Protocolo de Microbiologia Clinica

PROTOCOLO DE MICROBIOLOGIA
DELIA ROSA HERRERA HERNNDEZ

Bacteriloga
BLANCA LUZ SALDARRIAGA GAVIRIA
Bacteriloga
REVISADO POR
NOMBRE
CARGO
FIRMA
FECHA
APROBADO POR
Delia Rosa Herrera Hernndez

Bacteriloga
Paulo Andres Gutierrez

Representante de la Direccin
Septiembre de 2010
Septiembre de 2010
1. CITOQUIMICO DE ORINA_______________________________________________________ 4
2. UROCULTIVO _______________________________________________________________ 5
3. COPROLGICO ______________________________________________________________ 6
4. SANGRE OCULTA EN MATERIA FECAL __________________________________________ 7
5. MTODO DE GRAHAM PARA EL DIAGNOSTICO DE OXIUROS ________________________ 8
6. GRAM DE CUALQUIER MUESTRA ______________________________________________ 9
7. AZUCARES REDUCTORES____________________________________________________ 10
8. DETERMINACIN DEL PH ____________________________________________________ 11
9. TEST DE AMINAS ___________________________________________________________ 12
10. SECRECIN OCULAR _______________________________________________________ 13
11. LIQUIDO CEFALORRAQUDEO (LCR) __________________________________________ 14
11.1 ANLISIS DEL LCR ______________________________________________________ 15
11.2. EXAMEN CITOQUMICO DEL LCR __________________________________________ 15
11.3. OTRAS PATOLOGAS ___________________________________________________ 19
11.4 SEROLOGIA EN LCR _____________________________________________________ 20
11.5. RECUENTO CELULAR ___________________________________________________ 20
12. DIRECTO HONGOS O KOH ___________________________________________________ 23
13. BK EN ORINA ______________________________________________________________ 24
14. BACILOSCOPIA EN JUGO GASTRICO __________________________________________ 25
14. BACILOSCOPIAS ___________________________________________________________ 26
15. TEST DE TZANCK __________________________________________________________ 27
16. COLORACIN DE ALBERT (PARA CORYNEBACTERIAS) __________________________ 28
17. DIRECTO LEISMANIASIS ____________________________________________________ 30
18. FROTIS FARINGEO GRAM__________________________________________________ 31
19. FLUJO VAGINAL ___________________________________________________________ 32
19.1. MUESTRA DE ENDOCERVIS ______________________________________________ 32
19.2. MUESTRA DE VAGINA ___________________________________________________ 32
20. SECRECIN URETRAL ______________________________________________________ 33
21. ESPERMOGRAMA __________________________________________________________ 34

22. CONTROL DE CALIDAD INTERNO _____________________________________________ 35
22.1. CITOQUMICO DE ORINA _________________________________________________ 35
22.2. UROCULTIVO __________________________________________________________ 36
22.3. COPROLGICOS _______________________________________________________ 37
22.4. PRUEBA DE GRAHAM (OXIUROS) _________________________________________ 38
22.5. SANGRE OCULTA EN HECES______________________________________________ 39
22.6. AZUCARES REDUCTORES _______________________________________________ 40
22.7. PH ___________________________________________________________________ 41
22.8. TEST DE TZANCK _______________________________________________________ 42
22.9. FLUJO VAGINAL ________________________________________________________ 43
22.10. KOH _________________________________________________________________ 44
22.11. DIRECTO PARA LEISHMANIASIS _________________________________________ 45
23. CONTROL EXTERNO DE CALIDAD ____________________________________________ 46
23.1.
LABORATORIO DEPARTAMENTAL DE SALUD PBLICA _______________________ 46
23.2. NOVALAB _____________________________________________________________ 47

BIBLIOGRAFIA
1. CITOQUIMICO DE ORINA
Para la elaboracin de un examen de orina, se debe tener en cuenta tanto en hombre como en
mujeres las condiciones para
su recoleccin, de acuerdo a lo descrito en el FADX35
Recomendaciones para una adecuada recoleccin de muestras para los exmenes de laboratorio.
Procedimientos
1. Servir la muestra en un tubo de ensayo y colocarle la tirilla, donde se analiza: Leucocitos,
Nitritos, Urobilinogeno, Protenas, Ph, Eritrocitos, Densidad, Cuerpos Cetnicos, Bilirrubina,
Glucosa, adems miramos aspecto y color.
2. Centrfugar por 10 minutos a 2.500 RPM, descartar el sobrenadante, servir 1 gota del
sedimento entra lmina y laminilla, y luego con objetivo de 40x leer la muestra.
La observacin del sedimento urinario debe coincidir con la lectura de la tirilla urinaria. En caso
contrario se debe repetir la tirilla o el sedimento.
Nota aclaratoria
Cuando el paciente trae la orina para citoqumico se coloca la muestra directamente en la nevera, con
el fin de conservar la muestra mientras se realiza su respectivo anlisis.
2. UROCULTIVO
Es un procedimiento de microcultivo para confirmar en forma rpida y sencilla un proceso de infeccin
urinaria; este sistema consta de una paleta plstica de 2 caras:
11.2.
11.3.
Cara 1: Con Agar Cler.

