ABSTRACT

HUGO DE JESS RODRGUEZ JUREZ

1
,
TEODORO ESPINOSA SOLARES
2
La resiliencia en procesos fermentativos:
Revisin crtica y meta-anlisis como
enfoque
Diciembre de 2013

RESUMEN
La resiliencia es definida como el inverso
del tiempo tomado por un producto
intermedio, como un acido graso voltil
(AGV), para regresar a su estado
referencial en sistemas de digestin
anaerbica. Se llev a cabo una revisin
sistemtica de la literatura considerando
127 artculos cientficas para cuantificar
resiliencia, resistencia, reactividad,
declividad y estabilidad de acuerdo con una
metodologa propuesta basada en el
principio de electrones equivalentes de los
cambios en los productos intermediarios;
posteriormente se llev a cabo un anlisis
estadstico multivariado para determinar
componentes principales y agrupaciones
existentes entre las variables de resiliencia
y parmetros operacionales del proceso.
Los resultados mostraron una relacin
inversa entre los efectos de resiliencia y
estabilidad, se identificaron cinco
agrupaciones principales que involucran el
efecto de las variables de resiliencia,
declividad, slidos voltiles y pH como las
variables ms importantes. Los mtodos
estadsticos multivariados representan
herramientas analticas tiles para estudiar
asociaciones complejas en los grupos de
variables estudiadas. Se concluye que las
variables de resiliencia y parmetros del
proceso pueden ser analizados con la
metodologa propuesta y pueden ser
consideradas como indicadores del sistema
para evaluar el desempeo y la estabilidad
en digestores anaerbicos y procesos
fermentativos.
Palabras clave: estabilidad, metodologa
propia, electrones equivalentes,
fermentacin, estado del arte.

1
.Tesista
2
.Director de tesis
ABSTRACT


Resilience is defined as the inverse time
taken by the accumulated intermediate
product, like a voltile free acid (VFA), to
return to its referential state in anaerbico
digestin systems. We conducted a
systematic review of the literature involving
127 scientific research papers on the
resilience phenomenon to quantify
resilience, resistance, reactivity, declivity y
stability according to a proposed
methodology based on the electron
equivalent principle of intermediate product
changes; after that we carried out a
multivariate statistical analysis to determine
principal components y associated cluster
between resilience variables y operational
process parameters.Results showed a
strong inverse relationship between
resilience y stability, with resilience,
declivity, reactivity, voltile solids y pH
being the most important variables.
Multivariate statistical y meta-analysis
methods represent a useful analytical tool
for studying complex associations through
two groups of variables such as those of
resilience y process parameters.We
conclude that resilience variables y process
parameters could be analyzed by the
proposed methodology y could be
considered as system indicators to evaluate
performance y stability in industrial
anaerbico digesters or fermentative
processes.
Keywords: Stability, own methodology,
electron equivalent, fermentation, state of
the art.



1

INTRODUCCIN
En hbitats tan diversos como el suelo y el cuerpo humano, los procesos clave del
ecosistema son impulsados por las comunidades microbianas diversos arreglos
de microorganismos que interactan entre s y con su entorno (Konopka, 2009).
Por lo tanto, la investigacin en microbiologa que considera los contextos
biomdicos, ambientales, agrcolas y de bioenerga comparte un desafo comn:
predecir cmo las funciones y composicin de las comunidades microbianas
responden a las perturbaciones en los sistemas de digestin anaerbica y
sistemas fermentativos (Robinson et al., 2010; Gonzalez et al., 2011; Gonzalez et
al., 2012; Costello et al., 2012). Se resume el estado actual de los conocimientos
acerca de la resiliencia de las comunidades microbianas que habitan una gran
variedad de ecosistemas tales como la digestin anaerbica y los procesos
fermentativos, haciendo hincapi en las tendencias generales extradas de una
revisin de 127 estudios representativos referentes a la recuperacin en la
concentracin de cidos grasos voltiles (AGVs) mostrando recuperacin despus
de una perturbacin en el sistema.

Los combustibles fsiles son el alma de la sociedad y de muchos otros en todo el
mundo. La contaminacin del medio ambiente debido a la utilizacin de
combustibles fsiles, as como su progresivo agotamiento hace necesario
2

encontrar fuentes de energa y qumicos alternativos que respeten el medio
ambiente y renovables (Ahmad et al., 2011).

