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Toxicolgico.

6. Bioacumulacin, bioconcentracin y biomagnificacin

Qu se entiende por bioacumulacin?
Bioacumulacin: es la acumulacin neta de un contaminante en y sobre un organismo a
partir de todas las fuentes, agua, aire, fases slidas (alimento, suelo, sedimento,
partculas en suspensin en aire y agua).
Se define el Factor de bioacumulacin como la relacin entre la concentracin del
contaminante en el organismo y la concentracin del contaminante en la potencial fuente
(agua, alimento)
Qu se entiende por bioconcentracin?
Bioconcentracin: acumulacin neta de un contaminante en y sobre un organismo a
partir del agua.
Se define el Factor de bioconcentracin como la relacin entre la concentracin del
contaminante en el organismo y la concentracin del contaminante en el agua.
Qu se entiende por biomagnificacin?
Biomagnificacin: aumento en la concentracin de un contaminante en un nivel trfico
respecto del nivel trfico anterior, debido a la acumulacin a travs del alimento.
Por ejemplo, desde presa a predador.
La Concentracin del contaminante en el organismo: masa de contaminante/masa de
organismo, ej, 25 g Pb/g de tejido
Carga de contaminante en el cuerpo (body burden): masa de contaminante/individuo,
ej, 2.500 g Pb por individuo. Es la cantidad total de contaminante en el cuerpo de un
organismo. Para dos organismos que tengan la misma concentracin de contaminante, la
carga ser mayor para el organismo de mayor tamao.
La bioacumulacin es el balance resultante de los procesos de captacin, y eliminacin de
un contaminante en un organismo.

Cmo se determina el factor de bioconcentracin para un determinado

compuesto?
BCF (estado estacionario): Co/Ca ( o tambin K1/K2)
donde
Co: concentracin del compuesto en el organismo en el estado estacionario
Ca: concentracin del compuesto en el agua
K1: velocidad de asimilacin del compuesto por el organismo
K2: velocidad de eliminacin del compuesto por el organismo

Estado estacionario: se refiere a una concentracin constante del compuesto en un

organismo que resulta de los procesos de captacin y eliminacin.

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El equilibrio no se alcanza inmediatamente cuando se produce la exposicin. La

concentracin en el estado estacionario es entonces:
a) mxima concentracin esperada para un determinado contaminante y un
organismo
b) no depende del tiempo
c) resulta de procesos de captacin y eliminacin.
En un ensayo para la determinacin del factor de bioacumulacin realizado con
organismos vivos, se considera que se ha alcanzado el estado estacionario cuando los
resultados de tres anlisis consecutivos, realizados a intervalos de dos das, no presentan
diferencias de ms de un 20% (Norma IRAM 29012-parte 16, Gua para el bioensayo de
muestras)
Qu factores condicionan la bioacumulacin de un contaminante?
1. El contaminante (forma qumica a la cual est presente en el ambiente, la
biodisponibilidad, la posibilidad de ser biotransformado y eliminado).

2. El organismo:
Las caractersticas fisiolgicas, bioqumicas y genticas determinan la capacidad del
organismo para la captar, biotransformar y eliminar el contaminante.
Por ejemplo,
- la cantidad de lpidos en el organismo influye sobre la acumulacin de contaminantes
lipoflicos
- los Hidrocarburos aromticos polinucleares se acumulan en mejillones porque estos
organismos no pueden biotransformarlos
- las hembras de los grandes mamferos marinos suelen tener menor carga de
contaminantes que los machos, ya que eliminan una cantidad importante del
contaminante a travs de la leche. La leche en estos mamferos es muy densa y con
alto contenido graso. La hembra se libera del contaminante pero lo transfiere a la cra.
El comportamiento y la ecologa determinan las rutas de exposicin y la eficacia de
captacin desde una fuente potencial. Por ejemplo, un predador est expuesto a travs de
su presa, una especie que vive en la parte superficial de un cuerpo de agua no est
expuesta a un contaminante asociado a sedimentos. (Relacionar con los conceptos de
Hbitat y nicho ecolgico)
3. Las condiciones ambientales:
- afectan la especiacin y la asociacin a fases del contaminante (biodisponibilidad)
- afectan el funcionamiento de los organismos (temperatura, pH, salinidad).
Las condiciones del microambiente en el sitio de interaccin son tan importantes como
las del ambiente general: ej, la qumica de las aguas de poro que rodean a una especie
que vive en sedimentos afecta fuertemente la captacin.

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6.1 Bioacumulacin de contaminantes inorgnicos

La bioacumulacin depende de la velocidad de excrecin del contaminante: por ejemplo,
la bioacumulacin del cadmio en animales es relativamente ms elevada que para la
mayora de los otros metales dado que es asimilado rpidamente y excretado lentamente.
La bioqumica de un organismo influye sobre el factor de bioconcentracin: por ejemplo,
los animales con esqueleto calcreo o los moluscos pueden acumular plomo y estroncio
en mayor medida que aquellos que no lo poseen puesto que ambas sustancias siguen
una va metablica similar a la del calcio para la cual los organismos han desarrollado una
alta eficiencia de asimilacin.
6.1.1 Biodisponibilidad
- las formas metiladas son captadas ms rpidamente que las no metiladas (ej, metil
mercurio)
- pH del medio, a pH reducido, algunos metales son ms solubles que otros, por lo tanto
se encuentran ms biodisponibles. Una descarga de un efluente con pH cido puede
poner en solucin metales inmovilizados en sedimentos.
- metales unidos a sedimentos, menor biodisponibilidad (ej, sulfuro de mercurio)

Figura 14. Concentracin del mercurio desde el zooplancton, el camarn que se alimenta de
zooplancton (Mysis relicta), peces que se alimentan del camarn hasta la trucha de lago
(Salvelinus namaycush). La estructura trfica se ha determinado mediante la cuantificacin
15
de la proporcin de un istopo del nitrgeno ( N) respecto del nitrgeno 14 en el tejido
15
de los organismos. La proporcin del N aumenta aproximadamente un 3.4 x 1000 con
cada intercambio trfico. Se evidencia una clara relacin entre la concentracin de mercurio
y el nivel trfico de los individuos, indicando el fenmeno de biomagnificacin.
Smelt (Osmerus mordax), Alewife (Alosa pseudoharengus), Sculpin (Myoxocephalus
thompsoni), Cisco (Coregonus artedii)
Fuente. - Newman, M. (Fundamentals of Ecotoxicology).

