
d) induo de mutaes especcas.
e) recombinao entre genes ativados.
2. No operon LAC de E. coli, qual a funo de cada um dos seguintes
genes ou stios:
a) regulador b) operador c) promotor d) gene estrutural Z e )
gene estrutural Y?
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo:
1. Explicar qual (is) as diferena(s) entre a regulao gnica de procariotos
e eucariotos?
2. Em relao ao Operon LAC, responda:
a) Qual a diferena repressores e indutores;
b) Como se diferencia controle positivo e controle negativo na regulao
gnica?;
3. Foi demonstrado experimentalmente que a maioria das sequncias alta-
mente repetitivas de DNA de cromossomos eucariotos no so transcritas.
O que isto indica a respeito da funo deste tipo de DNA?
REFERNCIAS
ALBERTS B, JOHNSON A, LEWIS J, et al - Molecular Biology of the
Cell. 4th edition. New York: Garland Science; 2002.
GRIFFITS, A. J. F. e Col Introduo gentica Editora Guanabara
Koogan, 9a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
SNUSTAD, D. P. Fundamentos de Gentica - Editora Guanabara
Koogan, 6a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
PRINCPIOS DE GENTICA DE
POPULAES
META
Mostrar ao aluno que a dinmica dos genes nas populaes pode ser compreendida por meio do
estudo das suas frequncias gnicas e genotpicas. Pretende-se fornecer os requisitos bsicos
para que o aluno possa entender os mecanismos relacionados a variao gentica das populaes
biolgicas ao longo do espao e do tempo. Discutiremos os mecanismos bsicos sobre os quais agem
os fatores evolutivos.
OBJETIVOS
Ao nal desta aula, o aluno dever:
saber identicar os principais mecanismos que afetam as frequncias gnicas das populaes
no espao e no tempo. Dever saber calcular as frequncias gnicas e genotpicas e entender a
dinmica dessas frequncias e suas implicaes numa populao biolgica.
PR-REQUISITOS
Noes de gentica mendeliana, Binmio de Newton e noes de lgebra.
Aula
10
168
Gentica Bsica
INTRODUO
Prezado aluno, at agora os assuntos tratados em gentica diziam
respeito s caractersticas individuais e familiares e as anlises utilizavam
heredogramas e cruzamentos entre indivduos. Nesse momento temos
um novo desao, como estudar uma populao? Seria possvel entender
a dinmica dos genes e dos gentipos em escala populacional? A resposta
positiva, mas muitos estudantes de biologia tm imensa diculdade em
entender os princpios bsicos de gentica de populaes, principalmente
em funo dos clculos envolvidos e por ser uma rea da gentica pouco
trabalhada no ensino mdio. No entanto, possvel contornar essa dicul-
dade inicial por meio de ilustraes e simulaes disponveis na internet.
Nesse ponto o ensino a distncia facilitado pelo desenvolvimento da
informtica e da disponibilidade de softwares e sites especializados nessa
rea que sero comentados ao longo desse captulo.
Uma populao natural formada por um conjunto de indivduos de
uma espcie contendo diversas famlias com muitos gentipos diferentes.
Desse modo, a estrutura da populao denida pela frequncia dos
alelos que compem os diferentes gentipos das diferentes famlias. Uma
populao natural formada por todos os indivduos que, ao se reproduzir
uns com os outros, compartilham de um pool gnico, que formado pelo
conjunto total de informaes genticas compartilhadas pelos membros
reprodutivos da populao.
Iniciaremos a aula descrevendo a variao gentica populacional, o que
determina essa variao gentica e quais suas implicaes. Depois iremos
entender como seria a dinmica dos genes e dos gentipos numa populao
ideal Populao em equilbrio de Hardy& Weinberg Tal qual o zero na
matemtica, ou um ponto de referncia na fsica, essa populao ideal for-
nece um parmetro bsico para que possamos entender o perl gentico das
populaes e vericar como cada fator evolutivo pode interferir na variao
populacional ao longo do tempo.A gentica de populaes estuda a origem
da variao, a transmisso dos genes ao longo das geraes e a dinmica da
mudana na composio gentica das populaes ao longo do tempo por ao
das foras evolutivas sistemticas (determinsticas) e aleatrias (estocsticas).
DEFINIO DE POPULAO
A populao formada por um grupo de indivduos pertencentes a
uma mesma espcie biolgica. Em gentica de populaes, entretanto,
preciso especicar melhor este conceito. A palavra populao no se refere
a espcie como um todo, mas apenas a um grupo de organismos de uma
mesma espcie que vive em uma determinada rea geogrca suciente-
mente restrita para que qualquer membro possa se casalar com qualquer
outro do sexo oposto.
