Manual de Histologia

LABORATORIO DE ANATOMIA E HISTOLOGIA
M.C. MARICELA TORRES Y SOTO 1

Reglamento del Laboratorio
El alumno deber:
Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesin slo se llevan
a cabo seminarios y o exmenes.
Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por la profesora.
Asistir puntualmente a las sesiones, slo tendr 10 minutos de tolerancia,
una vez que se pase lista, si llega despus, se considerar como falta.
Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suteres, chamarras u
otros objetos que no requiera para la realizacin de la prctica.
Traer el material biolgico o de otro tipo solicitado por la profesora.
Siempre traer guantes, cubre boca y perilla para las pipetas.
Siempre traer jabn y papel sanitario para el aseo de las manos y para la
limpieza del material de vidrio y de las mesas de trabajo.
Solicitar el material que requiere para las prcticas por medio de un vale, ya
sea a la profesora o a la persona encargada del rea del material y
reactivos.
Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos.
Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con
la boca.
Dejar los frascos de las soluciones en el lugar de donde los tom, despus
de su uso.
No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biolgicas slidas
(vegetales), ni material de vidrio roto (portaobjetos, cubreobjetos, tubos) en
las tarjas.
No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas.
Colocar el material contaminado en las bolsas o recipientes
correspondientes, de acuerdo a la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgicos
infecciosos- Clasificacin y especificaciones de manejo.
Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la informacin
proporcionada al inicio del curso.
Anotarse en la libreta que est al lado del microscopio que utilice, y en su
caso reportar cualquier anomala o desperfecto hallado en el microscopio
antes o durante su manejo.
Limpiar el aceite de inmersin de los objetivos del microscopio, de acuerdo
a las indicaciones dadas por la profesora.
Al trmino de la prctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir el
microscopio con su correspondiente funda y dejar cerrada la caja con llave.
Al trmino de la prctica, dejar limpias las mesas, libres de papeles,
material biolgico o de otro tipo.
Al concluir la prctica, entregar el material que emple segn las
indicaciones de la profesora, as como solicitar la devolucin del vale.
En caso de romper algn material, deber reponerlo a la brevedad posible,
para lo cual se le retendr el vale.


En caso de algn incidente o accidente, deber informarle a la profesora,
para que se tomen las medidas pertinentes.
Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que la
profesora no se har responsable por manuales, celulares, libros, batas,
etc, olvidados.
Los RPBI se consideran como residuos peligrosos y como tal se debe
establecer un plan integral para su manejo, almacenamiento, transporte,
tratamiento y disposicin final.

Los recipientes desechables que contengan sangre lquida.
Los materiales desechables que contengan fluidos y secreciones corporales,
provenientes de los pacientes de quienes se sospechen o exista un diagnstico
de una enfermedad infecto-contagiosa como la tuberculosis.
Los materiales de curacin empapados de sangre lquida o de cualquier otra
secrecin o lquido corporal.
Los materiales absorbentes utilizados en las jaulas de los animales que hayan
sido expuestos a agentes entero patgenos.
Los materiales punzo cortantes desechables como las hojas de bistur, las
agujas de sutura y los estriles de catter. El material de vidrio de
laboratorio, que se haya roto al momento de ser manipulado, se deber
desinfectar o esterilizar y ya no se considerar como RPBIs, por lo que
se podr disponer posteriormente como residuo municipal.
La disposicin general para el desecho de RPBIs en el laboratorio queda de la
siguiente manera:

TIPO DE
RESIDUO
ESTADO
FISICO
ENVASADO COLOR
Sangre Lquidos
Recipientes
hermticos
Rojo
Cultivos y
cepas de
agentes
infecciosos
Slidos
Bolsas de
polietileno
Rojo
Patolgicos Slidos
Bolsas de
polietileno
Amarillo
Residuos no
anatmicos
Slidos
Bolsas de
polietileno
Rojo
Objetos
punzocortantes
Slidos
Recipientes
rgidos
polipropileno
Rojo

PRINCIPALES MODIFICACIONES EFECTUADAS EN LA NOM-087-
SEMARNAT-SSA1-2002.


Criterios para considerar un residuo como RPBI
Nueva clasificacin de los RPBI
Cantidad de sangre o fluido corporal en los RPBI
Niveles de los establecimientos generadores
Periodo de almacenamiento temporal de los RPBI en los establecimientos
generadores.
Atribucin a la Secretaria de Salud, para la vigilancia de la norma.
Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de investigacin, son
considerados establecimientos generadores de materiales contaminados
por agentes biolgico-infecciosos. Estos desechos se denominan Residuos
Peligrosos Biolgico-Infecciosos (RPBIs), su manejo y disposicin
inadecuados, representa un riesgo para la salud del personal que labora en
estos sitios, as como para la salud de la poblacin aledaa, ocasionando
adems, el deterioro del medio ambiente. Los microorganismos patgenos,
virus, parsitos y priones (estructuras proteicas) son ejemplos de agentes
biolgicos-infecciosos. Para que un microorganismo sea capaz de producir
enfermedad, es decir, que sea un Agente Biolgico-Infeccioso, debe
ocurrir lo siguiente: tener una concentracin suficiente (inculo), estar en un
ambiente propicio (supervivencia), en presencia de una va de entrada en
un hospedero susceptible.

En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:
La sangre y sus componentes nicamente en estado lquido.
Los cultivos de agentes biolgico-infecciosos generados en:
Los procedimientos de diagnstico e investigacin.
La produccin y el control de agentes biolgico-infecciosos.
Los utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y
mezclar cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven durante las
autopsias, las cirugas o algn otro tipo de intervencin quirrgica que no
estn conservados en solucin de formol.
Las muestras biolgicas empleadas en los anlisis clnicos (excepto las
muestras de orina y de excremento), y aquellas usadas en los anlisis
patolgicos.
En los centros de investigacin, los cadveres y las partes de los animales
que fueron inoculados con agentes entero patgenos.
Los residuos no anatmicos:
Para que un material de curacin se considere como RPBIs, debe ser
desechable y estar goteando, chorreando o escurriendo sangre o
cualquier lquido corporal contemplado en la norma.


I. Niveles de los Establecimientos Generadores

NIVEL I NIVEL II NIVEL III
Establecimientos de
atencin mdica hasta
con 5 camas e
instituciones de
investigacin con
excepcin de los
sealados en el Nivel
III.
Unidades hospitalarias
de 6 hasta 60 camas.
de ms de 60 camas.
Laboratorios clnicos y
bancos de sangre que
realicen anlisis de 1 a
50 muestras al da.
realicen anlisis de 51
a 200 muestras al da.
Centros de produccin
e investigacin
experimental en
enfermedades
infecciosas.
psiquitricas.
Bioterios que se
dediquen a la
investigacin con
agentes biolgico-
infecciosos.
realicen anlisis a ms
de 200 muestras al
da.
Centros de toma de
muestras para anlisis
clnicos.
Establecimientos que
generen de 25 a 100
kilogramos al mes de
RPBIs.
Establecimientos que
generen ms de 100
kilogramos al mes de
RPBIs

II. Perodo de almacenamiento temporal de los RPBIs en los
establecimientos generadores.

NIVEL I NIVEL II NIVEL III
30 das mximos de
almacenamiento
temporal.
15 das mximos de
almacenamiento
temporal.
7 das mximos de
almacenamiento
temporal.
No requiere de rea
especfica para el
almacenamiento
temporal.
Si requiere de rea
especfica para el
almacenamiento
temporal.
Si requiere de rea
especfica para el
almacenamiento
temporal.
Se podrn ubicar los
contenedores
especficos para los
RPBIs* en el lugar
ms apropiado dentro

de sus instalaciones,
Deber cumplir con las
especificaciones
establecidas en la
NOM-087-
SEMARNAT-SSA1-

2002, para el rea de
Deber cumplir con las
especificaciones
establecidas en la
NOM-087-
SEMARNAT-SSA1-

2002, para el rea de


de manera tal que no
obstruyan las vas de
acceso.
almacenamiento
temporal.
almacenamiento
temporal.

*Los contenedores pueden ser plsticos o metlicos, con sealamiento del
smbolo universal de RPBIs y no mezclarlos con la basura municipal.

III. Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la Secretaria de
salud regular y vigilar el equipamiento, instalacin y funcionamiento de los
servicios mdicos que son los principales generadores de los RPBIs, por
ello participa complementariamente con la SEMARNAT en la regulacin y
vigilancia de la norma, para lo cual se estableci en el cuerpo de la misma,
la disposicin de crear las Bases de Colaboracin que firmarn ambas
dependencias y que sern publicadas en el Diario Oficial de la Federacin,
en las que se especificarn los puntos de la norma que vigilarn cada una
de ellas.



CRONOGRAMA

SEMANA No DE
PRACTICA
NOMBRE PAGINA
Introduccin al laboratorio
1 Seminario de liquido seminal
2 Estudio del lquido seminal 7
3 Desarrollo embrionario 14
4 Seminario de Manejo de las
tcnicas histolgicas
17
5 Seminario de Diseccin de
animal
23
Diseccin de animal de
laboratorio, preparacin de
soluciones y colorantes
23
6 Procesamiento de tejidos para
su inclusin en parafina
25
7 Realizacin de Cortes
histolgicos.
28
7 Realizacin de Cortes
histolgicos
28
8 Desparafinacin e hidratacin
de los cortes y Tincin de
hematoxilina-eosina (de los 4
tejidos).
33
9 Observacin de clulas
sanguneas en un Frotis
36
10 Observacin de laminillas y
discusin
40
discusin
40
discusin
40
Examen.

PRACTICA No. 1


ESTUDIO DEL LQUIDO SEMINAL

INTRODUCCION.-
OBJETIVO.- Que el alumno aprenda a manejar las variables que nos pueden dar
informacin acerca de la capacidad fecundante de un lquido seminal.

MATERIAL Y MTODO.- Portaobjetos, cubreobjetos, pipeta Pasteur, cmara de
Neubauer, microscopio.

MATERIAL BIOLGICO.- Muestra de semen recin emitida.

REACTIVOS.- Solucin salina fisiolgica, solucin de Saunders y Macomber (*)
colorantes de Giemsa y May Grenwald. (**)

INTRODUCCIN.
El examen de lquido seminal se realiza por medio de Espermatobioscopa
y Cultivo. La espermatobioscopa se realiza por los siguientes motivos.
a) Cuando hay problemas de esterilidad
b) Cuando se realiza una vasectoma (para ver si se hizo bien el corte de
los conductos)
c) Indicar la presencia de procesos infecciosos o enfermedades como
prostatitis crnica, vesiculitas seminal, piospermia, hemospermia,
trastorno funcional en las glndulas accesorias.

Los parmetros analizados en el semen reflejan:
la funcin exocrina de las glndulas sexuales masculinas
y nos orientan sobre patologas del sistema genital

En relacin con la investigacin de la esterilidad, es importante reconocer el
objetivo propio del examen del semen. En primer lugar, slo constituye una
historia detallada y una exploracin fsica general. Tambin pueden estar
indicados procedimientos especializados, como las pruebas tiroideas, de funcin
suprarrenal e hipofisiaria, o incluso una biopsia testicular.
El estudio del semen tiene una limitacin inherente, que consiste en que los
estndares de calidad del semen se basan en los resultados de estudios de una
poblacin de varones pertenecientes a parejas frtiles e infrtiles. En
consecuencia, estos estndares de calidad son ndices relativos y no absolutos de
fertilidad o de esterilidad (con la nica excepcin de una aspermia completa).

Adems, se recomienda generalmente que, en caso de un resultado anormal en el
estudio del semen, se repita la prueba una o ms veces.

