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Sinopsis de las Tcnicas de
Bancos de Sangre
Rafael Amadeo Mateo Capilla, Tecn. Laboratorio
Clnico
Indice:
Grupo AB0
El fenotipo Rh-Kell
La conrmacin de antgeno D
El grupo hemtico en tubo
El grupo srico en tubo
La determinacin del antgeno D en placa
La determinacin del grupo ABO en placa
La resolucin de discrepancias AB0
La identicacin de Anticuerpos Irregulares
La investigacin de anticuerpos irregulares
La titulacin de anticuerpos. Mtodo en tarjeta
Las pruebas cruzadas
Tcnica del Coombs Directo
La tcnica del Coombs directo monoespecco
Interpretacin de la aglutinacin
La determinacin del fenotipo del grupo Lewis
La determinacin del grupo MN
La determinacin del grupo P
La determinacin de los grupos acreditados Ss, Kk,
KpaKpb, FyaFyb, JkaJkb, LuaLub
La elucin mediante R-E-S
La elucin con Gamma EGA
La adsorcin autloga de autoanticuerpos calientes
La hemoglobinuria paroxstica nocturna
Las autoaglutininas fras de ttulos elevados
La especicidad de crioaglutininas
La tcnica de Donath-Landsteiner
Captulo 1. GRUPO AB0
Estudio de anlisis
Establecer el grupo ABO (hemtico/srico) y el factor Rh
(D) en tarjeta.
Exposicion
1. Identicar la tarjeta con el nombre y apellidos
del receptor.
2. Preparar en un tubo debidamente identicado
una dilucin con 10 l de sangre total del paciente
y 0.5 ml de Id-Diluent .
3. Situar 50 l de la dilucin de hemates en los
pocillos con anti-A anti-B, anti-AB, anti-D, anti-
CDE y control.
4. Situar 50 l de dilucin de hemates comerciales
A1 y B en los otros dos pocillos.
5. Ampliar 50 l de suero o plasma del paciente en
los pocillos de hemates comerciales.
6. Centrifugar en la centrfuga.
7. Proceder a la lectura.
Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte supe-
rior del pocillo indica aglutinacin y la lectura es
positiva. La gradacin sera:
La presencia de hemlisis indica igualmente posi-
tividad.
Si el botn de hemates se deposita en el fondo
del pocillo la lectura es negativa.
Si existe discrepancia entre grupo srico y hemti-
co habr que resolverla antes de informar el
resultado.
Captulo 2. El fenotipo Rh-
Kell.
Estudio de anlisis
Establecer los antgenos del sistema Rh y Kell (D, C, c,
Cw, E, e y Kell).
Exposicin de anlisis de anlisis
1. Identicar una tarjeta DiaClon Rh-subgroups+K
con el nombre y apellidos del paciente.
2. Preparar en un tubo debidamente identicado una
dilucin con 10 l de sangre total del paciente y
0.5 ml de Id-Diluent 1.
3. Situar 10 l de la dilucin de hemates en los
pocillos con anti-C, anti-c, anti-E, anti-e, anti-K y
Control
4. Centrifugar en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte
superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura
es positiva.
La presencia de hemlisis indica igualmente
positividad.
Si el botn de hemates baja la lectura es negativa
Captulo 3. La conrmacin
de antgeno D
Estudio de anlisis
Establecer el antgeno D
Exposicin de anlisis de anlisis
1. Identicar un tarjeta Diamed anti-D con el
nombre y apellidos del paciente.
2. Preparar en un tubo debidamente identicado una
dilucin con 10 l de sangre total del paciente y
0.5 ml de Id-Diluent 1.
3. Situar 10 l de la dilucin de hemates en los
pocillos con anti-D y Control
4. Centrifugar en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte superior del
pocillo indica aglutinacin y la lectura es positiva.
La presencia de hemlisis indica igualmente
positividad.
Si el botn de hemates baja la lectura es negativa.
Captulo 4. El grupo hemtico
en tubo

Estudio de anlisis
Establecer el grupo ABO en tubo.
Exposicin de anlisis de anlisis
1. Situar una gota de anti-A, anti-B, y anti-AB, en
tres tubos limpios y convenientemente rotulados.
2. Ampliar una gota de hemates problema diluidos
en suero salino al 2-5% a cada tubo.
3. Mezclar suavemente agitando el contenido de
los tubos y centrifugar durante 20 segundos 3000
rpm
4. Retirar de la centrfuga y resuspender
suavemente el sedimento de los hemates.
5. Examinar la presencia o ausencia de aglutinacin
y anotar los resultados.