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Figura 15. Correlacin entre la concentracin de mercurio y la estructura trfica (

N) de la
trucha de lago en lagos de Canad; la estructura trfica respecto de la trucha de lago es
diferente en los distintos lagos. En algunos lagos no se encuentran los camarones o los
peces de los cuales se alimenta la trucha, o ambos, dando lugar a distintas estructuras
trficas. 1: una estructura simple. 2: una estructura sin camarones. 3: una estructura ms
compleja, como la de la figura 14. En la mitad derecha de la figura estn representadas las
15
concentraciones reales de mercurio y los N para la trucha de lago de siete lagos
canadienses. Ntese que las truchas de estos lagos estn en posiciones algo diferentes e
intermedias entre los niveles discretos de estructura trfica.
Fuente. Newman, M. (Fundamentals of Ecotoxicology).
15

6.2 Bioacumulacin de contaminantes orgnicos

6.2.1 Organismos acuticos:
En el estado estacionario, el factor de bioconcentracin est determinado por la particin
del compuesto entre el agua y los componentes hidrofbicos del organismo. El factor de
bioconcentracin est en estrecha relacin con las caractersticas qumicas del
contaminante en cuestin. En el caso de compuestos no polares (no solubles en agua),
con elevada lipofilicidad (solubles en grasas), el compuesto tiende a permanecer en el
organismo; si el organismo no puede metabolizarlo y eliminarlo, tiende a bioacumularse.
El coeficiente de particin octanol/agua de una sustancia es el modelo utilizado para
predecir la distribucin de un compuesto orgnico entre el agua y los lpidos del
organismo; se ha demostrado que existe una relacin entre los factores de
bioconcentracin para los compuestos orgnicos lipoflicos y el valor del coeficiente de
particin octanol/agua (Kow).

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6.2.2 Organismos terrestres.

La va de ingreso es el alimento y la de eliminacin la va metablica; a diferencia del
medio acutico donde el coeficiente de particin octanol/agua es el modelo utilizado para
predecir la bioconcentracin,
no se han validado modelos predictivos para la
bioacumulacin a travs del alimento.
La posibilidad de biomagnificacin debe ser considerada siempre en toda evaluacin de
riesgo ecolgico La biomagnificacin fue el fenmeno que provoc el cambio en la forma
de encarar el cuidado del ambiente (dilucin a boomerang) a partir de la tragedia de
Minamata y el envenenamiento de pjaros con DDT.
En general, los compuestos con alta lipofilicidad, sumado a una baja capacidad
metablica del compuesto por parte de los organismos, determinan su persistencia y
bioacumulacin (ej, metilmercurio, aldrin, dieldrin, DDT, PCBs).
Los organismos que ocupan los niveles superiores de las cadenas trficas son los ms
afectados por el fenmeno de biomagnificacin; por ejemplo, los grandes mamferos
marinos dado que las cadenas trficas marinas son largas (por lo general ms largas que
las terrestres).
Efectos asociados al fenmeno de biomagnificacin:
En los grandes mamferos acuticos, los contaminantes tienden a estar en los depsitos
de grasas, pero cuando el organismo metaboliza las grasas en perodos de falta de
alimento, los contaminantes pueden circular nuevamente por el organismo; se ha
observado que durante veranos muy calurosos, disminuye la cantidad de fitoplancton, y
por lo tanto de peces. Los delfines tienen menos alimento disponible y consumen sus
tejidos grasos; el contaminante pasa a sangre y ejerce entonces su efecto sobre el
organismo. Se han descripto aumento de enfermedades infecciosas sobre delfines
(hongos y virus) atribuidas a este efecto. (Dra Marcela Junn, Museo de Ciencias
Naturales)
La Bioacumulacin fue un hecho que marc un cambio en la forma de enfocar los temas
de contaminacin y est asociada al surgimiento de la ecotoxicologa.

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Figura 16. Amplificacin biolgica de los PCBs (bifenilos policlorados) en una cadena
alimentaria acutica en los Grandes Lagos (Amrica del Norte). La mayora de estos 209
compuestos orgnicos clorados, sintticos y oleosos, son insolubles en agua, solubles en
grasas y muy resistentes a la degradacin qumica y biolgica, propiedades que originan su
bioacumulacin en los tejidos de los organismos y su amplificacin biolgica en las
cadenas y redes trficas. Los efectos a largo plazo sobre la salud de las personas
expuestas a niveles bajos de PCBs y sus ms txicas impurezas furnicas, son
desconocidas. Sin embargo, en animales de laboratorio, dosis altas de los PCB producen
daos hepticos y renales, trastornos gstricos, defectos congnitos, bronquitis, abortos,
lesiones cutneas, cambios hormonales y tumores. Algunos estudios indican que la
mayora de estos efectos nocivos son ocasionados por dibenzofuranos clorados
(comnmente llamados furanos) que se encuentran como contaminantes en algunos PCB.
En Estados Unidos y Canad, estas sustancias han sido prohibidas desde 1976. Sin
embargo, antes de esas prohibiciones, millones de toneladas de estas sustancias qumicas
fueron liberadas al ambiente, terminando muchas de ellas en los sedimentos del fondo en
lagos, corrientes fluviales, mares y ocanos.

