APPLIED M IC R O B IO LO G Y , S e p t . 1 9 6 8 , p .

1 4 1 8 - 1 4 1 9
C o p y r i g h t 1 9 6 8 Am e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y
Er r o r s i n t h e T e c h n i q u e o f In t r a p e r i t o n e a l
In j e c t i o n o f M i c e
JO HN P. S T EWAR D, E. P. O R NELLAS , ' K . D. B EER NINK , ' AND WILLIAM H. NO R T HWAY
De p a r t m e n t o f M e d i c a l M i c r o b i o l o g y a n d t h e F l e i s c h m a n n La b o r a t o r i e s o f t h e M e d i c a l S c i e n c e s , a n d De p a r t m e n t -
o f R a d i o l o g y , S t a n f o r d U n i v e r s i t y S c h o o l o f M e d i c i n e , Pa l o Al t o , C a l i f o r n i a 9 4 3 0 4
R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n 2 Ju l y 1 9 6 8
In j e c t i o n o f d r u g s , c h e m i c a l s , o r i n f e c t i o u s
a g e n t s i n t o t h e p e r i t o n e a l c a v i t y o f t h e m o u s e i s
u s e d b y i n v e s t i g a t o r s i n a v a r i e t y o f d i s c i p l i n e s f o r
p r e s u m a b l y r e l i a b l e a n d s a f e p l a c e m e n t o f a n
i n o c u l u m i n t o a kn o wn a n a t o m i c a l l o c a t i o n .
Ho we v e r , we h a v e f o u n d n o d e s c r i p t i o n s o f t h e
d i s t r i b u t i o n o f i n t r a p e r i t o n e a l i n o c u l a , n o r o f t h e
p o s s i b l e e r r o r s i n t h e i r i n i t i a l p l a c e m e n t .
R e c e n t l y , we a t t e m p t e d t o r e c o v e r r a d i o a c t i v e l y
l a b e l e d b a c t e r i a f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i t i e s o f
m i c e p r e v i o u s l y i n j e c t e d i n t r a p e r i t o n e a l l y wi t h a
s u s p e n s i o n o f t h e r a d i o a c t i v e b a c t e r i a . In f r e -
q u e n t l y , we r e c o v e r e d l e v e l s o f r a d i o a c t i v i t y f a r
b e l o w t h a t e x p e c t e d . It s e e m e d l i ke l y t h a t i n t h e s e
c a s e s t h e i n j e c t i o n h a d b e e n m i s t a ke n l y p l a c e d
i n t o a s i t e o t h e r t h a n t h e p e r i t o n e a l c a v i t y .
T o c o n f i r m t h i s , we u s e d t h e s a m e t e c h n i q u e t o
i n j e c t i n t o t h e p e r i t o n e a l c a v i t i e s o f B 1 o D2 , C F # 1
( C a r wo r t h F a r m s , Ne w Y o r k, N. Y . ) a n d B Al b C
m i c e t h e s a m e v o l u m e ( 0 . 2 m l ) o f Et h i o d o l ( G u e r -
b e t La b o r a t o r i e s ) , a n o n a b s o r b a b l e r a d i o l o g i c a l
c o n t r a s t m a t e r i a l wi t h a v i s c o s i t y n e a r t h a t o f
wa t e r . T h e m i c e we r e s a c r i f i c e d 1 5 t o 3 0 m i n a f t e r
i n j e c t i o n , a n d a n t e r o p o s t e r i o r a n d l a t e r a l X - r a y s
we r e t a ke n o f e a c h m o u s e . T h e i n j e c t i o n s we r e
p e r f o r m e d wi t h a 2 5 - g a u g e , 5 A- i n c h ( 1 . 5 9 c m ) d i s -
p o s a b l e n e e d l e . T h e i n v e s t i g a t o r h e l d t h e m o u s e
b y t h e s ki n o f t h e b a c k a n d n e c k i n h i s l e f t h a n d .