Disquisicin del estudio analtico
La presencia de aglutinacin o hemlisis
indicar que la reaccin es positiva,
mientras que una suspensin uniforme
de hemates se considerar como
resultado negativo.
Las discrepancias entre los resultados
del grupo ABO hemtico y srico deben
resolverse antes de clasicar el grupo
ABO del paciente.
Captulo 5. El grupo srico en
tubo

ESTUDIO DE ANLISIS
Establecer la presencia o ausencia de anti-A y anti-B en
el plasma o suero del paciente.
Exposicin de anlisis de anlisis
Utilizaremos hemates reactivo A1 y B de origen
comercial.
Opcionalmente podemos efectuar el grupo srico
utilizando adems hemates A2 y O.
1. Colocar una gota de hemates reactivo en cada
uno de los tubos limpios y rotulados. (A1, A2, B
y O).
2. Ampliar dos gotas de suero problema a cada
tubo.
3. Agitar suavemente y centrifugar durante 20
segundos a 3000 rpm (900-1000 x g).
4. Examinar los tubos en busca de hemlisis.
Resuspender suavemente el sedimento de
hemates y observar la presencia o ausencia de
aglutinacin. Anotar resultados.

Disquisicin del estudio analtico
La estampacin de aglutinacin o hemlisis revelar que La estampacin de aglutinacin o hemlisis revelar que
la reaccin es positiva, mientras que una suspensin
uniforme de hemates se considerar como resultado
negativo.
* Las diferencias entre los resultados del grupo
ABO hemtico y srico deben resolverse
antes de clasicar el grupo ABO del
paciente.
Captulo 6. La determinacin
del antgeno D en placa
Estudio de anlisis
Establecer la presencia del antgeno D (Rh).
Exposicin de anlisis de anlisis
1. Colocar una gota de antisuero Anti-D en un porta
o placa limpio y rotulado, junto a una gota de
sangre del paciente.
2. Colocar una gota de reactivo control (o en su
defecto suero siolgico) junto a otra gota de
sangre del paciente, en un segundo porta o en la
placa.
3. Mezclar con un palillo limpio formando un circulo
de 2-3 cm de dimetro.
4. Colocar los portaobjetos sobre el visor y
bascular suave y constantemente para observar
la presencia de aglutinacin. El mximo de
observacin es de dos minutos, superado ese
tiempo se puede producir un fenmeno de
rouleaux, que puede interpretarse errneamente
como aglutinacin.
Captulo 7. La determinacin
del grupo ABO en placa.
Estudio de anlisis
Efectuar el tipaje AB0 en placa o porta.
Exposicin de anlisis de anlisis
1. Identicar el porta o la placa con el nombre y
apellidos del paciente (o nmero de la unidad a
tipar)
2. Colocar una gota de Seraclone Anti-A, Anti-B, y
Anti-AB.
3. Ampliar una gota de sangre junto a cada gota de
los reactivo y mezclarlo en un rea aproximada de 2
cm de dimetro (puede utilizarse para ello palillos
higinicos).
4. Se recomienda hacer la lectura de la posible
aglutinacin despus de 30 a 60 segundos.