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Figura 17. Ejemplo de bioacumulacin: La concentracin de DDT en los tejidos grasos de

los organismos se amplific unas 10 millones de veces. (cadena alimenticia de un estuario
adyacente a Long Island Sound, cerca de la ciudad de Nueva York)

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7. Efectos de los contaminantes sobre los organismos. Ensayos de

toxicidad.
Muchos estudios en ecotoxicologa estn basados en ensayos de toxicidad sobre distintos
organismos.
En qu consiste un ensayo de toxicidad?
Los ensayos de toxicidad consisten en exponer a un grupo seleccionado de
organismos a distintas concentraciones de la muestra durante un determinado
perodo de tiempo.
La muestra puede ser una sustancia pura, una mezcla de sustancias, un efluente, agua
de ro, sedimentos.
(Nota: cuando los ensayos se realizan con muestras ambientales, nos referimos a
concentraciones y no a dosis como es habitual en toxicologa: los organismos son
expuestos a una muestra que contiene una determinada concentracin del txico, por
ejemplo 5 mg/l. La dosis es la cantidad de sustancia que se administra al organismo, ej,
se inyectan 5 mg de txico al organismo)

Veamos un ejemplo:
Se ha realizado un ensayo de toxicidad con peces en el cual se han expuesto 10
individuos a distintas concentraciones de un efluente industrial, durante 96 horas; al
finalizar este perodo se cont el nmero de organismos muertos para cada
concentracin; se han obtenido los siguientes resultados:

Concentracin de
efluente en %
0
6
12
25
50
100

Nmero de
organismos
expuestos
10
10
10
10
10
10

Nmero de
organismos
muertos
0
0
2
5
8
10

% de organismos
muertos
0
0
20
50
80
100

Analizando los resultados de la tabla vemos que cuando los organismos son expuestos a
concentraciones muy bajas del efluente (6%) no hay ningn organismo muerto; por el
contrario, cuando son expuestos a concentraciones del efluente del 100% todos los
organismos mueren.
La respuesta de los organismos est en relacin con la concentracin de las sustancias
txicas a las cuales son expuestos (en este ejemplo las sustancias txicas que se
encuentran en el efluente): la exposicin a concentraciones mayores causa efecto (en
este caso mortalidad) sobre un mayor nmero de organismos.
Veamos otro ejemplo:
Se ha realizado un ensayo de toxicidad utilizando semillas de lechuga. Las semillas
fueron colocadas en placas de Petri, sobre un papel. Las semillas fueron expuestas a
distintas concentraciones de una muestra ambiental; se las incub durante 5 das a 24
grados y al final de ese perodo se midi la longitud de las races.

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Se obtuvieron los siguientes resultados:

Control
Agua
deionizada
4,5
4,8
4,4
4,2
4,7

Longitud de la raz (cm)

Concentracin Concentracin Concentracin
de la muestra
de la muestra
de la muestra
25%
50%
75%
4,5
4,6
4,1
4,5
4,8

3,2
3,1
3,0
2,8
3,4

1,8
2,1
2,3
1,5
1,4

Concentracin
de la muestra
100%
0,2
0,4
0,6
0,5
0,6

Observamos que la longitud de la raz es menor cuando las semillas son expuestas a
mayores concentraciones de la muestra. En este caso se evala la inhibicin de la
elongacin de la raz con respecto al control con agua deionizada.
Tambin en este caso la respuesta de los organismos est en relacin con la
concentracin de las sustancias txicas presentes en la muestra: la exposicin a
concentraciones mayores causa mayor efecto sobre la variable evaluada (en este caso
mayor inhibicin de la elongacin de raz).
En el caso del ensayo con peces el efecto evaluado fue mortalidad; en el caso de semillas
de lechuga, el efecto evaluado fue la inhibicin de la elongacin de la raz, las semillas
(plantas) no mueren pero su desarrollo se vi afectado por la accin del txico.
Podemos diferenciar entonces dos tipos de efectos (respuesta):
- Letales
- Subletales: cambios en procesos fisiolgicos como crecimiento, reproduccin,
comportamiento.
7.1 La relacin concentracin respuesta.
La relacin entre la concentracin del txico a la cual un organismo est expuesto y la
respuesta de los organismos frente a la accin del txico est descripta por la relacin
concentracin/ respuesta.
Si representamos en un grfico la concentracin en funcin de la respuesta observada, se
obtiene una grfica de tipo sigmoidea, no rectilnea. A partir de esta relacin pueden
establecerse parmetros como la Concentracin Letal 50, que es la concentracin del
txico que mata al 50% de los individuos expuestos. A continuacin, definimos los
parmetros que se establecen en los ensayos de toxicidad y que son los ms utilizados
en ecotoxicologa.
CE 50 (Concentracin efectiva 50): concentracin a la cual se observa efecto sobre el
50% de los organismos expuestos, de acuerdo al criterio de ensayo.
Ejemplos:
Cuando el criterio seleccionado es letalidad, se determina la CL50, concentracin letal 50,
concentracin a la cual muere el 50% de los organismos expuestos.
Cuando el criterio seleccionado es inmovilidad (ej, en el ensayo con Dafnias), se
determina la concentracin a la cual el 50% de los organismos expuestos est inmvil.
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NOEC (Concentracin para la que no se observa efecto): es la mayor concentracin

