Modifikasi Konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 Medium MS ter-

hadap Pertumbuhan Eksplan

Modification of NH4NO3 and Cacl2 Concentration of MS Medium on

Growth of Hyperhydritised-Explants of Carnation
Budi Winarto1)

ABSTRACT

The existence of NH4NO3 and CaCl2 in MS medium used in carnation tissue culture has high effect on response
of explant growth cultured in vitro. The response of explant can be a normal and healthy growth or hyper-
hydritised-growth. The study aimed to know concentration changes of two macro elemen on hyperhydri-
tised-explant growth of carnation. The experiment was conducted at Tissue Culture Laboratory, IPPT, Faculty of Agriculture,
Universiti Putra Malaysia from January to August 2002. Factorial experiment was arranged using Randomized Complete Block
Design with four replications. First factor was concentration of NH4NO3 of (1) normal concentration, (2) ½ of normal concen-
tration, (3) ¼ of normal concentration and (4) without NH NO . Second factor was concentration of CaCl of (1) 1.5 of normal
4 3 2
concentration, (2) normal concentration, (3) ½ of normal concentration and (4) without CaCl2. Results of the study indicated that
concentration changes of NH4NO3 dan CaCl2 gave high effect on hyperhydritised-explant growth. Half strength of NH4NO3 and
CaCl2 from thier normal concentration was the appropriate concentration in reducing hyperhydricity incidence down to 67%
and increasing the highest leaf chlorophyll content up to 34% ( from 0.088 mg/mg to 0.134 mg/mg). Normal concentration of
CaCl2 without NH4NO3 presence in MS medium was the most suitable combination in lowering water content and enhancing
dry weigth of shoots. The existence of half-concentration of NH4NO3 without CaCl2 in the MS medium induced high axillary
shoot proliferation (8.6 shoot per explant). While the highest averages of shoot height were obtained on MS medium with normal
concentration of NH4NO3 without CaCl2.

Keywords: NH NO , CaCl , hyperhydricity and carnation

4 3 2

PENDAHULUAN palisade, sel-selnya hipertropi, bervakuola lebih besar

Kondisi kultur jaringan yang mampu mengin-
duksi pembentukan tunas secara cepat melalui induksi
tunas aksiler maupun tunas adventif seringkali men-
stimulasi perkembangan eksplan yang abnormal (Ziv et
al., 1987), yang dikenal dengan hiperhidrisiti (Debergh,
et al., 1992). Tunas dengan daun hiperhidrisiti, baik su-
kulen maupun translusen memperlihatkan kemampuan
hidup yang rendah (van Altvorst et al., 1996). Daun
yang sukulen dan translusen ini ditemukan berkembang
akibat kondisi botol kultur yang memiliki kelembaban
relatif yang tinggi (Ziv, 1991) dengan konsentrasi am-
monium yang tinggi (Daguin and Letousze, 1986) pada
medium yang konsentrasi sitokininnya tinggi (Ziv,
1986; Winarto, 2002) dimana terdapat akumulasi etilen
(Fal et al., 1999).
Daun yang hiperhidrisiti umumnya memiliki sel
palisade dan mesofil yang tidak normal (Debergh et al.,
1992) dimana terdapat penurunan jumlah lapisan sel
dengan ruang antar sel yang besar (Olmos dan Hellin,
1998) dan lebih bersifat heterotropik. Epidermis daun ti-
dak/kurang dilindungi dengan kutikula dan lapisan lilin
(Sutter dan Langhans, 1979), memiliki stomata yang
tidak berkembang dan berfungsi dengan baik (Ziv et
al., 1987), ligni-fikasi yang rendah (Kevers dan Gaspar,
1985). Sedangkan batangnya umumnya memiliki sel-sel
yang hipertropi dengan reduksi jumlah bendel jaringan
pengangkutan (Debergh et al., 1992; Winarto, 2002).
Plantlet hasil kultur jaringan dengan daun dan
batang yang abnormal memiliki kemampuan hidup yang
rendah saat dipindahkan ke kondisi lingkungan ex vitro,
utamanya disebabkan oleh kehilangan air dan kelayuan
(van Altvorst et al., 1996; Majada et al., 2001). Dua
penyebab utama kelayuan tersebut adalah sedikitnya
lapisan kutikula, sedikit atau tidak adanya lapisan lilin
(Sutter and Langhans, 1979) dan tidak berkembang dan
berfungsinya stomata (Ziv et al., 1987).