Disquisicin del estudio analtico
La presencia de aglutinacin indica la especicidad AB0.
Captulo 8. La resolucin de
discrepancias AB0.
Estudio de anlisis
Acordar el grupo ABO cuando no concuerdan el
grupo hemtico con el grupo srico.
Disquisicin del estudio analtico
Se produce una discrepancia cuando los
resultados del grupo hemtico y srico no concuerdan. La
interpretacin del grupo ABO debe retrasarse hasta que se
resuelva la discrepancia.
Los primeros pasos a seguir son:
1. Repetir el grupo hemtico y srico en tubo con los
hemates lavados.
2. Analizar los hemates frente a anti-A, B, A1.
3. Analizar el suero frente a hemates A1, A2, B.
4. Ampliar la relacin suero/hemates e incubar 30
minutos a temperatura ambiente. Centrifugar y
leer.
Capitulo 9. La identicacin
de Anticuerpos Irregulares

Estudio de anlisis
Identicar la especicidad (por probabilidades) del
anticuerpo que descubrimos con la investigacin o
escrutinio de anticuerpos irregulares.
Esta tcnica, bsicamente es similar a la deteccin de
anticuerpos irregulares, con la diferencia de que en este
caso enfrentamos el suero a una batera de 11 clulas
de grupo 0 ampliamente fenotipadas, y cuya reactividad
nos indicar la probable especicidad del anticuerpo en
estudio.

Exposicin de anlisis de anlisis
1. Extraer del frigorco las cajas
con los paneles comerciales de hemates
papainizados y no papainizados.
Comprobar la fecha de caducidad. Dar
suavemente varias vueltas a la caja
entera con el n de resuspender los
hemates de cada frasco.
2. Preparar una suspensin de 10 L
de sangre total del paciente con 0.5 ml
de Id-Diluent 1 y otra suspensin de 10
L de sangre total del paciente con 0.5
ml de Id-Diluent 2.
3. Rotular : 12 pocillos de tarjeta
Diamed ClNa 1 al 12, 12 pocillos de
tarjeta Diamed LISS/Coombs del 1 al
12, 12 pocillos de tarjeta Diamed ClNa
del 1P al 12P y 12 pocillos de tarjeta
Diamed LISS/Coombs del 1P al 12P.
4. Ampliar a cada pocillo 25 L del
suero problema.
5. Ampliar: 50 L de los hemates
no papainizados del vial 1 a los pocillos
rotulado 1 de las tarjetas Neutra y
Coombs, y as haremos con todos los
viales hasta el rotulado como 11. Al
pocillo nmero 12 de ambas tarjetas
ampliaremos 50 L de la solucin de
hemates del paciente preparada con
Id-Diluent 2.
6. Ampliar: 50 L de los hemates
papainizados del vial 1 a los pocillos
rotulado 1P de las tarjetas Neutra y
Coombs, y as haremos con todos los
viales hasta el rotulado como 11. Al
pocillo nmero 12 de ambas tarjetas
ampliaremos 50 L de la solucin de
hemates del paciente preparada con
Id-Diluent 1.
Captulo 10. La investigacin
de anticuerpos irregulares

Estudio de anlisis
Los nicos anticuerpos de grupo que se suelen tener
son los anti-A y anti-B. Los dems anticuerpos de grupo
no relacionados con el sistema AB0, se les conoce como
anticuerpos irregulares. Para detectar estos anticuerpos
se enfrenta el suero a estudiar a una serie de hemates
de grupo 0 que poseen la mayora de antgenos
frente a los cuales estos anticuerpos son especcos.
Clsicamente cuando esta prueba se utiliza como parte
de los test pretransfusionales se denomina investigacin
de anticuerpos irregulares, y cuando se esgrime como
parte del protocolo de isoinmunizacin materno fetal se
designa Test de Coombs Indirecto.
Exposicin de anlisis
1. Identicar la tarjeta Diamed Liss/Coombs con el
nombre y apellidos del receptor y rotular cuatro
pocillos en cada tarjeta con los nmeros 1, 2 y 3.
2. Ampliar a cada pocillo 25 L del suero
problema.
3. Situar 50 l de la dilucin de hemates comerciales
Id Diacell I, II y III en los pocillos rotulados de la
tarjeta.
4. Incubar durante 10 minutos a 37C la tarjeta en
la incubadora Diamed.
5. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
Proceder a la lectura.
Captulo 11. La titulacin de
anticuerpos. Mtodo en tar-
jeta.

