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Validation des mthodes

d'analyse
Journes Qualit et Chimie 2010
Une dmarche qualit au service de la chimie
Autrans - 14 octobre 2010
Marie-Dominique Blanchin

Laboratoire de Chimie Analytique

Rfrentiels

ISO 5725 : 1994 - Exactitude et fidlit d'une


mthode de mesure

ISO 17025 : 2005 - Prescriptions gnrales


concernant la comptence des laboratoires d'essai
et d'talonnage
Comptences management de la qualit
Comptences techniques

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Rfrentiels/Industrie Pharmaceutique

ICH : International Confrence on Harmonisation

Pharmacope amricaine, USP33-NF28

<1225> Validation of compendial methods

FDA guidance for industry.

Q2(R1) 2005 : validation of analytical procedures


test and methodology

Analytical procedures and method validation

Eurachem
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ICH /Dfinitions

Mthode d'analyse
Document crit
"Moyen de raliser l'analyse"
"Description dtaille des diffrentes oprations
ncessaires pour effectuer l'analyse de la
substance examiner"

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ICH / Dfinitions
Validation

"Le but de la validation d'une mthode d'analyse


est de dmontrer qu'elle correspond l'usage
pour lequel elle est prvue"
Ensemble des oprations ncessaires pour
prouver que le protocole est suffisamment exacte
et fiable pour avoir confiance dans les rsultats
fournis et ceci pour un usage dtermin
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Dfinitions

Validation

Application dtermine

Niveau de la validation

Fonction de l'application
Objectif clairement dtermin

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Critres de validation
Spcificit
Linarit
Exactitude
Fidlit
Intervalle d'application
Limite de dtection
Limite de quantification
Robustesse
Stabilit des solutions

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Spcificit

Specificity

"Capacit de la mthode de permettre une


valuation non quivoque de l'analyte en
prsence de composants qui sont susceptibles
d'tre prsents"

Capacit de faire la discrimination analyte /substances


interfrentes
Garantir que le rsultat de l'analyse analyte
Absence d'interfrences

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Spcificit

Specificity

Impurets

Ajouts doss impurets disponibles sur compos ou


formulation
Comparaison avec rsultats obtenus sur des
chantillons contenant des impurets ou des
produits dgradation (lumire, t, humidit, hydrolyse
acide ou alcaline, oxydation)
Profil impurets

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Spcificit

Specificity

Si mthode CLHP, vrifie par

Injection

placebo analytique = matrice (dgrad, non dgrad)


composs interfrents potentiels, produits de dcomposition,
intermdiaires, prcurseurs de synthse
chantillons dgrads (lumire, t, acide, alcalin, oxydant)

Observation des chromatogrammes obtenus


Vrification homognit des pics

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Linarit

Linearity

"Capacit dans un intervalle donn d'obtenir des


rsultats de dosage directement proportionnels
la concentration ou la quantit d'analyte
dans l'chantillon"

Relation linaire signal - concentration

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Linarit

Linearity

Exemple mthode CLHP, vrifie par injection de

solutions talons danalyte : linarit de la gamme


d'talonnage
Solutions chantillons reconstitus concentrations
d'analyte diffrentes : linarit de la mthode
n 5 concentrations
n 3 rptitions de chaque niveau

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Linarit

Linearity

Intervalle de linarit fonction de


Analyte (impuret, principe actif, conservateur,)
Application (formulation, test de dissolution,)
Vrifie : examen de la courbe, analyse de variance
Exprime : quation de la droite avec intervalle de
confiance sur pente, ordonne lorigine, coefficient
de dtermination r2
Si linarit + ordonne origine =0 : 1 seul point talon
en routine
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Exactitude

(justesse)

Accuracy

"Etroitesse daccord entre la valeur trouve et la valeur accepte


soit comme valeur conventionnellement vraie soit comme valeur
de rfrence"

ISO 5725
Exactitude : troitesse d'accord entre la rsultat d'essai et la
valeur de rfrence accepte
Justesse : troitesse daccord entre la valeur moyenne obtenue
partir de larges sries d'essais et une valeur de rfrence
accepte

cart d'une valeur obtenue / valeur considre comme exacte

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Exactitude

Exact, non fidle

Exact, fidle

(justesse)

Accuracy

Inexact, non fidle

Inexact, fidle

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Exactitude

(justesse)

Accuracy

Exactitude erreur systmatique (biais) d'une


valeur obtenue / valeur considre comme exacte

Vrifie par comparaison

mthode de rfrence
prparation chantillons reconstitus (matrice + quantit
connue danalyte) et talons
n 3 x 3 concentrations diffrentes en analyte

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Exactitude

(justesse)

Accuracy

Trac droite qt trouve - qt ajoute


(= thorique ou vraie)

Mthode exacte si

Trac droites rponse-qt ajoute et rponsequantit talons

pente=1
ordonne origine =0

Mthode exacte si pente et ordonne origine =0


identiques

Taux de recouvrement ou erreur relative %


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Fidlit

Precision

" Etroitesse daccord entre une srie de


mesures obtenues dans des conditions
prescrites partir de prises dessais multiples
provenant dune mme chantillon
homogne"

ou degr de dispersion des rsultats


ou cart alatoire de valeurs / valeur moyenne

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Fidlit

Precision

Fidle, inexact

Non fidle, inexact

Fidle, exact

Non fidle, exact

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Fidlit
Fidlit

Precision

erreurs alatoires

Rptabilit
Fidlit intermdiaire
Reproductibilit

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Fidlit, rptabilit

Repeatability

"La

rptabilit exprime la fidlit value dans


des conditions opratoires identiques et dans un
court intervalle de temps"
Dtermine partir d'un mme chantillon, value
dans des conditions opratoires identiques (mme
analyste, mme quipement, mme laboratoire,) et
dans un court intervalle de temps

