PRACTICA N7:

METABOLISMO DE PROTEINAS

I.

INTRODUCCION
Las bacterias son muy verstiles en la degradacin de polmeros. Sin
embargo, existen microbios que son ms activos frente a ciertos compuestos.
Existen microorganismos que se comportan como proteolticos, amiloliticos,
lipoliticos, etc., debido a que tienen un sistema enzimtico muy verstil.
La degradacin se puede demostrar por la aparicin de unidades monomericas
derivados de los compuestos polimricos, as, de las protenas, se obtendrn
aminocidos, y a partir de estos derivados como indol, escatol, cido
sulfhdrico, amoniaco, etc. La degradacin de compuestos nitrogenados se
evidencia por la aparicin de amoniaco u otros compuestos. Siempre que
existen las condiciones adecuadas, el microorganismo y el sustrato a
degradarse, aparecern compuestos productos de la degradacin.
Las protenas son los nutrientes ms complejos. A diferencia de los
carbohidratos y de las grasas, ambos constituidos por carbono, hidrgeno y
oxgeno (CHO), las protenas, adems de los tres tomos sealados,
presentan nitrgeno en se estructura (CHON).
Las protenas constituyen un grupo numeroso de compuestos nitrogenados
naturales. Comprenden, con ADN, ARN, polisacridos y lpidos, cinco clases
de complejas biomolculas que se encuentran en las clulas y en los tejidos.

II.

OBJETIVOS

Demostrar la accin de las bacterias frente a compuestos polimricos

nitrogenados, como protenas, urea, etc.

Demostrar que no todas las bacterias tienen capacidad de degradar

ciertos compuestos.

Observar la presencia de algunos compuestos de la degradacin de

protenas por medio de reactivos de lectura.

III.

MATERIALES

CULTIVOS PUROS:
Escherichia Coli.
Pseudonomas.
MEDIOS DE CULTIVO:
Urea
Gelatina
Caldo triptonado.
REACTIVO:
Kovacs

IV.

PROCEDIMIENTO

DEGRADACIN DE PROTENAS:

Esterilizamos el asa

Realizamos un leve
raspado

Introducimos en el centro 2
o 3 veces luego realizamos
el sembrado en estras.

LICUEFACCIN DE GELATINA.
En los tubos conteniendo medio gelatina se ha sembrado
Pseudomona
E.Coli

PRODUCCION DE INDOL Y H2S.

Ciertos microbios son capaces de degradar al triptfano en indol, otros
en degradar los aminocidos azufrados y producir la liberacin del
cido sulfhdrico y finalmente y otros producen las dos cosas.
En los tubos conteniendo caldo triptonado se ha sembrado
Proteus
E. Coli

DEGRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS.

HIDROLISIS DE LA UREA.
De la hidrolisis de la urea se libera el amoniaco y como resultado el
medio se torna alcalino haciendo virar el indicador de Ph al color
grosella.
En los tubos conteniendo medio urea se ha sembrado:
Pseudomonas
E. Coli
Proteus

V.

RESULTADOS
MEDIO GELATINA

Luego de una incubacin de 24 horas y

refrigeracin de 4 horas se observa que el
tubo sembrado con E.Coli se ha gelificado y
el Pseudomonas no.
Por lo tanto las Pseudomonan han
reaccionado de forma positiva con la

licuefaccin de la gelatina.
Fundamento: La prueba de licuefaccin de gelatina se utiliza como
medio de cultivo gelatina nutritiva, en esta prueba se pretende determinar
la capacidad de un microorganismo de producir enzimas de tipo
proteolticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o muestran
cambios caractersticos debido a los productos de degradacin. La
gelatina como protena derivada del colgeno animal es hidrolizada por la
gelatinasa en sus aminocidos constituidos, con prdida de sus
caractersticas gelificantes.
PRODUCCION DE INDOL Y H2S.
Se incubo a 37C durante 24 horas y tras la incubacin, aadimos unas
gotas de reactivo de Kovacs observando lo siguiente:

El E.coli reacciono de forma positiva observndose un anio rojo rosella

en la parte superior.
Fundamento: El indol es un compuesto que se genera mediante la
desaminacin reductiva del triptfano y esta reaccin es llevada a cabo
por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su
conjunto triptofanasas.Para detectar la produccin deindol se utiliza el
medio Caldo triptfano y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo
de Kovacs (alcohol isoamilo, p-dimetilamino benzaldehdo y cido
clorhdrico concentrado) con el que el indol producido reacciona
generando una coloracin rosa intensa.

