AISLAMIENTO DE FAGOS

I. OBJETIVOS:
Utilizar la tcnica ms comn y relativamente ms sencilla, para demostrar y cultivar
bacterifagos presentes en aguas residuales.
II. MATERIALES:
Material Biolgico:

Cepa bacteriana (Escherichia coli o Pseudomona sp.), para nuestro grupo se

utiliz E.coli.

Material de Laboratorio:

Medio de cultivo: Caldo Doble Concentrado

Caldo triptosa
Caldo Triptosa o Caldo Nutritivo.
Agar triptosa
Filtro de porcelana.
Frascos y botellas estriles.
Viales, placas, pipetas, papel filtro, tubo para centrifugar, anzas bacteriolgicas (en
anillo y en punta).
Centrfuga refrigerada.
Estufa
Bomba de vaco
Matraz

III. PROCEDIMIENTO:

En una botella estril colocamos 50 ml. de caldo doble concentrado (CDC).

Luego, sembramos la cepa problema en el CDC (1 azada si la cepa est en medio
lquido o 4 colonias si est en placa). En este caso, sembr E. coli de cepa pura
(vial).
Incubamos por 4 a 5 horas en el caso de E. coli.
Luego, agregamos el agua servida a la botella (previamente se lo pasa por papel
filtro), 50 ml.
Luego, incubar a 37C por 18 a 24 horas.
Pasado el tiempo, volvemos a filtrar en papel filtro, para luego centrifugar ese
filtrado a 1500 rpm por 5 a 10 min., de esta manera libramos a la muestra de
macroimpurezas.

Luego el sobrenadante lo filtramos con el filtro bacteriolgico de porcelana (aqu se

usa en un matraz estril y la bomba de vaco).
Luego, el filtrado obtenido, de manera asptica, lo pasamos a viales (estriles),
luego taponamos y lo guardamos en refrigeracin.

Comprobacin de fagos:

En una placa con agar triptosa sembramos con hisopo la cepa problema (en este
caso E. coli), luego incubamos de (4 a 6 horas).
Pasado el tiempo, con el asa aadimos 1 gota de filtrado sobre la placa.
Por ltimo, incubamos a 37C por 18 a 24 horas (observar la formacin de calvas o
placas).

IV. RESULTADOS:
Se puede observar la calva de gran amplitud (la cual abarca casi toda la placa) con lo que
se demuestra la presencia del bacterifago, lisando a las bacterias en crecimiento.

Figura 2: aislamiento de fagos

Figura 1: aislamiento de fagos

V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

ACTON, J. (1967). Virologa. Editorial Interamericana. Mxico D.F.

MADIGAN M. y J. PARKER (1997) Brock biologa de los microorganismos. 10ma

Edicin. Editorial Mc Graw Hill. Mxico D.F.

http://www.scribd.com/doc/6850630/Virologia-Practica-02-Aislamiento-debacteriofagos