Membuka dan menutupnya stomata dipengaruhi

1)
Balai Penelitian Tanaman Hias, Jl. Raya Pacet, Ciherang, Pacet, Cianjur 43253

Modifikasi Konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 Medium MS terhadap

Pertumbuhan Eksplan Hiperhidrisiti Anyelir (Budi Winarto) 45
oleh utamanya kandungan kation K+ dan Cl- berperan
sebagai anion penyeimbang bersama malat (Ziv et al.,
1987). Faktor lain yang berpengaruh terhadap menu-
tupnya stomata adalah kondisi gelap, keberadaan asam
absisik (ABA) dan Ca2+ (Schwartz, 1985 dalam Ziv et
al. 1987).
Mengingat kehadiran NH4NO3 dan CaCl2 dalam
medium MS berpengaruh terhadap pertumbuhan dan
pembelahan sel, pembentukan klorofil, stomata dan
fungsinya; penelitian ini dikonsentrasikan utnuk men-
getahui pengaruh NH4NO3 dan CaCl2 terhadap pertum-
buhan eksplan hiperhidrisiti. Hipotesis yang diajukan
adalah penurunan konsentrasi NH4NO3 dan peningkatan
konsentrasi CaCl2 akan berpengaruh terhadap pemulihan
eksplan hiperhidrisiti kedalam pertumbuhan normalnya.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pe-
rubahan konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 dalam medium
MS terhadap pertumbuhan eksplan hiperhidrisiti anyelir.
Luaran yang diharapkan adalah konsentrasi NH4NO3 dan
CaCl2 yang sesuai untuk memulihkan eksplan hiperhid-
risiti kedalam pertumbuhan normalnya.
BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kultur
Jaringan IPPT, Fakultas Pertanian, Universiti Putra Ma-
laysia dari bulan Januari hingga bulan Agustus 2002.
Eksplan hiperhidrisiti diperoleh dengan meng-
kultur eksplan anyelir (nodus yang pertama dan kedua)
pada medium MS yang mengandung 2.0 mg/l 6-Ben-
zyladenine (BA) dan 0.9 mg/l asam asetat á-naphthalene
(NAA) dengan tutup botol kultur yang ketat (selotip/alu-
minium foil) yang disimpan dalam ruang inkubasi yang
bersuhu 25±1ºC dibawah penyinaran lampu fluoresen
secara terus-menerus yang berintensitas cahaya ± 13
µmol.m-2.s-1 selama 5-6 minggu. Setelah inkubasi, no-
dus yang pertama dan kedua dari tunas hiperhidrisiti
yang dihasilkan selanjutnya digunakan sebagai sumber
eksplan dalam penelitian ini.
Dalam percobaan ini, perbedaan konsentrasi
NH4NO3, dan CaCl2 diuji. Konsentrasi NH4NO3 yang
diuji dalam penelitian ini adalah: (1) konasentrasi nor-
mal (1 K), (2) ½ dari konsentrasi normal (1/2 K), (3) ¼
dari konsentrasi normal (1/4 K) dan (4) tanpa NH4NO3
(0 K). Sedangkan konsentrasi CaCl2 yang di tes adalah
(1) 1½ dari konsentrasi normal (1.5 K), (2) konsentrasi
normal (1 K), (3) ½ dari konsentrasi normal (1/2 K) dan
(4) tanpa CaCl2 (0 K).
Percobaan ini disusun menggunakan Rancan-
gan Acak Kelompok pola factorial dengan empat kali
ulangan. Faktor pertama adalah empat level konsentrasi
NH4NO3 dan faktor yang kedua adalah empat tingkat
konsentrasi CaCl2. Tiap perlakuan berisi 15 eksplan.