169
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
VARIAO GENTICA POPULACIONAL
A variao uma propriedade natural das populaes biolgicas. No
entanto, essa concepo nem sempre foi assim. Antigamente pensava-se
que cada espcie era formada por uma essncia perfeita e que as diferenas
entre os indivduos de uma mesma espcie eram apenas erros, uma vez que
a essncia pertencia a um mundo perfeito, que seria o mundo das ideias
para uns ou o mundo divino para outros. Esse pensamento que colocava
a variao como erro persistiu por cerca de 2000 anos, desde Plato (na
Grcia antiga) at meados do sculo XIX. Felizmente Charles Darwin
revolucionou o mundo cientco quando a defendeu que a variao uma
propriedade natural das espcies e no defeitos que afastam os meros
mortais da essncia perfeita. O reconhecimento da amplitude da variao
fenotpica e de sua base hereditria levou Darwin ideia da evoluo por
meio da Seleo Natural.
Para melhor compreender isso, vamos observar as pessoas ao nosso
redor: parentes, vizinhos, conhecidos do bairro ou de outras regies. Ob-
serve que todos variam entre si em relao cor dos olhos, peso, cor da
pele, altura, caractersticas faciais, tipos sanguneos. fascinante pensar que
essa variao nos garante que nenhum indivduo, excetuando os gmeos
univitelinos, geneticamente igual ao outro e que no exista, dentre os
mais de 6,5 bilhes de habitantes do nosso planeta, outro indivduo igual
a voc e mais, que provavelmente nunca tenha existido outro e que nunca
existir outro igual a voc no futuro. Portanto, a variao uma realidade
muito presente, no s na espcie humana, mas na maioria dos seres vivos.
Por exemplo, as abelhas variam em tamanho, forma, padres de colorao;
camundongos variam em cor da pelagem; caramujos apresentam conchas
com diferentes padres de cores e listas e as plantas variam em relao
susceptibilidade diferencial a parasitas.
A nossa observao das espcies em nvel fenotpico d uma dimenso
prtica da existncia de variao. No entanto, a variao gentica ainda
maior que aquela que pode ser observada na comparao dos fentipos.
Ao nvel molecular a variao existente ainda maior, um fato comprovado
com o avano das tcnicas moleculares desenvolvidas a partir da segunda
metade do sculo XX e ainda em desenvolvimento. Uma boa parte da
variao gentica molecular no aparece no fentipo em funo de estar em
regies neutras do DNA, em outras reas no codicantes ou em funo
da redundncia do cdigo gentico que possibilita que cdons diferentes
decodiquem um mesmo aminocido. Desse modo, dois indivduos podem
produzir uma mesma protena mesmo que suas sequncias de DNA sejam
diferentes.
A quantidade de variao gentica dentro de populaes naturais e a
dinmica das foras limitantes e/ou moldadoras ao longo do tempo e do
espao formam a base de interesse do geneticista de populaes. A vari-
170
Gentica Bsica
abilidade gentica, portanto, est diretamente relacionada evoluo das
espcies e o grau de variabilidade dentro da espcie afeta diretamente o seu
potencial de se adaptar a mudanas ambientais.
O SURGIMENTO DA GENTICA DE POPULAES
Em 1900, com o redescobrimento dos trabalhos de Mendel, cou
cada vez mais claro que as caractersticas so determinadas por genes, que
se segregam durante a formao de gametas que so transmitidos para a
prole. A anlise da transmisso gentica em cruzamentos experimentais
e heredogramas rapidamente deu origem a um novo tipo de anlise que
envolvia populaes inteiras. Em 1930 a gentica de populaes j estava
se estabelecendo como disciplina, contando com a grande contribuio de
pesquisadores como Sewall Wright, R.A. Fisher e J.B.S. Haldane, passando
a representar um alicerce fundamental para a teoria evolutiva e para estudos
de variao gentica populacional na rea de ecologia. No podemos negli-
genciar a inuncia do contnuo avano tecnolgico da biologia molecular,
a partir da dcada de 1950 at os dias atuais, que permitiu a decifrao de
genomas inteiros, bem como com os avanos da bioinformtica, no desen-
volvimento da gentica de populaes, que se tornou uma disciplina com
ampla sustentao terica e uma enorme variedade de ferramentas prticas
que permitem analisar as caractersticas genticas das populaes tanto em
nvel fenotpico, quanto ao nvel molecular.
FREQUNCIAS DE ALELOS E GENTIPOS
A princpio os termos frequncias gnicas e frequncias genotpicas
parecem se tratar da mesma coisa, mas isso no verdade, sendo de fun-
damental importncia que o estudante saiba facilmente diferenci-los.
Tomemos como base um locus qualquer, por exemplo: o locus A.
Considerando que esse locus tenha apenas dois alelos diferentes (A e a),
podemos concluir que os indivduos diploides s podero apresentar os
gentipos AA, Aa e aa para esse locus.
Podemos concluir ento que para se calcular a frequncia genotpica,
simplesmente somamos o nmero de indivduos de um determinado genti-
po na populao e dividimos pelo nmero total de indivduos (N). Ento
para o locus com trs gentipos mencionado (AA, Aa e aa), a frequncia
(f) de cada gentipo :
171
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
Dizer 0,5 ou ou 50% exatamente a mesma coisa, sendo
apenas a escala diferente. 0,5 representa a metade do con-
junto inteiro igual a 1, enquanto o mesmo que a metade
de um conjunto inteiro de 2, ou seja, uma parte num total
de duas partes. Do mesmo modo, utilizando uma escala de
100 partes (percentagem), 50% representa a metade de 100.