Estudio de anlisis
El ttulo de un anticuerpo, es la dilucin mxima
en la que su presencia puede ser demostrada por
aglutinacin, y es una forma grosera de valorar la
cantidad del anticuerpo.
Exposicin de anlisis
1. Rotular los tubos con la dilucin del suero (1, 2,
4, 8, 16, 32, 64) y aadir 0,1 ml de Id solucin 2
a todos los tubos excepto al primero.
2. Ampliar un volumen igual de suero a los dos
primeros tubos.
3. Mezclar con una pipeta limpia varias veces el
contenido del segundo tubo y transferir 0,1
ml al siguiente tubo. Repetir el procedimiento
con todas las diluciones, utilizando una punta
de pipeta nueva con cada tubo. El volumen del
ltimo tubo se guarda en un tubo limpio por si se
requiriesen nuevas diluciones.
4. Rotular una tarjeta LISS/Coombs con el nmero
de identicacin del paciente y en cada pocillo
con las diluciones de los tubos empezando por el
segundo tubo (2, 4, 8, 16, 32, 64).
5. Dispensar en cada pocillo 50 L de hemates en
suspensin al 0.8% (los hemates deben tener
el antgeno frente al que se dirige el anticuerpo
a titular y ser compatibles ABO con el suero
problema).
6. Ampliar a cada pocillo 25 L de la dilucin
correspondiente.
7. Incubar durante 10 minutos la tarjeta en la
incubadora Diamed.
8. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
Proceder a la lectura.
Captulo 12. Las pruebas cru-
zadas
Estudio de anlisis
Control nal de la compatibilidad ABO entre el donante
y el receptor. Demuestra la ausencia de anticuerpos
irregulares que pudiera tener el receptor frente a los
hemates del donante.
Exposicin de anlisis
1. Identicar las tarjetas (Diamed LISS/Coombs
y Diamed ClNa) con el nombre y apellidos del
receptor y rotular cada pocillo con el nmero
de la unidad a cruzar.
2. Preparar una dilucin con 50 l de la unidad
de concentrado de hemates y 0.5 ml de Id-
Diluent 2, en un tubo rotulado con el n de la
unidad de concentrado de hemates.
3. Situar 50 l de la dilucin de hemates en los
pocillos de la tarjeta Diamed LISS/Coombs y
en la tarjeta Diamed ClNa.
4. Situar 25 l de suero del receptor en cada
pocillo de las dos tarjetas.
5. Incubar durante 15 minutos, la tarjeta
Diamed LISS/Coombs, en la incubadora
Diamed. Dejar ese mismo tiempo la tarjeta
Diamed ClNa a temperatura ambiente.
6. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga
Diamed.
7. Proceder a la lectura.
Captulo 13. Tcnica del
Coombs Directo
Estudio de analisis
Esta tcnica detecta si los hemates estn recubiertos de
anticuerpos o complemento.
Exposicin de anlisis
1. Identicar una tarjeta Diamed LISS/Coombs con
el nombre y apellidos del paciente y/o el nmero
de identicacin de la muestra.
2. Preparar una dilucin con 50 l de sangre total en
0.5 ml de Id-Diluent 2, en un tubo debidamente
identicado.
3. Situar 10 l de la dilucin de hemates en uno de
los pocillos de la tarjeta.
4. Centrifugar en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.
Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en
la parte superior del pocillo indica
aglutinacin y la lectura es positiva.
Si el botn de hemates baja la lectura
es negativa.
Captulo 14. La tcnica del
coombs directo monoespec-
co
Estudio de anlisis
Esta tcnica identica la clase de inmunoglobulina o
fraccin del complemento causantes de la positividad de
un test de Coombs.
Exposicin de anlisis
1. Identicar una tarjeta DC Screning I con el
nombre y apellidos del paciente y/o el nmero de
identicacin de la muestra.
2. Preparar una dilucin con 30 l de hemates de la
muestra en 1000 l de Id Solucin 2, en un tubo
debidamente identicado.
3. Situar 25 l de la dilucin de hemates en cada
uno de los pocillos de la tarjeta.
4. Centrifugar 8 minutos en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

Disquisicin del estudio analtico

Si el botn de hemates queda en
la parte superior del pocillo indica
aglutinacin y la lectura es positiva.
Si el botn de hemates baja la lectura
es negativa.
Captulo 15. Interpretacin
de la aglutinacin.
Estudio de anlisis
Valorar las reacciones de aglutinacin de forma
estndar.
Exposicin de anlisis

Anota-
cin


Grado de
aglutinacin

Descripcin de la
aglutinacin
10 ++++ Botn slido de
eritrocitos, ningn
eritrocito libre; fondo
claro.

