Practica No.

1: Factores que influyen en las separaciones cromatograficas / fecha de realizacin:

28/agosto/2014--/ 6FV1/ Profesores: Jonathan Fragoso Vzquez, Luis Almazn Snchez, Eleuterio
Burgueo Tapia / Equipo 3: Hernndez Balderas Jos Luis, Lozano Apolinar Martin Alejandro.

Objetivo

Experimento 2: Efecto del volumen de muestra

aplicada.

Analizar la influencia de algunos factores que

afectan las separaciones cromatograficas.

Rf-1(1 microlitro):

Introduccin

1.5/3.8=0.394

La cromatografa es un conjunto de tcnicas

usadas para separar, identificar y determinar los
componentes qumicos de mezclas complejas. El
principio de la cromatografa se fundamenta en la
dispersin de los componentes de la mezcla a
separar dentro de 2 fases no miscibles entre s,
una mvil y otra estacionaria. La elucin a
velocidades diferentes de los compuestos de una
muestra conduce a su separacin. Esta diferencia
de velocidades se atribuye a factores como:

3.8 Rf-2(2 microlitro):

1.5/3.8=0.394

Rf-3(4 microlitros): 1.4/3.8=0.368

Experimento 3: Efecto de concentracin de la
muestra

Polaridad: es una propiedad de las

molculas que representa la separacin
de las cargas elctricas a la misma.
Adsorcin: es el proceso mediante el cual
un slido poroso (a nivel microscpico)
es capaz de retener partculas de un
fluido en su superficie tras entrar en
contacto con este.

Rf-1 (1mg/ml):

21.7/3.8=0.447
Rf-2(5mg/ml):

3.8
1.6/3.8=0.421

Existen tambin, diversos factores que pueden

influir en las preparaciones cromatograficas, como
son: polaridad, volumen de la muestra
concentracin de la muestra, efecto de la matriz
(se define como matriz a todo lo que hay en la
muestra excepto el analito)

Rf-3(10
Experimento 4: Efecto de
mg/ml):1.6/3.8=0.421
matriz.

Resultados

Experimento 1: Efecto de la polaridad del

disolvente.

3.

3.9

Rf (sudan): 2.7/3.8=0.710

2
3.
8

3.

3. acetato de etilo/hexano (3:7)

Rf (R. de M): 0.3/3.8=0.078

1
3

1 de etilo:
1. acetato

Rf (R.de M) : 2.3/3.8=0.605
Rf (sudan) : 3.3/3.8=0.868
2. acetato de etilo/hexano (1:1)
Rf (R. de M):1.4/3.9=0.358
Rf (sudan): 3.5/3.9=0.897

3
B

1
3

2
3.
8

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28/agosto/2014--/ 6FV1/ Profesores: Jonathan Fragoso Vzquez, Luis Almazn Snchez, Eleuterio
Burgueo Tapia / Equipo 3: Hernndez Balderas Jos Luis, Lozano Apolinar Martin Alejandro.
A] Efecto de la naturaleza del disolvente de la
muestra.
Rf-1 (metanol): 1.9/3.8=0.5
Rf-2 (agua): 1.7/3.8=0.447
Rf-3 (CH3CN): 2.5/3.8=0.657
B] Presencia de otros analitos
Rf-1(agua):1.6/3.8=0.421
Rf-2 (sacarosa): 1.5/3.8=0.394
Rf-3 (NaCl): 1.2/3.8=0.315

Discusin de resultados
Efecto de la polaridad del disolvente.
Se observ que la afinidad muestra-disolvente se
fue modificando ya que se disminua la polaridad
del disolvente por la adicin de hexano, por lo se
observ que las muestras de rojo de metilo sus Rf
disminuyen considerablemente (de 0.605 a 0.078)
a comparacin del Sudan (de 0.868 a 0.710) , lo
que indica que el Rojo de metilo es ms polar que
el Sudan , ya que en el Rojo existe un grupo
carboxilo que tiene puentes de hidrogeno con el
acetato de etilo y en el Sudan solo hay un
hidroxilo. Existen interacciones muestra-fase mvil
y muestra-fase estacionaria; si la muestra tiene
mayor afinidad por la fase mvil esta avanzara
ms que si se realiza con una fase mvil poco afn
a la muestra.
Efecto del volumen de muestra aplicada.
En este experimento los Rfs tuvieron valores
cercanos (0.394, 0.394 y 0.368) aunque cuando
se coloca un volumen de muestra mayor (4
microlitros) la mancha es un poco ms grande lo
que provoca una resolucin pobre y se tendrn
problemas si este se requiere separar de algn
otro compuesto, adems se consider que al
incrementar el volumen de muestra aplicada se
incrementa la velocidad de migracin, esto se
debe a que los sitios activos de las molculas de
la fase mvil estn saturadas, lo cual ya
interactan con las dems y permiten el paso.
Efecto de concentracin de la muestra.