, portanto, apenas uma questo de escala.
Quando estamos falando de uma populao de 100 indivduos e veri-
camos que a metade deles heterozigota para o locus A, ou seja, que
50 indivduos sejam Aa, podemos dizer que a frequncia genotpica dos
heterozigotos :
Considerando ainda que nessa populao, 25 indivduos sejam de
gentipo aa e outros 25 de gentipo AA, podemos igualmente concluir
que a frequncia genotpica dos homozigotos recessivos :
172
Gentica Bsica
Observe que se somarmos as frequncias de todos os gentipos teremos:
AA+Aa+aa=1
ou seja, esses gentipos juntos englobam todos os indivduos dessa
populao (100%). Podemos ento concluir que as frequncias genotpicas
esto relacionadas forma em que os alelos esto distribudos aos pares
nos indivduos que formam a populao.
Utilizando o mesmo exemplo anterior, ento como seriam as frequn-
cias allicas (tambm frequentemente chamadas de frequncias gnicas)?
Caso no tenhamos a necessidade de saber como os alelos esto distribudos
aos pares nos indivduos, mas apenas querendo saber quais as suas frequn-
cias populacionais, podemos dizer que nessa populao de 100 indivduos,
a soma de todos os alelos A e alelos a representam o conjunto de todos
os alelos da populao para esse locus. Ento, podemos denir frequncia
allica como a proporo de cpias gnicas de um determinado tipo allico
numa determinada populao. A frequncia allica pode variar entre zero
(0) e um (1), sendo zero quando o alelo est ausente e, em outro extremo,
a frequncia allica 1 quando o locus monomrco, ou seja, quando
existe apenas um tipo allico para o locus em questo na populao.
Considerando que cada locus possui uma representao especca
de seus alelos, convencionou-se representar as frequncias de alelos pelos
smbolos p e q (substituindo A e a, no nosso exemplo). As frequncias dos
alelos podem ser calculadas pelas seguintes frmulas gerais:
Em que nAA, nAae naa representam o nmero de indivduos para
cada um dos gentipos (AA, Aa e aa) e N representa o nmero total de
indivduos de todos os gentipos. Divide-se por 2N porque cada indivduo
diploide possui dois alelos em um locus (exceto os hemizigotos). Como
apresentado anteriormente, a soma de todos os alelos sempre igual a 1,
ou seja, p+q=1. Considerando um locus com dois alelos, uma vez que
tenhamos obtido p, podemos obter q por subtrao: q=1-p
Voltando ao exemplo inicial em que as frequncias allicas de A e
aforam calculadas a partir das frequncias genotpicas, utilizando a frmula
geral temos:
173
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
Considerando as frequncias genotpicas exemplificadas acima
(AA=0,25; Aa=0,5; aa=0,25), podemos dizer que a frequncia allica de A
nessa populao igual ao total dos homozigotos somado metade dos
heterozigotos, logo:
Utilizando o nmero de indivduos, temos:
Ou, alternativamente, podemos utilizaras frequncias genotpicas para
chegarmos ao mesmo resultado:
Podemos dizer ento que nessa populao a frequncia allica de e,
por correspondncia a frequncia allica do alelo a pode ser obtida por
diferena, considerando que:
Se
p+q=1A+a=1
Ento sendo
Dessa forma tambm podemos descrever o pool gnico de uma
populao por meio de suas frequncias allicas. Lembrando que em uma
populao biolgica de reproduo sexuada, os gentipos so apenas
reunies temporrias de alelos nos indivduos, que se desfazem a cada ge-
rao quando os alelos individuais so passados aos descendentes atravs
dos gametas. Portanto, so os tipos de alelos, e no os gentipos, que tm
uma real continuidade de uma gerao para a outra, e que constituem o
conjunto gnico de uma populao.
174
Gentica Bsica
O PRINCPIO DE HARDY-WEINBERG
H mais de 100 anos atrs, em 1908, G. H. Hardy, um matemtico
ingls e W. Weinberg, um mdico alemo, desenvolveram independente-
mente um conceito matemtico relativamente simples, hoje denominado
princpio de Hardy-Weinberg, considerado o fundamento bsico da gen-
tica de populaes. Esse princpio diz que numa populao panmtica (de
reproduo ao acaso), innita e na ausncia de fatores evolutivos, como
o uxo gnico, mutao, seleo e deriva gentica, as frequncias allicas
e genotpicas permanecem constantes ao longo do tempo. O princpio de
Hardy-Weinberg pode ser utilizado para determinar a frequncia de cada
alelo de um par ou de uma srie, bem como frequncias genotpicas de
homozigotos e heterozigotos na populao.
Vamos considerar novamente o nosso conhecido locus A, com os
gentipos AA, Aa e aa, que sero aqui tratados como, respectivamente D, H
e R, uma aluso para gentipo dominante, heterozigoto e recessivo, mesmo
considerando que nem todos os loci apresentam essa forma de dominncia.