Parameter yang diamati dan diukur dalam studi
ini adalah (1) persentase hiperhidrisiti (PH, %), (2)
kandungan klorofil daun (KKD, mg/mg), (3) jumlah
tunas per eksplan (JTE), (4) tinggi tunas (TT, cm), (5)
jumlah akar per eksplan (JAE), (6) kandungan air (KA,
%) dan (7) berat kering (BK, %). Persentase tunas
hiperhidrisiti dihitung menggunakan rumus Pathak
(1972), sedangkan penilaian daun yang hiperhidrisiti
dinilai berdasarkan skala 0-5 menurut Jain et al. (1997)
sebagai berikut: 0 - tidak ada daun yang hiperhidrisiti,
1: 1-5% daun mengalami hiper-hidrisiti, 2: 6-25% daun
mengalami hiperhidrisiti, 3:26-50% daun mengalami
hiperhidrisiti, 4: 51-75% daun mengalami hiperhidrisiti
dan 5: lebih dari 75% daun mengalami hiperhidrisiti.
Kandungan klorofil daun diukur pada saat awal dan
akhir percobaan menggunakan metode tak langsung
(Klorofilmeter Minolta TM SPAD model 502) dan metode
langsung (Scanning Spektrofotometer UV 3101PC) dan
total klorofilnya dikalkulasikan menggunakan rumus
Coomb dan Hall (1997). KA dan BK ditentukan dengan
menimbang berat basah dan berat kering tunas sukulen.
10% tunas sukulen yang diambil secara acak kemudian
ditimbang berat basahnya (BB). Selanjutnya bahan
segar tersebut dikeringkan dalam oven pada suhu 80ºC
selama 24 jam. Penimbangan berat kering dilakukan
secara berulang hingga berat kering yang stabil dipe-
roleh. Kandungan air dihitung dengan mengurangi BB
dengan BK dibagi dengan BB dikalikan dengan 100%.
Sedangkan BK dihitung dengan mengurangi 100%
dengan persen KA. Data awal kondisi tunas hiperhidri-
siti yang digunakan dalam penelitian ini adalah 95.2%
kandungan air, 4.8% berat kering tunas dan 0.088 mg/mg
kandungan klorofil daun.
Data yang telah dikumpulkan dioleh menggu-
nakan program SAS Release Windows 6.1, perbedaan
nilai rataan yang ditemukan antar perlakuan diuji lanjut
menggunakan uji wilayah ganda Duncan pada taraf
5%.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Berdasarkan hasil analisa varian dapat dik-
etahui bahwa kombinasi perlakuan NH4NO3 dan CaCl2
memberikan pengaruh yang sangat nyata terhadap per-
tumbuhan eksplan hiperhidrisiti (p=0.05). Kombinasi
perlakuan tersebut juga memberikan pengaruh interaksi
antar perlakuan pada semua parameter yang diamati.
Konsentrasi CaCl2 diketahui memberikan pengaruh yang
lebih besar dibanding konsentrasi NH4NO3nya pada
persentase hiperhidrisiti, kandungan klorofil daun dan
tinggi tunas, tetapi jumlah produksi tunas per eksplan,
kandungan air dan berat kering lebih banyak dipengaruhi
oleh kehadiran NH4NO3.
Dari gambar 1 terlihat bahwa penurunan kon-
sentrasi NH4NO3 dalam medium mampu menurunkan
persentase hiperhidrisiti, kandungan air dan meningkat-
kan berat kering tunas. Pada media MS yang tidak dit-
ambahkan NH4NO3 sama sekali (0 K), ternyata mampu
menurunkan persentase tunas hiperhidrisiti hingga 79%,
Agrosains 6(2): 45-52, 2004
dengan 87% kandungan air dan 13% berat kering tunas.
Jika dibandingkan dengan kondisi awal tunas terjadi
penurunan kandungan air dan peningkatan berat kering
sekitar 8.2% (95.2% ke 87%; 4.8% ke 13%). Tetapi
penurunan konsentrasi NH4NO3 ini tidak memberikan
kecenderungan pengaruh yang
sama terhadap kandungan daun (gambar 2), jumlah tunas
per eksplan dan tinggi tunas (Gambar 3). Pada ketiga
parameter tersebut penurunan konsentrasi NH4NO3
hingga ½ konsentrasi normalnyalah (1/2 K) yang mem-
berikan pengaruh terbaik, dengan kandungan klorofil
daun tertinggi.