La mitigacin de las emisiones de CO
2
y el calentamiento global asociado requiere
la explotacin de las energas renovables con el fin de reducir la dependencia de
los combustibles fsiles. Esto tambin tiene implicaciones para el calentamiento
global (Lauwers et al., 2013; Jaenicke et al., 2011). En este sentido, la energa
procedente de la biomasa se ve que es uno de los futuros y actuales fuentes de
energa renovable ms prometedoras (Konur, 2012; Mohee y Mudhoo, 2012;
Angenent et al., 2004).

La digestin anaerbica es una excelente tcnica para la valorizacin energtica
de los distintos tipos de biomasa, incluyendo las diferentes formas de residuos, es
la tecnologa de bioenerga de ms xito en todo el mundo con el requisito
fundamental de que es costosa para procesar los residuos slidos, aguas
residuales, y en relacin con el cambio climtico, la generacin de dixido de
carbono es un problema (Werner et al., 2011; Marshall, 2013). La digestin
anaerbica utiliza cultivos microbianos no definidos para producir metano (CH
4
) a
partir de sustratos orgnicos (Werner et al., 2011), la produccin de metano en
condiciones anaerbicas se viene produciendo de forma natural en muchos
hbitats anaerbicos naturales como los sedimentos de los ocanos, lagos, ros,
suelos anegados, y en el tracto intestinal del ganado vacuno, porcino, termitas y
seres humanos (Braun et al., 2011; McDonald y Parkin, 2009; Werner et al., 2011).
3

Los cultivos mixtos anaerbicos no definidos pueden procesar la complejidad y
variabilidad de los residuos orgnicos, producen carboxilatos que se pueden
convertir de manera eficiente a bioproductos tiles (Agler et al., 2011b). El valor
energtico de la biomasa se produce debido a que sus molculas de carbono
contienen electrones de alta energa (Lee et al., 2008).

Los consorcios microbianos que cooperativamente intercambian electrones juegan
un papel clave en el procesamiento anaerbico de materia orgnica. La
transferencia de hidrgeno entre especies es una estrategia bien documentada
para el intercambio de electrones dispersos en cultivos de laboratorio, pero
algunos microorganismo de entornos naturales a menudo forman agregados de
varias especies (Summers et al., 2010).

Debido a su naturaleza compleja, la optimizacin y el proceso de desarrollo de
esta tecnologa van de la mano con la disponibilidad de los modelos matemticos,
ya sea para fines de simulacin y control, algunas investigaciones indican que la
capacidad de recuperacin, en lugar de una competencia dinmica entre las
comunidades, juega un papel importante en el mantenimiento de las poblaciones
microbianas necesarias en los digestores anaerbicos (Werner et al., 2011). Sobre
la base de un balance de energa, la digestin anaerbica tiene una ventaja sobre
el compostaje, la incineracin,o una combinacin de compostaje y la digestin
(Edelmann et al., 2000) o los desechos de alcantarilla (Haight, 2005), con la
digestin anaerbica se pude proveeer de energa suficiente si solamente un
4

cuarto de los residuos bioenergticos se digiere a biogs (Walker et al., 2009;
Edelmann et al., 2000).
A continuacin, un resumen de la situacin actual de los conocimientos sobre la
capacidad de recuperacin y resistencia de las comunidades microbianas que
habitan una gran variedad de ecosistemas como los digestores anaerbicos,
procesos fermentativos, haciendo hincapi en las tendencias generales extradas
de una revisin de 127 estudios representativos de los cambios en la
concentracin de cidos grasos voltiles (AGVs) en los procesos de digestin
anaerbica y otros estudios en los campos de procesos fermentativos y
anaerbicos. Se considera que las principales fuentes de resiliencia tales como
microorganismos individuales, poblaciones y comunidades que influyen en la
comunidad microbiana y la estabilidad del sistema se debe analizar desde el
enfoque de sistemas. Finalmente, se discuten los resultados obtenidos al aplicar
metodos estadsticos multivariados incluyendo meta-anlisis.

Microbiologa de la digestin anaerbica
Los microorganismos (incluidos los virus, bacterias, arqueas y protistas) no existen
en forma aislada sino que estn en formas complejas de redes que interactan
ecolgicamente. Las interacciones dentro de estas redes ecolgicas pueden tener
un impacto positivo, un impacto negativo, o ningn impacto en las especies en
cuestin (Faust y Raes, 2012).

El proceso de digestin anaerbica se ha utilizado durante aos en el tratamiento
de lodos de aguas residuales y representa una tcnica atractiva para la reduccin
5

de lodos, junto con la produccin de energa a travs de biogs. Sin embargo, este
proceso sigue siendo una 'caja negra' y tiene rendimiento limitado. El conocimiento
acerca de los consorcios microbianos implicados en este proceso est limitado
debido a la falta de datos filogenticos y metablicos en estos microorganismos
predominantemente no cultivados (Riviere et al., 2009).