10

+++

Varios aglutinados
grandes; fondo claro.

8

++

Muchos aglutinados
de regular tamao;
fondo claro.

5

+

Aglutinados
pequeos; fondo
turbio.

2

+/-

Aglutinados muy
pequeos; fondo
turbio.

0

-

No aglutinacin ni
hemlisis todos los
eritrocitos libres.

PH



Hemlisis parcial.

H



Hemlisis completa;
no quedan hemates.
Siempre debe buscarse la presencia de hemlisis,
su presencia indicar un resultado positivo.
Captulo 16. La determinacin
del fenotipo del grupo Lewis
Estudio de anlisis
Establecer el fenotipo del grupo Lewis, en este caso
para los antgenos Lea y Leb
Exposicin de anlisis
1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed ClNa
correctamente identicada por cada antgeno a
identicar como P, C+ y C- y ampliar por orden;
50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en
el primer pocillo, 50 L de hemates comprobados
positivos para el antgeno en el segundo pocillo y
50 L de hemates comprobados negativos para
el antgeno en el tercer pocillo.
2. Ampliar a cada pocillo 25 L del antisuero
correspondiente al antgeno a identicar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 22C.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte
superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura
es positiva.
Si el botn de hemates baja la lectura es
negativa.
Una positividad en el control negativo o negatividad en el
control positivo invalida la prueba.
Captulo 17. La determinacin
del grupo MN
Estudio de anlisis
Establecer el fenotipo del sistema MN, en este
caso para los antgenos M y N.
Exposicin de anlisis
1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed ClNa
correctamente identicada por cada antgeno a
identicar como P, C+ y C- y ampliar por orden;
50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en
el primer pocillo, 50 L de hemates comprobados
positivos para el antgeno en el segundo pocillo y
50 L de hemates comprobados negativos para
el antgeno en el tercer pocillo.
2. Ampliar a cada pocillo 25 L del antisuero
correspondiente al antgeno a identicar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 22C.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte
superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura
es positiva.
Si el botn de hemates baja la lectura es
negativa.
Una positividad en el control negativo o negatividad en el
control positivo invalida la prueba.
Captulo 18. La determinacin
del grupo P
Estudio de anlisis
Establecer el fenotipo del sistema P, en este caso para
el antgeno P
1
.
Exposicin de anlisis
1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed ClNa
correctamente identicada por cada antgeno a
identicar como P, C+ y C- y ampliar por orden;
50 L de hemates del paciente diluido al 0.8% en
el primer pocillo, 50 L de hemates comprobados
positivos para el antgeno en el segundo pocillo y
50 L de hemates comprobados negativos para
el antgeno en el tercer pocillo.
2. Ampliar a cada pocillo 25 L del antisuero
correspondiente al antgeno a identicar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 22C.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte
superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura
es positiva.
Si el botn de hemates baja la lectura es
negativa.
Una positividad en el control negativo o negatividad en el
control positivo invalida la prueba.
Captulo 19. La determinacin
de los grupos acreditados Ss,
Kk, KpaKpb, FyaFyb, JkaJkb,
LuaLub
Estudio de anlisis
Establecer el fenotipo de los hemates para los sistemas
de grupo aludidos.
Exposicin de anlisis
1. Rotular 3 pocillos de una tarjeta Diamed LISS/
Coombs correctamente identicada por cada
antgeno a identicar como P, C+ y C- y ampliar
por orden; 50 L de hemates del paciente diluido
al 0.8% en el primer pocillo, 50 L de hemates
comprobados positivos para el antgeno en el
segundo pocillo y 50 L de hemates comprobados
negativos para el antgeno en el tercer pocillo.
2. Ampliar a cada pocillo 25 L del antisuero
correspondiente al antgeno a identicar.
3. Incubar la tarjeta durante 10 minutos a 37C en
la incubadora Diamed.
4. Centrifugar la tarjeta en la centrfuga Diamed.
5. Proceder a la lectura.