1 K – konsentrasi NH4NO3 normal, ½ K - ½
konsentrasi normal NH4NO3, ¼ K - ¼ konsentrasi
normal NH4NO3, 0 K – tanpa NH4NO3
Gambar 1. Pengaruh konsentrasi NH4NO3 terhadap
persentase hiperhidrisiti (PH-%), kan-
dungan air (KA-%) dan berat kering
tunas (BK-%)
Histogram yang diikuti dengan huruf yang
sama dalam satu parameter menunjuk-
kan tidak berbeda nyata berdasarkan Uji
Wilayah Berganda Duncan pada taraf
kepercayaan 5%.
Gambar 2. Pengaruh konsentrasi NH4NO3 terha-
dap kandungan klorofil daun
Histogram yang diikuti dengan huruf
yang sama menunjukkan tidak berbeda
nyata berdasarkan Uji Wilayah Ber-
ganda Duncan pada taraf kepercayaan
Modifikasi Konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 Medium MS terhadap
Pertumbuhan Eksplan Hiperhidrisiti Anyelir (Budi Winarto)
JTE – jumlah tunas per eksplan, TT – tinggi tunas
Gambar 3. Pengaruh konsentrasi NH4NO3 terha-
dap
jumlah tunas per eksplan dan tinggi
tunas
Histogram yang diikuti dengan huruf
Berganda Duncan pada taraf kepercayaan
5% .
Berbeda dengan NH 4NO 3, peningkatan dan
penurunan konsentrasi CaCl2 dari konsentrasi normal-
nya justru dapat meningkatkan persentase terjadinya
hiperhidrisiti tunas (Gambar 4), walaupun penurunan
konsentrasinya cenderung menurunkan kandungan air
dan meningkatkan berat kering tunas. Pada konsen-
trasi normalnya, perlakuan CaCl2 mampu menurunkan
persentase tunas hiperhidrisiti hingga 67% dan berbeda
nyata dengan konsentrasi yang lain. Selanjutnya ter-
hadap kandungan air dan berat kering tunas perubahan
konsentrasi CaCl2 tidak berpengaruh nyata. Konsen-
trasi ini juga tetap menunjukkan kandungan klorofil
daun yang tertinggi (0.116 mg/mg) (Gambar 5) dengan
tinggi tunas tertinggi (2.06 cm) (Gambar 6). Sedangkan
terhadap produksi tunas perlakuan CaCl2 memberikan
pengaruh yang acak (Gambar 6).
Tabel 1 terlihat bahwa ½ konsentrasi normal
CaCl2 yang dikombinasikan dengan ½ konsentrasi
normal NH4NO3 merupakan kombinasi terbaik dalam
menekan persentase terjadinya tunas hiperhidrisiti
hingga 67% dan meningkatkan kandungan klorofil
daun hingga 0.134 mg/mg (Tabel 1). Perlakuan ini juga
menunjukkan perbedaan yang nyata bila dibandingkan
dengan kombinasi lain (1/2 K CaCl2 dengan 1 K dan 0
K NH4NO3). Hasil terbaik kedua (71%) dengan kan-
dungan klorofil daun 0.124 mg/mg ditunjukkan oleh
konsentrasi normal CaCl2 yang dikombinasikan dengan
¼ konsentrasi normal NH4NO3 walaupun sebagian
besar tidak berbeda nyata dengan kombinasi yang lain.
Selanjutnya berdasarkan nilai rata-rata antar perlakuan-
nya, konsentrasi normal CaCl2 yang dikombinasikan
dengan semua konsentrasi NH4NO3 memberikan nilai
rataan yang terendah, tetapi nilai rataan kandungan
klorofil daun yang sama dengan 1/2 K dengan semua
kombinasi NH4NO3nya.
47

1.5 K – satu setengah kali konsentrasi normal CaCl2, 1
K – konsentrasi normal CaCl2, 1/2 K – ½ konsentrasi
normal CaCl2 dan 0 K – tanpa CaCl2. PH : persentase
hiperhidrisiti; KA: kandungan air; BK: berat kering
tunas
Gambar 4. Pengaruh konsentrasi CaCl2 terhadap
persentase hiperhidrisiti, kandungan
air dan berat kering tunas
Histogram yang diikuti dengan huruf
yang sama dalam satu parameter menun-
jukkan tidak berbeda nyata berdasarkan
Uji Wilayah Berganda Duncan pada taraf
kepercayaan 5%.