Al aumentar la concentracin de la muestra , esta

interacciona en mayor proporcin con la fase
estacionaria por lo tanto se empieza a formar una
asimetra en la mancha (coleo) con esto el valor
de Rf se ve afectado.
Efecto de la naturaleza del disolvente de la
muestra.
El disolvente que se encuentra en la muestra es
de importancia ya que esta tambin interacciona
con la fase mvil y con la fase estacionaria con lo
que modifica los valores del Rf o puede provocar
que la resolucin de la mancha sea pobre , esto
debido a que el disolvente no es el correcto parato
para disolver la muestra , como en el caso del
Rojo de metilo con H2O, este es insoluble en
agua, como consecuencia se observo una mancha
tenue y con coleo a diferencia de las muestras
disueltas en acetonitrilo y metanol.
Presencia de otros analitos.
Se debe de considera que si se encuentran
presentes analitos en la muestra, se debe tomar lo
valores de coeficiente de particin para lograr
separar estos del analito de nuestro inters, ya
que si no se considera esto en cuenta se
observara un coleo por la poca o con mucha
afinidad ya sea por la fase mvil o por la fase
estacionaria; como en el caso de la solucin con
NaCl . esta tuvo un Rf menor y presento coleo ya
que es ms a fin por la fase estacionaria que por
la fase mvil, a diferencia de la sacarosa que tiene
un poco de coleo pero no afecta el valor de Rf.

Conclusiones
La afinidad del analito por la fase
mvil est dada por la polaridad de
ambos, interaccionando con la fase
mvil y/o fase estacionaria.
A mayor volumen de muestra menor
resolucin se obtendr.
A mayor volumen de aplicacin de
muestra, mayor velocidad de
migracin.
A mayor concentracin de la muestra
se presentara el fenmeno de coleo.
La presencia de otros analitos afecta
en la retencin del analito de inters.

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28/agosto/2014--/ 6FV1/ Profesores: Jonathan Fragoso Vzquez, Luis Almazn Snchez, Eleuterio
Burgueo Tapia / Equipo 3: Hernndez Balderas Jos Luis, Lozano Apolinar Martin Alejandro.

A mayor afinidad del analito por la

fase mvil, mayor ser el Rf.

B) Investiga dos aplicaciones de la cromatografa

en el anlisis ambiental
o

Implementacin de mtodos analticos para

Determinar compuestos orgnicos de inters
ambiental en distintas muestras de aguas,
sedimentos y lodos

Anlisis de parmetros radioactivos segn la

Normativa 98/83/EC, relativa a los requisitos
sanitarios de la calidad de las aguas para el
consumo humano

B)

Mecanismos de separacin de cromatografa

Cuestionario
A)

Defina brevemente los siguientes trminos

Tipos de interacciones moleculares:

o 1. Atraccin dipolo-dipolo: fuerzas
que se producen entre dos o ms
molculas polares, por atraccin
entre cargas parciales positivas y
negativas
o

2. Atraccin ion-dipolo: fuerza entre

un ion positivo o negativa y una
molcula polar.

3. Fuerzas de Van de Waals (fuerzas

de London): son atracciones dbiles
entre molculas no polares. Se
producen cuando estas molculas no
tienen polos y son inducidas a
provocar un desplazamiento
momentneo de los electrones,
generando un polo positivo y uno
negativo.

Resolucin:
o Es una funcin del factor de
capacidad K'x y la retencin relativa
y el nmero de platos tericos en
funcin del segundo soluto.

Coeficiente de particin:
o Es un parmetro fisicoqumico que
permite determinar de modo
cuantitativo el grado de lipofilia.

Asimetra de pico:
o Es la porcin de cromatograma
diferencal que registra la respuesta
del detector cuando un nico
compuesto sale de la columna.

Bibliografia
o
o
o

Efecto de matriz:
o Consiste en una disminucin o
aumento de la respuesta
instrumental del analito debido a la
presencia de otros componentes.

Ferr, J. Tcnicas de Laboratorio, 297

(2004) 986-989.
Riu J, Boqu R. Tcnicas de Laboratorio,
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Dominique Pradeau. Analisis qumicos
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X. Fuentes Arderiu. Bioqumica clnica y
patologa molecular Segunda Edicion.
Editorial Reverte. Espaa. Volumen 1.
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