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Techniques de coloration complexe : Coloration de Gram

C'est une double coloration qui nous permet de connatre la forme, l'arrangement, la puretainsi que la nature
biochimique de la paroi des cellules purifies.Cette coloration permet de classer les bactries selon leur capacit
fixer le cristalviolet. Celles qui possdent une enveloppe externe sont dcolores lors du lavage
lthanol(Gram-), alors que celles qui nen possdent pas vont retenir le colorant (Gram+) (Perry,2004). La
consistance et la valeur de la coloration de Gram correspond des diffrencesbiochimiques entre
la paroi des bactries Gram positif et les bactries Gram ngatif (Marchalet Bourdon, 1982).
Technique :
- Prparer et fixer un frottis bactrien la chaleur du bec Bunsen.- Recouvrir au violet de Gentiane pendant
1min. Eliminer l'excs par l'eau courante;- Ajouter du Lugol : deux bains de 45 secondes, jeter l'excs par l'eau
courante;- Traiter l'alcool 95 pendant 30 secondes, puis rinage l'eau;- Recolorer la Fuschine pendant 1 2
minutes, rinage l'eau puis schage;L'observation se fait en ajoutant de l'huile immersion .Les bactries
Gram positif se colorenten violet alors que les Gram ngatif se colorent en rose.