Cara 2: Con Agar MacConkey.
Procedimiento:
1. Colectar la muestra aspticamente en un recipiente estril de boca ancha.
2. Agitar la orina para permitir una suspensin uniforme de los microorganismos que pueden
estar presentes.
3. Tomar cuidadosamente un tubo de urobacter e introducir la paleta en la orina, permitiendo una
inmersin completa de esta.
4. Limpiar con un papel absorbente el excedente de orina que queda en la paleta.
5. Colocar inmediatamente la paleta en su recipiente estril y cerrar hermticamente.
6. Incubar a 37 C por 18 24 horas.
7. Revisar el crecimiento obtenido una vez terminado el tiempo de incubacin, interpretar los
resultados segn el nmero de colonias.
Interpretacin de los resultados:

1. Positivo: Crecimiento de ms de 100.000 colonias/ml 3. Enviar el microcultivo al laboratorio de
referencia para su identificacin bioqumica, determinar especie y realizar pruebas de
sensibilidad antibitica.
2. Negativo: No se observa crecimiento bacteriano y se procede a descartar el microcultivo.
Nota aclaratoria: los urocultivos negativos no se descartan inmediatamente despus de su lectura,

sino que se dejan en incubacin 24 horas ms antes de ser descartados.
SE ANEXA TCNICA DE LA CASA COMERCIAL
3. COPROLGICO
Para la elaboracin de un examen coprolgico, se debe tener en cuenta las condiciones para su
recoleccin, de acuerdo a lo descrito en el FADX35 Recomendaciones para una adecuada
recoleccin de muestras para los exmenes de laboratorio. Su anlisis debe realizar el mismo da de
la recoleccin.
Procedimiento
1. Revolver bien la muestra con un palillo.
2. Servir utilizando solucin salina, 1 gota y Lugol 1 gota.
3. Mezclar primero la muestra con la gota de solucin salina y por ltimo con Lugol.
4. Servir entre lmina y laminilla.
5. Observar primero con el objetivo de 10x para determinar huevos y larvas.
6. Pasar luego al objetivo 40x para diferenciar los quistes.
Reportar los huevos: En huevos por gramo (hpg). Para reportar los quistes y trofozoitos se utilizan
cruces de acuerdo a la cantidad presente: +, ++, +++ o ++++.
Adems se debe reportar la consistencia de la muestra, presencia de Almidones, Grasa, Moco,
Leucocitos, Eritrocitos y anotar la cantidad: Escasa, Media, Abundante.
4. SANGRE OCULTA EN MATERIA FECAL
1. Destornillar la tapa del tubo colector y clave el palo colector dentro de la materia fecal en al
menos tres sitios diferentes.
2. Enrosque y ajuste la tapa en el tubo colector agitando vigorosamente para mezclar la materia
fecal y el buffer extractor.
3. Saque el dispositivo o casette del sobre sellado y utilcelo tan pronto sea posible.
4. Sostenga el tubo colector hacia arriba y rompa la punta del tubo.
5. Transfiera dos gotas completas del espcimen extrado al pozo del dispositivo o casette
6. Esperar hasta que aparezcan las lneas coloreadas. Los resultados deben leerse a los 5
minutos. No interpretar los resultados despus de 10 minutos.
Lectura
Positiva:
Dos lneas coloreadas aparecen. Una lnea debe estar en la banda de la regin de
control C y otra lnea debe estar en la banda de la regin de la prueba T.
Negativa:
Una lnea coloreada aparece en la banda de control de la regin C. Ningn color
aparente aparece en la banda de la regin de la prueba T.
5. MTODO DE GRAHAM PARA EL DIAGNOSTICO DE OXIUROS
1. Pegar un pedazo de cinta engomada transparente en una placa con la parte engomada contra el
vidrio. Se puede pegar el extremo de la cinta a un baja lenguas para facilitar la toma de la
muestra.
2. Levantar la cinta en el momento de usarla y voltearla hacia atrs de tal modo que la parte
engomada quede expuesta en la superficie externa.
3. Toca varias veces con la superficie engomada la regin peri anal y perineal.
4. Pega de nuevo la cinta en la placa, alisar bien y mirar al microscopio.
Este mtodo da una positividad de 70 - 80%, la cual aumenta con exmenes repetidos en casos de
oxiuriasis, mientras que el examen coprolgico corriente solo revela el 5%.
6. GRAM DE CUALQUIER MUESTRA

Las muestra a las cuales se les realiza el Gram son: Orina, Materia Fecal, Esputo, materiales
purulentos, lquido Cefaloraqudeo, Frotis Farngeo, Etc.
Se realizan los extendidos en una placa porta objetos, rotar el aplicador suavemente, dejar secar a
temperatura ambiente y luego fijar al calor con mechero.
7. AZUCARES REDUCTORES
Muestra: Material fecal y tabletas reactivas (determinacin cuantitativa de la glucosa (azcar) en

materia fecal.
Procedimiento:
1. Colocar en un tubo de ensayo 10 gotas de H2O destilada o 2ml de esta.
2. Adicionar un gramo de materia fecal y mezclar.
3. Colocar una tableta en el tubo. Permitir que se lleve a cabo completamente la reaccin, no
agitar el tubo durante la reaccin o por los 15 segundos despus de haber terminado la
reaccin.
4. Al final del periodo de 15 segundos agitar el tubo suavemente para mezclar el contenido.
5. Comparar con la carta de color, el color del lquido contenido en el tubo. Ignorar el sedimento
que puede estar presente en el tubo. Ignorar tambin el cambio de color despus del periodo
de 15 segundos.
6. Anotar el resultado de acuerdo al valor asignado al bloque de color con el que ms se acerque
al color del lquido.
8. DETERMINACIN DEL PH
Esta prueba permite conocer la acidez o basicidad de determinada muestra.

