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KIT CALCULS URINAIRES

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr

Mthode qualitative chimique

FABRICANT :
BIOLABO SA,

Ractifs pour la dtermination qualitative


des principaux constituants des calculs urinaires.

02160, Maizy, France


REF 92315 : 100 tests
REF 92330 : 40 tests

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES


Tel : (33) 03 23 25 15 50

IVD USAGE IN VITRO

Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1)(2)

PRECAUTIONS

La prsence de calculs dans les urines est due la concrtion et la


cristallisation de substances en sursaturation. Les raisons de ce
dsquilibre peuvent tre mulitiples : nutritionnelles, mtaboliques,
gntiques, anatomiques, iatrogniques, neurologiques, infectieuses,
plusieurs dentre elles pouvant concourir simultanment ou
successivement la formation et la croissance du calcul.
Les substances chimiques les plus frquemment rencontres sont par
ordre de frquence dcroissante : les oxalates de calcium, les
phosphates calciques et ammoniaco-magnsiens, les acides uriques et
urates, les protines diverses, la cystine.
Lanalyse qualitative dun certain nombre de constituants (parmi les plus
frquents) des calculs urinaires constitue une premire approche dans le
diagnostic tiologique des lithiases urinaires et lorientation du suivi
thrapeutique des patients. Elle doit imprativement tre conduite en
parallle avec des analyses morphologiques (loupe binoculaire,
microscopie optique) et/ou une identification molculaire et cristalline
(diffraction aux rayons X, spectophotomtrie infrarouge). En raison de sa
nature, le calcul doit faire lobjet dune analyse prcise et fiable. Les
mthodes optiques et chimiques couples et rationnellement exploites
peuvent dans la majorit des cas fournir des informations suffisantes sur
la composition et ltiologie du calcul.

Voir indications au REACTIFS et respecter les symboles de scurit


figurant sur les tiquettes des flacons.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple demande.
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

PRINCIPE (4)(5)
La mthode utilise permet didentifier les principaux composants
minraux et un composant organique (la cystine) des calculs urinaires
par des tests chimiques simples.

REACTIFS
Flacon R1

Acide chlorhydrique (HCl 1,65 M)

(irritant)

Flacon R2

(corrosif, toxique)

Flacon R4
(nocif)

Flacon R5
(corrosif)

INTERFERENCES (4)

Ractif pour la dtermination du calcium


(KOH, calcine)

Flacon R9
(irritant)

Flacon R10
(nocif)

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN

Le cobalt et le nickel ninterfrent pas avec la dtermination du


magnsium en raison de leur faible concentration dans lorganisme.
Test du carbonate : s'il y a eu effervescence lors de l'addition de R1
rvlant la prsence de carbonate, ajouter R1 goutte goutte jusqu'
ce qu'il n'y ait plus de dgagement gazeux. Agiter ensuite
vigoureusement ("Vortex") pendant au moins une minute pour liminer
tout le gaz carbonique (ou dfaut, porter quelques secondes
bullition dans un tube Pyrex puis ramener temprature ambiante).
Cette opration est ncessaire pour viter un rsultat faussement
positif lors de la dtermination de l'oxalate.

Ractif pour la dtermination des phosphates


(Acide sulfurique, Molybdate dammonium,
Sulfate ferreux)

Flacon R7

(toxique)

En labsence de contamination, les ractifs bien rebouchs sont


stables temprature ambiante, jusqu' la date de premption
indique sur l'tiquette du coffret sils sont utiliss et conservs dans
les conditions prconises.

2nd Ractif pour la dtermination de la cystine


(Sodium nitroprussiate)

Ractif pour la dtermination du Magnsium


(NaOH, paranitrophnylazorsorcinol)

Flacon R8

STABILITE ET CONSERVATION
Stocker labri de la lumire, dans le flacon dorigine bien
bouch 18-25C.

1er Ractif pour la dtermination de la cystine


(soude, cyanure de sodium)

Flacon R6

(irritant)

Les ractifs sont prts l'emploi.


Couper lembout des compte-gouttes laide de ciseaux en vitant
dorienter louverture du flacon vers soi ou vers un tiers (risque de
projection) .

Ltude morphologique est ralise sur calcul entier dbarass des


impurets ventuelles. Lanalyse qualitative et le test la flamme sont
raliss sur calcul pulvris laide dun mortier et dun pilon propres
jusqu obtention dune poudre fine.

Hydroxyde de sodium (NaOH 6,25 M)

(corrosif)

Flacon R3

PREPARATION DES REACTIFS

Ractif pour la dtermination de lAmmonium


(Iodure de potassium, iodure mercurique)
Ractif pour la dtermination de lacide urique
(Acide actique, nocuprone, sulfate de cuivre)
Ractif pour la dtermination de loxalate
(Dioxyde de manganse)

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES


1.
2.
3.
4.
5.

Loupe binoculaire
Pilon et mortier en porcelaine propres
Anneau densemencement
Balance au mg (pese de la poudre de calcul)
Tubes ou plaque alvole en verre ou cramique fond blanc

Version : FT 92315 12 09 2008

CONTRLE DE QUALITE

PERFORMANCES

Lorsque les calculs prsentent une morphologie anormale ou conduisent


des rsultats ngatifs ou incohrents au cours de lanalyse chimique, il
convient de mener des analyses plus fines qui peuvent mettre en
vidence une composition ou une tiologie particulires.
Il appartient chaque laboratoire dtablir son propre protocole
dinvestigation par des techniques adaptes la diversit non seulement
de la structure, mais aussi de la composition molculaire du calcul
tudi.