Gambar 5 Pengaruh konsentrasi CaCl2 terhadap
kandungan khlorophil daun
Histogram yang diikuti dengan huruf
yang sama dalam satu parameter menun-
jukkan tidak berbeda nyata berdasarkan
Uji Wilayah Berganda Duncan pada taraf
kepercayaan 5%.
Berdasarkan kandungan air dan berat kering
tunas (Tabel 2) terlihat bahwa absennya NH4NO3 (0
K) dalam medium MS yang dikombinasikan dengan
konsentrasi normal CaCl2 (1 K) merupakan kombinasi
terbaik dalam menurunkan kadar air dan meningkat-
JTE – jumlah tunas per ekplan; TT – tinggi tanaman
Gambar 6 Pengaruh konsentrasi CaCl2 terhadap
jumlah tunas per eksplan dan tinggi
tunas
Histogram yang diikuti dengan huruf
yang sama dalam satu parameter menun-
jukkan tidak berbeda nyata berdasarkan
Uji Wilayah Berganda Duncan pada taraf
kepercayaan 5%.
kan berat kering tunas. Kombinasi perlakuan tersebut
mampu menurunkan kadar air dan meningkatkan berat
kering tunas tertinggi hingga 9.9% (95.2% ke 85.3%
kandungan air tunas; 4.8% ke 14.7% berat kering tunas).
Juga dapat diperhatikan bahwa ketidakhadiran NH4NO3
dalam semua kombinasi dengan CaCl2 dalam medium
MS menurunkan kandungan air dan berat kering tunas
yang lebih baik dibanding kombinasi yang lain. Ini
mengindikasikan bahwa penurunan konsentrasi atau
ketidakhadiran NH4NO3 sebagai salah satu komponen
penstimulasi pertumbuhan tanaman yang lebih cepat
menyebabkan tunas hiperhidrisiti juga terdorong untuk
membentuk sel-sel yang lebih kompak dan tumbuh
lebih sehat.
Pada pertumbuhan tunas hiperhidrisiti yang diin-
dikasikan dengan kemampuan tunas hiperhidrisiti dalam
menghasilkan tunas dan pertambahan tingginya terlihat
bahwa 1/2 konsentrasi NH4NO3 yang dikombinasikan
dengan 0 K dari CaCl2 merupakan kombinasi terbaik
dalam menginduksi pembentukan tunas aksiler terban-
yak (8.6 tunas per eksplan) tetapi ketidakhadiran CaCl2
menyebabkan pertambahan tinggi tanaman menjadi
terhambat (Tabel 4). Sedangkan rataan tinggi tunas yang
tertinggi (2.65 cm) ditunjukkan oleh kombinasi normal
konsentrasi NH4NO3 (1 K) tanpa kehadiran CaCl2 (0
K) (Tabel 4). Hasil ini makin menguatkan argumentasi
peran NH4NO3 dan CaCl2 dalam pertumbuhan tanaman.
Kehadiran NH4NO3 mendorong pertumbuhan tanaman
yang cepat, yang berorientasi pada pertambahan tinggi
tanaman. Sementara kehadiran CaCl2 menstimulasi
tunas tumbuh kompak dengan pertambahan tunas ak-
siler yang lebih tinggi dengan pertambahan tinggi yang
terhambat.
Agrosains 6(2): 45-52, 2004
Modifikasi Konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 Medium MS terhadap
Pertumbuhan Eksplan Hiperhidrisiti Anyelir (Budi Winarto) 49
Pembahasan
Dari hasil penelitian ini dapat diketahui bahwa
kehadiran NH4NO3 dan CaCl2 dalam medium MS sangat
berpengaruh terhadap pertumbuhan tunas hiperhidrisiti
anyelir. Penurunan konsentrasi NH4NO3 dari konsentrasi
normalnya, menurunkan peluang terjadinya pertumbu-
han yang abnormal pada tunas hiperhidrisiti yang dikul-
tur secara in vitro, sedang peningkatan konsentrasinya
berpengaruh sebaliknya. Kondisi tersebut berkaitan
erat dengan peran ammonium dalam pertumbuhan dan
pembelahan sel tanaman (Sutiyoso, 2003). Peningkatan
konsentrasinya mendorong sel-sel tanaman lebih aktif
membelah, sel-selnya berukuran lebih besar, tanaman
tumbuh lebih cepat dan seringkali tanaman menjadi
abnormal/hiperhidrisiti (Daguin dan Letouze, 1986;
Ziv, 1991; Sutiyoso, 2003). Sementara penurunan kon-
sentrasinya meningkatkan proporsi tanaman tumbuh
normal (Ziv et al., 1987). Menurut Ziv (1991) penurunan
konsentrasi ammonium dalam medium juga mening-
katkan lignifikasi dan menurunkan peluang terjadinya
hiperhidrisiti pada willow, plum dan kaktus.