 DEGRADACION DE LA UREA

El tubo conproteos y pseudnona han reaccionado de forma positiva, es

decir estos microorganismos contienen ureasa.

Fundamento: Cuando una bacteria contiene la enzima ureasa puede

descomponer la urea. Los productos de esta reaccin de hidrlisis son el
amoniaco y el dixido de carbono. Por s mismo, esto no sera
perceptible. Cuando la reaccin se produce enpresencia de indicadores
de pH, sin embargo, produce un color perceptible. El amonaco provoca
un pH bsico (alcalino) a desarrollar y el indicador de pH cambiar de
color. El indicador ms comnmente utilizado para esta prueba es de
color rojo fenol, que se vuelve de color rosa despus de la exposicin al
amoniaco. La aparicin de una coloracin rosa es un resultado positivo.
Esto significa que la bacteria contiene ureasa.

VI.

CUESTIONARIO
1. Qu importancia tiene el estudio de la degradacin de protenas?
La degradacin de protenas tambin tiene un rol fundamental en la
regulacin del metabolismo. As por ejemplo, durante una desnutricin los

proteasomas de las clulas musculares son muy activos, ya que al

degradarlas en sus constituyentes bsicos, los aminocidos, estos quedan
libres para producir glucosa a partir de ellos, la que a su vez se quema
para generar energa. Es as como la destruccin de las protenas
musculares explican la atrofia y debilidad de la masa muscular que se
produce en individuos que sufren una desnutricin o una enfermedad
avanzada, como el SIDA o una diabetes no tratada. La degradacin de las
protenas desempea importantes funciones, ya sea por la modulacin de
los niveles intracelulares de protenas especficas (protelisis limitada),
como por la eliminacin de protenas anormales. La degradacin de las
protenas, y de los biopolmeros en general, no fue considerada por mucho
tiempo como un mecanismo necesario en la homeostasis de clulas y
tejidos. Actualmente se sabe que en ladegradacin de determinadas
protenas reside el control de diversos procesos biolgicos. Algunos
fundamentales, como la progresin del ciclo celular.
Y es que las protenas se van estropeando y es necesario reciclarlas para
crear otras nuevas. Continuamente se generan nuevas protenas a partir
de antiguas, pero antes ha habido que desmontarlas.
2. Fundamente la hidrolisis de las protenas en la formacin de indol y
cido sulfhdrico?
La prueba del indol es una prueba bioqumica realizada en especies
bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol
del aminocido triptfano. Esta divisin molecular es lograda por una serie
de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le
llama con frecuencia triptofanasa. Se genera el indol por una desaminacin
reductiva del triptfano va la molcula intermediaria cido indo pirvico.
Las triptofanasas catalizan la reaccin de desaminacin, durante el cual se
remueve el grupo amino (NH2) de la molcula de triptfano. Los productos
finales de la reaccin son el indol, cido pirvico, amonaco (NH3) y
energa. Como coenzima de la reaccin se requiere al fosfato de piridoxal.
Evala la presencia en las bacterias de la enzima triptofanasa, mediante la
cual, ocurre la hidrlisis y desaminacin oxidativa del triptfano, con
formacin de indol. El indol se evidencia al aadir el revelador: reactivo de

Kovacs (p-dimetilamino benzaldehdo) que al condensarse con el indol,

forma un anillo de color rojo o fucsia.
3. Explique el cambio de coloren la hidrolisisde la urea?
La capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos
molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un
cambio de color rojo en el medio. La hidrolisis de la urea es catalizada por
la ureasa para dar dos molculas de amoniaco.La ureasa es una enzima
microbiana vinculada con la descomposicin de loscompuestos orgnicos.
sta ser degradada por aquellos microorganismoscapaces de producir el
enzima ureasa.Esta degradacin produce amoniaco que har variar el
color del indicador de amarillo a rojo,ponindose as de manifiesto la
actividad

ureasa.Para

revelar

el

resultado

de

esta

prueba

es

importantetener en cuenta el tiempo de incubacin ya que especies de

Proteus vuelven alcalino el medio poco despus de la inoculacin y sus
resultados deben ser ledos en las primeras 2-6 horas, mientras que
Citrobacterfreundii y Klebsiellapneumoniae tienen actividad ureasa dentro
de las 24-48 horas de incubacin.

