1.

Fundamentos del microscopio ptico

1.1 El microscopio de campo claro
1.2 Tincin de microorganismos para su observacin al
microscopio de campo claro
1.3 Microscopio de contraste de fases
1.4 Microscopio de campo oscuro
1.5 Microscopio de fluorescencia

2. Microscopio confocal de barrido con lser

3. Fundamentos del microscopio electrnico
3.1 Microscopio electrnico de transmisin
3.2 Microscopio electrnico de barrido

Leccin 2. Observacin de microorganismos
Aumento
Ninguno
Imagen
visualizada
ojo
Lente ocular
Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)
Lente objetivo
Muestra
Condensador
Fuente de luz
Microscopio ptico
Recorrido
de la luz
Tincin de clulas para
la observacin microscpica
Extensin de una fina capa
de clulas sobre el porta
Secado al aire
Fijacin por flameado del porta
Adicin del colorante
lavado y secado
Se coloca una gota de aceite
de inmersin sobre el porta y
se observa con el objetivo de
100X
Tincin de Gram
Paso 1
Paso 2
Paso 3
Paso 4
Tincin del frotis
Previamente fijado al calor,
con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las clulas se tien
de color azul-violeta.
Aadir Lugol,
dejar actuar 2 minutos

Todas las clulas siguen
de color azul-violeta.
Decolorar con alcohol
Las clulas Gram +
siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.
Tincin de contraste
Con safranina 2 minutos.

Las clulas G+
se ven azul-violeta.

Las G- rosas o rojas.

Gram +
Gram -
Microscopio de
Campo Claro
Alga verde
(eucariota)
Microscopio de
Fluorescencia

Bacteria filamentosa
Teida con naranja
de acridina
Microscopa
Confocal por Lser

Cianobacteria
filamentosa
Microscopio de Contraste
de Fases
Saccharomyces cerevisiae
Microscopio lser
de barrido confocal
Microscopio de fluorescencia
Tincin clulas con sondas filogenticas unidas a un
colorante fluorescente
Sonda filogentica

Colorante fluorescente

FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales
Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH
3
NO
2-
)
Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO
2-
NO
3-
)
Oxidacin anaerobia de metano en sedimentos marinos

Agregados de bacterias metanognicas (rojo)
rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)

Cada tipo celular est teido con un colorante filogentico (FISH)
diferente

Bacterias metanognicas
Bacterias
sulfato-reductoras
Micrografa Lser Confocal de una
muestra de fango de aguas residuales
Microscopio Electrnico
Transmisin
Barrido