Es importante conocer el PH en muestras como: L. C. R, esperma, orina, flujo vaginal, materia fecal.
Para determinarlo existe comercialmente una tirilla la cual analiza el PH de 1 a 14 mediante una tabla
clasificadora representada en colores, los cuales corresponden a un nmero.
9. TEST DE AMINAS
La muestra de flujo vaginal que al directo se le observe cocobacilos, clulas gua, se le hace el Test
de Aminas.
Procedimiento:
1. Colocar una gota de esta muestra de flujo en un porta objetos
2. Echar una gota de Hidrxido de Potasio al 10%, si expide un olor caracterstico (a pescado) se
dice que es KOH positivo o a su defecto negativo.
10. SECRECIN OCULAR
Procedimiento:
1. Tomar con aplicador estril un poco de la muestra que presente el paciente
2. Extender en un porta objetos en forma circular
3. Deja secar y luego colorear con Gram.
4. Leer con objetivo de 100x de aceite de inmersin.
Es importante reportar la reaccin leucocitaria en cantidad y la presencia de bacterias.
11. LIQUIDO CEFALORRAQUDEO (LCR)
El lquido cefalorraqudeo (LCR) se ha considerado como un ultra filtrado del plasma, semejante al
lquido intersticial y al lquido glomerular, pero con algunas diferencias importantes.
Aproximadamente 150ml de LCR ocupan la cavidad que rodea el encfalo y la mdula; se encuentra
en los ventrculos cerebrales, cisternas, espacios subaracnoideos del encfalo y mdula espinal.
Todas estas cavidades estn conectadas entre s y la presin del lquido est regulada a un nivel
constante.
Formacin
La mayor cantidad de LCR, aproximadamente el 60% es producido por los plexos coroides de los
ventrculos cerebrales; otra parte proviene del plasma, por lo tanto constituye un ultra filtrado de las
sustancias del plasma al espacio extracelular del cerebro y los plexos coroides en mayor proporcin
provienen de los vasos sanguneos del encfalo y la mdula espinal de los menngeos y los
revestimientos ependimarios de las cmaras cerebroespinales.
Composicin
Hay un cambio gradual de la concentracin de los componentes a medida que el LCR fluye desde los
ventrculos del cerebro hasta las cisternas que lo rodean y luego al rea lumbar de la mdula espinal,
donde se obtiene generalmente las muestras de LCR por puncin.
Barrera Hemato Enceflica

Su existencia se refleja en el hecho de que diferentes solutos se difunden en distinta cuanta entre la
sangre y el tejido cerebral.
Aunque en otros lugares del cuerpo muchas sustancias atraviesan las paredes de los capilares de la
sangre a los tejidos, algunos no pueden atravesar las paredes de los capilares a los plexos por la
accin vital de las clulas de revestimiento; entre estas sustancias se encuentran los pigmentos
biliares y muchos medicamentos.
Algunas sustancias como el alcohol etlico, penetran rpidamente en el tejido cerebral; otras como la
penicilina lo hacen muy lentamente y algunos como la urea, creatinina y glucosa ocupan una posicin
intermedia.
En condiciones patolgicas especialmente en los procesos infecciosos, desaparece la barrera hemato
enceflica y la accin vital de las clulas de revestimiento.
11.1 ANLISIS DEL LCR
Recoger la muestra en tres tubos estriles tapa rosca (sobre todo si la muestra va a ser transportada
de un laboratorio a otro) as:
1. Un tubo para estudios bacteriolgicos y serolgicos (1cc).
2. Un tubo para determinaciones qumicas (3cc).
3. Un tubo si se van a hacer estudios citolgicos (la muestra debe ser tomada con anticoagulante
para evitar que las clulas queden atrapadas en el coagulo cuando este se presente (1cc).
Tomar simultneamente al paciente muestra de sangre para hacer la glicemia en sangre u otra
determinacin.
11.2. EXAMEN CITOQUIMICO DEL LCR

Comprende:
1. Estudios Fsicos: Aspecto, color, coagulacin
2. Estudios Qumicos; Glucorraquia, proteinorraquia, clorurorraquia
3. Estudio Microscpico: Recuento de leuccitos, recuento de eritrcitos y placas de
sedimento para Wrigth, Gram, BK
11.2.1 Estudio Fsico:

Color: El LCR normal es incoloro. Puede ser hemorrgico debido a puncin traumtica o a
hemorragia por fracturas seas, hemorragias cerebrales, medulares, ditesis hemorrgica, ruptura
de aneurisma, hemorragia menngea.
Aspecto: LCR normalmente es transparente, cristalino como agua de roca. Tambin se puede ser
claro en la meningitis tuberculosa, pero en este caso a menudo es opalescente.
Coagulacin: El coagulo en tela de araa es caracterstico de la meningitis tuberculosa; algunos

sndromes como el de Froint, presentan coagulacin espontnea. El cogulo se da por presencia
de fibrina en LCR.
11.2.2. Estudio Qumico