de txico para la cual no se observa un efecto estadsticamente significativo respecto del
control en un determinado tiempo de exposicin.
NOEC: del ingls, No Observed Effect Concentracin
LOEC (Menor concentracin para la que se observa efecto): es la menor
concentracin de txico para la cual se observa un efecto estadsticamente significativo
en un determinado tiempo de exposicin.
LOEC: del ingls Low Observed Effect Concentracion
CI 50 (Concentracin inhibitoria 50): concentracin a de la sustancia que causa un 50%
de inhibicin de la variable estudiada con respecto al control (ej, concentracin de txico
que inhibe en un 50% la elongacin de raz, concentracin de txico que inhibe en un
50% el crecimiento de las algas)
Cmo se establecen estos parmetros a partir de los ensayos de toxicidad? Vamos a
analizar en forma separada aquellos ensayos de toxicidad en los cuales se evalan
efectos letales de aquellos en los que se evalan efectos subletales.
7.1.1 Efectos letales.
Las respuesta en este caso es mortalidad; al finalizar el ensayo de toxicidad, vamos a
contar el nmero de individuos muertos en cada concentracin. La variable en este caso
es de tipo cuantal, la variable solo puede tomar determinados valores, 1,2,3,4, etc.
(Comparar ms adelante con efectos subletales y con variables mtricas)
Los mtodos ms utilizados para analizar la relacin concentracin/respuesta para el
caso de respuestas cuantales estn basados en el concepto de dosis efectiva individual o
tolerancia individual.
Se asume que la tolerancia a los txicos vara entre los individuos de una poblacin; an
cuando la poblacin que se utiliza para realizar los ensayos de toxicidad en el laboratorio
es homognea (por ejemplo, se emplean organismos de la misma edad y tamao, en
algunos casos se emplean clones) existen diferencias entre los organismos que hacen
que la tolerancia a los txicos de cada uno de ellos sea diferente.
Segn este concepto, la dosis efectiva individual (Individual Effective Dose, IED en
ingls) es la dosis que se necesita para matar a un individuo particular y es caracterstica
de ese individuo.
Analizamos ahora la parte superior de la figura 18.
Entre los 35 peces expuestos a un txico, cul es la distribucin de la tolerancia
individual al txico dentro de la poblacin?
En el grfico estn representadas 7 concentraciones del txico, 1 a 7 (menor a mayor
concentracin).
Cuando los organismos son expuestos a la concentracin 1, no muere ninguno, es decir
la concentracin del txico no es suficiente para matar ningn individuo dentro de la
poblacin.
Cuando los organismos son expuestos a la concentracin 2, mueren 5, es decir que
dentro de un grupo de 35 individuos, hay 5 individuos para los cuales la concentracin 2
es suficiente para matarlos.

10

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11

Cuando los organismos son expuestos a la concentracin 3, mueren 11 ms, es decir esa
concentracin es suficiente para matar 16 individuos (11 ms los 5 que murieron a la
concentracin 2).
Podemos seguir analizando qu ocurre con las restantes concentraciones; la
representacin grfica de la distribucin de los valores de IED dentro de la poblacin en
funcin de la concentracin da como resultado una curva asimtrica, mostrando que
dentro de la poblacin el nmero de organismos muy tolerantes es pequeo.
En resumen:
- en una misma poblacin vamos a encontrar organismos ms tolerantes y otros menos
tolerantes a la accin del txico
- cuando se grafica el nmero de organismos afectados en funcin de las
concentraciones de exposicin se obtiene una distribucin asimtrica con pocos
organismos muy tolerantes.

Figura 18.
Fuente: Newman, M. (Fundamentals of Ecotoxicology)

Analicemos ahora la parte inferior de la figura 18:

En la esta figura, se ve la curva concentracin/respuesta de forma sigmoidea obtenida a
partir de un ensayo de toxicidad realizado con peces provenientes de la misma poblacin.
7 muestras de 10 peces cada una, fueron expuestas a las mismas concentraciones del
txico que en el ejemplo anterior.
Se obtiene una curva de tipo log-normal; la forma ms comn de analizar los datos dosis
o concentracin respuesta para el caso de respuestas cuantales es transformando los
11

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valores de las concentraciones a logaritmos y expresando los datos de mortalidad en

unidades probit.
-

concentracin: tranformacin logartmica (log concentracin)

proporcin afectada: los datos de mortalidad se expresan en unidades probit (ver
tabla)

Tabla
%

----

2.67

2.95

3.12

3.25

3.36

3.45

3.52

3.59

3.66

10

3.72

3.77

3.82

3.87

3.92

3.96

4.01

4.05

4.08

4.12

20

4.16

4.19

4.23

4.26

4.29

4.33

4.36

4.39

4.42

4.45

30

4.48

4.50

4.53

4.56

4.59

4.61

4.64

4.67

4.69

4.72

40

4.75

4.77

4.80

4.82

4.85

4.87

4.90

4.92

4.95

4.97

50

5.00

5.03

5.05

5.08

5.10

5.13

5.15

5.18

5.20

5.23

60

5.25

5.28

5.31

5.33

5.36

5.39

5.41

5.44

5.47

5.50

70

5.52

5.55

5.58

5.61

5.64

5.67

5.71

5.74

5.77

5.81

80

5.84

5.88

5.92

5.95

5.99

6.04

6.08

6.13

6.18

6.23

90

6.28

6.34

6.41

6.48

6.55

6.64

6.75

6.88

7.05

7.33

----

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

99

7.33

7.37

7.41

7.46

7.51

7.58

7.65

7.75

7.88

8.09

Por ejemplo, cuando la proporcin de organismos afectados es del 50%, el valor en

escala probit es de 5. Otro ejemplo, cuando la proporcin es de 36%, el valor en escala
probit es de 4,64.
Con los datos del ejemplo anterior (pgina 8):
Concentracin de
efluente en %

0
6
12
25
50
100

Concentracin de
efluente
Log 10

Proporcin de
organismos
muertos (%)

0,78
1,08
1,39
1,69
2

0
0
20
50
80
100

Proporcin de
organismos
muertos en escala
probit

4,16
5
5,84

12

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El ndice ms empleado es la concentracin que causa un efecto sobre el 50% de los

organismos expuestos, en un intervalo de tiempo determinado; cuando el efecto es
mortalidad se establece la Concentracin Letal 50.
El valor de la CL50 se obtiene a partir la relacin concentracin respuesta, sea mediante
mtodos grficos o por clculo. Los datos que se utilizan para el clculo corresponden a
mortalidades parciales, no utilizan para el clculo los valores de mortalidad del 100% ni
del 0%.
En el ejemplo analizado anteriormente, la concentracin de la muestra que causa la
mortalidad del 50 % de los peces (CL 50) expuestos es cercana al 25%.