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Fidlit, rptabilit

Repeatability

Rptabilit de la mesure : n 6 mme


chantillon
Rptabilit de la mthode : n 6 ou n 3x3

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Fidlit, fidlit intermdiaire

Intermediate precision

"La fidlit intermdiaire exprime la variabilit


intra-laboratoire : jours diffrents, analystes
diffrents, quipements diffrents, etc "
Dtermination partir d'un mme chantillon
bien spcifier les conditions
plan expriences
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Fidlit, reproductibilit

Reproductibility

" La reproductibilit exprime la variabilit inter


laboratoires (tudes collaboratives)
habituellement appliques la standardisation
de la mthodologie"

Dterminations partir dun mme chantillon

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Fidlit, expression

Precision

cart-type s (standard deviation)


Variance s2
Coefficient de variation, s/m*100 ( relative
standard deviation) %

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Intervalle de validit

Range

"Intervalle compris entre la concentration


(quantit ) la plus leve et la plus faible de
l'chantillon dans lequel il a t dmontr
que la mthode d'analyse prsente une
fidlit, une exactitude et une linarit
satisfaisante."

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Limite de dtection

Detection Limit

" La limite de dtection d'une mthode d'analyse


est la plus petite quantit danalyte qui peut tre
dtecte mais pas ncessairement quantifie
comme une valeur exacte"

Exprime en quantit injecte ng, g

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Limite de dtection

Detection Limit

valuation visuelle
valuation signal/bruit
valuation pente et cart-type

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Limite de dtection

Detection Limit

Exemple mthode CLHP


Masse ou concentration danalyte qui donne un
rapport S/B = 3
Bruit pic pic
Vrifie dans matrice par injection la
concentration retenue comme LD

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Limite de quantification

Quantification Limit

"Quantit la plus faible danalyte dans un


chantillon qui peut tre dtermine
quantitativement avec une fidlit et une
exactitude approprie"

Exprime en ng ou g

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Limite de quantification

Quantification Limit

valuation visuelle
valuation signal/bruit
valuation pente et cart-type

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Limite de quantification

Quantification Limit

value : quantit ou concentration danalyte S/


B = 10
Vrifie en injectant des solutions de conc. =LQ

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Robustesse

Robustness

"Capacit du protocole de rester non affecte par des


variations faibles mais dlibrment introduites dans
les paramtres de la mthode; fournit une indication
sur sa fiabilit dans des conditions normales
dutilisation"

Variations faibles : modifications contrles des


conditions d'application (changements dlibrs mais
limits facteurs indpendants)
tude de l'effet de chaque facteur sur le rsultat de
l'analyse

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Robustesse

Robustness

Vrifie par approche multivarie ou univarie (plan


d'expriences)

Permet de fixer les limites des tests de conformit


Donne une ide sur variations entre jours, entre
laboratoires tape prliminaire avant de transfrer les
mthodes, avant les tudes collaboratives

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Robustesse

Exemples de facteurs

Temps d'extraction
Temps d' agitation
CLHP

Robustness

pH de la phase mobile
Composition de la phase mobile
Dbit
Colonne
Temprature .

Permet de fixer les limites des tests de


conformit
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Stabilit des solutions


Vrifie sur solutions talons et chantillons
Vrifie par comparaison des facteurs de
rponse

Exemple mthode CLHP


Solution vieillie
Solution frache
Temps > 16h (injecteur automatique)

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Conclusion

Validation initiale
Pas de rgles
Recommandations; lignes directrices
Pas de protocole fig
Adaptation l'usage, aux exigences

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Conclusion

Routine

Validation in situ : confirmation validation initiale


applicable ( suivi des paramtres, CQ,)
Tests de conformit HPLC

Paramtres chromatographiques Tr, Rs, N


Rptabilit injections successives (n = 6)

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TEST

PARAMETRE

CRITERE D ACCEPTATION

Identification

Spcificit

Test garantissant lidentit de lanalyte

Tests quantitatifs
majeurs

Exactitude/TR
Rptabilit
Fidlit intermdiaire
Linarit
Spcificit

95 105 % qt thorique
Doit tre prouve
RSD 3 %
R2 0,98 ou R 0,99
Rs satisfaisante entre les pics PA et pdts de
dgradation connus; valuation de linterfrence du
placebo

Robustesse

Doit tre dmontre

Exactitude/TR
Rptabilit
Linarit
Spcificit

70 130 % de la qt tolre
RSD 10 %
R2 0,95 ou R 0,97
Rs satisfaisante entre pics PA et pdts de
dgradation connus; valuation de linterfrence du
placebo
Pour tests limites uniquement
Doit tre dmontre

Dosage de faibles
conc. (pdts de
dgradation,
impurets)

LD
LQ

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Quelques livres

Validation and Qualification in Analytical Laboratories L. Huber


Interpharm / CRC 1999
L'assurance qualit dans les laboratoires agro-alimentaires et
pharmaceutiques M. Feinberg, coordonnateur Ed TEC&DOC
2001
Analytical method validation and instrument performance
verification Ed Chung Chow Chan, H. Lam, Y.C. Lee, X.M.
Zhang John Wiley&Sons, 2004
Validation of chromatography data systems Meeting business
and regulatory requirements R.D. McDowall Ed Royal
Society of Chemistry, 2005
Method validation in pharmaceutical analysis a guide to best
practice Ed J. Ermer and J.H. McB. Miller Wiley- VCH, 2005

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