RESUMEN

OBJETIVO:
Conocer la existencia de Yersinia enterocolitica en sunos visiblemente sanos y
sacrificados para el consumo humano.
MTODOS:
Fueron estudiadas 100 muestras de tejido linftico obtenidas en el momento del
sacrificio, en un matadero del Estado de Mxico. Fueron realizados muestreos
pilotos de 20 casos, de los cuales 20% fueron positivos, permitiendo obtener una
muestra estudiada (n=100). Las muestras colectadas de tejido linftico fueron
acondicionadas para el aislamiento de Yersinia enterocolitica en caldo de Rappaport
y en medio de cultivo de Salmonella-Shigella y MacConkey. Las identificaciones
fueron efectuadas por medio de pruebas bioqumicas y serolgicas, utilizndose en
el caso los antisueros O:3, O:8 y O:9 para la biotipificacin correspondiente.
RESULTADOS:
Fueron obtenidos 22 aislamientos tipificndose 8 serotipos pertenecientes al O:3 y
8 al O:9 correspondientes al biotipo 1; y, en 6 muestras no fue posible la
serotipificacin. No se encontr en el total de los aislados el serotipo O:8.
CONCLUSIONES:
En base en la metodologa, se registr la presencia de Y. enterocolitica y sus
serogrupos en tejido linftico de porcinos por la primera vez en Mxico; esto es
importante porque el patgeno y sus serotipos aislados estn comprometidos con
mayor frecuencia con problemas de salud pblica.

INTRODUCCIN

es un representante de las enterobacterias. Es un bacilo gram negativo, no esporulado, capaz

de crecer dentro de una amplia escala de temperaturas, desde -1 C hasta +40 C. Presenta
factores antifagocitarios (cpsula).
Se multiplica en las mucosas y se puede transmitir a travs del contacto con animales,
ingestin de productos alimenticios o contaminados o agua contaminada. Raramente causa
infecciones mortales.
Mvil a 25C (flagelos peritricos);inmvil a los 37C. Fermenta la glucosa. No fermenta la
lactosa. No proteolitico. Hetertrofa.

Fisiologa: pH:Neutrofila min:4 ptimo:7 Max:10

Temp: Psicrotrofa (desarrolla en heladera) min:0C ptima:29C Max:42C
ClNa: 0-5%
Factores de crecimiento necesarios: biotina y tiamina
Virulencia: cepas patogenas: secretan una enterotoxina resistente al calor e invaden el
intestino delgado.
Enterotoxina: resiste el calor (121C - 30 min) PM:10.000-50.000 daltons Resiste el calor
(congelacin) Resiste la variacin de pH(1-11)
Zoonosis Inoculo de 108 a 109

La Yersinia enterocolitica es un cocobacilo Gram negativo pequeo, que no forma

esporas, es aerobio o anaerobio facultativo, mvil por flagelos pertricos a 22-25C,
pero no a 37C, oxidasa negativo y catalasa positivo, crece a una temperatura entre
30-37C a un pH entre 7 y 8, tiene la capacidad de reproducirse a 5C, tolera en
gran medida al 2,4,4- tricloro-2- hidrxydifenil eter (irgasan) utilizado como un agente
selectivo en medios de cultivo; consta de 5 biotipos y hasta 70 serotipos, basados en
antgenos O, la patogenicidad est asociada a los biotipos 1, 2 y 4, y a los serotipos
O:3, O:8 y O:9.4,8
Se ha demostrado que existe una reaccin cruzada entre los antgenos comunes de Y.
enterocolitica O:9 yBrucella spp, Francisella tularensis, Salmonella O:30, Vibrio
cholerae, Escherichia coli O:157 y Morganellamorganii, la reaccin cruzada entre el
gnero Brucella y Y. enterocolitica O:9, se debe a la presencia de determinantes
antignicos comunes, situados en la cadena O del lipopolisacrido de ambas especies y
puede presentar reacciones falsas positivas en el diagnstico diferencial
con Brucella por mtodos serolgicos.5
En los Estados Unidos de Amrica, los cerdos son reservatorios comunes de los
serotipos O:3 y O:9 de Y. enterocolitica, en Dinamarca, Blgica y Suecia, el serotipo
O:3 es el predominante en estos animales, pero en los Estados Unidos, se ha
detectado con mayor frecuencia el O.8, a partir de lenguas de cerdo.7
Otra caracterstica relacionada con el crecimiento del microorganismo es que puede
alcanzar niveles de infeccin en cuatro das en la carne de cerdo y tambin ha sido
aislado a partir de carne empacada al vaco, en alimentos congelados an cuando stos
han tenido procesos repetidos de congelacin y descongelacin.13
En Mxico, se desconoce la presencia de Y. enterocolitica en cerdos, as como que
biotipos y serotipos estn presentes.