Figura 19. Mtodo grfico para el clculo de la concentracin letal 50. En abscisas las
concentraciones en escala logartmica, en ordenadas las proporciones afectadas en escala
probit. El valor del log10 de la CL50 corresponde a un valor de probit de 5. El intervalo de
confianza para la concentracin letal 50 puede estimarse en forma aproximada entre los
valores correspondientes a probit 4 y 6.
Fuente: Newman, M. (Fundamentals of Ecotoxicology)

Este mtodo para analizar los datos obtenidos en los ensayos de toxicidad se aplica no
solamente cuando la respuesta es la mortalidad de los organismos, sino en todos los
casos en los cuales la variable analizada es de tipo cuantal, por ejemplo:
-

en el ensayo de toxicidad sobre dafnias, el efecto evaluado es inmovilidad; para cada

concentracin se cuenta el nmero de dafnias inmviles. Se establece la
Concentracin efectiva 50, la concentracin que causa efecto sobre el 50% de los
organismos expuestos, en este caso inmovilidad.
en el ensayo de inhibicin de la germinacin en semillas, para cada concentracin se
cuenta el nmero de semillas no germinadas. Se establece la Concentracin
efectiva 50, la concentracin que causa efecto sobre el 50% de las semillas
expuestas, en este caso inhibicin de la germinacin.

13

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14

7.1.2 Efectos subletales

La respuesta de los organismos puede manifestarse como la inhibicin de algn
parmetro, ej: elongacin de raz, crecimiento de algas, emisin de luz por bacterias
luminiscentes. La variable analizada en este caso es de tipo mtrica, puede tomar todos
los valores dentro de un intervalo.
Para el caso de aquellos ensayos de toxicidad en los que se evalan por ejemplo la
inhibicin de parmetros como crecimiento, reproduccin, elongacin de raz, (variables
mtricas) las respuestas se analizan mediante test de hiptesis. Los datos se analizan
para determinar si la respuesta en cada concentracin ensayada es significativamente
diferente de la obtenida para el control. (ver figura 20)
Se determina por ejemplo el valor de NOEC (Non Observed Effect Concentration).
NOEC: es la mxima concentracin de la muestra para la cual la respuesta de los
organismos no es significativamente diferente del control. Para el ejemplo del ensayo de
inhibicin de la elongacin de raz (ver pgina 9), el valor de NOEC es del 25%.
Los datos pueden ser empleados para un anlisis de regresin; puede determinarse la
concentracin inhibitoria 50, que es la concentracin de muestra para la cual el efecto
medido es en promedio 50% menor que en el control.

Figura 20. Los resultados obtenidos en los ensayos de toxicidad en los cuales se evalan
efectos subletales se analizan utilizando test de hiptesis. Una serie de recipientes que
reciben concentraciones crecientes de un contaminante se emplean para estimar la
respuesta para cada concentracin; se incluye en el ensayo recipientes sin txico (control).

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Con los datos obtenidos se realizan los tests de hiptesis para determinar si la respuesta a
cada concentracin difiere significativamente respecto del control. En el grfico del centro,
el asterisco (*) indica aquellas concentraciones de exposicin con efectos que resultaron
significativamente diferentes al control. Las respuestas para las 5 concentraciones
superiores fueron significativamente diferentes del control, pero las diferencias no fueron
significativas para la menor concentracin. Estos datos pueden utilizarse tambin para
realizar un anlisis de regresin y establecer una relacin concentracin efecto (grfico
inferior). Fuente: Newman, M. (Fundamentals of Ecotoxicology)

Resumiendo:
En qu consiste un ensayo de toxicidad?
Exponer un
- grupo de organismos seleccionados a
- distintas concentraciones de la sustancia a ensayar
- durante un determinado tiempo
- evaluar luego el efecto causado.
El efecto de las sustancias qumicas sobre los organismos depende de la concentracin
de la sustancia en el ambiente a la cual el organismo est expuesto (exposicin) y de la
toxicidad de la sustancia.
La toxicidad se evala mediante un ensayo de toxicidad: la toxicidad que se evala en el
ensayo biolgico es el resultado de la interaccin entre la sustancia y el sistema
biolgico.; los organismos pueden mediante reacciones metablicas transformar al
contaminante y hacer que ste resulte menos txico o eliminarlo.
La toxicidad, capacidad de una sustancia de ejercer un efecto nocivo sobre un organismo,
solamente puede evaluarse mediante un ensayo con materia viva. No se han desarrollado
otros instrumentos para medir toxicidad.
7.2 Ensayos crnicos y agudos
Segn al duracin del ensayo, los mismos pueden clasificarse en:
-

agudo: diseados para medir los efectos de los txicos sobre organismos durante un
perodo corto de su ciclo de vida. Respuesta rpida de los organismos al efecto del
txico. Normalmente el efecto es mortalidad, o alguna otra manifestacin, como por
ejemplo, inmovilidad en dafnias. Tambin se evalan efectos subletales (ej, inhibicin
de la emisin de luz en bacterias luminiscentes)

crnico: perodo de exposicin al txico ms prolongado (por convencin el ensayo

crnico debe cubrir al menos 10% del perodo de vida del organismo), por lo general
se evalan efectos subletales (crecimiento, reproduccin, comportamiento). Estos
efectos son observados en situaciones en las que la concentracin del txico permite
la sobrevida del organismo, pero se afectan algunas de sus funciones biolgicas.

En general, los efectos agudos de los agentes txicos sobre los organismos acuticos han
sido observados luego de una aplicacin inadecuada de pesticidas, accidentes, y
situaciones donde los efluentes sin tratar son volcados al cuerpo receptor (Ej:
mortandades de peces).