Do mesmo modo, as frequncias allicas de A e a sero tratadas como p e
q. Essas letras (D, H e R para gentipos e p e q para alelos) so utilizadas
pelos livros convencionalmente para que seja possvel desenvolver frmulas
gerais que possam ser utilizadas para qualquer locus com dois alelos.
Hardy& Weinberg perceberam que a distribuio dos alelos numa
populao, considerando um locus uma populao mendeliana, pode ser
ajustada perfeitamente ao binmio de Newton, estudado por todos ns
ainda no ensino fundamental, quem se lembra de (p+q)
2
? Ento, pelos
produtos notveis sabemos que o clculo ca simples, apenas relembrando
o quadrado do primeiro mais duas vezes o primeiro pelo segundo mais o
quadrado do segundo = (p+q)
2
=p
2
+2pq+q
2
, mas como reunir isso que
eu aprendi em matemtica gentica de populaes?
Figura 1: Binmio de Newton ajustado ao quadrado de Punnet.
175
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
surpreendente o quanto essa distribuio binomial se ajusta perfeita-
mente distribuio dos alelos e dos gentipos numa populao, vejamos:
um locus autossmico eu um indivduo diploide apresenta dois alelos, que
podem ser iguais (quando o indivduo homozigoto) ou diferentes (nos
heterozigotos). De qualquer modo, eles esto aos pares e durante a forma-
o dos gametas eles se separam e so distribudos de forma independente
para os descendentes, ento voltando ao nosso velho exemplo, o locus A,
numa populao onde esse locus apresenta dois alelos (A+a). A distribuio
desses alelos se d aos pares, uma vez que os indivduos so diploides, logo
(A+a)2; Os indivduos, por sua vez, podem ser homozigotos dominantes
(AA), heterozigotos (Aa) e homozigotos recessivos (aa), os quais podemos
chamar, respectivamente de D, H e R.
Figura 2: Clculo das freqncias genotpicas para o locus A.
Suponha que cada gentipo seja igualmente representado por machos e
fmeas, e que os cruzamentos ocorram inteiramente ao acaso na populao.
Nesse caso no estamos mais preocupados em saber quais indivduos esto
sendo cruzados, como fazamos nos cruzamentos encontrados nos exerccios
de gentica mendeliana elementar, uma vez que o foco populacional, quere-
mos apenas estimar quais as frequncias genotpicas populacionais baseados
nas frequncias gnicas, ou vice-versa, quais so as frequncias gnicas da
populao quando j sabemos a priori suas frequncias genotpicas.
Para compreender melhor esse ajuste entre a distribuio binomial e a
gentica de populaes, vamos utilizar uma populao humana hipottica
de 1000 indivduos, igualmente distribudos entre homens e mulheres. Uti-
lizaremos o grupo sanguneo MN, que controlado por dois alelos, Lme
Ln. Cada alelo codica uma molcula de polissacardeo na superfcie das
hemcias e pode ser distinguido por meio de reagentes qumicos apropria-
dos. Os tipos de molculas so designados M e N respectivamente e os
176
Gentica Bsica
alelos LmeLn so codominantes, o que quer dizer que se expressam nos
heterozigotos. Um exame para o grupo sanguneo MN constatou que nessa
populao a frequncia do alelo Lm 0,4. Utilizando o que j aprendemos
anteriormente para calcular frequncias allicas, podemos deduzir facilmente
que a frequncia do alelo Ln pode ser obtida por diferena, j que Lm+
Ln=1 (p+q=1), ento qual seria o nmero esperado de indivduos do tipo
M (gentipo LmLm), MN (gentipo LmLn) e do tipo N (gentipo LnLn)
nessa populao? Considerando que essa populao est em equilbrio de
Hardy-Weinberg, podemos calcular facilmente esses valores utilizando o
binmio de Newton (p+q)2, vejamos:
Considerando que so 1000 indivduos e que 0,16 so do tipo M (ho-
mozigotos, D), ento basta multiplicar o nmero total de indivduos pela
sua frequncia:
Para calcular o nmero estimado de heterozigotos procedemos assim:
177
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
Considerando que so 1000 indivduos e que 0,48 so do tipo MN
(heterozigotos, H), ento basta multiplicar o nmero total de indivduos
pela frequncia de heterozigotos:
D=f(L
m
L
n
)=0,48x1000=480 indivduos
Finalmente, para calcular o nmero esperado de indivduos homozigo-
tos do tipo N, basta calcular:
R= f(L
m
L
n
)=q
2
R= f(L
m
L
n
)=0,6
2
=0,36
Considerando que so 1000 indivduos e que 0,48 so do tipo MN
(heterozigotos, H), ento basta multiplicar o nmero total de indivduos
pela respectiva frequncia:
R=f(L
m
L
n
)=0,36x1000=360 indivduos
Portanto:
p
2
+2pq+q
2
=1, assim como D+H+R=1
Nesse exemplo:
160M+ 480MN+360N=1000 indivduos
Tambm podemos calcular as frequncias gnicas quando temos ap-
enas as frequncias genotpicas, utilizando o inverso do raciocnio anterior.