FISIOLOGA DEL LQUIDO SEMINAL.


El semen o lquido seminal esta formado por la secrecin de los tbulos
seminferos del aparato reproductor masculino y de las glndulas relacionadas
(vesculas seminales, prstata y bulbo uretrales o de Cowper), .el 60 % de su
contenido es lquido seminal, 30 % lquido prosttico y 10 % lo constituyen los
espermatozoides. Adems el lquido seminal contiene cido ascrbico (8 10
mg/dl), cido ctrico (350 a 600 mg/dl) fructuosa (200 a 400 mg/dl)n y
glicerilfosforilcolina) (15 a 45 mg/dl). Su funcin consiste en facilitar un medio
nutritivo de osmolalildad y volumen adecuados para vehiculizar los
espermatozoides hacia el moco endocervical, donde termina su contribucin al
proceso de fertilizacin. Recin eyaculado el semen, es lquido, coagula con
rapidez y experimenta una licuacin alrededor de los 15 minutos despus de
haber sido emitido. No contiene ni protrombina ni trombina, pero s fibringeno y
tromboplastina, aun cuando no se conoce muy bien el mecanismo de la
coagulacin, ste parecera producirse por la transformacin de fibringeno en
fibrina. La licuacin ulterior ocurre por la actividad enzimtica de la fibrinolisina. El
estudio analtico del lquido seminal se denomina espermiograma o
espermatograma.

TESTCULOS. Los espermatozoos, que comprenden menos del 5% del volumen
del semen, son el nico tipo de clulas presentes en nmero apreciable en el
semen normal. Se depositan abundantemente en las porciones ampollares de los
conductos deferentes hasta el momento de eyaculacin. Los espermatozoides
almacenados en el epiddimo son prcticamente inactivos por las elevadas
concentraciones de carnitina y de gliceril-fosforilcolina y de la disminucin de
suministro de oxgeno, sobreviven aproximadamente hasta un mes.

VESCULAS SEMINALES. Aproximadamente el 60% del volumen del semen se
deriva de las vesculas seminales. Este lquido amarillo o incluso muy pigmentado,
como resultado de su elevado contenido en flavina. Las vesculas seminales son
la fuente principal de fructuosa, tambin contiene potasio y cido ctrico y en
menor cantidad cido ascrbico, ergotionena y fosforilcolina. Tambin
proporciona el sustrato que permite la coagulacin del semen despus de la
eyaculacin.

PRSTATA. La prstata constituye aproximadamente al 20% del volumen total
del semen. Su lquido lechoso es ligeramente cido, con un pH aproximadamente
de 6.5, resultante fundamentalmente de su elevado contenido en cido ctrico.
Tambin contiene enzimas proteolticas y en fosfatasa cida.

RECOLECCIN DE LA MUESTRA

Por masturbacin el mismo da del examen
Frasco de vidrio o de plstico atemperado 20- 40 C, de boca amplia.
Slo una eyaculacin
Se recomienda: abstinencia de 3-7 das.
Maximizar la calidad de la muestra.


Y reducir la variabilidad
Lo ideal: recoger la muestra en un cuarto cerca del laboratorio.
Evitar choque trmico (20 - 40 C).
Entregarlo lo antes posible (1h).
Hacer hincapi:
Evitar la perdida.
Lavarse bien las manos y genitales antes.
No utilizar preservativo ni el coitus interruptus
Usar frascos estriles de plstico

EXAMEN BSICO
Examen macroscpico: color, aspecto, olor, volumen, viscosidad,
turbidez, licuefaccin, y pH. ESTUDIO MACROSCOPICO
Concentracin de esp. y otras clulas.
Motilidad
Vitalidad. ESTUDIO
MICROSCOPICO
Morfologa espermtica.
Presencia de aglutinaciones.
Deteccin de anticuerpos antiespermatozoide unidos a la superficie
esp.

CARACTERISTICAS FSICAS.
El semen recin eyaculado es un coagulo muy viscosos, opaco blanco o
grisceo, que puede tener un olor mohoso o acre. Despus de 10 a 20 minutos, el
coagulo se licua espontneamente para formar un lquido translucido, turbio y
viscoso, que es ligeramente alcalino, con pH alrededor de 7.7. Volumen del semen
normal equivale a 3 a 6 ml.

RECUENTOS DE ESPERMATOZOIDES. Despus de la licuefaccin del semen,
los espermatozoides pueden contarse en la cmara de recuento de un
hemocitmetro, tras una dilucin inicial efectuada en una pipeta de leucocitos. Se
mezcla bien el semen y se absorbe una muestra hasta la marca 0.5 de la pipeta.
Despus se diluye hasta la marca 11 con la solucin siguiente:
Bicarbonato sdico 5 gr.
Formalina (neutra) 1 ml
Agua destilada 100 ml

Despus de cargar la cmara del hemocitmetro (cmara de Neubauer) siguiendo
la misma tcnica que para el recuento de leucocitos, se deja que los
espermatozoides inmovilizados sedimenten durante 2 minutos. Se cuentan
entonces en 2 mm
2
(2 cuadriculas grandes). Esta cifre, multiplicada por 100,000
dar el nmero de espermatozoides por mililitro.
Valores de referencia > de 20 millones/ml


La cantidad normal por mililitro es de 28 225 millones y se considera en
general como lmite inferior de la fecundidad del semen un mnimo de 60
millones/ml.
En el grabado de la pgina siguiente aparece la cuadrcula de la Cmara de
Neubauer. Solamente deben contarse los cuadros L y al final se aplica la
frmula: N x 20 x 10 / 4 por 1000

MOTILIDAD.
Se coloca una pequea gota de semen lquido en el portaobjeto de un
microscopio, precalentado hasta la temperatura corporal y despus se tapa con un
cubreobjetos en el que se ha untado un crculo de vaselina. La motilidad se valora
observando varios campos con el objetivo seco ms potente hasta que se haya
contado por lo menos un total de 200 espermatozoides. Es esencial enfocar a
travs del grosor total de cada campo, de modo que se incluyan los
espermatozoides inmviles que hayan podido asentar en el fondo del medio. Se
registra el % de espermatozoides que muestra una autentica motilidad, as como
clasificarlos en rpidos, lentos e inmviles.

REFERENCIA: En un eyaculado normal examinado entre 30 y 60 minutos
aproximadamente son mviles el 90% de los espermatozoides. 61% mviles,
pueden ser rpidos, lentos o de balanceo

MORFOLOGA.
La observacin morfolgica de los espermatozoides se hace sobre material
recogido en portaobjetos, dejados secar al aire y coloreados por distintos
mtodos. Uno de los mtodos ms utilizados es el de May-Grenwald-
Giemsa o hematoxilina.
Las extensiones se preparan en portaobjetos limpios de modo idntico a las
de la sangre. Teir con hematoxilina.

1) Con formalina al 10% (v/v) durante 1 minuto.
2) Lavar con agua,
3) Hematoxilina de Harris, durante 2 minutos

4) Lavar con agua
5) Secar al aire
6) Observar con objetivo de inmersin en aceite.

La observacin microscpica en los espermatozoides muestra que este
consta de una porcin ceflica o cabeza y una porcin caudal o cola; en total mide
unas 60 micras de longitud. La cabeza mide de 4 a 5 micras de largo por 2.5 a 3.5
micras de ancho. La cola mide 55 micras, la cola o flagelo posee nueve pares de
tbulos perifricos ms dos tubos centrales, caractersticos de cilias y flagelos...
Las anomalas morfolgicas pueden consistir en alteraciones de la cabeza del
espermatozoide, segn su tamao, puesto que a veces se observan
espermatozoides biceflicos. Las formas anormales pueden presentar a veces
cabezas muy aguzadas o bien redondeadas en exceso. La cola del


espermatozoide puede ser atpica y presentar una mala implantacin o una
duplicacin. Algunos autores aceptan hasta un 10% de formas anmalas en sus
distintos tipos.
El semen normal contiene menos del 30% de formas anormales, presencia
de hemates, leucocitos y clulas epiteliales.
Un hombre que presenta entre un 20 y un 60% de espermatozoides
anmalos, las probabilidades de tener un hijo sano oscilan entre el 55 y el 58.9%.
De un 60 a un 80% de formas anmalas producen una tasa de fertilidad del
46.2%. Si existe ms de un 80% de formas anmalas, la fertilidad potencial
desciende al 14%.

FORMAS ANORMALES.
2 cabezas, 2 colas, macromegalia (cabeza grande), micromegalia (cabeza
pequea)

NOTA: Recin obtenida la muestra, se debe determinar el pH y se anotar el
color, aspecto, viscosidad y volumen.
(*) La solucin de Saunders y Macomber debe prepararse en el momento. Para
100 ml de agua destilada, agregar 5 gramos de bicarbonato de sodio y un mililitro
de formol.
(**) En lugar de los colorantes citados, se puede teir el extendido de semen con
la tincin rpida para frotis sanguneo, fijando con metanol previamente y despus
introduciendo la preparacin 10 segundos en el colorante A, enjuagando y 10
segundos en el colorante B, enjuagando y secando al aire.



Cmara Neubaue

Corte transversal de un tbulo seminfero.



Formas Normales y Anormales de espermatozoides



PRACTICA NO. 2
DESARROLLO EMBRIONARIO
OBJETIVO.- Caracterizar el desarrollo gestacional del ser humano

INTRODUCCION.-
Los cordados a los que pertenece la especie humana surgen de disco
embrionario trilaminar, ectodermo, endodermo y mesodermo.
1.- Desarrollo embrionario.
Los aspectos embriolgicos que vamos a ver, se refieren a animales de
reproduccin sexual, o sea que comienzan su desarrollo a partir de una sola clula
(normalmente 2n) llamada cigoto o huevo, procedente de dos gametos, que pueden
ser iguales (isogametos) o con mucha ms frecuencia diferentes (anisogametos),
llamados vulo () y espermatozoide (). El citoplasma del cigoto presenta toda la
cantidad de sustancia alimenticia que el vulo haya podido aportar, pues el
espermatozoide slo aporta material gentico. A la sustancia alimenticia se le llama
vitelo y la cantidad del mismo est muy relacionada con el tipo de desarrollo. As si
existe poco vitelo, el desarrollo ser muy rpido o debe existir un aporte externo de
sustancia nutritiva.
El inicio del desarrollo ofrece aspectos semejantes en todas las clases animales.
Despus de la fecundacin, el huevo se divide numerosas veces
(segmentacin), alcanzando entonces el estadio de blstula. La blstula es el
origen de una fase ms avanzada, la gastrulacin, durante la cual las hojas
embrionarias se disponen adecuadamente, lo que corresponde ya el estadio de
gstrula. Despus de la gastrulacin, los rganos se esbozan y el desarrollo inicia su
especializacin (organognesis).
Segmentacin.
El cigoto formado en la fecundacin, se divide dando dos clulas hijas o
blastmeros, luego cada uno de stos se segmentan segn un plano
perpendicular al primer plano de divisin, quedando un estadio de 4 blastmeros.
Continua el proceso de segmentacin con sucesivas divisiones y cuando se llega a
un nmero determinado de blastmeros que depende de la especie y generalmente
no ms de 128, queda una estructura que recuerda el aspecto de una mora o
mrula, sin que se haya producido aumento de tamao. En teora la mrula en
corte se vera como una serie de blastmeros, en este caso de igual tamao, que
confluyen en la parte central, presentando dos polos, uno externo en contacto con
el medio ambiente y otro interno, en contacto con las otras clulas.
Cuando se ha formado la mrula se produce un aumento de tamao, adoptndose
la forma de una pelota. Los blastmeros han emigrado hacia la periferia, quedando
un hueco en el centro o blastocele, lleno de lquido o lquido blastoclico
producido por los mismos blastmeros a travs de entrada de lquido externo.
El blastocele o cavidad primaria nunca est en contacto con el exterior. A esta fase
se le llama blstula.
Hasta la fase de blstula no ha habido necesidad de aporte nutritivo externo. As si
el cigoto es de poco vitelo habr necesidad por ejemplo de aporte materno. Si el
huevo es de mucho vitelo el proceso ser diferente.