VII.

DISCUSIONES
1.

En

esta

prueba

se

pretende

determinar

la

capacidad

de

un

microorganismo de producir enzimas de tipo proteolticas (gelatinasas) que

licuan/hidrolizan la gelatinao muestran cambios caractersticos debido a los
productos de degradacin. La gelatina como protena derivada del
colgeno animal es hidrolizada por la gelatinasa en sus aminocidos
constituidos, con prdida de sus caractersticas gelificantes.
2. Se genera el indol por una desaminacin reductiva del triptfano va la
molcula intermediariacido indolpirvico. Las triptofanasas catalizan la
reaccin de desaminacin, duranteel cual se remueve el grupo amino
(NH2) de la molcula de triptfano. Los productos finales de la reaccin
son el indol, cido pirvico, amonaco (NH3) y energa.
Cuando una bacteria contiene la enzima ureasa puede descomponer la
urea. Los productos de esta reaccin de hidrlisis son el amoniaco y el
dixido de carbono.Por s mismo, esto no sera perceptible. Cuando la
reaccin se produce en presencia de indicadores de pH, sin embargo,

produce un color perceptible. El amonaco provoca un pH bsico (alcalino)

a desarrollar y el indicador de pH cambiar, por lo tanto, de color.
Elindicador ms comnmente utilizado para esta prueba es de color rojo
fenol, que se vuelve de color rosa despus de la exposicin al amoniaco.
3. Segn Evelyn Rodrguez Cavallini: El indol es uno de los productos
derivados de la oxidacin del triptfano,producido por la desanimacin del
cido indol pirvico, principal intermediario en la degradacin del triptfano.
Algunos microorganismos poseen la enzima triptofanasa, que les permite
hidrolizary desaminar oxidativamente el triptfano y formar entre otros
productos el indol. Este puede extraerse con xilol y evidenciarse con el
reactivo de Kovacs (pdimetilanimobenzaldehdo), que al condensarse con
el indol, forma un producto de color fucsia.Para esta prueba se utiliza caldo
triptona al 1% peptona derivada de la casena y cuyo contenido de
triptfano es alto.Los carbohidratos inhiben la produccin de indol, por
cuanto son utilizados antes que las peptonas.Adems, la acidificacin que
provocan puede inhibir el metabolismo bacteriano;por ello, no se incluyen
en los medios para anlisis de indol.

VIII.

CONCLUSIONES
1. Hay muchos tipos de bacterias. Algunas son dainas, algunas beneficiosas
y otras no son ni lo uno ni lo otro. La capacidad de distinguir entre estas
bacterias es crucial para la prevencin y el tratamiento de enfermedades.
2. A menudo las bacterias pueden ser identificadas por su capacidad para
reaccionar con compuestos qumicos. La urea es uno de tales compuestos
y la prueba de hidrolisis de la urea se utiliza para distinguir unos grupos de
bacterias de los otros.
3. En esta prueba se determin la capacidad de un microorganismo de
producir enzimas de tipo proteolticas (gelatinasas) que hidrolizan la
gelatina o muestran cambios caractersticos debido a los productos de
degradacin.
4. Las triptofanasas catalizan la reaccin de desanimacin, durante el cual se
remueve el grupo amino de la molcula de triptfano.
5. Cuando una bacteria contiene la enzima urea puede descomponer la urea.

IX.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BENYON S: Metabolismo de las protena. En, Lo Esencial en

Metabolismo y Nutricin. Cursos Crash de Mosby.. Harcourt, Madrid,
1998

BAIZA L A.: Aminocidos: biosntesis, En, Hicks J J. Bioqumica.. Mac

Graw-Hill Interamericana, , 2000

KICKS J J.: Aminocidos: recambio y degradacin, En, Hicks J J.

Bioqumica.. Mac Graw-Hill Interamericana, , 2000