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Cuando los efluentes lquidos, an tratados, son descargados en forma continua en el

ambiente acutico pueden producirse efectos crnicos dado que los organismos estn
expuestos a bajas concentraciones de contaminantes durante largos perodos de tiempo.
Si estos contaminantes son degradables, permanecen corto tiempo en el ambiente y a
una cierta distancia del punto de descarga cesarn los efectos, pero el trecho de ro o el
rea donde se produce el vuelco y donde tiene lugar el proceso de degradacin se ver
afectada.
Si entre los contaminantes se encuentran sustancias persistentes o sustancias
bioacumulables, pueden producirse efectos a largo plazo sobre las poblaciones
expuestas.
7.3. Mtodos para evaluar el efecto sobre los organismos (laboratorio)
En el laboratorio se realizan diferentes ensayos de toxicidad, evaluando al finalizar los
mismos distintas variables.
Ejemplos:
- relacin entre el nmero de huevos puestos por un organismo/concentracin del
txico (contaminante)
- relacin entre el nmero de cras viables/ concentracin del txico (contaminante)
- relacin mortalidad/ concentracin del txico (contaminante)
- relacin luminiscencia/ concentracin del txico (contaminante)
- relacin velocidad de crecimiento de algas unicelulares/ concentracin del txico
(contaminante)
- relacin inmovilidad de dafnias/ concentracin del txico (contaminante)
- relacin elongacin de raz/ concentracin del txico (contaminante)
- relacin germinacin de semillas/ concentracin del txico (contaminante)
Qu procedimientos se utilizan para realizar los ensayos de toxicidad?
Los procedimientos para la realizacin de estos ensayos estn descriptos en normas ISO,
EPA, CEE, AFNOR, AENOR, CETESB, OECD, Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater, ASTM, etc. Se busca obtener resultados reproducibles y que
puedan ser comparados.
En Argentina, el IRAM es el organismo de normalizacin; dentro del IRAM, el grupo de
trabajo de ecotoxicologa est redactando las normas para la realizacin de los ensayos
de toxicidad.
Qu especies se utilizan para la realizacin de los ensayos de toxicidad?
Vamos a enumerar algunas especies que se utilizan para los ensayos de toxicidad.
7.3.1. Especies utilizadas
Medio acutico
Productores primarios:
Inhibicin de crecimiento de algas (Selenastrum capricornutum, Scenedesmus
subpicatus, Chlorella vulgaris)
Consumidores primarios:
Inmovilizacin de microcrustceos (Daphnia magna, Dahnia pulex, Ceriodaphnia
dubia)
Efectos sobre la reproduccin (Ceriodaphnia dubia)
Mortalidad en Artemia salina
Consumidores secundarios:
Mortalidad en peces (trucha arcoiris).
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- esttico, sin renovacin del medio durante el ensayo

- semi-esttico, con renovacin peridica del medio
- continuo, con renovacin continua del medio
Microorganismos (descomponedores):
Inhibicin de la luminiscencia en bacterias (Vibrio fischeri= Microtox)
Inhibicin de la respiracin en bacterias (Pseudomonas aeruginosa)
Inhibicin del crecimiento de microorganismos
Inhibicin del consumo de oxgeno (cultivos mixtos)
Inhibicin de la nitrificacin
Sedimentos
Mortalidad y crecimiento en larvas de chironmidos (dpteros) (Chironomus tentans),
que habita en sedimentos
Mortalidad y crecimiento, reproduccin en anfpodos (Hyalella azteca), que habita
sobre los sedimentos.
Ensayo con oligoquetos (Tubifex tubifex), un organismo que vive en parte en el
sedimento y en parte en el agua.
Inhibicin del crecimiento de algas (representativo de productores primarios, el
ensayo se realiza con eludos o agua de poro del sedimento)
Inhicin de la bioluminiscencia (ensayo Microtox)
Suelos
Mortalidad y reproduccin en lombrices (Eisenia foetida). Las lombrices juegan un rol
importante en el suelo y es un ensayo relativamente sencillo de realizar.
Inhibicin de la germinacin en vegetales (Lactuca sativa, Avena sativa)
Inhibicin de la elongacin de raz (Lactuca sativa, Avena sativa)
Inhibicin de la reproduccin en colmbolos
Cules son los criterios utilizados para la seleccin de especies para la realizacin de
bioensayos?
- los organismos son sensibles a las sustancias qumicas
- pueden obtenerse fcilmente y son fciles de criar
- tienen un ciclo reproductivo breve (para ensayos crnicos)
7.4. Descripcin de ensayos de toxicidad
7.4.1 Determinacin de la inhibicin de la movilidad de Daphnia magna Strauss
(Cladocera, Crustacea)
(Norma IRAM, Nmero 29130, Determinacin de la inhibicin de la movilidad de Daphnia
magna Strauss (Cladocera, Crustacea), 2004)
Las especies del gnero Daphnia son muy utilizadas como organismos de ensayo. La
facilidad de cultivo en el laboratorio, la reproduccin partenogentica (lo que asegura la
homogeneidad del grupo de organismos expuestos), el corto ciclo de vida y la produccin
de un alto nmero de cras hacen que este grupo posea las condiciones ideales para
realizar los ensayos.
Cmo se lleva a cabo el ensayo?
Las hembras se mantienen en laboratorio, en agua dura, a una temperatura de 21 +/- 2C,
y con un fotoperodo de 16 h luz/8 h oscuridad. PH del agua 7,6 8. Las dafnias son
alimentadas con algas.
El ensayo de toxicidad se realiza con individuos de menos de 24 hs de edad.

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10 individuos son expuestos en recipientes a distintas concentraciones de la muestra a