Disquisicin del estudio analtico
Si el botn de hemates queda en la parte
superior del pocillo indica aglutinacin y la lectura
es positiva.
Si el botn de hemates baja la lectura es
negativa.
Una positividad en el control negativo o negatividad en el
control positivo invalida la prueba.
Captulo 20. La elucin medi-
ante R-E-S
Estudio de analisis
Con la elucin pretendemos separar los anticuerpos
unidos a los hemates para poder estudiar dichos
anticuerpos.
Exposicin de anlisis
1. Solucin de Lavado. Se prepara suciente
solucin para lavar cuatro veces los hemates.
Es una dilucin 1/10 con disolvente y agua
destilada (ej. 2ml de disolvente y 18ml de H2O
destilada).
2. Lavar 1 ml (20 gotas) de hemates concentrados
1 vez con salino, y 4 veces con solucin de
lavado.
3. Retirar el mximo de sobrenadante del ltimo
lavado y utilizarlo como control (en un tubo
etiquetado).
4. Colocar 1 ml de clulas lavadas en un tubo
y ampliar 1 ml de SOLUCION I (20 gotas y 20
gotas).
5. Mezclar suavemente por inversin 4-5 veces.
6. Centrifugar inmediatamente en 3400 durante 1
minuto.
7. Transferir el sobrenadante (ELUIDO) a un tubo
limpio y etiquetado.
8. Ampliar 20 gotas de SOLUCION II (Azul), mezclar
bien. Si el color es an amarillo, ampliar gota a
gota hasta que alcance un color azul plido.
9. Centrifugar nuevamente para eliminar
cualquier precipitado y transferir a un tubo
limpio.
Investigar la presencia de anticuerpos en el eludo,
utilizar el sobrenadante del ltimo lavado como control
negativo.
Captulo 21. La elucin con
Gamma EGA
Estudio de anlisis
El procedimiento descrito es til para eliminar los
autoanticuerpos que recubren a los hemates, para
de esta forma poder fenotiparlos. Es igualmente til
para clulas no recubiertas con IgG, cuando el n es
destruir los antgenos del sistema Kell para ayudar en
la identicacin de anticuerpos.
Exposicin de anlisis
1. Lavar los hemates tres veces con salino
siolgico, y resuspenderlos al 3-5%.
2. Ampliar 30 gotas de esta suspensin en un
tubo limpio
3. Centrifugar 1 minuto a 3.400 rpm y eliminar
el sobrenadante con cuidado de no tocar los
hemates.
4. En otro tubo, preparar la solucin cida
de EDTA-glicina aadiendo 4 gotas de EGA
solucin 1 y 16 gotas de EGA solucin 2.
5. Ampliar inmediatamente la solucin EDTA-
glicina recin preparada al paquete de
hemates lavados y mezclar suavemente.
6. Mantener a temperatura ambiente (233C)
no ms de 2 minutos (con el cronmetro
en mano). Si las clulas estn fuertemente
agrupadas o teido, debe acortarse el tiempo
de incubacin en perodos de 15 segundos.
7. Ampliar inmediatamente 7 gotas de solucin
EGA 3, mezclar bien y centrifugar 30 segundos
a 3.400rpm.
8. Eliminar el sobrenadante, y resuspender
las clulas en salino. Si en este momento del
tratamiento las clulas no estn fuertemente
agrupadas o teidas (ver paso 6), lavar las
clulas al menos tres veces con salino.