Wi t h t h e s y r i n g e i n h i s r i g h t h a n d , h e i n j e c t e d
t h r o u g h t h e wa l l o f t h e a b d o m e n i n t o o n e o f t h e
l o we r a b d o m i n a l q u a d r a n t s .
T h e t e c h n i q u e s o f f i v e e x p e r i e n c e d i n v e s t i g a t o r s
we r e s a m p l e d a n d t h e r e s u l t s a r e s u m m a r i z e d i n
T a b l e 1 . O f 1 5 0 m i c e i n j e c t e d , 2 1 ( 1 4 % ) s h o we d
a l l o r p a r t o f t h e i n o c u l u m i n a s i t e o t h e r t h a n t h e
p e r i t o n e a l c a v i t y . In 1 3 c a s e s , t h i s s i t e wa s t h e
l u m e n o f t h e s t o m a c h o r t h e s m a l l b o we l , a l -
t h o u g h 4 s u b c u t a n e o u s , 3 r e t r o p e r i t o n e a l , a n d 1
i n t r a v a s c u l a r i n j e c t i o n o c c u r r e d . Al l o t h e r i n o c -
u l a e we r e v e r y we l l d i s p e r s e d t h r o u g h o u t t h e
p e r i t o n e a l c a v i t y , a n d , i n e v e r y m a l e m o u s e , c o n -
t r a s t m a t e r i a l c o u l d b e s e e n i n t h e s c r o t u m . T y p i -
'Pu b l i c He a l t h S e r v i c e Pr e d o c t o r a l F e l l o w ( G M
3 0 2 8 0 ) .
2 Po s t d o c t o r a l F e l l o w, s u p p o r t e d b y t h e Ar o n
F o u n d a t i o n .
c a l r a d i o g r a p h s o f s u c c e s s f u l a n d u n s u c c e s s f u l
i n j e c t i o n s a r e s h o wn i n F i g . 1 . T h e r e a s o n f o r t h e
m o r e a c c u r a t e p l a c e m e n t o f t h e i n o c u l u m b y o n e
i n v e s t i g a t o r ( F . A. F . ) wa s n o t i m m e d i a t e l y a p -
p a r e n t . T h e t e c h n i q u e s i n a l l c a s e s we r e s i m i l a r .
T h e r e s u l t s s h o w t h a t t h e we l l - p l a c e d i n o c u l u m
q u i c kl y d i s t r i b u t e s u n i f o r m l y t h r o u g h o u t t h e
p e r i t o n e a l c a v i t y . In t h e m a l e , t h i s d i s t r i b u t i o n
i n v a r i a b l y i n c l u d e s t h e p e r i t e s t i c u l a r s p a c e , a n d i t
s e e m s l i ke l y t h a t t h i s c o m p a r t m e n t i s l e s s a c c e s s i -
b l e t o p r o c e d u r e s f o r r e c o v e r y o f t h e i n o c u l u m
f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i t y . In s t u d i e s wh e r e r e -
T AB LE 1 . An a t o m i c a l l o c a t i o n i n m i c e o f s u p p o s e d l y
i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n s o f 0 . 2 m l o f a r a d i -
o l o g i c a l c o n t r a s t m e d i u m d e t e r m i n e d b y X - r a y
No . o f
In j e c t o r i n o c u l a a / An a t o m i c a l l o c a t i o n o f i n o c u l a b In e t r
t o t a l m i c e
i n j e c t e d
J. P. S . 3 / 1 2 2 S B ; 1 R P
E. P. O . 3 / 2 0 2 S B ; 1 S C
V . K . 3 / 1 8 2 S C ; 1 IV
K . D. B . 1 1 / 7 5 8 S B ; 2 R P; I S C
F . A. F . 1 / 2 5 1 S B
T o t a l 2 1 / 1 5 0 1 3 S B ; 3 R P
4 S C ; 1 IV
a
Wh o l l y o r p a r t l y o u t s i d e t h e p e r i t o n e a l c a v i t y .
b No t i n t h e p e r i t o n e a l c a v i t y . S B , l u m e n o f
s t o m a c h a n d / o r s m a l l b o we l ; R P, r e t r o p e r i t o n e a l ;
S C , s u b c u t a n e o u s ; IV , i n t r a v a s c u l a r .
c o v e r y o f t h e i n o c u l u m i s i m p o r t a n t , f e m a l e s
s h o u l d b e u s e d .