El objetivo del presente trabajo fue aislar e identificar Y. enterocolitica a partir de

cerdos destinados para el abasto, realizando la tipificacin de serotipos y biotipos.

MTODOS
Las muestras se colectaron en el matadero A.B.C. ubicado en el municipio de Los
Reyes la Paz, estado de Mxico, Mxico. La muestra, incluy a los porcinos
independientemente de su procedencia, sexo, raza, edad y peso.
La variable cuantitativa discontinua fue la frecuencia de Y. enterocolitica; las variables
cualitativas nominales fueron el aislamiento, la identificacin y la serotipificacin de Y.
enterocolitica y el estudio se clasific como: observacional, descriptivo y transversal.10
Debido al desconocimiento de informacin en Mxico, referente a la frecuencia de Y.
enterocolitica en cerdos, fue necesario realizar un estudio piloto de 20 muestras, para
estimar una frecuencia de infeccin y con base en ella calcular el tamao de muestra
(n), que se calcul con la ecuacin3 siguiente: n= v2(p)(1-p)/T2.
Donde:
p= estimado de la prevalencia poblacional
n= nmero de animales considerados en la muestra
v= valor de Z (1.96) para = 0.05, nivel de confianza del 95%
T= 0.1 (lmite de error)
El tamao mnimo de muestra calculado fue de 62 cerdos, sin embargo, se increment
a 100. Una vez calculado el tamao de muestra, el muestreo se realiz de manera
sistemtica, considerando un promedio diario de 1,100 animales sacrificados.
Asimismo, se calcul el intervalo del muestreo y mediante una tabla de nmeros
aleatorios, se escogi el primer animal que entr en el intervalo De ah en adelante los
otros cerdos se obtuvieron agregando sistemticamente el mismo valor del
intervalo.10 Se tomaron 16 muestras por da/semana.
Se mezclaron 10 g de muestra de tonsilas previamente picadas, en 20 ml de agua
peptonada estril, se dejo reposar 10-15 min a temperatura ambiente (24C), se
filtr a travs de una gasa estril, para quitar los fragmentos grandes del macerado; se
mezcl un mililitro del filtrado con 20 ml de medio Rappaport modificado, adicionado
con suplemento CIN que contiene novobiocina, irgasan y cefsulodina, en 6 tubos de
vidrio estriles y se incub a 22-25C por 48h en aerobiosis. Posteriormente se sembr
por duplicado en placas de agarSalmonella-Shigella (SS), suplementado con
desoxicolato de sodio y cloruro de calcio y en agar McConkey, incubndose a 33C por
48h en aerobiosis. A las colonias obtenidas, se les hiz un frotis y tincin de Gram,
para observar su morfologa y pureza al microscopio seleccionndose las cepas
sugerentes de Y. enterocolitica.5,8 Se realizaron las siguientes pruebas bioqumicas: y
se incubaron durante 48h en aerobiosis a diferentes temperaturas; a 25C: oxidacinfermentacin (OF), H2 S, motilidad e indol (SIM), Voges-Proskauer (VP). A 36C: Triple

azcar hierro (TSI), urea, hierro-lisina (LIA), nitratos, motilidad-hierro-ornitina (MIO),