Gastrulacin.
Supondremos que nuestro cigoto es de poco vitelo y existe suficiente aporte
nutritivo.
La gastrulacin es el conjunto de procesos morfogenticos que conducen a la
formacin de las capas fundamentales de los metazoos. La actividad mittica, muy
intensa a lo largo de la segmentacin, disminuye aun sin cesar nunca por completo.
Los blastmeros, o agrupaciones de ellos, emprenden migraciones considerables de
las que se origina la segregacin celular en dos tipos, uno de los cuales cubrir al
otro. La capa externa o ectoblasto (ectodermo), cubre la capa interna o
endoblasto (endodermo). Pero la gstrula no es germen diblstico ms que en los
porferos y celenterados (cnidarios y ctenforos), en todos los dems metazoos, una
capa media o mesoblasto (mesodermo) queda intercalada entre las dos capas
antes mencionadas.
As, en la blstula una parte de los blastmeros comienza a invaginarse,
formndose el blastoporo. El lugar donde se produce esto, est regulado
genticamente. La invaginacin progresa, e invade todo el territorio del blastocele
que se va viendo reducido proporcionalmente al aumento del arqunteron o
nueva cavidad que se va formando, que tiene la particularidad de estar en contacto
con el exterior a travs del blastoporo.
Se ha formado una gstrula a travs del proceso de gastrulacin. Se han formado
dos capas de blastmeros, una en contacto con el exterior o ectodermo y otra en
contacto con el arqunteron o endodermo y entre las dos el blastocele con el
lquido blastoclico.
Como se ha comentado antes, algunos animales, porferos y celentreos, mantienen
esta etapa, siendo animales diblsticos (con dos hojas blastodrmicas). Por ejemplo
los plipos tienen dos capas y se pueden asemejar a una gstrula invertida, siendo
la mesoglea equivalente al blastocele y la cavidad interna e contacto con el exterior
equivalente al arqunteron, no as el gastroporo con el blastoporo, pues tienen
orgenes embrionarios diferentes. Estos animales son representantes de un nivel
celular muy sencillo que no han formado rganos sino algo parecido a tejidos.
Para que se hayan formado rganos se ha tenido que desarrollar una tercera hoja
blastodrmica, aunque de tal forma que no se aumente demasiado el volumen,
siguiendo la lnea anteriormente descrita.
En la gstrula diblstica, clulas del endodermo se invaginan formando unas bolsas
que se van ampliando hasta la consecucin de una tercera hoja blastodrmica o
mesodermo, incluida entre el endodermo y el ectodermo. Con dos capas, una
somatopleura cercana al ectodermo y otra esplacnopleura cercana al
endodermo.
El mesodermo delimita junto con el mediastino (que dar lugar al mesenterio) una
cavidad o celoma.
Los animales con tres hojas blastodrmicas se denominan triblsticos, tanto
acelomados, pseudocelomados como eucelomados.
La formacin del mesodermo, anteriormente descrita, se denomina enterocelia.


MATERIAL Y METODO.- Embriones y fetos, pelcula

PROCEDIMIENTO.- Observar la morfologa de las diferentes etapas
gestacionales y compare cada una de ellas

PRACTICA 3
MANEJO DE LAS TCNICAS HISTOLGICAS
OBJETIVO. .


1. El alumno conocer la importancia de la preservacin de los tejidos para su
estudio histolgico
2. Capacitarse en el procesamiento de material histolgico y en la realizacin
de coloraciones de rutina y especiales.

INTRODUCCIN.
Las clulas cuando son extradas de los organismos mueren por falta de
nutrientes y de factores de su micro-ambiente y sufren procesos de
descomposicin debido a la accin de enzimas como proteasas, lipasas,
DNAasas, RNAasas que comienzan a destruir el tejido. Los tejidos deben ser
tratados para su preservacin, por lo que se utilizan diversas tcnicas de
preservacin para mantener las estructuras conservadas de la clula. La tcnica a
utilizar depende del tipo de estudio y del tipo de tejido a utilizar. Si desean realizar
un estudio rpido del tejido se utiliza la tcnica por congelacin la cual permite
detener la actividad de las enzimas. Si desea realizar un estudio ms completo de
la estructura celular y requiere mayor tiempo de realizacin se puede utilizar la
preservacin por fijacin del tejido. Los estudios ms finos de la clula como la
observacin de su ultraestructura el tejido pasa por fijacin ms rigurosa para
poder obsrvalo por microscopio electrnico.

Existen reactivos aclaradores que actan borrando o moderando los
ndices de refraccin de los elementos tisulares. Mientras menos contrastes ms
claros aparecern los preparados y ms fcil ser la apreciacin de los elementos
coloreados. Entre los ms usados tenemos esencias o aceites de clavo, de cedro
o de organo, xilol, tolueno y cerosota.
Reactivos opacantes actan de modo contrario a los reactivos aclarantes,
oscureciendo el contorno celular y robando transparencia a la preparacin. Este
efecto es til cuando se observan clulas sueltas, filamentos libres y superficies
que exhiben expansiones delicadas (aire, alcohol, ter, acetona, agua corriente).
Reactivos aisladores liberando los elementos celulares de los tejidos o al
menos, facilitando su disociacin mecnica. Los ms usados son el cido ntrico al
25%, potasa al 40%, alcohol al 30%, cido sulfrico diluido, cido pcrico a
saturacin.
Reactivos ablandantes se usan para reblandecer los tejidos
excesivamente duros, como hueso y dientes, en virtud que disuelven las sales de
calcio. Tenemos a los cidos ntricos, tricloractico, crmico, clorhdrico y pcrico
que se emplea en saturacin.
Reactivos inofensivos, tambin llamados soluciones fisiolgicas, lquido
de Ringer, de Locke, de Bizozero, solucin amortiguadora de fosfatos (PBS).
Reactivos colorantes son sustancias que permiten distinguir detalles
estructurales invisibles o poco aparentes al microscopio, encontramos dos tipos
generales:
a) colorantes naturales, extrados de productos animales o vegetales, como el
carmn, la hematoxilina, la orcena y la safranina.

b) Colorantes artificiales, conocidos como colorantes de anilina, colorantes de
carbn o colorantes sintticos.
Reactivos conservadores son aquellos que protegen a los tejidos de la
putrefaccin, conservan el color y evitan cambios que pudieran sufrir las
preparaciones histolgicas. Estos reactivos eliminan el agua del preparado,
evitando todo crecimiento bacteriano, otras veces sustituyen el agua por
materias resinosas imputrescible. Tenemos a la glicerina, blsamo de
Canad, resinas sintticas, gelatina, licor de Apathy y licor de Ferrant.



Mtodos histolgicos.
La clula es la estructura bsica vital del organismo y esta compuesta
principalmente de protenas, hidratos, lpidos y sales inorgnicas, por lo que el
objetivo principal es la preservacin de los componentes celulares para as evitar
la autolisis y la proliferacin que altera los componentes celulares, conservando la
arquitectura y composicin tisular lo ms semejante a como se encuentra en el
organismo vivo, y para ello se utilizan diferentes mtodos histolgicos.
Los mtodos histolgicos abarcan varios procedimientos a los que se somete un
tejido para proporcionar los cortes como se conocen, montados bajo un cubre
objeto con imgenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo
microscopa ptica o electrnica. Para la obtencin de cortes para observar a
microscopio, hay que seguir un protocolo en el que se incluye la obtencin de la
muestra, su corte y montaje.

Para empezar con la tcnica histolgica se debe obtener una muestra del tejido.

Los especimenes para estudio histolgico son producto de reseccin quirrgica o
de necropsia. En ocasiones, con fines de investigacin tambin se puede obtener
material de animales de experimentacin.
Sacrificio animal; en el caso de proyectos de investigacin en los cuales se
emplean animales de experimentacin, se requiere su sacrificio para obtener tejido
y rganos susceptibles de ser estudiados macro y microscpicamente.
El grosor del tejido es de 0.5 cm., el dimetro varia dependiendo del rgano a
estudiar

1. Fijacin: Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con
sustancias qumicas, de manera que mantenemos las clulas y tejidos con las
propiedades intactas lo mejor posible en morfologa y composicin qumica al
estado vivo. Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra
manera iniciaran la autlisis y llevaran a la DEGENERACIN POST MORTEM.
La fijacin mantiene las estructuras al estimular la formacin de enlaces cruzados
entre las protenas.
Los tipos de fijacin son variados y depende del tejido. Algunos funcionan
deshidratando los tejidos como son los alcoholes (etanol, metanol), o combinados
con cidos (cido actico, pcrico), cido crmico. Otros fijadores polimerizan para
formar un red entre la clula y de esa formar conservar la estructura celular, tales
como formaldehdo, formol y paraformaldehdo, glutaraldehdo. Otros ms son
compuestos ms fuertes como cacodilato o sales de osmio, platino y mercurio.
Las desventajas del uso de los fijadores es que son txicos para las clulas
vivas de nuestro cuerpo, pueden ser irritantes, fijan las clulas y algunos son
cancerigenos, por lo que se deben utilizar con las medidas adecuadas (guantes,
gafas protectoras, mascarillas). El tiempo de fijacin oscila entre 30 minutos a 12
horas dependiendo del grosor del tejido, las clulas libres requieren solo de 30
minutos, tejido delgado de 2 horas y ms grueso hasta de 12 horas, entre ms
delgado sea el tejido mejor se fijar.

Una imagen igual ha de observarse en todos los tejidos idnticos obtenidos
de diferentes individuos de una misma especie.

Su reproducibilidad en todas las preparaciones histolgicas obtenidas de
los tejidos, independientemente del proceso de fijacin.

Principios generales de la fijacin.
No existe un mtodo universal de fijacin


No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido
Un defecto de fijacin jams puede ser corregido
Es imposible realizar un estudio histolgico sobre un material con graves
defectos de fijacin.

Cuando se va a utilizar un fijador siempre hay que investigar lo siguiente:

1. Concentracin patrn. 11. Cambios volumtricos de la
muestra.
2. Formula qumica. 12. Endurecimiento de la muestra.
3. Descripcin (apariencia). 13. Lavado del fijador.
4. Potencial de oxidacin. 14. Efectos del fijador sobre clulas.
5. Reaccin con las protenas. 15. Compatibilidad qumica.
6. Reaccin con los cidos nucleicos. 16. Efecto sobre antgenos.
7. Reaccin con los lpidos. 17. Precauciones de salud.
8. Reaccin con los carbohidratos. 18. Almacenamiento.
9. Tiempo de penetracin. 19. Influencia sobre la inclusin.
10.Constante de fijacin. 20. Influencia sobre las
coloraciones.

GENERALIDADES.
Cantidad. Por lo menos de 3 a 5 volmenes de fijador deben de ser utilizados por
cada volumen de tejido.
Penetracin: ningn fijador penetrar ms de 2 a 5 mm, en tejido dolido, y 0.5 cm.
en tejido poroso, en un periodo de 24 horas.
Tiempo: la mayora de los tejidos deben de permanecer en fijacin por lo menos
12 horas.
Temperatura: la mayora de los fijadores se realizan a temperatura ambiente.
Calor: el calor coagular las protenas, pero no se recomienda para la fijacin.