ensayar, durante un perodo de 48 horas. Cada concentracin se ensaya por triplicado.
Se ensaya un control: este control (llamado tambin control negativo) se realiza en las
mismas condiciones del ensayo, sin el agregado de la muestra que se est ensayando.
Tambin se ensaya un control positivo con un txico de referencia (puede ser dicromato
de potasio) para evaluar la sensibilidad de los organismos en el momento de realizacin
del ensayo.
Luego de 48 hs se cuentan en cada recipiente el nmero de organismos inmviles.
Por qu se evala inmovilidad y no mortalidad? Porque en el caso de las dafnias es difcil
determinar cuando una dafnia inmvil est muerta.
Cmo se expresan los resultados?
Se calcula la CE 50 (Concentracin efectiva 50 concentracin a la cual se observa efecto
sobre el 50% de los organismos expuestos) utilizando el mtodo descrito en 7.1.1.
7.4.2 Determinacin de la inhibicin de la elongacin de raz en semillas de lechuga
(Lactuca sativa)
Cmo se realiza el ensayo?
1. se selecciona un grupo de semillas de lechuga, que sean de tamao homogneo y
cuyo poder germinativo y sensibilidad a txicos de referencia han sido evaluados
previamente.
2. las distintas concentraciones de la muestra a ensayar, (ej, una sustancia qumica, un
extracto acuoso de un suelo posiblemente contaminado) se colocan en las placas . Se
debe asegurar que las semillas posean suficiente humedad para poder germinar y
desarrollarse (en las placas de Petri de 10 cm de dimetro, un volumen de agua de 4
ml).
3. las semillas se colocan en placas de Petri, sobre papel poroso, en un nmero igual por
cada placa (ej, 10 semillas por placa).
4. Las placas (semillas + muestra) se incuban durante 5 das a temperatura controlada
(24C)
5. se mide la longitud de la raz al finalizar el perodo de incubacin. Se comparan los
datos obtenidos para la muestra con los obtenidos en el control. Se evala la inhibicn
de la elongacin de la raz (% respecto del control)
Qu es un txico de referencia? compuesto qumico utilizado para medir la
sensibilidad del organismo de ensayo.
Qu evala un txico de referencia? sensibilidad de los organismos en el momento
de realizacin del ensayo
Algunos comentarios respecto de la interpretacin de los resultados obtenidos en
los ensayos de toxicidad.
En el comienzo de la ecotoxicologa, el criterio ms importante para la seleccin de un
organismo era su mayor sensibilidad frente a los txicos; se consideraba que si se
determinaba el valor de la concentracin umbral para la especie ms sensible del
ecosistema en condiciones de laboratorio, ese valor de concentracin sera adecuado
para proteger a todas las otras especies del ecosistema.
Esto no es as, ya que:
1. dependiendo de la sustancia ensayada, puede ser una u otra especie la que presente
la mayor sensibilidad. Existen diferencias en la toxicidad de un mismo contaminante

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sobre distintas especies, por lo tanto no es posible encontrar una especie que sea la
ms sensible frente a todos los contaminantes.
2. El hecho de no detectar efecto txico sobre una especie, no implica que esto sea
vlido para todas las otras especies.
Los efectos observados en los ensayos de toxicidad, realizados en condiciones
controladas de laboratorio, no pueden ser extrapolados en forma directa y decir que estas
sustancias provocarn un efecto similar sobre los ecosistemas. Sin embargo, un efecto
nocivo detectado mediante estos ensayos puede alertar acerca de peligros
potenciales sobre los ecosistemas como consecuencia de la exposicin a estas
sustancias (Norma IRAM 29012).

7.5. Ensayos en campo, monitoreo biolgico

El efecto de los contaminantes sobre los organismos es difcil de predecir a partir de
conocer las concentraciones del compuesto en el ambiente abitico. Distintos factores
afectan la biodisponibilidad de una sustancia o compuesto; incluyen a la temperatura, las
interacciones con otros contaminantes, el tipo de suelo y sedimento, pH y salinidad.
Los organismos autctonos en los cuerpos de agua (algas, peces, invertebrados)
completan la mayor parte de su ciclo de vida en el agua y pueden ser indicadores de la
calidad del agua o de la presencia de determinadas sustancias.
El monitoreo biolgico (biomonitoreo) es el estudio de la biota en el ecosistema
(acutico o terrestre).
Los bioindicadores son organismos o grupos de especies cuya presencia,
comportamiento o hbito se encuentra estrechamente correlacionado con factores
ecolgicos definidos y que pueden servir como indicadores directos del estado, stress o
cambios en el ecosistema.
Modificaciones en la estructura de la comunidad, o desaparicin de especies y aparicin
de especies oportunistas estn indicando que las descargas en el cuerpo receptor han
causado efectos sobre el ecosistema.
Este tipo de estudios no especifica el origen del dao sino que evidencia el impacto
cuando ste ya ocurri.
El monitoreo biolgico in situ puede realizarse:
1. presencia o ausencia de especies en un sitio, cambios en la composicin de las
especies, presencia o ausencia de especies clave, biomasa, crecimiento.
2. determinacin de la concentracin de contaminantes en especies indicadoras. Los
indicadores de acumulacin ms conocidos son las algas, moluscos, tambin tejidos
grasos de mamferos marinos. Algunas sustancias, metales pesados e hidrocarburos
clorados, se encuentran en los organismos en concentraciones significativamente
mayores que en el medio, facilitando el anlisis qumico.
3. parmetros bioqumicos, fisiolgicos y morfolgicos pueden ser usados como
biomarcadores (ej, induccin de metalotionenas/cadmio, afinamiento de la cscara
del huevo/DDT-DDE, induccin de monooxigenasas/PAH, patologas o parasitacin de
las poblaciones)
4. deteccin de poblaciones genticamente diferentes que han desarrollado resistencia
en respuesta a contaminantes (ej, plantas resistentes a metales pesados, insectos
resistentes a pesticidas)

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Los ciclos de vida de las distintas especies son de distinta duracin; aquellos organismos
de vida breve y alta capacidad reproductiva pueden ser indicadores tempranos de
contaminacin mientras que las especies de vida larga pueden actuar como indicadores
para compuestos bioacumulables.
Este tipo de estudios evidencia el impacto cuando ste ya ocurri.
7.6. Ensayos a nivel semi-campo
Combinan las ventajas de los ensayos realizados en laboratorio (estandardizacin y
reproducibilidad) y los ensayos de campo (condiciones reales).
Los ensayos se realizan en condiciones controladas por ejemplo en un invernadero
(microcosmos) o en un rea delimitada en el campo (mesocosmos).
-

Microcosmos: sistemas que pueden ser controlados y reproducidos en el laboratorio,

invernadero, o cmaras climticas para simular los procesos e interacciones de un
segmento elegido del ambiente. Se emplean para estudiar tanto el destino de los
contaminantes en el ambiente como el efecto sobre los organismos. El tamao vara
de varios cm hasta aproximadamente 1m3.

