Module : Techniques d’analyses biologiques. Nom : Prénom
1- Pourquoi est-il nécessaire de mesurer la vitesse de réaction enzymatique de la
peroxydase en début de réaction (vitesse initiale) plutôt qu'en fin de réaction? Réponse :Réaction d’ordre 1(proportionnalité), calcule de laVmax donc de l’activité enzymatique. 2- En supposant que vous ayez un milieu réactionnel pour le dosage de l'activité enzymatique qui soit le suivant:
Tampon X 100 mM pH 5.0 500 µL
Substrat 50 mM 100 µL Préparation enzymatique (dil 1/5) 50 µL Eau distillée 350 µL 1 mL
a) Dans cet exemple quelles sont les concentrations finales de tampon et de substrat? Réponse : Tampon :50 mM Substrat : 5 mM
b) Comment pourrait-on avoir les mêmes concentrations finales de tampon ou de substrat
à partir de solutions initiales de concentrations différentes et ce sans modifier le volume final (STANDARD) de 1 ml? Donnez un exemple. Réponse Pour réaliser la gamme d étalonnage, on dispose d un sérum étalon à 74 g/l de protéines. Le dosage est réalisé sur un ml de sérum (A et B) dilué au 1/20 auquel on ajoute 4 ml de réactif de biuret. Après développement de la coloration, on lit les absorbances à 540 nm. Compléter le tableau de gamme. Tubes 0 1 2 3 4 5 Sérum A Sérum B Sérum à doser dilué (ml) 0 0 0 0 0 0 1 1 Sérum étalon dilué (ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0 Eau physiologique (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0 Réactif (ml) 4 4 4 4 4 4 4 4 Protéines (g/l) 0 1.48 2.96 4.44 5.92 7.40 3.4 4.1 Absorbance 0 0.090 0.180 0.260 0.350 0.440 0.200 0.240 a) Quelle dilution du sérum étalon faut-il utiliser ? Réponse : 1/10 Calculer la concentration en protéines de chacun des deux sérums. Réponse : Sérum A : 68 g/l Sérum B : 82 g/l.