Utilizando os resultados da questo anterior, vejamos como conseguimos
chegar s frequncias allicas:
Se considerarmos a frequncia do alelo Lm como p e a frequncia de Ln
como q, ento podemos estimar as frequncias allicas da seguinte forma:
178
Gentica Bsica
fcil perceber, portanto que existe uma relao direta entre as
frequncias allicas e genotpicas. De tal modo que sabendo as frequncias
genotpicas possvel estimar as frequncias allicas e vice-versa, desde que
a populao considerada esteja em equilbrio de Hardy-Weinberg.
No entanto, algumas vezes no temos como saber a priori as frequncias
de todos os gentipos, como o caso onde existe relao de dominncia
entre os alelos em que no possvel diferenciar homozigotos dominantes
de heterozigotos. Nesse caso, temos como saber estimar esses valores partin-
doda frequncia do homozigoto recessivo. Para exemplicar essa situao,
vamos imaginar uma populao em equilbrio em que a frequncia de indi-
vduos albinos seja de 0,1 (aa=0,1). Nesse caso quais seriam as frequncias
allicas de a e A? e quais seriam as frequncias genotpicas de AA e Aa?
Figura 3: Individuo albino em uma populao.
(Fonte: http://www.mun.ca/biology/scarr/Albinisim_in_Humans.html).
Ento, se sabemos a frequncia genotpica do homozigoto recessivo e
sabendo que essa frequncia igual a , basta raciocinar: como obter q a
partir de q2?. Caso voc tenha pensado na raiz quadrada, isso mesmo,
ento vejamos:
179
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
Agora basta seguir o mesmo princpio utilizado anteriormente:
Se
q=001
Ento
Sabendo as frequncias allicas podemos calcular facilmente as frequn-
cias genotpicas esperadas pelo equilbrio de Hardy-Weinberg:
Esses resultados indicam que se essa populao tivesse 10.000 in-
divduos, poderamos estimar, multiplicando as frequncias genotpicas
calculadas pelo total de indivduos, que de um indivduo seria albino (aa),
198 indivduos seriam heterozigotos para albinismo (Aa) e 9801 indivduos
seriam homozigotos normais (AA).
A gura a seguir ilustra a relao entre frequncias gnicas e genotpi-
cas para um locus autossmico com dois alelos em populaes diploides;
Figura 4: Equilbrio de Hardy-Weinberg
180
Gentica Bsica
Note que quando a frequncia allica no eixo x atinge 0,5 a frequncia
de gentipos heterozigotos atinge o ponto mximo. Portanto, populaes
em equilbrio nunca tero taxas de heterozigotos signicativamente acima de
50%. Para as frequncias de homozigotos (AA e aa) veja que a distribuio
inversamente proporcional. Quando a frequncia de alelos A atinge seu
nvel mximo (1,0) a frequncia de alelos recessivos zero. Nesse caso houve
a xao de alelos A e todos os indivduos da populao teriam gentipo
AA. No outro extremo, temos a situao inversa com a xao do alelo
recessivo em que todos os indivduos da populao seriam de gentipo aa.
Entre esses dois extremos existem todos os valores possveis de frequncias
allicas, sempre obedecendo a equao p+q=1 .
Uma grande parte das populaes biolgicas, as frequncias genotpi-
cas na maioria dos loci se adequam muito bem na distribuio de Hardy-
Weinberg. No entanto, o princpio de Hardy-Weinberg apresenta diversos
pressupostos para que seja vlido:
PRESSUPOSTOS PARA O PRINCPIO DE
HARDY-WEINBERG
1. Populao Panmtica
So populaes de acasalamento ao acaso, ou seja, nesse caso a proba-
bilidade de um determinado alelo participar do processo reprodutivo uma
questo inerente apenas sua frequncia populacional. Um dos fatores que
alteram esse pressuposto a endogamia, que est associada ao acasalamento
preferencial entre indivduos aparentados.
2. Populao innita
impossvel que uma populao biolgica seja efetivamente innita,
mas populaes muito grandes se comportam praticamente como se fossem
innitas. No entanto, quanto menor for o tamanho efetivo da populao,
maior sero os desvios ao acaso em suas frequncias gnicas e genotpicas
ao longo do tempo. Esse efeito consequncia da deriva gentica, que causa
variaes ao acaso (estocsticas) em populaes nitas, sendo tanto mais
forte sua inuncia quanto menor for a populao;
3. Que no exista uxo gnico entre populaes
O equilbrio de Hardy-Weinberg pressupe que as populaes sejam
fechadas, ou seja, que no haja intercmbio de genes em funo da migrao.
A sada e/ou entrada de indivduos, portanto, pode afetar as frequncias
genticas populacionais.
4. Genes no mudam de um estado allico para outro
Essa alterao chamada de mutao e est associada a entrada de
variao gentica na populao, que por consequncia alteraria as suas
frequncias genticas;
181
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
5. Todos os indivduos possuem probabilidades iguais de sobrevivncia e/
ou reproduo
Esse pressuposto diz respeito completa ausncia de qualquer tipo
de seleo. Caso haja diferena de probabilidade de sobrevivncia e/ou
reproduo as frequncias dos gentipos e dos alelos podem se alterar ao
longo das geraes.