rojo de metilo (RM), y citrato de Simons, as como las reacciones de catalasa y
oxidasa,11 y reacciones en carbohidratos.
Para la serotipificacin y biotipificacin de las especies aisladas, se utilizaron tres
tcnicas diferentes, aglutinacin simple, aglutinacin con absorcin de sueros y
aglutinacin lenta, en cada una de ellas se utilizaron controles de las cepas a probar.
En la aglutinacin simple, se procedi a mezclar 25 l de cada uno de los antisueros,
con cada uno de los aislamientos de Yersinia, se observ la reaccin de aglutinacin,
identificando y registrando el serotipo respectivo.5,11
La aglutinacin con absorcin de sueros, se utiliz debido a que en la aglutinacin
simple existieron aislamientos de Yersinia que dieron reaccin positiva a dos
antisueros. Est tcnica consisti en poner los antisueros especficos en contacto con la
cepa de referencia O:3 y O:9, a la cepa O:8, se incubaron a 37C por una hora, se
centrifugaron a 4.000 rpm (3.600 g) durante 30 min, se verti el sobrenadante en
otros tubos y se congelaron, inmediatamente despus de la fase de descongelacin se
efecto un filtrado en las siguientes membranas millipore: prefiltro, 1.2 , 0.8 , 0.65
, 0.45 y 0.22 , respectivamente, posteriormente se realiz la reaccin antgenoanticuerpo.5,11
La tcnica de aglutinacin lenta se realiz slo a los aislamientos que no pudieron ser
serotipificados por las otras dos tcnicas, ya que esta prueba es cuantitativa. Nas
cepas aisladas se mezclaron con las diferentes diluciones de cada uno de los antisueros
(O:3, O:8 y O:9); empleando como diluente una suspensin de cloruro de sodio 0,15
M.5,11
Para conocer y relacionar los serotipos de Y. enterocolitica identificados con sus
biotipos respectivos, se realiz la tcnica de hidrlisis de tween 80 mtodo de Wayne,
se mezclaron 0.5 ml de Tween 80 y solucin acuosa de rojo neutro al 0.1% en 100 ml
de solucin amortiguadora de fosfatos al 0.15 M y pH 7; se tomaron 2 ml de este
substrato; se esterilizaron 15 min a 121C. Se inocularon y se incubaron a 37C, sin
exposicin a la luz, la lectura se hizo a los 10 das de incubacin, comparando cada
tubo con el control de color mbar, un cambio a color rosa salmn se interpret como
positivo.11

RESULTADOS
En el muestreo piloto se encontr un 20% de frecuencia de Y. enterocolitica. De las
100 tonsilas trabajadas se logr aislar e identificar 22 (22%) cepas de Y.
enterocolitica (Tabla 1). Un problema frecuente en el estudio fue la presencia de
Proteus spp. como contaminante de los cultivos.

Con el uso de tres tcnicas se logr serotipificar 16 de las cepas aisladas, en cinco
cepas no fue posible la tipificacin, con los antisueros empleados (Tabla 1), se debe
resaltar que los serotipos encontrados fueron O:3 y O:9 y que no se logr identificar el
serotipo O:8.
En la tipificacin por el mtodo de aglutinacin directa de los 22 cultivos de Y.
enterocolitica se encontraron tres cepas (14.28%) del serotipo O:9.
Los 18 aislamientos no tipificados con la aglutinacin directa se trabajaron con la
tcnica de adsorcin; tipificndose 12 cepas (57.1%) de las cuales 7 (33.3%) fueron
O:3 y 5 (23.8%) pertenecientes al O:9; haciendo hincapi que bajo esta tcnica, se
identificaron los dos serotipos en una misma muestra. Los ttulos obtenidos con est
tcnica variaron de 1.20 a 1:160.
Las seis cepas no tipificadas con los dos mtodos anteriores, se evaluaron con la
aglutinacin lenta, con esta tcnica se determin el serotipo nicamente en una cepa,
correspondiente al serotipo O:3, quedando 6 cepas sin tipificar.
Las 16 cepas tipificadas pertenecieron al biotipo 1 (Tabla 2).