Mesocosmos: rea delimitada en el campo que queda expuesta a las condiciones

ambientales normales, el tamao vara de 1 m3 hasta varios cientos de m3. Para el
medio acutico, pueden colocarse organismos en bolsas porosas o pequeas jaulas
en el ro y observar el efecto de los contaminantes. Para el medio terrestre, se utilizan
lismetros para la investigacin de la movilidad de contaminantes: consisten en
columnas de suelo que se construyen en el campo y se utilizan para evaluar el
lixiviado de un contaminante y de sus metabolitos en condiciones reales, durante
largos perodos de tiempo.

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MESOSCOSMOS
Artculo publicado en El Pas, 14/06/2006
Nota realizada a Jos Vicente Tarazona, director del Departamento de Medio
Ambiente y del laboratorio de Ecotoxicologa del INIA (Instituto Nacional de
Investigacin y Tecnologa Agraria y Alimentaria, Madrid)

El mesocosmos que reproduce una laguna mediterrnea en las instalaciones del

INIA en Madrid

Cunto tarda un ecosistema en recuperarse tras un accidente ecolgico? Qu efectos

tiene a largo plazo la liberacin constante de sustancias con actividad biolgica, como los
medicamentos o los plaguicidas? Las respuestas a estas preguntas no pueden obtenerse
en un laboratorio: exigen estudiar numerosas especies y sus interacciones, un grado de
complejidad excesivo para un experimento entre probetas. Pero, por otra parte, tampoco
es posible recurrir al mundo real, donde los factores desconocidos son demasiados y las
condiciones de los experimentos no son controlables. Lo que hace falta es complejidad...
pero manejable. Es justo eso lo que proporcionan los mesocosmos, ecosistemas
artificiales creados a imagen y semejanza de los naturales, que incluyen miles de
especies: un paso intermedio entre el mundo real y el laboratorio.
Con uno de estos mesocosmos, el nico en el mundo que reproduce una laguna
mediterrnea, trabajan investigadores del Instituto Nacional de Investigacin y Tecnologa
Agraria y Alimentaria (INIA), en Madrid, desde hace un ao. Uno de sus primeros
objetivos es analizar los efectos de la liberacin al medio de contaminantes emergentes,
como los medicamentos. Mesocosmos significa literalmente mundo medio en latn, y eso
es lo que buscan los investigadores, un ambiente con un grado medio de complejidad. En
Europa se recurre a ellos desde hace varias dcadas, y hay una quincena que reproduce
distintos ecosistemas.
El mesocosmos del INIA, con sus algas, carrizos, insectos y ranas que no paran de croar
podra pasar por una agradable charca para adornar un jardn, de unos 40 metros de
largo por 10 de ancho. La instalacin se inaugur en octubre de 2003, tras un trabajo

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necesariamente lento. "Recogimos muestras de sedimentos y agua de muchas lagunas

de la pennsula Ibrica y luego dejamos que se aclimataran ellos solos durante meses",
explica Jos Vicente Tarazona, director del departamento de Medio Ambiente del INIA y
del laboratorio de Ecotoxicologa. ste es, con casi 50 personas, uno de los ms grandes
de este organismo.
El resultado es una laguna artificial representativa, segn Tarazona, del ecosistema de
una charca mediterrnea, lo que comprende tambin el sur de Francia, Italia y Grecia. La
laguna es hoy el hogar de miles de especies. La mayora de ellas venan en los
sedimentos y el agua, y simplemente han ido colonizando el lugar: son los seres
unicelulares como los hongos, protozoos y bacterias; los microinvertebrados o las algas.
Las plantas vasculares, los anfibios y los macroinvertebrados -crustceos, insectos- han
sido aportados despus o han colonizado la laguna de forma natural. Y aunque an no
hay peces, en el mesocosmos s estn representados todos los elementos esenciales de
una cadena trfica acutica, incluyendo productores primarios (fotosintetizadores: algas,
plantas); consumidores primarios y secundarios; consumidores de detritos, y organismos
mineralizadores. "Es un ecosistema muy complejo", explica Tarazona.
Slo unas tuberas que conectan el agua con un cobertizo adyacente contrastan con el
ambiente buclico de la laguna artificial. "Sirven para llevar el agua, por bombeo, a 18
tanques experimentales, que es donde hacemos los experimentos", explica Tarazona.
As, en la laguna en s no entra nunca un contaminante. Para investigar el efecto de una
sustancia sobre el medio los investigadores extraen agua de la charca, la bombean a los
18 tanques experimentales y, tras un periodo de aclimatacin del ecosistema, se
introduce la sustancia a estudiar; pasado un tiempo se evaluar el estado del ecosistema
en cada tanque, en los que se habr jugado con distintas concentraciones de
contaminantes, distintas maneras de liberarlo e incluso con distintos tipos de fondo pedregoso, arenoso y dems-.
"El objetivo es estudiar las verdaderas consecuencias de la liberacin de contaminantes
en el medio. Los ensayos con una sola especie son tiles para las primeras estimaciones,
pero no dicen nada del mundo real, hay que ir a los mesocosmos para reproducir el
mundo natural", explica Tarazona. Estos ecosistemas artificiales, aade, "permiten medir
directamente parmetros ecolgicos que afecten a la dinmica de poblaciones, a la
biodiversidad, a los ciclos de nutrientes y de energa, a cmo responde la comunidad a los
cambios en las especies ms sensibles".
En especial, estas instalaciones son la nica forma de estudiar los efectos indirectos, es
decir, los que resultan de las interacciones entre las diferentes especies en los
ecosistemas. "Por ejemplo", explica Tarazona, "la recuperacin de una especie afectada
puede verse condicionada como consecuencia de que otra especie ha ocupado su nicho
ecolgico, y esto es algo que slo podremos ver en un mesocosmos". Ahora bien, a la
inversa, lo que no pueden hacer los mesocosmos es dar resultados vlidos para una
especie en concreto

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