Las sustancias qumicas de inters clnico en el LCR son: La glucosa, las protenas y los cloruros.
Glucorraquia: Los valores normales en el adulto varan de 50 a 80mg/dl para el LCR obtenido por
puncin lumbar; en los nios las cifras son ligeramente superiores 70 a 90mg/dl.
La concentracin de la glucosa en LCR guarda estrecha relacin con la glicemia, normalmente la
glucorraquia es aproximadamente el 60 al 80% de la glicemia.
Tras un aumento o disminucin de la glicemia, la glucorraquia sufre un cambio paralelo en curso de 1
a 3 horas; este intervalo de tiempo refleja el transporte lento de la glucosa a travs de la barrera que
existe entre la sangre y el LCR. Por lo anterior se debe tomar muestra de sangre al mismo tiempo que
se toma la muestra de LCR, para hacer las determinaciones de glucosa en ambas.
La hiperglucorraquia fuera de ser discreta, es inconstante, por lo que tiene mayor valor clnico la
hipoglucorraquia.
La glucosa disminuye en la meningitis pigena y tuberculosa, este descenso se debe a las
necesidades metablicas de los microbios infectantes y de las clulas inflamatorias, una normal
glucorraquia no excluye una meningitis, pero una cifra baja si la confirma. La glucosa del LCR
disminuye en estados hipoglicmicos, en hemorragias subaracnoideas o en meningo-encefalitis.
En los casos de infecciones por virus la cifra de glucosa es normal o puede aumentar por alteracin
de la barrera hemato-cerebral.
Proteinorraquia: Normalmente el LCR obtenido por puncin lumbar tiene cifras entre 15 y 45
mg/dl para los adultos.
En prematuros la inmadurez
considerablemente elevados.
de
la
barrera
hemato-enceflica
Durante el primer ao de vida los niveles estn entre 30 y 100 mg/dl.
ocasiona
unos
valores
Las cifras de protenas aumentan con cualquier enfermedad inflamatoria aguda o crnica, en los
tumores cerebrales dependiendo de su localizacin, lo mismo que en afecciones vasculares del
sistema nervioso.
El aumento de las protenas puede obedecer a exudacin del suero, anomala en la barrera hematocerebral o liberacin de protenas por un tumor o por una clula inflamatoria.
Cuando las cifras proticas aumentan considerablemente se sospecha una meningitis purulenta,
tuberculosa o sifiltica, o en casos de bloqueo espinal exista o no sndrome de compresin medular
como en el sndrome de Froint, donde el cambio principal es el notable aumento de las protenas
totales, acompaado de xantocroma y coagulacin espontnea, aunque no siempre se presente la
trada completa.
ENFERMEDAD
PROTEINAS
GLUCOSA
CLORURO
CELULAS
OTROS
15 40
50 30
710 750
Transparente
Incoloro
MENINGITIS
PIGENA
100 500
0 40
600 700
Miles
Turbio
MENINGITIS
TUBERCULOSA
50 400
10 50
500 700
Cientos
Coagulo en
forma de
telaraa
MENINGITIS
VIRAL
50 100
Normal o
elevada
50 500
Variable
TUMOR
CEREBRAL
15 100
Normal
Normal
Negativa
OBSTRUCCIN
RAQUDEA
50 2000
Normal
Normal
Normal
Coagulo
espontneo
ESCLEROSIS
MLTIPLES
15 100
Normal
Normal
5 100
SIFILIS (segn la
etapa de la
enfermedad
25 150
Normal
Normal
10 500
NORMAL
Tabla N1 - Composicin del LCR en algunas enfermedades

Todos los resultados de la tabla se expresan en mg/dl.
Se presentan tambin niveles aumentados en el sndrome de Guillan Barr en el que tambin hay
disociacin albuminocitolgica; en estos procesos el paciente presenta parlisis flcida y abolicin de
reflejos.
Por otro lado se pueden determinar las globulinas en el LCR mediante la prueba de Pandy, reaccin
cualitativa cuya positividad es siempre anormal.
Clorurraquia: Su cifra normal es 100 130mg/dl. Las variaciones patolgicas de inters son los
hipoclorurorraquias.
Se encuentran notablemente disminuidas en las meningitis tuberculosas, en las que un descenso
rpido es los primeros das es signo de gravedad; de mejora cuando la cifra trata de normalizarse.
Se presenta disminucin discreta en la meningitis purulenta y sfilis nerviosa.
El aumento se presenta en procesos donde existe una retencin en sangre, como en la nefritis con
insuficiencia renal o hipercloremia, o en las deshidrataciones puras sin prdida de electrolitos.
11.2.3. Estudio Microscpico