Selanjutnya peningkatan dan penurunan konsen-
trasi CaCl2 dari konsentrasi normalnya meningkatkan
insidensi terjadinya pertumbuhan tunas yang hiperhidri-
siti, terutama jika konsentrasi NH4NO3 dalam medium
meningkat. Hasil yang hampir sama juga dilaporkan
oleh Ziv et al. (1987). Potensi hiperhidrisiti yang lebih
tinggi tersebut di pengaruhi oleh kandungan klorida
dalam medium dan penyerapannya oleh eksplan yang
dikultur (Dantas et al., 2001). Pada kultur in vitro
Prunus, penghilangan klorida dalam medium mampu
mereduksi insidensi hiperhidrisiti (Quorin and Lepoivr,
1997 dalam Dantas et al., 2001). Tetapi jika konsentrasi
ammonium diturunkan, peran kalsium dalam pembela-
han dan pemanjangan sel yang lebih kompak menjadi
optimal (Sutiyoso, 2003). Tanaman tumbuh lebih sehat
dan normal dengan kandungan air yang lebih rendah
dan berat kering tanaman yang lebih tinggi.
Perubahan konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 pada
penelitian ini juga berpengaruh terhadap kandungan
klorofil daun, kandungan air dan berat kering tunas,
jumlah tunas yang dihasilkan per eksplan dan tinggi
tunas. Penurunan konsentrasi NH4NO3 hingga ½ kon-
sentrasi normalnya merupakan konsentrasi optimal
untuk meningkatkan kandungan klorofil daun, tetapi
penurunan kandungan air dan peningkatan berat kering
tertinggi yang disertai penurunan jumlah produksi tunas
aksiler dan pertambahan tinggi tanaman yang terhambat
ditunjukkan oleh medium MS tanpa kehadiran NH4NO3.
Sedangkan peningkatan atau penurunan konsen-trasi
CaCl2 dari kondisi normalnya memiliki kecenderun-
gan pengaruh yang sama dengan penggunaan NH4NO3
terhadap persentase hiperhidrisiti, kandungan klorofil
daun, berat kering tunas, tetapi terhadap produksi tunas
aksiler, ketidakhadiran CaCl2 meningkatkan produksi
tunas aksiler yang signifikan. Konsen-trasi normal CaCl2
merupakan konsentrasi optimal untuk pertumbuhan
tananam hiper-hidirisiti anyelir dalam kondisi in vitro.
Menurut Ziv et al. (1987) penurunan NH4NO3
dan CaCl2 meningkatkan jumlah tanaman yang normal
dan sehat pertumbuhannya, sedangkan peningkatan
konsentrasinya berdampak sebaliknya. Reduksi NH4NO3
juga memudahkan masalah pertumbuhan hiperhidrisiti
dapat dikendalikan (Daguin dan Letouze, 1987) dan me-
ningkatan penggunaan C oleh tanaman, yang tercermin
pada penurunan kandungan air dan peningkatan berat
kering (Avila et al., 1998).
Pada penelitian ini, ½ dari konsentrasi normal
NH4NO3 dan CaCl2 merupakan kombi-nasi terbaik untuk
mendapatkan pertumbuhan eksplan hiperhidrisiti yang
sehat dan normal dengan persentase hiperhidrisiti yang
rendah dan kandungan klorofil daun yang tinggi, tetapi
pertumbuhan tunas aksiler dan tinggi tunas cenderung
terhambat. Sementara untuk mendapatkan pertumbu-
han tunas hiperhidrisiti yang memiliki kandungan air
yang rendah, berat kering yang tinggi dengan tinggi
tunas tertinggi, konsentrasi normal CaCl2 tanpa keha-
diran NH4NO3 menunjukkan hasil yang terbaik, tetapi
Agrosains 6(2): 45-52, 2004
memberikan hasil yang relative rendah pada persentase
hiperhidrisiti dan kandungan klorofil daun.