La conversin de materia orgnica compleja en metano y dixido de carbono es
posible slo por la accin comn de al menos cuatro grupos diferentes de
microorganismos (MO). El complejo microbiano esencial est compuesto por
bacterias hidrolticas, bacterias fermentativas, bacterias acetognicas y arqueas
metanognicas. Estos grupos de MO han establecido relaciones microbianas
donde los miembros posteriores de la cadena alimenticia dependen de
losanteriores por sus sustratos, pero tambin pueden tener una influencia
significativa sobre los miembros anteriores de la cadena mediante la eliminacin
de los productos metablicos (Garcia et al. 2000).

El primer grupo de MO consta de las bacterias hidrolticas. Estos organismos
catalizan la reaccin de hidrlisis por las enzimas hidrolticas extracelulares que
excretan. Los monmeros resultantes de esta reaccin se someten a fermentacin
y se produce directamente acetato, o a travs de la va de los cidos grasos
voltiles y alcoholes lo que se favorece por los llamados fermentadores
secundarios o reductores de protones obligatorios (Ralph y Dong 2010). Estas
bacterias convierten sus sustratos a acetato, dixido de carbono, hidrgeno, y tal
vez formato, que sern utilizados posteriormente por los metanognicos (Schink,
6

1997). Hay cuatro etapas principales que se llevan a cabo para demostrar la
secuencia de los eventos desarrollados por los microorganismos que se producen
durante todo el proceso: la hidrlisis, acidognesis, acetognesis y metanognesis
(Ahring et al., 1995; Braun et al., 2011; Jaenicke et al., 2011; Vavilin et al., 2008;
Agler et al., 2011b). La Figura 1 ilustra los principales pasos de este proceso.



















































Metano

Metano

cido actico

Alcoholes y cidos
orgnicos de cadena
larga, cidos grasos

Hidrlisis

Fermentacin

Acidogenesis

Acetognesis

Metanognesis
hidrogenotrfica


Metanognesis
aceticlstica


Carbohidratos en partculas,
Protenas y lpidos
(Polmeros)

Azcares y amino cidos; glicerol

A
c
i
d

g
e
n
o
s

P
r
o
d
u
c
e
n

e
n
z
i
m
a
s


CO
2

Puede estar
limitada por la
velocidad

Hidrgeno

CO
2

CO
2

NH
3

CO
2

(Monmeros)

7

Figura 1. Ruta clave de los procesos de digestin anaerbica.
(Angelidaki et al., 2006).

Ventajas y limitaciones de la co-digestin
La co-digestin presenta varias posibles ventajas y limitaciones ecolgicas,
tecnolgicas y econmicas, las cuales se muestran en la Cuadro 1.

Cuadro1. Mritos y limitantes de la tecnologa de co-digestin.
(Wu, 2013)

Mritos Limitantes
Mejora el equilibrio de nutrientes y la
digestin
Aumenta el COD del efluente del
digestor

Permite la estabilizacin de
partculas, la flotacin,
sedimentacin, acidificacin, a travs
de la dilucin por el estircol o los
lodos de depuracin
Mayores requisitos de mezcla

Requisito de tratamiento de aguas
residuales

Coleccin adicional de biogs
Se requiere alto grado de
procesamiento

Posibles tasas elevadas de entrada
para el tratamiento de residuos
Hay poca disponibilidad

Requisitos de higienizacin

Se obtiene fertilizante adicional
(acondicionador de suelos)



La co-digestin puede proporcionar un mejor balance de nutrientes y por lo tanto
un mejor rendimiento del digestor y ms altos rendimientos en biogs y porcentaje
de metano. Los residuos con pobre dinmica de fluidos, la agregacin de los
desechos, materiales particulados, residuos flotantes o materiales con altos
componentes perturbadores o inhibidoras se pueden procesar de una manera ms
8

efectiva como co-sustratos cuando se co-digestinan con lodos de depuracin o
estircol lquido (Braun, 2007; Braun, 2003). La aplicacin de co-sustratos puede
mejorar considerablemente la economa general de las plantas tratadoras (Wu,
2013; Braun, 2007).

