TAD

TEST DE AGLUTINACIN DIRECTA

Materiales necesarios:
Gradillas
Tubos Khan
Plumn
Micropipetas
Puntas
Muestra problema
Suero fisiolgico
Muestra control
Reactivo globulina anti-humana
Parafilm
1.- LAVADO DE ERITROCITOS
Primero en un tubo khan:
1. 200 (0,2 ml) o 500 (0,5 ml) microlitros de la muestra de sangre problema.
2. Adherir suero fisiolgico hasta casi llenar el tubo.
3. Taponar con parafilm y mezclar suavemente para evitar hemlisis.
4. Llevar a la centrfuga por 2 minutos a 3000 rpm.
5. Eliminar sobrenadante con el cuidado que solo se bote el suero fisiolgico.
6. Repetir este proceso un total de 4 veces.
Se realiza con el objetivo de eliminar cualquier tipo de
sustancia, para dejar los antgenos de superficie
totalmente expuestos.
2.- CLULAS CONTROL
Primero en un tubo khan:
1. 200 (0,2 ml) o 500 (0,5 ml) microlitros de la muestra de sangre OH+.
2. Adherir suero fisiolgico hasta casi llenar el tubo.
3. Taponar con parafilm y mezclar suavemente para evitar hemlisis.
4. Llevar a la centrfuga por 2 minutos a 3000 rpm.
5. Eliminar sobrenadante con el cuidado que solo se bote el suero fisiolgico.
6. Repetir este proceso un total de 4 veces.




Obtener muestra venosa de un donante que contenga
tipo OH+ (no olvidar tomarla en tubo con
anticoagulante morado-).


LUEGO DE TERMINAR EL 4 LAVADO EN AMBOS CASOS
(ERITROCITOS MUESTRA PROBLEMA Y CONTROL
POSITIVO)

Preparar una suspensin al 4% agregando gotas de suero fisiolgico hasta que se
consiga la consistencia de jugo de tomate.
3.- PREPARAR SUERO ANTI-D
En la proporcin 1:32 depositar en un tubo khan

100 ul (suero anti-D) + 3100 ul (agua destilada)


Tomar en cuenta la adicin primero del diluyente (agua destilada) y luego el
suero anti D.
EN UN TUBO KHAN LIMPIO
1. Depositar una gota de glbulos rojos al 4% de la muestra problema.
2. Agregar dos gotas de suero antiglobulina humana (reactivo verde).
3. Mezclar suavemente y taponar.
4. Llevar a la centrifuga a 3000 rpm por 20 segundos.

5. OBSERVAR AGLUTINACIN!!!
(+) Informar como TAD (+).
(-) Acudir a control para confirmar.
PARA CONFIRMAR MI RESULTADO
NEGATIVO
EN UN TUBO KHAN LIMPIO:
1. Agregar 1 gota de glbulos rojos al 4% del control.
2. Luego, 2 gotas de la preparacin suero anti D.
3. Mezclar y taponar.
4. Incubar 30 minutos a 37C (bao mara).
5. Lavar 4 veces (para eliminar exceso de anti D).
6. Suspender al 4% agregando gotas de suero fisiolgico (jugo tomate).
7. Agregar 1 a 2 gotas de esta suspensin a la muestra supuestamente negativa.
8. Centrifugar por 20 segundos a 3000 rpm.

OBSERVAR AGLUTINACIN,
CONFIRMANDO NEGATIVIDAD!!