2. DESHIDRATACION .- El proceso de la deshidratacin es otro de los
pasos importantes que sigue a la fijacin, este es el proceso que tiene por
finalidad la eliminacin completa del agua en el espcimen tanto intra como
extracelular, esto se lleva acabo mediante el uso de alguna sustancia que se
mezcla con el agua y tenga cierta afinidad con ella de manera que pueda penetrar
fcilmente entre las clulas de los tejidos y que pueda ser eliminada y
reemplazada adecuadamente en aquellos medios de inclusin que no sean
hidrosolubles, y se puede llevar a cabo empleando agentes qumicos o reactivos
deshidratantes

Dentro de loa agentes deshidratantes tenemos; Alcohol etlico, alcohol metilico,
dioexano, estos debe se utilizarse en graduaciones de menor a mayor
concentracin, esta puede ser variada dependiendo el laboratorio, en la practica
se utiliza alcohol al 80%, alcohol 96%, alcohol absoluto.

3. ACLARAMIENTO O DESALCOHOLIZACION.- (Interactuar con la
parafina) Como su nombre parece indicar su finalidad no es de hacer transparente
el tejido, pero en algunas ocasiones suele ocurrir. Esto se debe a sus elevados
ndices de refraccin y a los cambios pticos que se producen cuando el agente
aclarante penetra entre los elementos tisulares muy refractantes.


Es un proceso que permite que el alcohol de los tejidos (agente
deshidratante) sea reemplazado por una sustancia miscible con el medio de
inclusin que se va a utilizar (parafina) ya que lo que se pretende es que el tejido
se encuentre embebido con un agente qumico lquido, el cual pueda disolverse
en el medio de inclusin y as penetrar en el tejido.
Existen diferentes agentes: Benceno, xileno, ter de petrleo, tolueno,
cloroformo etc.
Loe mejores aclarantes, deben de eliminar rpidamente el alcohol y aclarar
sin producir endurecimiento, adems de favorecer su rpida evaporacin, durante
los baos de parafina, al agregar el agente aclarante no debe de existir turbidez.

4. INFILTRACIN O IMPREGNACION.- Este proceso tiene por objeto
= rellenar o infiltrar = completamente la muestra histopatolgica con el medio
que se va a utilizar para embeber el tejido. El fundamento de este proceso es la
ocupacin completa de todas las cavidades naturales, espacios e intersticios
tisulares y an los espacios intra y extracelulares inicialmente rellenos por el agua
intracelular, por lo que para lograr esto, es muy importante eliminar primeramente
los restos de los aclarantes en el tejido, ya que la finalidad de este proceso es la
de proporcionar homogeneidad y dureza suficiente a la pieza anatmica, sin
provocar distorsin morfolgica y sin alterar las relaciones del tejido y elementos
tisulares, para que se puedan obtener secciones finas y de buena calidad.
Adems se pueden realizar infiltraciones en diferentes medios, algunos
hidrosolubles, pero el mtodo preferido sigue siendo la parafina.
La parafina debe de tener un punto de fusin entre 56- 58

5. Inclusin: Por lo general, los tejidos son estructuras blandas y
frgiles, incluso despus de la fijacin. De tal forma que previo a la obtencin de
los cortes, es necesario incluirlos en un medio de soporte. Los medios ms
utilizados son las ceras o resinas. En estado lquido, estos medios tienen la
capacidad de penetrar y rodear el tejido, de esta forma se puede producir el
endurecimiento (por enfriamiento o por polimerizacin), para formar un bloque
slido que pueda ser cortado fcilmente en el micrtomo. Existe otro mtodo
alternativo, que es la congelacin rpida del tejido en un medio gelatinoso, que
permite el corte tisular directo del fragmento congelado, que puede ser cortado en
forma inmediata en un micrtomo especial denominado criostato. El objetivo de la
inclusin es hacer facilitar la seccin del tejido a cortes lo suficientemente
delgados como para permitir el paso de la luz y ser examinados mediante el
microscopio.

Por lo general se coloca la muestra de tejido en un recipiente y se le agrega
la parafina fundida a 60 C, colocando la muestra en una estufa de 30 minutos a 6
horas manteniendo la temperatura a 60 C. Despus se coloca la pieza y un poco
de parafina fundida en un molde de papel, escuadras o moldes de acero
inoxidable de forma rectangular y se deja solidificar a temperatura ambiente,
formndose un bloque slido de parafina con el trozo de tejido incluido, a este se
le denomina bloque. Los medios de inclusin para Microscopa Electrnica
comnmente utilizados son resinas polimerizadas, son parecidas al metacrilato.

6. Corte: El bloque ahora se puede cortar en secciones lo
suficientemente delgadas como para permitir el paso de la luz. La mayor parte de
los preparados para microscopa ptica tienen un grosor entre 3 a 5 micrmetros.
Para estos cortes se utiliza un aparato llamado MICROTOMO, con cuchillas de
acero inoxidable, estas tienen un ngulo en la parte lateral del filo. (bisel), tambin
existen cuchillas de diamante o e vidrio


Existen diferentes tipos de micrtomos, entre ellos tenemos el de rotacin
tipo minot, criostato, vibratomo, de deslizamiento y los ultramicrtomos
El procesamiento del tejido depende del micrtomo a utilizar
a) MICROTOMO DE CONGELACIN: Cuando deseamos estudiar grasas o
lpidos que se extraen en el proceso de aclaramiento o enzimas que quedan
inactivadas por el calentamiento de la inclusin, nos auxiliamos con la Tcnica de
Congelacin de Tejidos. Un tejido congelado, es los suficientemente duro para ser
cortado. Se sumerge la muestra de tejido en Nitrgeno lquido para tener una
congelacin rpida, o tambin en un medio de inclusin que es el tessiu-tec.
Luego se corta con un aparato especial denominado, existe un aparato ms
elaborado y eficiente para los cortes de congelacin llamado CRIOSTATO. La
ventaja de esta tcnica es que los cortes que se obtienen son muy rpidos, se
puede utilizar en el diagnostico de material patolgico, tomado en intervenciones
quirrgicas y el resultado se obtiene en el transcurso de una operacin.
b) VIBRATOMO: Este no requiere la fijacin del tejido, ya que los cortes se
realizan a un grosor entre 100 a 300 micros..

c) MICROTOMO DE DESLIZAMIENTO O ROTATORIIO: El tejido debe de ser
protegido con un polmero extra como es la parafina y as lograr cortes entre 3 y 5
micras.

d) MICROSCOPIA ELECTRONICA: se requieren cortes ms delgados
(denominados ultra finos) de aproximadamente 600-800 A de espesor y de 0.5
mm. de lado medio. Para esto se utiliza un ULTRAMICROTOMO, este utiliza
cuchillas de diamante o de vidrio, , son incluidos en pocillo hecho con cinta de
plata o aluminio. Una vez preparados, se montan sobre rejillas de cobre con un
dimetro de 3mm y que pueden ser de diferentes formas y material

7. TINCIN: Las tcnicas de tincin varan de acuerdo a la estructura a
observar, tenemos colorantes bsicos y cidos que van a teir
macromolculas cidas o alcalinas (hematoxilina, eosina, wright). Tenemos
otros colorantes con afinidad a ciertas grupos qumicos como son los
colorantes proteicos que se unen a grupos aminos libres, sulfhdricos libres
o hidroxilo libres, ejemplos de estos tenemos Coomassie, cristal violeta,
nitrato de plata, azul de metileno). O tenemos otros especficos a
estructuras como dicromatos para teir protenas de la matriz extracelular.
Existen otros tipos de colorantes fluorescentes que solo son visibles con
una lmpara de tungsteno, donde emite longitudes de onda de ultravioleta,
existen las tcnicas de inmunofluorescencia donde se utiliza anticuerpos
que reconocen un antgeno especifico, y posteriormente se utiliza un
segundo anticuerpo conjugado con un fluormetro (FICT, rhodamina), o con
una enzima y se visualiza con el sustrato calorimtrico (peroxidasa,
fosfatasa alcalina, etc.).
Es indispensable que las muestras sean transparentes o muy claras, y como
utilizaremos microscopio compuesto, tenemos que colorear o contrastar. Para
teir un corte de parafina, previamente eliminamos la parafina porque es
insoluble en agua, y lo hacemos con un solvente orgnico como xilol
En nuestro caso desparafinamos con xilol 2 veces 5 minutos cada vez, luego
tenemos que proceder a la hidratacin que se hace con una serie decreciente
de alcohol. Utilizamos primero etanol absoluto, luego etanol al 96%, 10 baos
en cada uno, lavamos en agua destilada. Y ya podemos aplicar la solucin
acuosa coloreada que s podr teir nuestra muestra. Los cortes ya hidratados
se ponen en unos vasos copleen, y no hay que dejar nunca que se sequen las
muestras. Despus de cada coloracin hay que hacer un bao con agua. En el


caso de la hematoxilina de Harris (color prpura) lo dejamos 2 minutos.
Despus se lava con agua corriente, se diferencia con alcohol cido, se lava
con agua corriente, se vira con carbonato de litio, agua amoniacal o solucin
scout, se lava con agua corriente y se contrasta con eosina 10 baos.,
posteriormente deshidratamos en etanol al 96%, etanol absoluto 10 baos en
cada uno y aclaramos en xilol 2 veces por 5 min. cada uno y finalmente se
coloca el cubreobjeto aplicando una resina sinttica como es el blsamo de
Canad y resina Entellan de Merck. Y ya lo tenemos preparado para observar.
Los cortes una vez teidos pueden ser conservador por muchos aos
.

PRACTICA NO 4
DISECCIN DE ANIMALES DE LABORATORIO.


OBJETIVO. El alumno conocer los diferentes rganos y aparatos que componen
un ser vivo.

INTRODUCCIN.
Un ser vivo cuenta con una serie de rganos y aparatos para su
sobrevivencia, todos ellos funcionan como un todo para el procesamiento de
alimentos, obtencin de nutrientes y oxigeno y la coordinacin del movimiento,
proteccin del medio exterior. El aparato digestivo funciona como un proveedor de
nutrientes obtenidos del medio exterior, lo procesa desde su degradacin
mecnica y qumica hasta su absorcin al organismo. As tenemos en la
degradacin mecnica y qumica el alimento pasa por boca, esfago, estomago e
intestino. Su absorcin se lleva a cabo en el intestino delgado y grueso. El aparato
circulatorio transportar los diferentes nutrientes a todo el organismo, la fuerza
motriz de la circulacin de los nutrientes por la sangre la realiza el corazn. Uno
de los nutrientes esenciales para la vida es el oxigeno que es capturado por el
aparato respiratorio. Los nutrientes son metabolizados y eliminados por rin,
pulmn y piel. El sistema nervioso se encarga de la planeacin, control y
regulacin de las funciones del organismo, por lo que, aparte del corazn es
primeramente nutrido que otros rganos o sistemas.
La diseccin tiene algo muy especial. Permite descubrir la anatoma
La descripcin de un organismo, usualmente involucra su diseccin, por lo que en
esta sesin se explorarn las tcnicas de reconocimiento de estructuras
morfolgicas internas y rganos. Una discusin que generalmente se presenta
cuando se sacrifica o experimenta con un organismo para fines de estudio, es
precisamente el valor de la vida y del propio organismo que se trabaja, por lo que
se sugiere considere este tema dentro de la discusin de sus resultados. Para la
seleccin del organismo a disecar, restringiremos por razones prcticas a
animales vertebrados, de tamaos mayores de 15 cm. Como ejemplo pueden ser
un conejo, rata, pollo, rana, culebra o un pez

MATERIAL Y REACTIVOS.
1. Equipo de diseccin (tijeras, pinzas hemostticas, pinzas de diseccin,
bistur, etc.)
2. Tabla de diseccin.
3. Frasco de vidrio de 2 litros
4. Frascos de plsticos de 100 ml, boca ancha
5. Frasco de vidrio de mayonesa de 500 ml
6. ter
7. Solucin de cido ntrico al 5%
8. 250 ml solucin salina isotnica
9. 2 litro formol al 10%.
10. Algodn
11. Bolsa amarilla para deshecho de animales.
12. Guantes, gafas protectoras, navajas, (traer los alumnos)

METODOLOGA.
Se realizar la diseccin de una rata para reconocer los siguientes rganos y
sistemas Aparato digestivo, hgado, riones, corazn, pulmones, aparato
reproductor, cerebro.



