Les Entrobactries (3me partie) :

Les Entrobactries lactose + : lexemple des

coliformes
Objectifs : * Mettre en vidence les caractres morphologiques, culturaux et biochimiques
pour orienter ltude vers la famille des entrobactries.
* Raliser lensemencement dune macrogalerie en vue de la dtermination de
lespce du coliforme.
* A laide du tableau dichotomique, identifier lespce du coliforme donn.
* Raliser, interprter et conclure un test de Mackensie.
1er jour
Manipulation : Par personne, vous disposez dune souche pure dun coliforme prsent sur GNi :

Souche numrote
prsente sur glose nutritive

TEST DE
MACKENSIE

Raliser une suspension bactrienne faible ( 1

colonie dans 5 mL deau distille strile)

Dj

Isolements des bacilles Gram +

sur :
Milieu prfrentiel :
EMB
Milieu non slectif :
BCP

Etude microscopique :
Raliser une coloration de
Gram

Ralisation du test
dorientation rapide
pour 1 entrobactrie :
Raliser le test de loxydase

Ensemencements
des milieux de la
galerie de famille :

Ensemencements des
milieux de la galerie de
genre et despce :

VF

Kligler-Hajna

Hugh et Leifson
glucoss

Clarks et Lubs
Ure Indole

Bouillon nitrat
Mannitol-Mobilit
Glose Nutritive
Ordinaire

Citrate de Simmons

Incuber botes et tubes 24 h 37C

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Compte-rendu :
Coloration de Gram

Test respiratoire :
Orientation

Observations

Conclusion

Observations

Conclusion

Souche n

2me jour
Manipulation :
Lecture des diffrents milieux ensemencs : botes et tubes.
Raliser le tests complmentaires ncessaires la mise en vidence de :
la nitrate rductase
la galactosidase
la voie fermentaire du glucose
la tryptophane dsaminase et de la tryptophanase

Compte-rendu :
1. Ensemencements
Milieux
VF
Bouillon nitrat
Hugh et Leifson glucos
Kligler
Clark et Lubs

Observations

Interprtations

Conclusion

Citrate de Simmons
Mannitol- Mobilit
Ure-Indole
Milieu LDC
Milieu ODC

2. Isolements
Observations : aspect des colonies

Conclusion

Glose Nutritive Ordinaire

Glose EMB
Glose BCP

3. Conclusion
3.1.

Proposer une identification du coliforme numrot et justifier votre dmarche logique

danalyse :
Justification de lappartenance la famille des Entrobactries.
Justification de lappartenance au genre et lespce bactrienne.

3.2.

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Interprter le test de Mackensie et conclure sur le coliforme initial.