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Université Abou Bekr Belkaid Année universitaire 2004/2005

Faculté des sciences


Département de Biologie.

Examen de travaux pratiques.


Module : Techniques d’analyses biologiques.
Nom : Prénom

1- Pourquoi est-il nécessaire de mesurer la vitesse de réaction enzymatique de la


peroxydase en début de réaction (vitesse initiale) plutôt qu'en fin de réaction?
Réponse :Réaction d’ordre 1(proportionnalité), calcule de laVmax donc de l’activité
enzymatique.
2- En supposant que vous ayez un milieu réactionnel pour le dosage de l'activité
enzymatique qui soit le suivant:

Tampon X 100 mM pH 5.0 500 µL


Substrat 50 mM 100 µL
Préparation enzymatique (dil 1/5) 50 µL
Eau distillée 350 µL
1 mL

a) Dans cet exemple quelles sont les concentrations finales de tampon et de substrat?
Réponse : Tampon :50 mM Substrat : 5 mM

b) Comment pourrait-on avoir les mêmes concentrations finales de tampon ou de substrat


à partir de solutions initiales de concentrations différentes et ce sans modifier le
volume final (STANDARD) de 1 ml? Donnez un exemple.
Réponse
Pour réaliser la gamme d étalonnage, on dispose d un sérum étalon à 74 g/l de protéines. Le
dosage est réalisé sur un ml de sérum (A et B) dilué au 1/20 auquel on ajoute 4 ml de réactif
de biuret. Après développement de la coloration, on lit les absorbances à 540 nm.
Compléter le tableau de gamme.
Tubes 0 1 2 3 4 5 Sérum A Sérum B
Sérum à doser dilué (ml) 0 0 0 0 0 0 1 1
Sérum étalon dilué (ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0
Eau physiologique (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0
Réactif (ml) 4 4 4 4 4 4 4 4
Protéines (g/l) 0 1.48 2.96 4.44 5.92 7.40 3.4 4.1
Absorbance 0 0.090 0.180 0.260 0.350 0.440 0.200 0.240
a) Quelle dilution du sérum étalon faut-il utiliser ?
Réponse : 1/10
Calculer la concentration en protéines de chacun des deux sérums.
Réponse : Sérum A : 68 g/l Sérum B : 82 g/l.