Llevar una rata por equipo y un hueso de pierna de pollo fresco colocarlo en
formol al 10%.
1.- El animal ser anestesiado con ter en el frasco de 2 litros.
2.- Una vez dormido el animal, se coloca en la tabla de diseccin y se sujeta a
esta.
3.- Se realiza una incisin en la parte media del abdomen y se corta la piel hacia
los lados. Despus se corta el msculo y se expone los rganos que se encuentra
en el abdomen. Se identifica el estmago, intestinos, hgado, pncreas, bazo,
rin y aparatos reproductores. Se prosiguen a extraer el corazn abriendo el
trax del animal, los pulmones, timo, tiroides, paratiroides. Y por ltimo se extrae
el cerebro.
4.- Los rganos extrados sern depositados en solucin salina para lavar la
sangre y pasarlos a frascos de plsticos con formol al 10%.
5.- El hueso de pollo en un frasco con formol al 10% que se mantuvo por 12 horas.
Se lava con agua corriente, por 10 minutos. Se le realiza el procedimiento de
descalcificacin. Se pasa a un frasco una porcin del hueso con cido ntrico al
5% durante 24 horas, dependiendo del tamao del hueso.
6.- Los restos del animal sern llevados al bioterio para su incineracin.



PRACTICA 5
PROCESAMIENTO DE TEJIDOS E INCLUSIN EN PARAFINA.

OBJETIVO.
El alumno aprender a procesar los tejidos para su estudio histolgico.

Conocer los diferentes medios de inclusin, pero sobre todos saber la
orientacin de los tejidos a la hora de incluirlos en la parafina o en cualquier
medio de inclusin, as como tambin su elaboracin con los moldes.

INTRODUCCIN.
Se denomina mtodo o tcnica histolgica al conjunto de operaciones
destinadas a demostrar la disposicin estructural de los tejidos. Cada mtodo
incluye una serie de actos tcnicos para determinar cada particularidad de una
estructura dada. Existen un gran nmero de mtodos, por lo cual se mencionar
dos grupos generales.
Mtodos para examen en vivo. Este se puede realizarse en lquidos
orgnicos, en tejidos disociables y en membranas transparentes,
mantenindose en un reactivo inofensivo o bien mediante el mtodo de los
cultivos celulares.
Mtodos para el examen de tejidos privados de vitalidad. La dificultad de
ver directamente con el microscopio la arquitectura natural de la mayora de
los tejidos, por su grosos y opacidad, y sobre todo por la rpida
descomposicin que experimentan, ha dado lugar a una serie de
operaciones indispensables para evidenciar la estructura tisular y
consrvala durante mucho tiempo en preparaciones fijas, las que son muy
tiles en todos los campos de la biologa. En este curso solo se mencionar
este tipo de mtodos.

Comprende la fijacin tisular, la deshidratacin, el aclaramiento y la infiltracin o
impregnacin del tejido. Este comprende 12 horas y se utilizan (1) al 10%, (1)
alcohol al 80%, (3) alcohol al 96 %, (3) alcohol absoluto, (2) xilol y (2) parafina
fundida a 60 c

a) FIJACIN TISULAR
b) DESHIDRATACION
c) ACLARAMIENTO O DESALCOHOLIZACION
d) INFILTRACIN O IMPREGNACION
e) INCLUSION EN PARAFINA

Orientacin de la pieza.
Una vez infiltrado el tejido, este se coloca en la posicin adecuada al tipo de
corte que se va a realizar, tomando en cuenta que la cara anterior del bloque es la
superficie del corte, el tejido deber orientarse de tal modo que la parte ms
blanda se corte primero y la ms dura o firme al final del proceso y asegurndose
de que se obtiene una seccin completa.

Debe haber un margen adecuado de medio de inclusin (2 mm, mnimo) rodeando
el tejido por todos lados para que el apoyo al cortar sea el mximo posible.



Los especimenes grandes y slidos (rectangulares grandes) como el tero,
la prstata, la glndula tiroides y el tejido seo se deben de incluir con un ligero
ngulo de relacin al borde de la cuchilla, para que esta empiece el corte con
menos resistencia, reduciendo as la posibilidad de desplazar el tejido fuera del
bloque.

Los tejidos pequeos (aguja fina, gastrointestinal) se orientan
diagonalmente y no en el mismo plano para que la resistencia a la cuchilla durante
este proceso no sea simultnea.

Las estructuras tubulares, deben de incluirse como las corta el patlogo, de
manera que se vean todas las capas de la pared (vasos deferentes, venas,
arterias y oviducto), estos deben ser incluidos de tal forma que la cuchilla corte a
travs de la luz tubular. La orientacin deber ser tan vertical como sea posible,
por lo que la cuchilla deber hacer los cortes en una forma que sea perpendicular
al eje longitudinal del tubo.

Los especimenes delgados, estructuras qusticas (quistes) deben ser
incluidos con la superficie de corte hacia abajo para que as la cuchilla corte a
travs de todas las capas de la pared del quiste.

Los especimenes con mucosa o epitelio (piel, intestino vescula biliar, la
vejiga urinaria y el tero), deben de ser colocados de tal forma que el plano se
seccin pase a travs de todas las capas del tejido. La superficie epitelial debe de
colocarse en la parte ms alta del bloque para que esta sea la ltima en ser
cortada. Si son varios los fragmentos, la mucosa o el epitelio debe de estar
uniforme al mismo lado y los fragmentos diagonales al corte, de manera que la
cuchilla no encuentre el epitelio de todos los fragmentos al mismo tiempo.
Las rganos (rin, hgado, ganglio linftico, plipos) se incluyen con la
cara hacia abajo (descanso sobre el fondo del molde)
Si existe una marca en el tejido (tinta, ranura) esto significa que la cara esta
hacia abajo, por lo que la marca debe de ir alejada al fondo del molde.
|
Si los especimenes son mltiples deben de incluirse con la superficie ms
grande hacia el fondo del molde

MATERIAL Y REACTIVOS
Dispensador de parafina lquida.
Escuadras metlicas de diferentes tamaos.
Bases metlicas para las escuadras.
Cassettes.
Anillos de inclusin.
Moldes de acero inoxidable para cassettes.
Pinzas.
Plancha fra o refrigerador para solidificar el bloque.

PROCEDIMIENTO:

1.- EXTRACCION DE LAS CAPSULAS CON LAS MUESTRAS DE TEJIDO DEL
HISTOQUINETTE PARA LA ELABORACION DE LOS BLOQUES.
a) Apertura de las cpsulas.
b) Verificar que las cpsulas contengan el tejido y numeracin
correspondiente al indicado en el listado, as como el numero de
fragmentos


c) Colocacin de los tejidos en recipientes metlicos (cassettes, moldes
paraflex, moldes metlicos de acero inoxidable) con parafina lquida a 56-
58 C pura.
d) Colocacin del nmero correspondiente en uno de los extremos del
bloque.
e) Enfriamiento de los bloques de parafina, para la separacin de los
moldes de inclusin.
f) Enfriamiento de los bloques para su posterior corte en micrtomo.

Material

4 Kg. de parafina
2 litros de formol al 10 %
2 litros de alcohol al 80%
6 litros de alcohol al 96%
6 litros de alcohol absoluto
4 litros de xilol
20 bolsas de gasa (5 por equipo, traer el alumno)
Guantes (por alumno)
Gafas protectoras por alumno



PRACTICA 6
REALIZACIN DE CORTES HISTOLGICOS
OBJETIVO.
Conocer los diferentes tipos de micrtomos, sus principios bsicos y
aprender a realizar cortes histolgicos con el micrtomo.

INTRODUCCIN:
La variacin de imgenes microscpicas depende esencialmente de su
calidad tcnica, la cual viene determinada tanto por el microscopio como por la
naturaleza del objeto (tejido), que se examina. Muchas veces no se conoce
precisamente a sta ltima condicin la suficiente importancia en la investigacin
de las preparaciones histolgicas. La diferencia de la imagen, debidas al objeto
(tejido), se suelen checar al microscopio, cuando en numerosas ocasiones han de
atribuirse a la imperfecta confeccin de los cortes obtenidos con el micrtomo.
La precisin ptica del microscopio deber correr con la precisin mecnica
de micrtomo, si se quiere que el resultado de todo el empeo tcnico, no
depender exclusivamente de las circunstancias sugestivas, como son la destreza
y la experiencia en el empleo del micrtomo y del microscopio. En la actualidad los
micrtomos se valoran en base a otros criterios que los empleados hace algunos
aos, ya no son decisivos nicamente las precisiones tcnicas de un micrtomo,
sino tambin el grado de eficacia con que el usuario puede llevar a la prctica el
potencial ofrecido.

El micrtomo es un instrumento mecnico con el que se realizan
secciones tisulares translcidas de un espesor micromtrico y lo suficientemente
delgadas, susceptibles de ser colocadas para permitir su observacin.

El trmino micrtomo fue introducido por C. Chevallier en 1839 y el
termino (1er histotecnlogo) por Lee en 1885. En el micrtomo se realizan cortes
tisulares de grosor micromtrico y lo suficientemente delgadas para permitir su
observacin microscpica. Segn el tipo de trabajo, la forma en que se hizo la
preparacin y la inclusin del tejido es el tipo de micrtomo que se usa.

Todos los micrtomos tienen principios bsicos semejantes en su
funcionamiento, los cuales son:

a) Un portabloques es en el que se sostiene el material que se va a cortar,
el cual avanza discontinuamente sobre una cuchilla, debido a un mecanismo
regulable de cremallera. De manera peridica se hace incidir el bloque sobre la
cuchilla, obtenindose secciones tisulares de grueso equivalente al previamente
seleccionado en el tornillo micromtrico que controla el mecanismo de avance. En
los portabloques antiguos, la fijacin del bloque se realiza adhirindolo, con
parafina previamente calentada a la superficie rugosa del portaobjetos, los
micrtomos modernos poseen un mecanismo de pinza, el que se adapta a
cualquier tipo de base o molde con el que esta fabricado el bloque. Es conveniente
que el portabloques est tambin provisto de orientacin que garantice su
paralelismo con la cuchilla.

b) Un portacuchillas clsico, el cual consiste en un dispositivo de
fijacin basado en una pinza orientable especialmente, esta pinza permite variar el
ngulo de inclinacin de la cuchilla, as como tambin su grado de aproximacin al
portaobjetos.



c) Mecanismo de avance del portabloques sobre la cuchilla, este es un
sistema mecnico electrnico que proporciona cortes sucesivos de tejido a partir
del bloque. El continuo perfeccionamiento de los sistemas de avance, as como su
motorizacin ha permitido una progresiva mejora de las tcnicas de corte.

Existen diversos tipos de micrtomos, entre los cuales destacan los
siguientes:

1. Micrtomo oscilatorio o de balance..
2. Micrtomo de rotacin o tipo Minot.
3. Micrtomo de deslizamiento
4. Criostto o criotomo
5. Ultramicrtomo.