Se debe realizar recuento celular (Leucocitos y Eritrocitos) y recuento diferencial, lo mismo que las
placas para Gram y BK.
Recuento de Leucocitos: El recuento normal de leucocitos en LCR esta generalmente de 0 5
leucocitos por mm3, un recuento aumentado de leucocitos en LCR indica generalmente una
irritacin menngea, ya sea asptica o sptica.
Se presenta pleocitosis (aumento de nmero de clulas) ligeramente o moderado en procesos de
meningitis asptica, tuberculosis, neurosfilis, tumores cerebrales y medulares y en casos de Erpes
Zoster.
Pleocitos con leucocitos inmaduros no es rara, por infiltracin leucmica en las meninges.
Recuento de Eritrocitos: Normalmente no hay eritrocitos en el LCR. Los hemates estn
aumentados patolgicamente en casos de hemorragia subaracnoidea, hematomas, etc.
Recuento Diferencial: Se realiza en la placa coloreada por Wrigth; la reaccin celular neutrfila,
linfoctica o mixta, depende de la naturaleza y duracin de la enfermedad.
Cuando existe pleocitosis se debe hacer un recuento diferencial cuyo resultado se puede asociar con
diferentes patologas a saber: Linfocitosis, tpica de la meningitis tuberculosa; tambin es linfocitaria la
pleocitosis que acompaa ciertas infecciones agudas, meningitis linfocitaria benigna, leptospirosis,
fiebre recurrente; igualmente se presenta en casos de meningo - encefalitis vrica, esclerosis mltiple
y meningitis sifiltica.
La polinucleosis Neutrofila se presenta en procesos spticos agudos como la meningitis purulenta,
meningoccicas, estrepto o neumocccicas, en abscesos meningoencefalticos y en la fase inicial de
la meningitis tuberculosa y la poliomielitis.
La polinucleosis Eosinofila se deba a parasitosis; es mucho ms escasa que las dos anteriores, pero
tiene gran valor diagnstico en la cisterciscosis cerebral.
Puede presentarse una reaccin mixta de neutrofilos, linfocitos, monocitos en una meningitis
bacteriana subaguda, durante las 2 3 primeras semanas de la meningitis tuberculosa, de la mictica
o durante la primera semana de la meningoencefalitis vrica.
11.3. OTRAS PATOLOGAS

La meningitis fngica debido al criptococo neoformans, puede asociarse a reaccin acelular con
respuesta mixta o con eritrocitos y linfocitos.
En las lipidosis cerebrales puede observarse histiocitos cargados de lpidos, pero tambin se ven
despus de la administracin intratecal de medios radiogrficos de contraste.
Despus de una hemorragia subaracnoidea se puede encontrar macrfagos cargados de
hemosiderina.
Un carcinoma primario o metasttico con invasin menngea puede sembrar el LCR de clulas
malignas; estas infiltraciones neoplsicas pueden asociarse con una disminucin de la glucorraquia.
La meningitis tuberculosa es difcil de diagnosticar, pues a menudo los microorganismos estn
ausentes en las extensiones teidas con Ziehl Neelsen y pueden ser difciles de demostrar en los
cultivos.
11.3.1. Tcnicas de Laboratorio

Es necesario centrifugar la muestra de LDR antes de someterla a estudios qumicos.
Glucorraquia: La misma tcnica que se est realizando en sangre.

Proteinorraquia: Los procedimientos ms comunes para estimar protenas consisten en medicin
de la turbidez cuando estas reaccionan con reactivos de precipitacin, como el cido sulfosalislico.
11.4 SEROLOGIA EN LCR

Preparacin del antgeno:
1. Depositar en un frasco esmerilado 100 Buffer - 125 del antgeno, mezclar poco a poco hasta
agregar 1.25cm del Buffer.
2. Inactivar el lquido problema por 30 minutos a 56 C, luego dejar enfriar para procesarlo.
Procedimiento:
1. Tomar 50 del LCR o 0.05 mm, agregar 1 gota del antgeno con aguja N 18. Agitar por 4
minutos y leer al microscopio por aglutinacin.
Si la muestra aglutina se dice que es reactiva se debe hacer la dilucin de la siguiente manera.
2. Toman 200 del LCR, agregar 200 de solucin salina (dilucin de 1:2).
3. Sacar de la dilucin anterior 200 y agregar 200 de solucin salina (dilucin 1:4).
4. Sacar de la dilucin anterior 200 y le agrego 200 de solucin salina (dilucin 1:8).
5. Continuar con las diluciones dependiendo de la aglutinacin de la muestra. Luego se toman
50 de cada dilucin y agregar una gota del antgeno con aguja N 18. Agitar por 4 minutos
en el rotador y leer al microscopio hasta donde llega la aglutinacin as:
2 Dils o 4 Dils o 8 Dils, etc. Reportar: Reactivo 1 en 4 Dils.
11.5. RECUENTO CELULAR

Debe hacerse durante la primera media hora despus de tomada la muestra ya que las clulas se
lisan con un reposo prolongado y se hace imposible un recuento exacto; debe emplearse para el
recuento celular el ltimo tubo tomado, ya que es menos probable que est hemorrgico debido a la
puncin traumtica y adems debe contener anticoagulantes.
Segn el aspecto de la muestra se lleva el LCR diluido o sin diluir a la cmara de Neubauer para
hacer el recuento total de clulas.
11.5.1. Recuento de Leucocitos

Si el lquido es transparente, se llena la cmara de recuento con un capilar (sin dejar burbujas), llenar
ambos lados. Se cuentan los cuatro retculos de blancos en ambas cmaras, se promedia el
resultado, se multiplica por 10 y se divide por 4 as:
Total Leucocitos
2
Leucocitos x 10
4
Leucocitos por mm3
Si el lquido es turbio, se diluye este en pipeta de blancos (igual que en sangre) hasta 0.5 con LCR y
completar a 11 con lquido de blancos o azul de toluidina.
Llenar ambas cmaras, contar los retculos de blancos, se promedia el resultado, se multiplica por 50
as:
Total leucocitos
2
Leucocitos x 50
Leucocitos por mm3
11.5.2. Recuento de Eritrocitos