Limites de dtection :
Carbonate :
1 mg de Calcium carbonate
Cystine :
1 mg de L-Cystine
Phosphate :
1 mg de Calcium phosphate
Ammonium : 1 mg dAmmonium magnsium Phosphate
Magnsium:
3 mg dAmmonium magnsium Phosphate
Calcium:
0.1 mg de calcium (phosphate, carbonate, oxalate)
Acide urique : 0.1 mg dacide urique
Oxalate :
2.5 mg de Calcium Oxalate
Sensibilit : Les ractifs utiliss sont trs sensibles et permettent donc de
dtecter les diffrents lments mme ltat de traces.

Spcificit : chaque raction est spcifique du composant test. Pour


loxalate, voir le INTERFERENCES.

MODE OPERATOIRE (1)


Procder ltude morphologique du calcul avant de pulvriser le calcul pour raliser les tests chimiques.
Test la flamme : Immerger un anneau mtallique d'ensemencement dans l'eau distille, puis dans la poudre de calcul. Porter la flamme. La
carbonisation ou la disparition de la poudre indique que les composants sont principalement de nature organique. L'absence de
carbonisation indique que le calcul est constitu de substances minrales.
Tests chimiques qualitatifs : (voir tableau ci-dessous)
Etape 1 : Peser environ 50 mg de poudre du calcul, transvaser dans un tube hmolyse et ajouter 10 gouttes de ractif R1. Une
effervescence indique la prsence de carbonate (voir INTERFERENCES). Dans ce cas, agiter vigoureusement pendant une minute. Le
restant du mlange est appel M1 dans le tableau ci-dessous.
Prparation du mlange M2 : Mlanger 50 Il de M1 et 5 ml deau distille. Bien mlanger et utiliser uniquement pour la dtermination du
calcium (Etape 5).
Selon le cas, verser une goutte du mlange M1 ou M2 dans chaque cavit d'une plaque touche en cramique ou dans des tubes et
continuer les tests ci-aprs (Etape 2 8). :
Etape 1

Etape 2

Etape 3

Etape 4

Etape 5

Etape 6

Etape 7

Etape 8

CARBONATE

CYSTINE

PHOSPHATE

MAGNSIUM

CALCIUM

AMMONIUM

ACIDE
URIQUE

OXALATE

POUDRE DE
CALCUL

1 GOUTTE

1 GOUTTE

1 GOUTTE

1 GOUTTE

1 GOUTTE

1 GOUTTE

MELANGE

M1

M1

M1

M2

M1

M1

RESTANT

+
R3

+
R5

+
R6

+
R2

+
R2

+
R2

+
R10

1 GOUTTE

2 GOUTTES

1 GOUTTE

1 GOUTTE

1 GOUTTE

1 GOUTTE

MELANGER.
ATTENDRE
5 MINUTES

MELANGER.
ATTENDRE
5 MINUTES

+
R2

+
R7

+
R8

+
R9

5 GOUTTES

2 GOUTTES

1 GOUTTE

1 GOUTTE

MELANGER

MELANGER

MELANGER

MELANGER

ATTENDRE
QUELQUES
SECONDES

50 mg
+
R1
10 gouttes

+ R4

M1

LA POINTE D'UNE
SPATULE
environ 60 mg

= M1

1 GOUTTE

RESULTAT
POSITIF

EFFERVESCENCE
RQ 2

COULEUR
ROUGE

COULEUR
BLEUE

PRECIPITE
BLEU

COULEUR
JAUNE

PRCIPIT
MARRON/ORANGE

COULEUR
JAUNE/ORANGE

EFFERVESCENCE
RQ 2

RESULTAT
NEGATIF

ABSENCE
deffervescence

COULEUR
JAUNE

PAS DE
CHANGEMENT DE
COULEUR

ABSENCE DE
PRECIPITE
COULEUR
VIOLETTE

COULEUR
ORANGE

COULEUR
JAUNE

PAS DE
CHANGEMENT
DE COULEUR

ABSENCE
deffervescence

Remarques :
1) Tmoin ngatif : pour les tapes 2 7, il peut tre utile de raliser un tmoin ngatif en remplaant le mlange M1 ou M2 (selon le cas ) par de leau
dminralise afin de mieux diffrencier les couleurs.
2) Effervescence : audible et visible.

REFERENCES
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)

Les calculs urinaires : M. DAUDON, le Biotechnologiste, n4, (02/1994), p.8 11.


Comment analyser un calcul et comment interprter un rsultat : M. DAUDON, lEurobiologiste (1993), 27, n203, p.35-46
Revue critique des mthodes danalyse des calculs urinaires M. DAUDON et R. J. REVEILLAUD., Actualits nephrologiques de lhpital Necker, Flammarion mdecine
sciences, d. Paris,(1985) p. 203-224
Routine Analysis de urinary calculi : Rapid simple method using spot tests, J. H. WINER et MATICE M. R., J. Lab. Clin. Med. (1943), 28, p.898-904
P-nitrobenzenazoresorcinol solution ; use in test reagent for Magnesium : WELCHER F., Chemical solutions (1966)p.244
Practical Value de analysis de urinary calculi, WINER. J. H., J.A.M.A. (1959), Vol.169, n15, p.1715-1718.

Made in France
Version : FT 92315 12 09 2008

Fabricant

Date de premption

IVD

Usage in vitro

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