Meta-anlisis
El componente cuantitativo de una revisin sistemtica es generalmente conocido
como meta-anlisis, que se define en el "Diccionario de Cambridge de Estadstica
en las Ciencias Mdicas", de la siguiente manera:
Una coleccin de tcnicas mediante las cuales los resultados de dos o ms
estudios independientes se combinan estadsticamente para dar una respuesta
global a una pregunta de inters.
El fundamento de este enfoque es proporcionar una prueba con ms potencia que
la prevista por los propios estudios separados. El procedimiento se ha convertido
cada vez ms popular en la ltima dcada ms o menos, pero no est exento de
crticas, sobre todo debido a las dificultades de saber que se deben incluir los
estudios y para los resultados finales se aplican en realidad en la poblacin
(Everitt, 2006).

Resiliencia ecolgica
En ecologa diversas definiciones se han utilizado para adaptarse a las
dimensiones o el sistema que est bajo investigacin: la reduccin de la definicin
hace que, desde una perspectiva prctica, sea ms adecuado para trabajar, sin
embargo, este enfoque reduccionista hace ms difcil de encontrar una teora
central en la ecologa (Loreau, 2001; Ulanowicz, 2003). En 1973, C. S. Holling
9

introdujo la palabra resiliencia en la literatura ecolgica como una forma de ayudar
a comprender la dinmica no lineal observada en los ecosistemas. (Holling, 2010;
Holling, 1996a), ms tarde resiliencia ecolgica se define como el grado de
perturbacin que un ecosistema puede soportar o absorber sin
cambiar/transicionar procesos y estructuras autoorganizadas (definida como
estados estables alternativos) de acuerdo a la Figura 4. Otros autores consideran
la resiliencia como un tiempo de retorno a un estado estable despus de una
perturbacin. Un nuevo trmino, la capacidad de adaptacin, se introdujo para
describir los procesos que modifican la resiliencia ecolgica (Folke et al., 2004;
Folke et al., 2002; Gunderson, 2000 ).

Figura 2. Representacin de la estabilidad del ecosistema a travs del paisaje de
estabilidad. Los rangos de estabilidad estn representados por valles.
Simplificado de Folke et al. (2004).

Dos definiciones reconocen la presencia de mltiples estados estables (o rangos
de estabilidad), y por lo tanto la capacidad de recuperacin es la propiedad que
media la transicin entre estos estados. Las transiciones entre estados estables se
10

han descrito para muchos ecosistemas, incluyendo los pastizales semiridos,
lagos, arrecifes de coral y los bosques. En estos sistemas, la capacidad de
recuperacin ecolgica se mantiene gracias a los procesos de estructuracin
trapezoidal a travs de una serie de escalas, las fuentes de la renovacin y la
biodiversidad funcional. En la prctica, el mantenimiento de una capacidad de
renovacin en un entorno dinmico proporciona un bfer ecolgico que protege el
sistema contra fallas (Folke et al., 2004; Folke et al., 2002; Gunderson, 2000 ).

En trminos de paisajes de estabilidad, tal como se representa en la Figura 4, la
capacidad de recuperacin ecolgica hace hincapi en condiciones lejos del
estado estacionario de equilibrio, donde inestabilidades pueden voltear un sistema
en otro rgimen de comportamiento, es decir, a otro dominio de estabilidad
(Holling, 1973). En este caso la medicin de la resiliencia es la magnitud de
perturbacin que puede ser absorbida antes de que el sistema cambia su
estructura cambiando las variables y los procesos que controlan el
comportamiento. Este concepto puede ser representado visualmente por el ancho
del rango de estabilidad, o el valle del panorama de estabilidad (Figura 4).

La resiliencia en digestin anaerbica
Actualmente, el trmino resiliencia se utiliza con frecuencia en el marco de las
estrategias de proteccin del medio ambiente. Una revisin de la literatura de la
ltima dcada muestra que el concepto de resiliencia en los sistemas ecolgicos
se ha aplicado en numerosos estudios en los ltimos cincuenta aos: una variedad
11

de definiciones se han formulado y se han propuesto un gran nmero de enfoques
experimentales.
Por otra parte, la simplificacin necesaria para abordar este tipo de estudios ha
llevado inevitablemente al "colapso" de la comunidad microbiana en uno
(bacterias) o pocos grupos funcionales (por ejemplo, los fijadores de nitrgeno,
descomponedores metanognicos) y muy pocos estudios han descrito la
estabilidad y la capacidad de recuperacin en un ecosistema microbianonico.
Mientras que los cientficos estn desarrollando nuevas herramientas y la
aplicacin de nuevas metodologas para el estudio de estos sistemas en diferentes
escalas, los responsables polticos y administradores del medio ambiente deben
ser conscientes de las carencias y las preguntas abiertas en las teoras y adoptar
el trmino "resiliencia" con cautela, sin confundirla con la aceptacin general y
conceptos como la biodegradacin o la atenuacin natural y lo ms importante
para el estudio de la resiliencia en los procesos de digestin anaerbica.