Se monta el LCR en cmara. Montar ambas cmaras, contar los 5 retculos de rojo, promediar,
multiplicar el resultado por 10 y dividirlo por 5 as:
Ret A + Ret B
2
Eritrocitos
5
X 10 = Eritrocitos por mm3
Se debe especificar si estn normales o crenados v/n: 0 eritrocitos por mm3.
11.5.3. Recuento Diferencial

Si existe pleocitosis se debe hacer un recuento diferencial para determinar el tipo de clulas y su
porcentaje.
La muestra de centrfuga, se conserva el sobrenadante para estudios qumicos y del sedimento se
hace un extendido en un porta objetos, se deja secar y se colorea con Wright.
11.5.4. Otras pruebas

Se debe hacer frotis adicionales del sedimento y se tie uno con Gram para estudios morfolgicos de
bacterias y el otro servir en casos de sospecha de TBC, para hacer tincin de Ziehl Neelsen (cuando
existe el coagulo en tela de araa usar este para la tincin). El resto del lquido se debe congelar
para estudios virolgicos u otro anlisis posterior.
Los cultivos se realizaran de acuerdo a las tcnicas estandarizadas, cubriendo el aislamiento de toda
flora posible, BHI, agar sangre, agar chocolate y medio de Todd. Hewitt (enriquecimiento de
Neumococo).
Las muestras para cultivo de BK pueden sembrarse en la unidad de salud si se tiene el medio de
Lowenstein Jensen refrigerarlo y remitirlo. Para cultivo de Neisserias no se puede remitir ni
refrigerar la muestra ya que el Meningococo es muy lbil; la muestra debe sembrarse
inmediatamente.
12. DIRECTO HONGOS O KOH
Esta prueba permite observar microscpicamente la presencia de hongos en una muestra.

La muestra se obtiene haciendo un raspado en la lesin con una lamina porta objetos ya sea en piel o
cuero cabelludo.
Lo ideal es lograr que la lesin descame y a esta muestra se la agrega una gota de una dilucin
anteriormente preparada de KOH y tinta china (0.1 tinta china + 0.9 de KOH). Colocar la lamilla y
flamear levemente.
Observar microscpicamente en 40X toda la placa y se reporta lo observado en cantidad o si hay
ausencia decir negativo para hongos.
13. BK EN ORINA
Para la elaboracin del examen BK en orina, se debe tener en cuenta las condiciones para su
recoleccin de muestras para los exmenes de laboratorio
Centrifugar toda la orina y del sedimento que se obtiene hacer un extendido, dejar secar para luego
colorearlo como un BK.
14. BACILOSCOPIA EN JUGO GASTRICO
Centrifugar la totalidad de la muestra por un espacio de 10 minutos a 2.500 RPM, se descarta el

sobrenadante y el sedimento se somete a 2 procesos: Extendido y siembra.
14.1.
EXTENDIDO
Hacer un extendido del sedimento en una placa porta objetos, la cual es leda posteriormente por la
bacteriloga.
Decontaminar el sedimento con NAOH (hidrxido de Sodio al 4%) durante 2 minutos.
14.2.
SIEMBRA
Se siembra el sedimento en dos tubos de Ogawa de la siguiente manera:

Se procede a sembrar este sedimento con un aplicador estril en 2 tubos de Ogawa y luego se
remiten al laboratorio departamental, donde son ledos.
14. BACILOSCOPIAS
Para la elaboracin del examen de Baciloscopias, se debe tener en cuenta las condiciones para su
recoleccin de muestras para los exmenes de laboratorio
Procedimiento:
1. Utilizar placa porta objetos, nueva y lavada.
2. Extender la muestra uniforme y que quede esparcida en las 3 cuartas partes de la placa.
3. Secar al are y luego fijar al calor.
4. Colorear, segn Protocolo de Auxiliar rea de la Salud (Laboratorio)
15. TEST DE TZANCK

Para la realizacin de esta prueba es aconsejable limpiar la superficie de la lesin y con un bistur
raspar del fondo de la lesin hasta obtener buena cantidad de clulas.
En la mujer se ordena adems citologa vaginal.
La muestra obtenida se extiende en placas, se colorea con Wright; Observar el efecto cito patognico
y las inclusiones compatibles con herpes.
16. COLORACIN DE ALBERT (PARA CORYNEBACTERIAS)
En algunas de las cepas de corynebacterium Difteriae pueden verse al final de cada bacilo, en uno de
sus extremos, unos cuerpos polares compuestos de fosfatos polimerizados que se colorean
metacromticamente y que se conocen comnmente como grnulos metacromticos. Toman un
color diferente al del resto del bacilo y se asemejan a un fsforo con el cuerpo azul verdoso o verde y
la cabeza de color rojo, caf. Agrupados generalmente en empalizadas.
Procedimiento:
1. Fijar la placa previamente preparada con calor suave a la llama.
2. Cubrir la placa totalmente con colorante de Albert (colorante metal cromtico) dejar actuar
durante 10 minutos.
3. Enjuagar con agua corriente.
4. Dejar secar y observar bajo el objeto de 100x.
Existe un mtodo abreviado para hacer la coloracin as:

1. Impregnar la placa con colorante hasta cubrirla totalmente.
2. Colocar un mechero bajo la placa y calentar hasta que emita vapores.
3. Retirar la llama y repetir el proceso hasta completar 3 minutos.
4. Enjuagar con agua corriente.
1.6.1.
FROTIS PARA INVESTIGAR CORYNEBACTERIAS DIFTERIA
El paciente debe estar sentado con la cabeza un poco inclinada hacia atrs, presionar la lengua hacia
atrs con la ayuda de un baja lenguas.
Procedimiento
1.
Levantar la membrana con escobilln y luego tome la muestra por debajo de la membrana, ya
que en esta sola hay detritus celulares, leucocitos y muy escasos bacilos.
2.
Evitar en lo posible que sangre al desprender la membrana, para que la toxina no penetre en la
circulacin. El bacilo no es invasor.
3.
Sembrar en los medios apropiados y hacer el extendido para colorear. Si no es posible hacerlo
ah mismo, enviar al laboratorio en medio de transporte.
17. DIRECTO LEISMANIASIS

El directo de este parsito puede hacerse en preparacin coloreada con Wright.
El cultivo presenta mayores resultados. Uno de los medios ms utilizados es el NNN (Novy, MacNeal,
Nicolle)
Procedimiento
1. Preferir las lesiones ms jvenes, que generalmente estn menos contaminadas.
2. Raspar el borde del ndulo o de la lcera despus de haber profundizado un poco con el bistur.
Es preferible tomar la muestra entrando por piel sana del borde de la lesin.
3. Extender en una placa porta objetos.
4. Secar a temperatura ambiente y se colorear por 9 minutos con coloracin Wright.
18. FROTIS FARINGEO GRAM
1. Tomar la muestra con aplicador estril.

2. Introducir por la boca hasta la nasofaringe.
3. Hacer toser al paciente y luego retirar con cuidado.
4. Extender el material haciendo un pequeo crculo en el centro de la placa, nueva, limpia y
previamente flameada.
5. Dejar secar a temperatura ambiente.
6. Colorear con la coloracin Gram.
19. FLUJO VAGINAL
19.1. MUESTRA DE ENDOCERVIX

Tomada con espculo humedecido en solucin salina estril, no se debe usar ningn tipo de
lubricante
Procedimiento:
1. Tomar la muestra visualizando el cuello uterino
2. Remueve el moco y el exceso de flujo.
3. Introducir el aplicador estril en el canal endocervical y rotarlo suavemente.
4. Retira el aplicador y hacer el frotis en la placa.
19.2. MUESTRA DE VAGINA

O fondo de saco con otro aplicador, entender en la placa en la parte final.
20. SECRECIN URETRAL
Debe tomarse la muestra en el hombre sintomtico, preferiblemente sin asearse sus genitales.
Procedimiento:
1. Frotar con un aplicador estril el conducto urinario que debe ser visualizado al recoger el
prepucio.
2. Frotar suavemente el aplicador sobre el porta objetos.
3. Dejar secar al aire y colorear con Gram.
El Gram por si solo es diagnostico de la uretritis gonoccica en el hombre.
21. ESPERMOGRAMA
El esperma debe ser llevada al laboratorio inmediatamente sea recolectada. Est debe
empezarse a procesar antes de que transcurra 1 hora, porque las clulas pueden morirse.
Procedimiento:
1. Medir la cantidad en milmetros, luego con tirillas de pH, introducir un pedazo de tirilla en el
semen y se hace lectura en la tabla que trae la cintilla.
2. Para la viscosidad introducir un aplicador en el tubo de la muestra y determinar por la formacin
de hilos. Segn su consistencia estos hilos puede ser la viscosidad aumentada, normal o
disminuida.
3. Para la movilidad colocar una gota de semen entre lmina y laminilla y mirar al microscopio, all
se determina el porcentaje de espermatozoides normales unidireccionales, anormales hacia
direcciones diferentes, inmviles o pendulantes.
4. Para el recuento de espermatozoides, en pipeta de glbulos blancos llenar con esperma hasta
marcar 0.5 y con agua destilada se llena hasta 1.1; luego llenar la cmara de Neubauer y dejar
est en reposo por 15 minutos, se hace el recuento en la cmara de glbulos rojos (5 cuadrados)
y multiplicar por 1 milln o tambin se puede contar en uno solo de los cuadrantes de glbulos
blancos y multiplicar por 200000 mil.
5. Hacer un extendido de la muestra en un porta objetos, se deja secar y luego colorear con Gram.
6. Al secarse la placa mirar al microscopio donde se cuentan las clulas normales y las clulas con
anormalidad de cabeza, de cuello, de cola; en un recuento de 100 clulas y se dan en porcentaje.
22. CONTROL DE CALIDAD INTERNO
22.1. CITOQUMICO DE ORINA

El control de calidad del citoqumico de orina se realiza con soluciones de control positivo y negativo
para Uroanlisis (liquichek). Este control se monta cada ocho das.
Procedimiento:
Se Anexa Tcnica De La Casa Comercial
22.2. UROCULTIVO
Se hace control de la esterilidad del medio cada que se inicia un nuevo lote, sometiendo el urotubo al
proceso de incubacin de igual manera como se procede con las muestras del da y ste debe dar
negativo, garantizando la esterilidad del medio.
22.3. COPROLGICOS
Consiste en repetir el directo de solucin salina a todo coprolgico negativo. Este control se hace
diariamente.
22.4. PRUEBA DE GRAHAM (OXIUROS)

El control interno de esta prueba se hace de la siguiente manera:
1. Tomar una muestra al paciente.
2. Hacer dos lecturas, las cuales deben coincidir. (las lecturas deben hacerse por dos
bacterilogas diferentes).
22.5. SANGRE OCULTA EN HECES