Arrostracin
Es de mxima cautela que en el tratamiento con EGA
hace que las clulas se puedan hemolizar con facilidad.
En caso que se produzca un retraso entre el lavado y el
tipaje, se requerirn mas lavados
Disquisicin del estudio analtico
Efectuar la prueba de antiglobulina directa
(Coombs Directo) de las clulas tratadas. Si es
negativo, se procede al tipaje de los hemates.
Captulo 22. La adsorcin
autloga de autoanticuerpos
calientes
Estudio de anlisis
Los auto-anticuerpos (Ac) calientes pueden enmascarar
la presencia de alo-Ac en el suero. La adsorcin del
suero con hemates autlogos puede eliminar los auto-
Ac y desenmascarar los posibles alo-Ac.
Exposicin de anlisis
1. Preparar dos alcuotas de 1 ml de hemates del
paciente tratados segn la Tcnica de Elucin con
GammaEGA (T-22).
2. Ampliar 2 ml de suero del paciente a una de las
alcuotas, mezclar e incubar a 37C durante 30
minutos.
3. Centrifugar a 3400 rpm durante 2 minutos y
transferir el suero a la segunda alcuota de
hemates. Mezclar e incubar a 37C durante 30
minutos.
4. Centrifugar a 3400 rpm 2 minutos. Transferir
el SUERO ADSORBIDO, a un tubo limpio y
etiquetado.
5. Efectuar una investigacin de anticuerpos
irregulares, y una identicacin si procede. En
caso de positividad puede utilizarse este suero
para la realizacin de pruebas cruzadas.
Observacin primordial: No es propio para
llevar a efecto la autoadsorcin con hemates de un
paciente recin transfundido, puesto que los hemates
transfundidos circulantes pueden adsorber los alo-Ac
que se estn inquiriendo.
Captulo 23. La hemoglobinuria
paroxstica nocturna
Estudio de anlisis
El Test de HPN (hemoglobinuria paroxstica nocturna)
sirve para detectar la ausencia o dcit de protenas
implicadas en la mayor sensibilidad de las clulas de
serie roja al complemento en estos pacientes. Valora el
DAF (factor acelerador del decaimiento CD55) y el MIRL
(inhibidor de membrana de la lisis reactiva).

Exposicin de anlisis
1. Recoger un tubo de sangre citratada
(protrombina) del enfermo. En este caso
tambin sirve tubo con EDTA, heparina o CPD-
A. Es importante que sea sangre fresca recin
extrada.
2. Preparar una solucin 0,8 % con diluyente 2 de
DiaMed (10 mcl de sangre y 1 ml de diluyente)
para usar inmediatamente.
3. Ampliar 50 mcl de suspensin de hemates
a los pocillos DAF, MIRL y ctl de la tarjeta
DiaMed.
4. Ampliar 50 mcl de cada solucin (MIEL, DAF y
ctl) al pocillo correspondiente
5. Repetir la operacin con sangre de un paciente
sin HPN, que servir como control negativo en
la misma tarjeta.
6. Incubar 15 minutos a 37 C.
7. Centrifugar en la centrfuga Dia Med (ID
centrifuga 24 S) durante 10 minutos.
Leer los resultados
Captulo 24. Las autoaglutini-
nas fras de ttulos elevados
Estudio de anlisis
Precisar a que concentracin se detentan anticuerpos
fros. Los autoanticuerpos fros, si estn presentes a
ttulos elevados tienen signicacin clnica y pueden
causar hemlisis maniesta, sntomas sistmicos e
indicar una neoplasia subyacente.
Exposicin de anlisis
1. Obtener suero (mantenido a 37C desde el
momento de la extraccin) separado a 37C de
una muestra de sangre que se deja coagular
a 37C o plasma, separado de una muestra
anticoagulada despus de inversiones peridicas
a 37C durante 15 minutos.
2. Preparar una suspensin al 1% en salino de
eritrocitos de los siguientes fenotipos:
OI (pueden prepararse a partir de un
segmento tomado de una unidad de
sangre extrada dentro de los 7 das
precedentes o de una muestra extrada
con EDTA dentro de los tres das
precedentes).
Oi (Cordn)
Autlogos.
3. Diluir el suero o plasma al 1/5 en salina.
4. Preparar tres hileras de doce tubos con diluciones
seriadas al doble de suero o plasma diluido al 1/
5 (1/10,....1/20.480). Utilizar volmenes de 0,5
ml cuando se hacen las diluciones.
5. Agregar a cada tubo 0,5 ml de los hemates
correspondientes.
6. Mezclar e incubar toda la noche a 4C.
7. No centrifugar. Examinar los eritrocitos
sedimentados macroscpicamente en busca de
aglutinacin. Anotar los resultados.