DISCUSIN

Los medios como MacConkey y SS, favorecen en general el crecimiento del

microorganismo; no obstante, Y. enterocolitica puede ser inhibido en agar SS, cuando
es adicionado con verde brillante para el aislamiento deSalmonella, ya que resulta
txico,8 sin embargo, el empleo de este medio para el aislamiento primario tuvo
resultados satisfactorios. Una de las limitaciones encontradas para el aislamiento, fue
la presencia de Proteusspp. contaminando los cultivos, lo cual se redujo utilizando agar
MacConkey.
El aislamiento de Y. enterocolitica de origen tonsilar en porcinos en este trabajo, es el
primero bajo esta modalidad; sin embargo, se tenan antecedentes del patgeno en
humanos y en algunos productos de origen animal en Mxico,12 pero slo en una
investigacin, realizada en humanos se logr la tipificacin del serotipo y biotipo
involucrado.2
La recuperacin de Y. enterocolitica a partir de cerdos, demostr la presencia del
microorganismo en Mxico, al menos en estos animales destinados para el abasto.
Estudios en cerdos para abasto, principalmente en rastros y carniceras, han hallado
que los serotipos predominantes en Europa han sido el O:3 y O:9; sobre todo el O:3
en contraste con el O:8 el cual es la causa ms comn de yersiniosis en los Estados
Unidos de Amrica, aunque su presencia ha sido rara en el porcino.1,14
Investigaciones anteriores llevadas a cabo en varios pases, han confirmado tambin la
existencia de la bacteria en tonsilas de cerdos;1 y a partir de muestras de lengua y
canales frescas.8 Los serotipos O:3 y O:9 inclusive se han identificado a partir de
lengua, garganta, tonsilas, canales, carne, jamn y contenido cecal de cerdos.4
La tipificacin de las 16 cepas aisladas en este trabajo, dio como resultado los
serotipos O:3 y O:9, lo que concuerda con resultados similares, publicados en otros
pases, en donde los serotipos sealados estn presentes en los porcinos, que son
reservorios comunes de Y. enterocolitica. En los Estados Unidos, se han identificado los
serotipos O:3 y O:9, en Finlandia, el O:3 fue localizado en el 36.4% a partir de tonsilas
de cerdo,1 el mismo serotipo ha sido aislado frecuentemente en Dinamarca, Blgica y
Suecia;7 de la misma manera ha predominado en Escandinavia, Japn, Canad y en
otras regiones de Europa.9
Cabe mencionar que en este trabajo, no se consigui la serotipificacin de cinco cepas
y en ninguno de los casos se logr identificar al serotipo O:8. Tal resultado
posiblemente obedezca a que eran cepas correspondientes a otro serotipo, aparte de
los que se buscaron, como fueron O:3, O:8 y O:9, debido a que no se tenan otros
antisueros de referencia, otro factor pudo ser el uso de caldo Rappaport modificado,
como un medio altamente selectivo en la recuperacin del O:3, pero inhibitorio para
ciertos serotipos, especialmente el O:8, otra limitante podra ser que el serotipo O:8 ha
sido raramente aislado de animales.1,2,4
En Mxico, posiblemente Y. enterocolitica se encuentra ampliamente distribuida, sin
embargo, las prioridades de diagnstico estn encaminadas a conocer la situacin de
otras enterobacterias como Campylobacter, Salmonellay Shigella, lo cual de alguna
manera es una limitante para la escasa informacin que se tiene del microorganismo y
sus serotipos patgenos.

Los serotipos O:3 y O:9 reconocidos en este trabajo fueron identificados por sus
propiedades bioqumicas y correspondieron al biotipo 1, difiriendo este resultado con
los criterios de clasificacin establecidos, donde relacionan regularmente la pertenencia
del O:3 al biotipo 4 y O:9 al biotipo 2, respectivamente, lo ms cercano a una posible
explicacin de estos hallazgos, estn referidas a las cepas canadienses O:3, segn
clasificacin de Nilhn y Wauters perteneceran al biotipo 4 y de acuerdo a Knapp y
Thal, al biotipo 1.14
En humanos se han admitido como modos de transmisin, el contacto de personas con
animales infectados, la transmisin de persona a persona dentro de una familia
infectada y el consumo de carne de cerdo contaminada, involucrados principalmente
los trabajadores relacionados con los rastros, granjeros y criadores de porcinos. Los
posibles mecanismos de transmisin tambin estn fuertemente vinculados a las
caractersticas psicroflicas del agente y su habilidad de proliferar rpidamente
alrededor de los 4C; estos atributos permiten a la bacteria la capacidad de
incrementarse en los alimentos durante la refrigeracin y sobrevivir en los mismos por
largos perodos, lo que de alguna forma repercute desfavorablemente en la industria
de alimentos.6
Las actividades tendientes a disminuir o evitar la contaminacin de la carne por Y.
enterocolitica, estn encaminadas a modificar los procesos de sacrificio, lo que
justificara en gran medida separar la cabeza de la canal, con el propsito de reducir la
presencia del microorganismo en la misma y en consecuencia disminuir la frecuencia
de la bacteria.
La presencia de Y. enterocolitica en cerdos y su serotipificacin, se registraron por
primera vez en Mxico, esto es importante debido a que el patgeno, est involucrado
en problemas de salud pblica.