At t e m p t s we r e m a d e t o i m p r o v e t h e i n j e c t i o n
p r o c e d u r e b y u s i n g o n e i n v e s t i g a t o r t o h o l d t h e
m o u s e wh i l e t h e o t h e r i n v e s t i g a t o r i n j e c t e d
t h r o u g h a f o l d o f a b d o m i n a l wa l l . T h e i n c i d e n c e
o f e r r o r r e m a i n e d t h e s a m e .
It i s p r o b a b l e t h a t p l a c e m e n t o f t h e i n o c u l u m
i n t o a s i t e o t h e r t h a n t h e p e r i t o n e a l c a v i t y , a l -
t h o u g h i n f r e q u e n t , i s a n e r r o r i n h e r e n t i n t h e t e c h -
n i q u e a n d c a n n o t b e m i n i m i z e d b y s i m p l e m o d i f i -
c a t i o n s o f p r o c e d u r e . T h i s e r r o r m a y e x p l a i n t h e
o c c a s i o n a l f a i l u r e o f a m o u s e t o s h o w a p r e d i c t e d
e f f e c t wh e n t h i s f a i l u r e i s m o s t u n l i ke l y t o h a v e
r e s u l t e d f r o m o t h e r c a u s e s . T h e p o s s i b i l i t y o f t h e
1 4 1 8
V o l . 1 6 , No . 9
Pr i n t e d i n U . S . A.
V O L. 1 6 , 1 9 6 8
F IG . 1 . Lo c a t i o n b y X - r a y o f Et h i o d o l , s u i p p o s e d l y i l n j e c t e d i l i t r a p e r i t o n e a l l y i n m i c e . ( A) In i t r a p e r i t o n i e a l i n i j e c -
t i o c i s h o wi n i g . t h a t d i s t r i b u t i o n I i n l c l u l d e s p e r i t e s t i c l l l a r s p a c e . R e t i c u l a r p a t t e r n l i s d u e t o n e g a t i v e b o we l s h a d o ws .
( B ) R e t r o p e r i t o n e a l i n i j e c t i o n t . Ne g a t i v e ki d n t e y s h a d o w c a n b e f a i n t l y s e e n . ( C ) In j e c t i o n t i n t o t h l e s m a l l b o we l . ( D)
In t t r a v a s c u l a r i n j e c t i o n 1 . M o s t o f t h e Et h i o d o l h a s l o c a l i z e d i n t h e l i v e r a n d s p l e e n i .
e r r o r s d e s c r i b e d h e r e s h o u l d b e ke p t i n m i n d wh e n
i n t e r p r e t i n g t h e r e s u l t s o f e x p e r i m e n t s i n v o l v i n g
t h e r e c o v e r y o f i n o c u l a f r o m t h e p e r i t o n e a l c a v i -
t i e s o f m i c e o r e x p e r i m e n t s i n v o l v i n g t h e s t u d y o f
d o s e - e f f e c t r e l a t i o n s h i p s , p a r t i c u l a r l y
wh e n s m a l l
n u m b e r s o f n m i c e a r e u s e d .
T h i s i n v e s t i g a t i o n wa s s u p p o r t e d b y Pu b l i c He a l t h
S e r v i c e r e s e a r c h g r a n t 2 - HK Z - 4 3 3 f r o m t h e Na t i o n a l
In s t i t u t e o f Al l e r g y a n d In f e c t i o u s Di s e a s e s a n d g r a n t
G M 1 7 0 7 f r o m t h e Na t i o n a l In s t i t u t e o f G e n e r a l
M e d i c a l S c i e n c e s .
1 4 1 9
NO T ES