Cubreobjetos.
Portaobjetos.
Parafina histolgica.
Refrigerador.
Micrtomo.
Cuchillas.
Bao de flotacin.
Plancha con termostato para fijar las preparaciones histolgicas.
Horno o estufa para desparafinado.

PROCEDIMIENTO:

1.- PREVIO AL CORTE SE REALIZA AFILADO Y ASENTADO DE CUCHILLAS.

2.- CORTES HISTOLGICOS EN MICRTOMO ROTATORIO TIPO MINOT.
a) Enfriamiento del bloque.
b) Fijacin del portabloques.
c) Orientacin del bloque.
d) Orientacin de la cuchilla del micrtomo, con el bloque para su
desbastado.
e) Seleccin del espesor del corte.
f) Realizacin de las secciones.
Rebajar el bloque hasta que el tejido se vea ntegro.
Cortar a 5 micras.
Colocacin del corte y extensin con un pincel en el bao de
flotacin.
Marcar las laminillas con el nmero correspondiente a la muestra
(tejido).
Seleccin y colocacin del corte en el portabloques.
Escurrir el exceso de agua en las preparaciones histolgicas.
Fijacin a calor de las preparaciones histolgicas (plancha con
termostato a 56-58 C).
Desparafinado de los cortes histolgicos en horno o estufa a 60 C
durante 30 min.

RESULTADOS: cortes bien elaborados, sin mellas y plegamientos.









PRACTICA 7
TINCION HEMATOXILINA EOSINA
.
OBJETIVOS: Conocer el principio de la tincin. As como los problemas que se
presentan al realizarla.

INTRODUCCION:
Esta es una tincin empleada rutinariamente para la interpretacin de los
tejidos, la razn por lo que la emplean es que tiene una variedad de matices
rosados y rojos que provoca la coloracin con eosina, a lo que se une la excelente
definicin nuclear que da la hematoxilina.

Este mtodo consta de una fase inicial, en la que se van a colorear los
ncleos celulares con la hematoxilina y una fase interior de contraste
citoplasmtico y de los componentes extra celulares con la eosina.

Esta coloracin generalmente se usa como base ya que el 90 % de los
diagnsticos se hacen con este mtodo, el producto final depende mucho de la
destreza del Q.F.B, Histotecnlogo, Tcnico de laboratorio y los colorantes en
uso.
La hematoxilina es uno de los colorantes usados en la tincin de H&E. Es
un colorante natural el cual se extrae del palo de Campeche, este al ser
combinado con sales de aluminio, hierro, cobre y tungsteno, tiene excelentes
propiedades para teir el ncleo.

El agente qumico activo de la Hematoxilina es la Hematena, que se
forma por la oxidacin de la hematoxilina, este proceso de oxidacin
maduracin ocurre cuando la Hematoxilina se deja en reposo por algunos
das o semanas despus de aadir el oxidante (yodato de sodio)

Basado en las concentraciones del colorante, las hematoxilinas estn
clasificadas en regresivas y progresivas.
La Hematoxilina de Harris se utiliza en el mtodo regresivo, el cual consiste
en teir y luego someterlo a un proceso de decoloracin controlada en alcohol
cido.
El otro mtodo es el progresivo, usando la Hematoxilina de Mayer, el cual
consiste en teir todas las estructuras del tejido y luego someterlo a una
diferenciacin con solucin amoniacal o con carbonato de litio. Para que haya
uniformidad en el tejido se debe de utilizar una sola frmula de Hematoxilina y
llevar un control diario de tiempo y calidad.

La Eosina es un colorante que se emplea para teir estructuras
citoplasmticas, este colorante se puede utilizar en base acuosa o alcohlica para
darles contraste al teido nuclear de la hematoxilina.
La adicin de floxina a la eosina le da un contraste variado rosado (al
citoplasma) a rojo vivo (msculo y colgeno) La combinacin de hematoxilina con
la eosina es una reaccin que tiene cargas positivas y negativas.

El primero es un colorante con molculas cargadas positivamente, de
naturaleza bsica (basfilo) con afinidad nuclear y el segundo consta de molculas
cargadas negativamente, es acidfilo con afinidad por el citoplasma.



La ventaja de la H&E es la facilidad con que se pueden decolorar y teir
otros constituyentes en los tejidos que en ese momento pueden determinar y
solucionar un diagnstico difcil.

Alcohol absoluto.
Alcohol del 96 %
Xilol.
Carbonato de litio.
Alcohol cido.
Hematoxilina de Harris.
Eosina Amarillenta.
Cajas de cristal para tincin.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.

SOLUCIONES:

1.- EOSINA.
264 c.c. de alcohol del 95 %. Acompletar a 300 c.c. con H
2
O destilada.
10 c.c. de eosina al 5 %, acompletar a 100 c.c. de H
2
O destilada.
A sta agregar 2 c.c de cido actico.

II.- SOLUCION SATURADA DE CARBONATO DE LITIO.
Carbonato de litio. 4.0 gr.
Agua destilada. 400.0 ml.

III.-ALCOHOL ACIDO.
Alcohol al 70 %. 990.0 ml.
cido clorhdrico 10.0 ml.

IV.- HEMATOXILINA DE HARRIS.
Hematoxilina. 5. 0 gr.
Alcohol absoluto. 50.0 ml.
Sulfato de aluminio y potasio (alumbre) 100.0 gr.
H
2
O destilada 1000.0 ml
Oxido rojo de mercurio. 2.0 gr.

Disolver la hematoxilina en el alcohol absoluto.
El alumbre en el agua destilada, con ayuda del calor.
Retirar del calor y aadir el oxido de mercurio lentamente.
Calentar hasta un color prpura oscuro.
Retirar de la flama, inmediatamente colocar en agua fra hasta que enfre.

El colorante se coloca en un frasco oscuro y esta listo para usarse.
Agregar de 2 a 4 mi de cido actico por 100 In! de solucin.

Nota.- Como regla general en la preparacin de esta hematoxilina tiene que
tomarse en cuenta que todos los componentes de la frmula deben de
agregarse en el orden establecido y deben de estar disueltos totalmente antes
de agregar el siguiente.

PROCEDIMIENTO:
Fijacin: Formol al 10 %.


Tcnica: Cortes en parafina a 5 micras.

PROCEDIMIENTO PARA TEIR
Desparafinar e hidratar hasta agua corriente de la llave.
Hematoxilina de Harris...................................................3 a 5 min.
Lavar en agua corriente de la llave .. 5 min.
Alcohol cido, ( diferenciar) .. l bao
Lavar en agua corriente
Carbonato de litio, (virar).10 baos
Lavar en agua corriente
Contrastar con Eosina.10 baos
Deshidratar, aclarar y montar

OBSERVACION AL MICROSCOPIO.
RESULTADOS:
Ncleos - azules.
Eritrocitos - naranja a rosa
Citoplasma - rosa.
Estructuras restantes - rosado a rojo.

EXPLICACION DE LA TECNICA:
1. Desparafinar e hidratar hasta agua de la llave.
2. La hematoxilina tie los ncleos.
3. Se lava en agua para quitar el colorante.
4. Aqu se lleva a cabo la diferenciacin este es relativo, remueve el colorante
de ciertos componentes tisulares ms fcilmente y rpidamente que otros.
La diferenciacin generalmente da un intenso contraste de tincin porque
los iones hidroniun e hidrxido en los solventes usados para diferenciar se
difunden ms rpidamente que aquellos iones de cualquier colorante
5. Lavar el exceso de alcohol cido.
6. El carbonato de litio vira las secciones de tejido de color morado a azul.
7. Quitar el carbonato de litio.
8. Contrastar, aqu se tien las estructuras citoplasmticas.
9. Deshidratacin, se lleva a cabo por medio de alcoholes de menor a mayor
concentracin y esta consiste en separar el agua de las preparaciones
histolgicas, pero tambin al mismo tiempo que se va deshidratando se va
lavando el exceso de colorante de contraste.
10. El aclaramiento se efecta en xilol, aqu los cortes deben de aparecer
claros.
11. El propsito del montaje es preservar el tejido teido para su siguiente
manejo examinacin al microscopio. El cubre se une al corte por medio e
un agente llamado medio de montaje el cual puede ser blsamo de
Canad o resina Entellan de Merck

Nota.- Las causas debidas a una tincin inadecuada en esta tcnica, pueden ser:
- Mala fijacin tisular,
- El exceso o defecto de oxidacin de la Hematena.
- Diferenciacin de coloracin.
- Emplear una hematoxilina vieja o muy baja (que este muy usada)



PRACTICA NO. 8
OBSERVACION DE CLULAS SANGUNEAS EN UN FROTIS

OBJETIVO.- Aprender a diferenciar las clulas sanguneas

INTRODUCCION
La sangre es un tipo de tejido conectivo especial, constituido por una
sustancia lquida que se mantiene en movimiento permanente dentro del sistema
cardiovascular.
La sangre est formada esencialmente por dos componentes: una
sustancia intercelular lquida o plasma y elementos figurados, entre los que se
encuentran los eritrocitos, hemates o glbulos rojos, leucocitos o glbulos blancos
y restos o fragmentos citoplasmticos derivados de clulas especiales de la
mdula sea, llamados plaquetas.
Las funciones de la sangre son variadas y complejas como son: transporte
de elementos necesarios para el funcionamiento de los distintos rganos, como
oxgeno, agua y sustancias alimenticias, recoleccin de elementos de desecho,
transporte de secreciones que regulan el funcionamiento de algunos sistemas y
contribucin a la defensa del organismo.
La morfologa de las clulas sanguneas se estudia habitualmente por el
mtodo del frotis, que consiste en extensiones delgadas, homogneas, de una
gota de sangre perifrica sobre un portaobjetos.

MATERIAL Y METODO.- Lancetas estriles, portaobjetos, microscopio, colorante
de Giemsa, colorante de Wright, colorante de May Grenwald.
NOTA: se puede sustituir la muestra por una obtenida por puncin venosa y
utilizando los colorantes para tincin rpida.

PROCEDIMIENTO.
Si elige la tcnica de la lanceta estril, pique la yema de uno de los dedos o del
lbulo de la oreja y deposite una gota en un portaobjetos limpio en uno de sus
extremos, y con otro portaobjetos extienda la gota en forma horizontal de derecha
a izquierda y procurando se forme entre los dos portaobjetos un ngulo de 45.
Deje secar al aire y tia con cualquiera de los colorantes segn se indica a
continuacin; pero si se utiliza sangre de puncin venosa con anticoagulante, el
frotis debe hacerse colocando una gota de sangre en la parte media inferior del
portaobjetos, y con otro se extiende hacia arriba uniformemente la gota y se deja
en contacto los dos portaobjetos deslizando lentamente el de arriba hasta que
forme el extendido central. Se deja secar al aire, se fija con metanol y se tie con
la tcnica rpida, colocando el frotis 15 segundos en el colorante A, lavando con
agua, y 15 segundos en el colorante B, se lava y se seca para observar con una
gota de aceite de inmersin con el objetivo de 100X.

Coloracin de Giemsa
1. Fije el frotis con alcohol metlico durante 5 minutos.
2. Agregue solucin diluida de colorante de Giemsa recin preparada (3
gotas de colorante de Giemsa concentrada por cada ml de agua
destilada) y cuente 20 minutos.
3. Lave con agua corriente.
4. Seque al aire y observe con objetivo de inmersin.