La resiliencia es un trmino ecolgico que define la capacidad de un sistema para
reaccionar a una cierta perturbacin, pero no es necesariamente un concepto
positivo: un sistema contaminado puede ser muy resilente al cambio, por ejemplo,
hacia la remediacin activa o la introduccin de bacterias capaces de degradar un
contaminante especfico, y como una consecuencia que podra ser muy difcil de
modificarse.

De tal manera (Hashsham et al., 2000) representaron los conceptos de resiliencia
relacionados en trminos de la envolvente de la amplificacin de los productos
12

intermedios clave en respuesta a una perturbacin (Figura 7), definir la resiliencia
como el tiempo empleado por el producto intermedio acumulado para volver a su
estado de referencia (hay que tener en cuenta que definen la capacidad de
recuperacin en trminos de tiempo), resistencia de una comunidad con respecto
a un producto intermedio se define como la acumulacin mxima del producto. Es
una medida de la capacidad de amortiguacin de la comunidad con respecto al
producto intermedio correspondiente. En esta definicin se sugiere considerar el
tiempo inverso para recuperar un estado coasistatic contrario de conisider el
tiempo en la definicin de resistencia.

Figura 3. Parmetros ecolgicos de estabilidad funcional.
Elaboracin propia con base en(Hashsham et al., 2000)
Esto implica que la estabilidad funcional no necesariamente se correlaciona con la
estabilidad en la estructura de la comunidad e incluso sugiere que la estructura de
13

una comunidad estable es funcionalmente menos estable, lo que sugiere que la
estructura inflexible de la comunidad puede estar asociada a una mayor
inestabildiad funcional despus de una perturbacin significativa. Esto puede ser
porque los organismos que son dominantes en condiciones de estado estacionario
no son necesariamente los organismos mejor adaptados a las condiciones
perturbadas (Fernndez et al., 2000; Hashsham et al., 2000). (Fernndez et al.,
1999) monitorearon las dinmicas de la comunidad de bacterias y arqueas
metanognicas en un reactor funcionalmente estable, continuamente se mezclan
durante 605 das y se encontraron diferencias en los niveles de la diversidad y la
dinmica entre los dominios de bacterias y arqueas. La diversidad de la poblacin
dentro del dominio bacteriana fue casi cuatro veces mayor que en el dominio
archaeal, y las poblaciones bacterianas muestra un patrn muy variable de
variacin temporal, a pesar de la funcin del sistema estable y condiciones
ambientales constantes. Por el contrario, las poblaciones de arqueas muestran
menos variabilidad temporal y exhibieron un patrn ms definido de la dominacin
y de la sucesin. Se observaron resultados similares en otro sistema de reactor
metanognicas, un reactor de lecho fluidizado alimentados con la vinaza (residuos
de destilacin de vino) en el que la biomasa se inmoviliz sobre polvo de piedra
volcnica porosa (Zumstein et al., 2000). Diversos diseos de bioreactor de
diferentes maneras reflejan las interacciones y los procesos de los ecosistemas a
gran escala.

CONCLUSIONES

14

De los resportes cientficos considerados para aplicar la metodologa propuesta
por Hashsham et al. (2000) que consistieron principalemente en artculos
cientficos indexados y que van desde el ao de 1984 hasta 2013, se
seleccionaron 40 como los que presentaron de forma clara el fenmeno de
resiliencia.
En esta investigacin se llev a cabo una revisin sistemtica y anlisis
estadstico multivariado para caracterizar el universo de los estudios de procesos
de digestin y fermentacin anaerbica que presentaron resiliencia. De 40
estudios analizados se mostr que los principales metabolitos intermedios para ser
considerados en los sistemas de digestin anaerbica son el acetato y el
propionato, los parmetros de resiliencia fueron la declividad del acetato y del
propionato y la resiliencia del acetato, y los parmetros de operacin ms
importantes a considerar fueron los slidos voltiles, pH y condiciones de
mezclado.
Se deben considerar las variables de resiliencia, declividad, resistencia, slidos
voltiles, pH para determinar las mejores condiciones de operacin de los
digestores anaerbicos y que estos muestren resiliencia, se degraden los cidos
grasos voltiles y que estos finalmente se conviertan en energa.