Disquisicin del estudio analtico
El ttulo es la reciproca de la dilucin ms alta del suero
en la que se observa aglutinacin. Los ttulos por encima
de 1/40 se consideran elevados, pero la anemia hemoltica
por autoaglutininas reactivas en fro rara vez ocurre a
menos que el ttulo sea superior a 1/640.
Captulo 25. La especicidad
de crioaglutininas
Estudio de anlisis
Establecer la especicidad de las autoaglutininas que
reaccionan en fro. Para ello se estudia el suero frente
a eritrocitos que presenta antgenos ante los cuales
reaccionan las aglutininas fras.
Exposicin de anlisis
1. Suero (mantenido a 37C desde el momento de
la extraccin) separado a 37 C de una muestra
de sangre que se deja coagular a 37C o
plasma, separado de una muestra anticoagulada
despus de inversiones peridicas a 37C
durante 15 minutos.
2. Suspensin al 5% en salino de eritrocitos de los
siguientes fenotipos.
a. Dos muestras de clulas OI (puede
utilizarse hemates del panel de
investigacin de anticuerpos).
b. Una muestras de hemates del paciente
c. Una muestra de hemates A o B si el
paciente no es grupo 0
d. Una muestra OI tratada con enzimas
(bromelina)
e. Una muestra de hemates Oi (cordn
umbilical)
3. Preparar cinco hileras de doce tubos con
diluciones seriadas al doble de suero o plasma
(1/2,....1/4096)
4. Mezclar tres gotas de cada dilucin con una
gota de hemates al 5% de cada muestra de
eritrocitos.
5. Incubar a temperatura ambiente durante
15 minutos. Centrifugar (1000 x g 30
segundos)y examinar (golpear suavemente)
macroscpicamente en busca de aglutinacin.
Anotar los resultados.
6. Colocar los tubos a 4C e incubar a esta
temperatura durante 1 hora. Centrifugar y
examinar macroscpicamente en busca de
aglutinacin. Anotar los resultados.
Disquisicin del estudio analtico
Sntesis
Eritrocitos Anti-I Anti-i Anti-H A n t i -
IH
Anti-Pr
OI NR/
Oi NR/ <
AI
OI enzimas NR/
Autlogo

Algunos autoanticuerpos fros pueden no mostrar
especicidad aparente a temperatura de 4C, en estas
circunstancias las pruebas pueden ser incubadas a 30-
37C. La reactividad diferencial puede hacerse ms
aparente si se prolonga el tiempo de incubacin y la
aglutinacin se evala despus de la sedimentacin sin
centrifugacin.
Captulo 26. La tcnica de Do-
nath-Landsteiner
Estudio de anlisis
Esta tcnica se emplea para detectar la hemolisina
bifsica responsable de la anemia hemoltica
autoinmune paroxstica fra.
Exposicin de anlisis
1. Obtener suero separado de una muestra de
sangre recogida y mantenida a 37 C y suero
fresco (como fuente de complemento).
2. Preparar eritrocitos del grupo O lavados y
resuspendidos al 50%.
3. Rotular tres las de tubos como sigue:
? A
1
A
2
A
3
? B
1
B
2
B
3
? C
1
C
2
C
3
4. A los tubos 1-2 de cada la ampliar 10
volmenes de suero del paciente.
5. A los tubos 2-3 de cada la ampliar 10
volmenes de suero fresco.
6. A todos los tubos ampliar un volumen de la
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suspensin de eritrocitos. Mezclar.
7. Colocar los tres tubos de la hilera A en hielo
fundido durante 30 minutos y luego pasarlos a
37 C durante 1 hora.
8. Colocar los tres tubos de la hilera B en hielo
fundido durante 90 minutos.
9. Centrifugar todos los tubos e investigar
hemlisis en el liquido sobrenadante.
Disquisicin del estudio analtico
La prueba se considera positiva cuando el suero del
paciente, con complemento o sin el, produce hemlisis
en los tubos que se han colocado primero en hielo
y luego a 37 C (tubos A
1
A
2
) y no hay hemlisis en
los mantenidos a 37 C o en hielo. Los tubos A
3
B
3

C
3
sirven como control del complemento y deben ser
negativos.

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