Coloracin de Wright
1. Cubra el frotis con un nmero conocido de gotas de colorante de Wright
durante 2 minutos.
2. Aada el mismo nmero de gotas de agua destilada, mezcle y deje
actuar la mezcla durante 8 minutos.
3. Lave con agua corriente.
4. Seque al aire y observe con objetivo de inmersin.
Mtodo Panptico de Pappenheim
1. Cubra el frotis con 4 gotas de colorante de May Grenwald durante 3
minutos.
2. Aada la misma cantidad de agua destilada procurando que se mezclen
y deje actuar la mezcla durante un minuto.
3. Escurra el lquido y sin previo lavado, aada solucin diluida de Giemsa
recin preparada, dejndola actuar durante 10 minutos.
4. Seque y observe con objetivo de inmersin.

Frotis sanguneo. Linfocito pequeo, mtodo de Wright

Frotis sanguneo. Linfocito mediano, mtodo de Wright



Frotis sanguneo. Monocito y plaquetas, mtodo de Wright

Frotis sanguneo. Polimorfo basfilo, mtodo de Wright

Frotis sanguneo. Polimorfo neutrfilo, mtodo de Wright



Frotis sanguneo. Polimorfo eosinfilo, mtodo de Wright



PRACTICA NO. 9
OBSERVACION DE LAMINILLAS DE LOS DIFERENTES TEJIDOS
(EPITELIAL, CONECTIVO, MUSCULAR, OSEO, CARTILAGINOSO)

INTRODUCCION.- El tejido epitelial es un conjunto de clulas que cumple con
funciones de revestimiento, secrecin o absorcin. De acuerdo a la funcin que
desempea, la forma de las clulas se adapta a las necesidades de dicha funcin. As por
ejemplo, si se trata de la funcin de revestimiento o proteccin, la clula adquiere en su
citoplasma, sustancias que la hagan resistente (queratina). Si la funcin es de secrecin o
bien de absorcin, la clula sufre modificaciones en su borde libre (cilios,
microvellosidades, flagelos) que le permiten aumentar la superficie de absorcin o
secrecin.
Las clulas del tejido epitelial carecen de sustancia intersticial y se apoyan en una
estructura llamada membrana basal. Debido a la existencia de esta membrana, la clula
epitelial adquiere polaridad, es decir, la orientacin de sus organelos, que hacen
distinguir en ella una regin basal y otra apical.
El tejido epitelial tiene su origen en su mayor parte en el ectodermo, aunque
tambin procede del mesodermo y del endodermo. El tejido epitelial de revestimiento lo
encontramos en la piel; el de secrecin en las glndulas y mucosas y el de absorcin en
la mucosa intestinal, que cumple tanto con funciones de absorcin como de secrecin. El
tejido epitelial de secrecin o Glandular, puede ser de secrecin interna (glndulas
endocrinas) o de secrecin externa (glndulas exocrinas). Ejemplo de las primeras lo
encontramos en el ovario, cuyo producto de secrecin (estrgenos) pasan a la circulacin;
y ejemplo de secrecin externa, las glndulas salivales que vierten su contenido en la
cavidad bucal.
El tejido conectivo tiene como funcin principal, unir los otros tres tejidos del
cuerpo (epitelial, muscular y nervioso). El tejido conectivo se desarrolla a partir de la capa
media del embrin, o sea del mesodermo. Este tejido se caracteriza por poseer diversos
tipos de clulas y fibras, todo contenido en una matriz de sustancia amorfa. Las
variedades celulares, las diferentes fibras y la composicin qumica de la sustancia
amorfa son muy variadas dependiendo de la funcin que cada tejido conectivo tenga
asignada. Habitualmente la clasificacin del tejido conectivo se basa en el tipo de clulas,
fibras y sustancia amorfa que posee y en la proporcin entre ellas. Por esta razn se le
clasifica en dos grandes grupos, tejido conectivo propiamente dicho y tejido conectivo


especial. El primero se subdivide segn la proporcin de los elementos que lo componen,
en tejido conectivo laxo y denso. El tejido conectivo laxo forma la capa de refuerzo de los
epitelios, como en el tejido subcutneo de la piel, o forma endotelios que protegen y
sujetan los rganos como la pleura y la membrana mesentrica. Tambin forma parte de
otros tejidos como el perimisio de los msculos, que forman los tendones (conectivo
fibroso).
El cartlago es un tipo de tejido conectivo especial denso con funciones de sostn.
Est formado por fibras de colgeno y en algunos casos fibras elsticas que estn
contenidas en una sustancia amorfa en estado de gel muy firme. Sus clulas se
denominan condrocitos.
El cartlago se clasifica en tres tipos: hialino, elstico y fibroso. El ms abundante
es el hialino. Es de color blanco perlino debido a la constitucin de la sustancia
intercelular constituida principalmente por cido condroitnsulfrico y colgeno. Las
clulas o condrocitos se encuentran en los espacios de la sustancia amorfa en grupos o
nidos celulares. Los condrocitos son clulas maduras que se han rodeado de sustancia
intercelular que fue producida por sus antecesores o clulas jvenes llamadas
condroblastos, las cuales son activas y producen las sustancias que forman la matriz
amorfa o sustancia intercelular. Estas clulas son intensamente basfilas, caracterstica
que disminuye en las clulas maduras.
El hueso es un tejido conectivo especializado en funciones de sostn y proteccin,
cuya matriz intercelular calcificada le proporciona dureza y rigidez.
El tejido seo o hueso consta de una sustancia amorfa o intercelular calcificada o
mineralizada de fibras de colgeno y clulas llamadas osteoblastos (activos o maduros)
que producen la sustancia intercelular como el tropocolgeno o precursor del colgeno y
mucopolisacridos cidos. Estas clulas se rodean de la sustancia intercelular que
producen y pasan a ser osteocitos o clulas maduras.
La matriz intercelular o calcificada est formada por unidades llamadas laminillas
sea. La disposicin de estas unidades determinan dos variedades de hueso que son:
hueso poroso o esponjoso y hueso compacto. El hueso esponjoso tambin llamado
reticular se observa como una red cuya proyeccin tridimensional corresponde a un
conjunto de lminas que delimitan un laberinto de cavidades. El hueso compacto en
cambio, es una masa slida sin cavidades visibles. Sin embargo, microscpicamente est
formado por los sistemas de Havers que son espacios o conductos conocidos como
Conducto de Haver rodeado de laminillas dispuestas concntricamente. Entre estos


sistema s se disponen otras laminillas a manera de relleno y forman los sistemas
intersticiales. Las clulas estn dispuestas en la superficie de las laminillas seas. Los
espacios que deja la matriz calcificada se encuentran inervados y vascularizados.
Para realizar estudios de preparaciones de hueso, es necesario descalcificarlo.
El tejido muscular est formado por clulas fusiformes llamadas fibras musculares, que
poseen la caracterstica de acortarse, siguiendo su eje mayor al ser estimuladas; esta
propiedad se conoce como CONTRACTILIDAD muscular. El tejido muscular se clasifica
segn su morfologa en estriado y liso, es decir, si las fibras musculares estn
atravesadas transversalmente por estras, o no lo estn, respectivamente. Se hace otra
clasificacin desde el punto de vista fisiolgico en voluntario e involuntario, si depende su
contraccin de la voluntad o no. El msculo estriado puede ser esqueltico o cardiaco
siendo este ltimo de tipo involuntario. Las fibras musculares estn rodeadas por una
membrana citoplasmtica o sarcolema. El citoplasma o sarcoplasma contiene a los
componentes fundamentales de la clula como sarcosomas (mitocondrias) y retculo
sarcoplsmico (REL).
En el tejido nervioso, las clulas se han especializado especficamente para
transmitir impulsos de una parte del cuerpo a otra. . Este proceso es rpido y prosigue
por tractos circunscritos, compuestos de clulas nerviosas en serie. El impulso pasa de
una clula a otra a travs de brechas submicroscpicas conocidas como sinapsis. Cada
clula nerviosa posee por lo menos una prolongacin citoplsmicas muy larga, de manera
que el nmero de unidades requeridas para transmitir el impulso se mantenga al mnimo.
La unidad bsica del tejido nervioso es la neurona una clula nerviosa y todas sus
prolongaciones citoplsmicas. La gran mayora de las clulas nerviosas tienen muchas
prolongaciones citoplsmicas y se denominan por lo tanto, neuronas multipolares, en
estas clulas nerviosas, solo una de las prolongaciones, el axn, conduce el impulso del
cuerpo celular hacia fuera. Las dems prolongaciones, llamadas dendritas, conducen el
impulso hacia el cuerpo celular. Algunas clulas nerviosas solo poseen dos
prolongaciones, un axn y una dendrita y se denominan neuronas bipolares. Finalmente
algunas clulas nerviosas pueden exhibir solo una prolongacin celular que se divide
casi inmediatamente, a manera de T, en un axn y una dendrita, estas clulas se conocen
como neuronas seudounipolares.
Los cuerpos neuronales del sistema nervioso central yacen en la materia gris, o en
acumulos localizados en la materia blanca. La materia gris comprende vastas reas de
clulas nerviosas y sus neuroglias de sostn, que se encuentran en las cortezas del


cerebro y del cerebelo y en la regin central de la mdula espinal. La materia blanca est
compuesta de las prolongaciones citoplasmticas de las clulas nerviosas y sus
neuroglias de sostn. Los acumulos de neuronas que se encuentran en la materia
blanca, son, usualmente aunque no siempre, llamados ncleos, se encuentran en todas
las partes del sistema nervioso central.

Epitelios de revestimientos simples

Cbico conductos excretores Plano endotelio vasos Cilndrico intestino

EPITELIO DE REVESTIMIENTO SIMPLES
SEUDOESTRARIFICADO CILINDRICO CILIADO
TRAQUEA H-E
cilios
epitelio epitelio membraba
membrana basal cilios
basal



EPITELIOS DE RESTIMIENTO SIMPLES EPITELIO DE REVESTIMIENTO
ESTRTATIFICADO
TRANSICION E. PLANO ESTRATIFICADO MUCOSO
VEJIGA H-E (NO QUERATINIZADO)
ESOFAGO H-E

epitelio
clulas superficiales E. funcional
superficial

Membrana basal Estrato basal
Membrana basal

EPITELIOS REVESTIMIENTO ESTRATIFICADOS
E. PLANO ESTRATIFICADO QUERATINIZADO
PIEL H-E

Estrato corneo
Estrato granuloso

Tejido
Conectivo

Estrato
espinoso


.

FIGURA I Figura 2

Tejido conectivo alveolar Tejido conectivo alveolar

Tejido conectivo alveolar Tejido conectivo alveolar
Mtodo de Verchoeff Mtodo Brasilina



Tejido conectivo grasa blanca Tejido conectivo alveolar
Sudan Negro (clulas grasas y
Tendn)

Tejido conectivo denso organizado Tejido conectivo elstico organizado
(aorta)



Cartlago hialino costal. Hematoxilina-eosina

Hueso compacto, sistema de Havers, Msculo esqueltico.
Hematoxilina-eosina Tcnica de Plata



BANCO DE PREGUNTAS
Qu es el semen?

Qu volumen debe la muestra de esperma para considerarse normal?

Mencione las caractersticas macroscpicas que se le realizan al lquido seminal.

Cmo se realizan el recuento de espermatozoides.

Porque es importante la observacin de la motilidad de los espermatozoides?

Qu importancia tiene la morfologa de los espermatozoides?

Mencione que anormalidades pueden presentar los espermatozoides.

Qu colorantes utilizara para ver la morfologa de los espermatozoides?

Qu funcin tiene el plasma seminal?

Si la muestra es opaca (no pasa la luz), la turbidez esta aumentada esta es
indicativa de:

Cul es la utilidad clnica del anlisis del semen?