Kondisi tersebut diatas menunjukkan bahwa ter-
dapat konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 optimal yang ber-
beda untuk memberikan respon pertumbuhan tanaman
yang terbaik pada eksplan hiperhidrisiti anyelir. Hasil
studi yang lain menunjukkan bahwa penurunan NH4NO3
hingga setengah atau dihilangkannya sama sekali dalam
medium MS pada kultur in vitro anyelir dapat mening-
katkan jumlah tanaman yang normal dan sehat (Ziv et
al., 1987), demikian juga dengan kandungan CaCl2nya.
Pada kultur in vitro kentang, penurunan konsentrasi N
(dalam bentuk ammonium dan nitrat) hingga setengah
konsentrasi normalnya mampu meningkatkan panjang
tunas, jumlah nodus dan berat keringnya (Avila et al.,
1998). Pada Delphinium cardinale, penurunan kon-
sentrasi NH4NO3 hingga 1/3 dari konsentrasi normalnya
meningkatkan pembentukan tunas tunas dan meningkat-
kan kondungan klorofil daun (Ohki dan Sawaki, 1999).
Sedangkan pada Dioscorea alata, konsentrasi NH4NO3
yang lebih tinggi atau lebih rendah dari konsentrasi nor-
malnya menghambat pembentukan umbinya (Mantell
dan Hugo, 1989).
Secara keseluruhan perubahan konsentrasi
NH4NO3 dan CaCl2 yang ditambahkan kedalam medium
MS sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan tunas
hiperhidrisiti anyelir. Berkaitan dengan perannya dalam
menurunkan persentase hiperhidrisiti dan meningkatkan
kandungan klorofil daun, ½ konsentrasi NH4NO3 dan
CaCl2 merupakan kombinasi perlakuan yang potensial
untuk diaplikasikan. Selanjutnya untuk menurunkan
kadar air dan meningkatkan berat kering tunas, konsern-
trasi normal CaCl2 tanpa kehadiran NH4NO3 merupakan
DAFTAR PUSTAKA
Avila, A.L., S.M. Pereyra and J.A. Arguello. 1998. Ni-
trogen concentration and proportion of NH4+ -N
affect potato cultivar response in solid and liquid
media. Hortsci. 33(2): 336-338.
Coombs, J. and D.O. Hall. 1987. Techniques in Biopro-
ductivity and Photosynthesis. Pergamon Press.
Oxford, U.K. 223p.
Daguin, F. Letouze, R. 1986. Ammonium-induced
vitrification in cultured tissues. Physiol. Plant.
66: 94-98.
Dantas, A.K., J.P. Majada, B. Fernandez and M.J. Ca-
nal. 2001. Mineral nutrition in carnation tissue
cultures under different ventilation conditions.
Plant Growth Regul. 33: 237-243.
Debergh, P.C., Aitken-Christie, J., Cohen, D., Grout,
B., van Arnold, S., Zimmerman, R., and Ziv, M.
Modifikasi Konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 Medium MS terhadap
Pertumbuhan Eksplan Hiperhidrisiti Anyelir (Budi Winarto)
kombinasi yang terbaik. Setengah konsentrasi NH4NO3
yang dikombinasikan dengan 0 K dari CaCl2 merupakan
kombinasi terbaik dalam menginduksi pembentukan tu-
nas aksiler terbanyak (8.6 tunas per eksplan). Sedangkan
rataan tinggi tunas yang tertinggi (2.65 cm) ditunjukkan
oleh kombinasi normal konsentrasi NH4NO3 (1 K) tanpa
kehadiran CaCl2 (0 K).
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil percobaan diatas dapat disim-
pulkan bahwa:
1. Perubahan konsentrasi NH4NO3 dan CaCl2 berpen-
garuh terhadap pertumbuhan eksplan hiperhidrisiti
anyelir.
2. Setengah dari konsentrasi normal NH4NO3 dan
CaCl2 merupakan kombinasi terbaik dalam menu-
runkan insidensi hiperhidrisiti hingga 67% dan
meningkatkan kandungan klorofil tertinggi hingga
34% (dari 0.088 mg/mg ke 0.134 mg/mg).