Caso todos os pressupostos mencionados anteriormente sejam aten-
didos, as frequncias gnicas e genotpicas populacionais permanecero
constantes ao longo do tempo, como arma o princpio de Hardy-Weinberg.
Imagino que voc deva estar pensando a essa altura que esse princpio
de Hardy-Weinberg extremamente terico e no possui qualquer apli-
cao prtica. Entretanto, esse princpio verdadeiramente o principal
alicerce para o estudo da gentica de populaes. Isso possvel porque o
princpio de Hardy-Weinberg permite gerar parmetros genticos bsicos
de uma populao. Numa populao ideal que atenda a todos os pressup-
ostos mencionados no existe qualquer inuncia da evoluo e, por isso,
as condies genticas da populao continuariam constantes ao longo do
tempo. Por se tratar de uma super simplicao da realidade, o Principio
de Hardy-Weinberg pode ser considerado como um modelo de referencia
para uma populao ideal e quando vericamos se uma populao biolgica
encontra-se ou no em equilbrio, isso nos d uma idia clara sobre o grau de
inuncia do processo evolutivo sobre essa populao. Portanto, a distncia
de uma populao ideal em relao a uma populao biolgica formada
pelos ingredientes da evoluo. importante ressaltar que as suposies
do equilbrio de Hardy-Weinberg se aplicam a apenas um locus. Nenhuma
populao natural se reproduz aleatoriamente para todas as caractersticas;
nem a populao est livre dos fatores evolutivos para todas as caractersti-
cas. O princpio de Hardy-Weinberg, portanto no exige que a populao
seja panmtica, ausncia de seleo, migrao, deriva gentica e mutaes
para todos os loci. Ela exige essa condio apenas para o locus que est
sendo considerado na anlise. Uma populao pode estar em equilbrio
para um locus e no para outros.
AVALIAO DO EQUILBRIO POPULACIONAL
Utilizando as informaes anteriores possvel agora avanar para as
populaes naturais e vericar se tais populaes estariam ou no em equil-
brio de Hardy-Weinberg.Com as frequncias allicas de uma populao real
construmos uma populao terica e comparamos as duas distribuies
de frequncias genotpicas. Esse passo fundamental porque a distribuio
terica tem propriedades matemticas que nos possibilitam tirar concluses
de grande importncia. Se ao analisarmos a populao real se apresentar
estatisticamente semelhante populao terica, poderemos estender as
182
Gentica Bsica
concluses para a populao real e compreender seu comportamento
gentico. Para compararmos duas populaes iniciamos vericando suas
diferenas quanto as frequncias genotpicas.
Utilizando novamente como exemplo os grupos sanguneos do sistema
MN nos seres humanos, vamos considerar os dados de Race e Sanger (1975)
que realizaram amostras de sangue em 1000 ingleses e encontraram:298 M,
489 MN e 213 N. Essa populao estaria em equilbrio de Hardy-Weinberg?
Para responder a essa pergunta precisamos comparar os dados dessa popu-
lao real com os valores que seriam esperados em uma populao ideal,
ento vejamos:
A tabela acima resume as informaes necessrias para a comparao
entre a populao real e a populao ideal. A estatstica apropriada para
essa comparao o teste de qui-quadrado, que permite avaliar os desvios
entre frequncias observadas (fo) e frequncias esperadas (fe). A frequncia
esperada a distribuio de frequncias genotpicas da populao terica e
frequncia observada a distribuio de frequncias genotpicas da popu-
lao real. A frmula do qui-quadrado a seguinte:
Para calcular febasta voltar ao contedo anterior que nos ensina a
calcular as frequncias allicas:
Agora sabendo as frequncias allicas, podemos estimar as frequncias
esperadas de indivduos do tipo M:
Fentipos Gentipos Nmero observado de
indivduos na populao real
Frequncias
genotpicas esperadas
M L
m
L
m
298 D=p
2
MN L
m
L
n
489 H=2pq
N L
n
L
n
213 R=q
2
183
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
Onde fe(M) a frequncia esperada de indivduos de fentipo M e
o nmero total de indivduos, ento:
Para a frequncias esperada de indivduos MN temos:
Logo:
Finalmente, para a frequncia esperada de N, temos:
Ento, resumindo a tabela anterior:
Aplicando a frmula de qui-quadrado teremos:
184
Gentica Bsica
Os resultados desta frmula so comparados com os resultados de uma
tabela de qui-quadrado de referncia, levando-se em conta a margem de
erro considerada no clculo estatstico (geralmente e o nmero de graus
de liberdade, que para populaes igual ao nmero de classes fenotpicas
menos 2 (GL=NC-2). Se o valor do qui-quadrado calculado for menor que
o valor correspondente de qui-quadrado da tabela podemosdizer que as
diferenas entre as duas distribuies no so signicativas e podemos con-
siderar que a populao real comporta-se como uma populao terica em
equilbrio. O valor de qui-quadrado de referncia, na tabela de qui-quadrado
nesse caso 3,841. Podemos concluir, portanto, que a populao estudada
por Race e Sanger est em equilbrio de Hardy-Weinberg para o locus MN.