Cundo se solicita el examen?


Qu significa el resultado?

Qu significan los siguientes trminos?

Aspermia.
Azoospermia
Astemozoospermia.
Normozoospermia
Oligozoospermia
Teratozoospermia.

Como surge la fecundacin?

Qu es la segmentacin?

Qu entiende por gastrulacin?

Qu entiendes por organognesis?

Qu procesos se lleva a cabo durante la etapa embrionaria

Qu procesos se llevan a cabo durante la etapa fetal?

Qu factores influyen en el desarrollo gestacional?

Los espermatozoides comienzan a formarse en (marca la opcin correcta)
Durante la vida intrauterina
A partir de los 18 aos
Al llegar a la pubertad.
En el momento del nacimiento.

De las siguientes opciones afirmaciones sobre la espermatognesis, marque la
opcin correcta.
Las epermtides son clulas diploides.
Los espermatocitos I son clulas diploides.
Las espermatogonias son clulas aploides.
Los espermatocitos II son clulas diploides.

De las siguientes afirmaciones marca la/s opcin/es correctas.
a. La captacin de los espermatozoides se produce en el epiddimo
b. Las vesculas seminales aportan fructuosa y prostaglandinas
c. Los espermatozoides, en el epiddimo, sufren cambios en las glucoproteinas
de la membrana plasmtica de la cabeza del espermatozoide.
d. Los espermatozoides, cuando salen de los tmulos seminferos pueden
fecundar al vulo.

Una joven consulta al mdico sobre la posibilidad de un embarazo, ya que tuvo
relaciones sexuales 8 das despus de la ovulacin. Cul de las siguientes
opciones seleccionaras para responder a la paciente.


a. Si hay posibilidad de embarazo, ya que los espermatozoides son viables
entre 5 y 7 das.
b. Si hay posibilidades de embarazo, ya que el vulo puede vivir ms de una
semana.
c. No hay posibilidades de embarazo, ya que el espermatozoide solo vive 3
das.
d. No hay posibilidad fe embarazo, ya que el vulo solo es viable por 48 hrs.

Un estudiante de tercer cuatrimestre de la carrera de ciencias qumicas pregunta a
su mdico si es posible que ingresen ms de un espermatozoide al interior del
vulo despus de la fecundacin.
Cul de las siguientes opciones seleccionara para responder correctamente
esta consulta?
a. Si, es posible en entren varios espermatozoides, ya que no hay barreas que
lo impidan.
b. No, todos los espermatozoides restantes mueren por apoptosis.
c. No, porque luego de la fusin, se inactivan los receptores de los
espermatozoides en la zona pelcida.
d. Si, es posible que entren otros espermatozoides porque la zona pelcida
tiene muchos receptores para los espermatozoides.

Investigue la definicin de un fijador.

Cul es el propsito de la fijacin.

Existe un tiempo mximo de fijacin?

Cuales son loa agentes deshidratantes ms utilizados, y que ventajas tienen unos
sobre otros.

Cul es el agente aclarante que se utiliza en el laboratorio, cuales son sus
propiedades fsicas y qumicas y cual es su toxicidad.

Describa los tres mtodos de embebido que se utilizan en histologa.

Investigue la definicin de un colorante.

Cual es el fundamento de los colorantes de hematoxilina y eosina, que tipo de
color se tien las diferentes estructuras celulares.

Que estudios pueden realizar con el procesamiento de tejidos.

Para que se usa el formol al 10%

En que consiste la descalcificacin, cul es su propsito y sus inconvenientes?
Indica algn mtodo de descalcificacin.

Que rganos compone el aparato digestivo

Que rganos compone el aparato respiratorio

Que rganos compone el aparato cardiovascular

Que rganos compone el aparato urinario


Que rganos componen el aparato reproductor.

Cmo son usados los animales de laboratorio?

Qu quiere decir alternativas a la experimentacin con animales?

Qu alternativas existen para el empleo de animales de educacin?

Qu alternativas implementaras en tu clase?

Cules son los argumentos en contra el empleo de animales en
experimentacin?

Cules son los beneficios para la gente de la investigacin en animales? Qu
descubrimiento han hecho mediante el empleo de animales?

Hay algn beneficio para los animales?

Qu tipo de animales son utilizados en experimentacin?

Qu tipo de pruebas experimentales se hacen?

Dnde se consiguen los animales para investigacin

Investigue cuales son las acciones de los fijadores.

Mencione 2 agentes fijadores

Qu desventajas presentan los fijadores?

Cules son los fijadores o mezclas fijadoras ms utilizadas en microscopia ptica
y electrnica? Qu importancia tiene la solucin tampn en la fijacin?

Investigue la funcin de los agentes fijadores.

En que consiste la maceracin?

Cul es el propsito de la inclusin?

Qu medio de inclusin hay para microscopia ptica y microscopia electrnica?

Qu es la parafina?

En que consiste la deshidratacin?

Mencione 2 agentes deshidratantes

Es necesaria siempre la deshidratacin de la muestra en el procesamiento de los
tejidos tanto para microscopia ptica como Lara la electrnica? Justifique su
respuesta.

En que consiste el aclarado de las muestras?



Qu funcin tiene la parafina?

Qu tipo de cuchillas se utilizan para hacer cortes semifijos y ultrafinos?

Cmo se adhieren los cortes al portaobjetos

Cul es la importancia de realizar cortes histolgicos, en que lo aplicaras?

En que situaciones est aconsejado la utilizacin del criostato o del micrtomo de
congelacin?

Cmo se realiza la crioproteccin de la muestra? Qu estudios realizaras con
cortes por criostato?

Qu estudios realizaras con cortes por ultramicrtomo?

Qu problemas tuvieron en realizar los cortes histolgicos en el laboratorio?

En cules de las siguientes tinciones o procesos deben de efectuarse cortes por
congelacin sin previa fijacin?
a) Tincin rojo oleoso.
b) Receptores tumorales.
c) Impregnacin argntica.
d) Preparaciones para inmunofluorescencia.
c) Todas menos c.

Si un bloque de parafina viene mal deshidratado cul sera su conducta a
seguir?
a) Cortarlo como salga.
b) Tirarlo.
c) Reprocesarlo.
d) Solicitar la inclusin de ms tejido.
e) Todos menos a y b

Si un da " X " los tejidos salen mal procesados, que hara usted?
a) Revisar las soluciones del procesador.
b) Solamente los reprocesara.
c) Los tirara y pide la inclusin de ms tejido.
d) Revisa las soluciones del procesador y las reprocesa.
e) Saca los cortes como salgan.

Si a usted le dicen que sus cortes estn mal desparafinados, su conducta a
seguir sera la siguiente.
a) Se disgustara y no hace caso.
b) Revisa las condiciones del Xilol que utiliza en la tincin.
c) Revisa su tren de tincin.
d) Revisa su parafina del histoquinette.
e) Ninguna de las anteriores.

Si un tejido le sale muy consistente, usted considera que se debe a?
a) Fue fijado en formol sin la dilucin adecuada.
b) Fue sobredeshidratado.
c) La parafina se encuentra a temperatura elevada.


e) Todas menos a y b.

En que consiste la iluminacin de Khler y su funcin

A qu nos referimos con el trmino de diferenciar tras la tincin? Significa lo
mismo que decolorar la muestra?

En qu consiste el aclarado de las muestras?

Qu medio de montaje conoces y cul es su funcin?

Describe algn mtodo para teir el citoplasma, el ncleo, lpidos, sangre y
bacterias.

Una coloracin nuclear plida se debe a; Excepto.
a) pH de hematoxilina muy bajo
b) Prdida de potencia de hematoxilina
c) Frotis insuficiente
d) Tiempo de tincin muy corto.
e) Extendido grueso.

Las preparaciones mal teidas se deben a: Excepto.
a) Mala concentracin de colorantes
b) Tiempos inadecuados en los colorantes
c) Tiempos prolongados en xilol
d) lavados excesivos en los alcoholes
e) Diferenciacin muy prolongada

Es una sustancia que ayuda a unir los colorantes en el tejido, para asegurar una
accin o reaccin especfica. Ejemplo: cromo, aluminio, mercurio.
f) cidos
g) Mordentes
h) Bases
i) Ninguna de las anteriores

Esta coloracin generalmente se usa como base, ya que el 90% de los
diagnsticos se hacen con ste mtodo, el producto final depende mucho de la
destreza del Histotecnologo, Tcnico de laboratorio o del Q.F.B. y de los
colorantes en uso.

a) H&E b) PAS c) Papanicolaou d) Mucicarmin e) Histoqumica.

Que estructuras observ en las laminillas

Dibuje y seale cada estructura tisular de los diferentes cortes de tejido realizado

Enumere las caractersticas estructurales y funcionales que distinguen al Tejido


Epitelial de otros tipos de tejidos.

2. Describa las caractersticas de la lmina basal en cuanto a:
a) Localizacin.
b) Composicin.
c) Propiedades de tincin.

Mencione los tipos de uniones que se presentan entre las clulas

Compare las caractersticas de las microvellosidades, estereocilios y cilios

Enumere los tipos de epitelios simples y cite ejemplos de sitios corporales en
donde se encuentren.

Enumere los tipos de epitelios estratificados y cite ejemplos de sitios corporales en
donde se encuentren.

Compare las glndulas endocrinas y exocrinas en cuanto a:
a) Su origen embrionario.
b) La forma en que se transportan los productos.

Qu criterios estructurales se emplean para clasificar las glndulas exocrinas?

Compare las modalidades de secrecin merocrina, holocrina y apocrina en
cuantoa la porcin de la clula que es liberada, y cite ejemplos de cada tipo de
glndula.

Compare las clulas serosas y mucosas en cuanto a su aspecto y producto de
secrecin.

EJERCICIOS.
Relacione cada figura con el grupo de preguntas que tiene en mismo nmero y
ejectelas, respndalas o compltelas correctamente.



En la fotografa de la pared arterial del nombre de las estructuras marcadas con la
letra a___________________y la estructura qumica de las
mismas_______________

Escriba el nombre de la coloracin aplicada__________________________
Escriba el nombre de la variedad de tejido conjuntivo que muestra la
imagen__________________

Escriba el nombre de los dos tejidos representados en esta foto marcados con las
letras a y
b_____________________________________________________________
Escriba el nombre de las clulas del tejido
a___________________________________

En la siguiente preparacin: Lengua. rgano macizo. Hematoxilina-Eosina 10X,
40X.

Identifique las siguientes estructuras
Epitelio estratificado plano
Tejido conjuntivo areolar laxo
Tejido conjuntivo denso irregular
Glndulas linguales
Msculo estriado esqueltico corte transversal, longitudinal
y oblicuo.
Ncleo de Clula muscular estriada
Endomicio (tejido conjuntivo areolar laxo)
Perimisio (tejido conjuntivo denso)

Cmo esta constituido el tejido conectivo ordinario?

Cules son los constituyentes de este tipo de tejido

Enumere los tipos de clulas del tejido conjuntivo ordinario.

Cuntos tipos de fibras encontramos en este tejido?

Qu diferencia hay entre el tejido conectivo laxo y denso?

Diga cules son las funciones de este tejido.

Identificacin de las variedades de tejido conjuntivo
Esquematizacin de ellas en su manual y anotacin de los nombres de cada
componente.

Cmo se clasifica el msculo?
Qu es el sarcmero?

Diga ejemplos de donde encontramos msculo estriado.



Diga ejemplos de msculo liso

Cules son los componentes del sarcmero?

Cules son los componentes energticos de la contraccin muscular?

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LABORATORIO DE ANATOMIA E HISTOLOGIA

M.C. MARICELA TORRES Y SOTO 1

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