3. Konserntrasi normal CaCl2 tanpa kehadiran NH-
NO3 merupakan kombinasi yang terbaik dalam
4
menurunkan kadar air dan meningkatkan berat
kering tunas terbaik.
4. Medium MS dengan ½ konsentrasi NH4NO3 tanpa
kehadiran CaCl2 mampu menginduksi pembentukan
tunas aksiler terbanyak (8.6 tunas per eksplan. Se-
dangkan rataan tinggi tunas yang tertinggi (2.65 cm)
ditunjukkan oleh medium MS dengan konsentrasi
normal NH4NO3 tanpa kehadiran CaCl2.
1992. Reconsideration of the term ‘vitrification’
as used in micropropagation. Plant Cell Tissue
Organ Cult. 30: 135-140.
Fal, M.A., J.P. Majada, A. Gonzalez and R. Sanchez
Tames. 1999. Differences between Dianthus
caryophyllus L. cultivar in in vitro growth and
morphogenesis are related to their ethylene pro-
duction. Plant Growth Regul. 27: 131-136.
Jain, A., S. Hussain and S.L. Kothari. 1997. Micro-
propagation of Dianthus caryophyllus L. control
of vitrification. J. Plant Biochem. Biotech. 6:
35-37.
Kevers, C., K. Coumans, M.F. Coumans-Gilles and T.
Gaspar. 1984. Physiological and biochemical
events leading to vitrification of plant culture in
vitro. Phyisiol. Plant. 61: 69-74.
Majada, J.P., M.I. Sierra and R. Sanchez-Tames. 2001.
Air exchange rate affects the in vitro developed
leaf cuticle of carnation. Sci. Hort. 87: 121-
130.
51
Mantell, S.H. and S.A. Hugo. 1989. Effects of pho-
toperiod, mineral medium strength, in organic
ammonium, sucrose and cytokinin on root, shoot
and microtuber development in shoot clusters of
Dioscorea alata L. and D. bulbifera L. yams. Plant
Cell, Tissue and Organ Cult. 16: 23-37.
Ohki, S. and S. Sawaki. 1999. The effects of inorganic
salts and growth regulators on in vitro shoot
proliferation and leaf chlorophyll content of Del-
pinium cardinale. Sci. Hort. 81: 149-158.
Olmos, E., and E. Hellin. 1998. Ultrastructural differ-
ences of hyperhydric and normal leaves from
regenerated carnation plants. Sci. Hort. 75:
91-101.
Pathak, V.N. 1972. Essentials of Plant Pathology. Job-
ner, India. 446p.
Sutter, E.G, and Langhans, R.W. 1979. Epicuticular
wax formation on carnation plantlets regenerated
from shoot tip culture. J. Amer. Soc. Hort. Sci.
104(4): 493-496
van Altvorst, A.C., Koehorst, H., de Jong, J., and Dons,
H.J.M. 1996. Transgenic carnation plants ob-
tained by Agrobacterium tumefaciens-mediated
transformation of petal explants. Plant Cell Tissue
Organ Cult. 169: 169-173.
Ziv, M., 1986. In vitro hardening and acclimatization
of tissue culture plants. P. 187-196. In: Withers,
L.A. and P.G. Alderson (Eds.) Plant Tissue Cul-
ture and Its Agricultural Applications. London:
Butterworth.
_______, A. Schwartz and D. Fleminger. 1987 Malfunc-
tioning stomata in vitreous leaves of carnation
(Dianthus caryophyllus) plants propagated in
vitro: Implication for hardening. Plant Sci. 52:
127-134.
_______, 1991. Vitrification: morphological and physi-
ological disorder of in vitro plants. p. 45-69. In:
Debergh, P.C. and R.H. Zimmerman (Eds.) Mi-
cropropagation; Technology and Application.
London. Kluwer Academic Publishers.
Winarto, B. 2002. Development Micropro-pagation Sys-
tem and Reduction of Hyper-hydricity in Regener-
ants of Ccarnation (Dianthus caryophyllus L.cv.
Maldives). Thesis, Crop Science Dept., Faculty of
Agriculture, Universiti Putra Malaysia. 330p
Agrosains 6(2): 45-52, 2004