Voc deve estar se perguntando como possvel que um locus esteja
em equilbrio numa populao humana, j que sabemos que as pessoas de-
nitivamente no escolhem seus parceiros ao acaso. O que ocorre que as
pessoas de fato escolhem seus parceiros por diversos caracteres fenotpicos,
com altura, peso, cor da pele, nvel social, etc. No entanto, ningum escolhe
o parceiro pelo tipo sanguneo. Com isso, pelo menos para o locus MN os
acasalamentos so de fato aleatrios nessa populao.
CRUZAMENTOS NO ALEATRIOS
Existem diversos motivos pelos quais o princpio de HW pode ser
afetado em uma populao em particular. A no ateno a qualquer um dos
pressupostos mencionados anteriormente podem inuenciar na variao
das frequncias gnicas e genotpicas ao longo do tempo, como o caso
dos cruzamentos no aleatrios.
A relao entre as frequncias allicas e genotpicas se desfaz se o cruza-
mento entre os indivduos da populao no ocorre ao acaso. Portanto, um
dos principais fatores que pode afetar o equilbrio de HW ocorre quando a
populao no panmtica. A endogamia e a reproduo preferencial so
os principais fatores associados aos cruzamentos no aleatrios. A endo-
gamia ocorre quando temos acasalamento entre indivduos aparentados, o
que aumenta a probabilidade de que os descendentes tenham dois alelos
idnticos por descendncia. A endogamia resulta no aumento da frequn-
cia de gentipos homozigotos e reduo no nmero de heterozigotos em
relao ao que seria esperado por acasalamentos aleatrios. O efeito da
endogamia tanto maior quando mais prximos geneticamente forem os
indivduos acasalados. Se em uma determinada populao o acasalamento
entre indivduos aparentados for comum, isso resultar na probabilidade de
encontrar um indivduo que tenha dois alelos idnticos por descendncia
quando fazemos uma amostragem aleatria da populao. Esta probabili-
dade chamada de F, ou coeciente de endogamia. Se voltarmos o suciente
no tempo, muitos alelos provavelmente sero idnticos por descendncia,
185
Princpios de Gentica de Populaes
Aula
10
mas, para calcular os efeitos da endogamia consideramos a identidade por
descendncia levando em conta apenas algumas geraes. O ponto mais
importante que deve ser observado que a endogamia altera as frequncias
genotpicas, mas as frequncias gnicas permanecem inalteradas. O coe-
ciente de endogamia (F) pode variar de 0 a 1. Um valor de 0 indica que a
reproduo em uma populao totalmente aleatria, enquanto um valor
de 1 indica que todos os alelos so idnticos por descendncia. Uma das
formas mais fortes de endogamia ocorrem na auto-fecundao, fenmeno
comum em plantas, que reduz em 50% o nmero de heterozigotos por ge-
rao, at que todos os gentipos na populao sejam homozigotos. Para a
maioria das espcies panmticas, a endogamia prejudicial porque aumenta
a probabilidade de alelos deletrios e letais recessivos se manifestarem na
populao em funo do aumento do nmero de homozigotos.
No caso dos cruzamentos preferenciais, eles ocorrem quando os mem-
bros da populao preferem se reproduzir com parceiros fenotipicamente
parecidos (cruzamento preferencial positivo), como exemplo, indivduos
de estatura alta procuram outros de mesma estatura para se relacionar e
o mesmo pode ocorrer com a cor da pele e outros caracteres fenotpicos.
Apesar de serem diferentes, a endogamia e os cruzamentos preferenciais
positivos resultam no mesmo efeito qualitativo. Elas reduzem a frequncia de
heterozigotos e aumentam a frequncia de homozigotos em comparao ao
que seria esperado pelo equilbrio de Hardy-Weinberg. No entanto, tambm
existem cruzamentos preferenciais negativos onde existe uma tendncia de
reproduo entre indivduos diferentes, o que pode aumentar a frequncia
de heterozigotos e reduzir o nmero de homozigotos.
CONCLUSO
Conforme armado anteriormente, a evoluo pode ser denida de
forma simplicada como a alterao nas frequncias genticas em uma
populao ao longo do tempo. Para compreender um cenrio onde as
frequncias gnicas mudam, imprescindvel que o estudante de biologia
entenda um cenrio um pouco mais simples, no qual as frequncias genticas
simplesmente no mudam, sendo essa compreenso a principal contribuio
dessa aula. A gentica de populaes forma o alicerce bsico para o estudo
da evoluo e tambm vem sendo muitssimo utilizada na rea de ecologia
e no estudo de populaes humanas e estudos epidemiolgicos. Diante do
que foi visto nessa aula, voc pode concluir que uma populao pode ser
caracterizada geneticamente por suas frequncias gnicas e genotpicas e
que tais frequncias se ajustam bem ao modelo matemtico do binmio de
Newton por meio do princpio de Hardy-Weinberg, que por sua vez nos
fornece um parmetro bsico para reconhecer o grau de inuncia dos
fatores evolutivos numa populao biolgica.
186
Gentica Bsica
RESUMO
A gentica de populaes estuda a origem da variao, a transmisso
dos genes ao longo das geraes e a dinmica da mudana na composio
gentica das populaes ao longo do tempo por ao das foras evolutivas.
A variao uma propriedade natural das populaes biolgicas. O reconhe-
cimento da amplitude da variao fenotpica e de sua base hereditria levou
Darwin idia da evoluo por meio da Seleo Natural.A nossa observao
das espcies em nvel fenotpico d uma dimenso prtica da existncia
de variao. No entanto, a variao gentica ainda maior que aquela que
pode ser observada na comparao dos fentipos. Ao nvel molecular a
variao existente ainda maior.A quantidade de variao gentica dentro
de populaes naturais e a dinmica das foras limitantes e/ou moldadoras
ao longo do tempo e do espao formam a base de interesse do geneticista
de populaes. A variabilidade gentica, portanto, est diretamente rela-
cionada evoluo das espcies e o grau de variabilidade dentro da espcie
afeta diretamente o seu potencial de se adaptar a mudanas ambientais. As
frequncias genotpicas populacionais esto relacionadas forma em que
os alelos esto distribudos aos pares nos indivduos que formam a popu-
lao, enquanto a frequncia allica est relacionada proporo de cpias
gnicas de um determinado tipo allico numa determinada populao. em
1908, Hardy e Weinberg desenvolveram,independentemente, um conceito
matemtico relativamente simples, hoje denominado princpio de Hardy-
Weinberg, considerado o fundamento bsico da gentica de populaes.
Esse princpio diz que numa populao de reproduo ao acaso, innita e
na ausncia de fatores evolutivos, as frequncias allicas e genotpicas per-
manecem constantes ao longo do tempo. O princpio de Hardy-Weinberg
pode ser utilizado para determinar a frequncia de cada alelo de um par
ou de uma srie, bem como frequncias genotpicas de homozigotos e
heterozigotos na populao.
ATIVIDADES
1. Considere essas 5 populaes. Calcule as frequncias allicas de cada uma
delas e verique quais esto em equilbrio de Hardy-Weinberg utilizando
um teste de qui-quadrado.
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Princpios de Gentica de Populaes
Aula
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AA Aa aa
a. Populao 1 320 480 200
b. Populao 2 380 460 160
c. Populao 3 45 300 665
d. Populao 4 184 432 384
e. Populao 5 351 418 230
COMENTRIO SOBRE AS ATIVIDADE
1. Para facilitar o seu trabalho, utilize o simulador ofine gratuito
que voc poder encontrar no site do Evotutor (nesse link: http://
www.evotutor.org). Na pgina do Evotutor, que um simulador para
gentica de populaes e processos evolutivos, voc pode escolher
entrar em Ofineapplication para instalar o simulador no seu
computador. Na pgina voc escolher o sistema operacional da sua
mquina (provavelmente Windows) e far o download do programa
numa verso compactada ( bem pequeno, 1.3Mb). Basta descompact-
lo numa pasta do seu computador e executar o arquivo evotutor.bat.
Quando abrir o programa entre em calculators na parte de cima da
pgina e escolha o tem Chi-Square, que uma calculadora para o
teste de qui-quadrado. Da mesma forma na guia calculators voc
pode entrar em HW-equilibrium que calcula as frequncias esperadas
para o equilbrio de Hardy-Weinberg. Com essas ferramentas voc far
todos os clculos rapidamente, mas eu sugiro que voc faa ao menos
dois exerccios utilizando as frmulas estudas na aula para que voc
possa obter maior domnio sobre o assunto.
AUTOAVALIAO
Aps estudar esta aula, consigo:
1. Denir o que so frequncias allicas?
2. Denir o que so frequncias genotpicas?
3. Denir quais so os pressupostos para que uma populao esteja em
equilbrio de Hardy-Weinberg?
4. Explicar e Justicar ma populao em equilbrio pode ter uma frequncia
de heterozigotos maior que 50% no locus analisado? Justique.
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Gentica Bsica
5. Explicar se uma populao humana de uma determinada localidade
possui 5000 habitantes e desses 10 so albinos (aa), quantos indivduos
heterozigotos para o albinismo (Aa) seriam esperados nessa populao
se considerarmos que esse locus esteja em equilbrio de Hardy-Weinberg?
6. Denir o que endogamia e como ela pode afetar as frequncias
genotpicas?
7. Denir o que so cruzamentos preferenciais?
8. Explicar quando consideramos que houve xao de um alelo na popu-
lao e qual a consequncia direta disso?
REFERNCIAS
GRIFFITS, A. J. F. e Col Introduo gentica Editora Guanabara
Koogan, 9a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
SNUSTAD, D. P. Fundamentos Gentica - Editora Guanabara
Koogan, 6a edio, Rio de Janeiro, RJ, 2008.
FUTUYMA, D. Biologia evolutiva Editora Funpec, 3 edio, Ribeiro
Preto, SP, 2009