1. Hacer control de los casetes de la prueba de sangre oculta fecal en placa cada mes,
sometindolas a una dilucin de sangre 1:5 (0.1ml de sangre + 0.4ml de solucin salina).
2. Observar la positividad de la prueba por la aparicin de dos lneas coloreadas (una lnea debe
estar en la banda de regin de control (C) y otra lnea debe estar en la banda de la regin de
la prueba (T).
22.6. AZUCARES REDUCTORES

1. Hacer control de la pastilla reveladora cada mes, utilizando orina de un paciente diabtico y
sometindola a todo el proceso.
2. Observar la positividad en el tubo por cambio de color.
22.7. PH
1. Para controlar esta prueba se utilizan dos soluciones de diferentes PH (cido bsico),
colocar una gota de cada una de estas soluciones en contacto con un trozo de la cinta
medidora de PH.
2. Comparar cada trozo de la cinta (cido bsico) con la escala de valores (PH) que trae el Kit
del reactivo.
22.8. TEST DE TZANCK

1. Hacer control realizando una placa de la lesin del paciente, la cual es coloreada.
2. Realizar lectura dos bacterilogas diferentes.
3. Realizar cada que llegue este tipo de muestra por lo espordico que es.
22.9. FLUJO VAGINAL

Comparar la concordancia entre el directo y la placa coloreada.
22.10. KOH
1. Montar una placa y comparar los resultados.
2. Hacer doble lectura (2 bacterilogas) de la muestra de un paciente al azar.
22.11. DIRECTO PARA LEISHMANIASIS

Como este es un examen muy espordico, se hacen lecturas dobles (2 bacterilogas) cada que se
presente un caso.
23. CONTROL EXTERNO DE CALIDAD
23.1. LABORATORIO DEPARTAMENTAL DE SALUD PBLICA

El Laboratorio Departamental de Salud Pblica (LDSP) hace control de calidad de placas de
Baciloscopia, Leishmania, Gram (ETS) y Gram lquidos estriles, as:
Leishmania: Examen directo para Leishmania. Se deben enviar la totalidad de las placas positivas
y el 10% de las negativas; si son menos de 10 placas se deben enviar todas.
Baciloscopia: Examen baciloscopia, coloracin para cido alcohol resistente (Ziehl Neelsen). Se
deben enviar la totalidad de las placas positivas y la siguiente negativa. El 10% de las negativas; si
son menos de 10 placas se deben enviar todas.
Gram de Flujo Vaginal o de Secrecin Uretral: Se deben enviar la totalidad de las placas con
diplococos gram negativos intracelulares y 5 placas negativas.
Gram de Lquidos Estriles: Se deben enviar la totalidad de placas positivas y el 10% de las
negativas; si son menos de 10 placas se deben enviar todas.
Las placas de los programas se deben enviar tres veces al ao y el Laboratorio Departamental las
recibe los primeros 10 das del mes asignado.
El Laboratorio Departamental de Salud Pblica (LDSP) evala la concordancia en la lectura y
observaciones tcnicas en cuanto al extendido y coloracin de las placas.
23.2. NOVALAB
Se hace control de calidad externo a las pruebas de Uroanlisis, y Parasitologa. Este programa
funciona con ciclos trimestrales
Procedimiento:
Se Anexa Tcnica de La Casa Comercial
Cuando llega el reporte con los resultados del control de calidad externo uroanalisis y
parasitologa se hace anlisis de cada uno de los parmetros medidos y se toman las medidas
preventivas cuando alguno no entra en el rango establecido por dicho control.
BIBLIOGRAFIA
-Manual de Laboratorio Facultad de Medicina Departamento de Microbiologa y Parasitologa/ autor.
Liliana lvarez, Luz Marina lzate, Gloria Jaramillo, Sofa Prez, Estela Restrepo, Mara Elena
Vsquez.
-Programa de evaluacin externa de Calidad Qualitest Control Novalab (seccin parasitologa y
uroanalisis).

Protocolo de Microbiologia Clinica

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PROTOCOLO DE MICROBIOLOGIA

DELIA ROSA HERRERA HERNNDEZ

Delia Rosa Herrera Hernndez

Paulo Andres Gutierrez

21. ESPERMOGRAMA __________________________________________________________ 34

LABORATORIO DEPARTAMENTAL DE SALUD PBLICA _______________________ 46

23.2. NOVALAB _____________________________________________________________ 47

Cara 1: Con Agar Cler.

Interpretacin de los resultados:

Nota aclaratoria: los urocultivos negativos no se descartan inmediatamente despus de su lectura,

4. SANGRE OCULTA EN MATERIA FECAL

SE ANEXA TCNICA DE LA CASA COMERCIAL

5. MTODO DE GRAHAM PARA EL DIAGNOSTICO DE OXIUROS

6. GRAM DE CUALQUIER MUESTRA

Muestra: Material fecal y tabletas reactivas (determinacin cuantitativa de la glucosa (azcar) en

SE ANEXA TCNICA DE LA CASA COMERCIAL

Esta prueba permite conocer la acidez o basicidad de determinada muestra.

SE ANEXA TCNICA DE LA CASA COMERCIAL

10. SECRECIN OCULAR

11. LIQUIDO CEFALORRAQUDEO (LCR)

Barrera Hemato Enceflica

11.2. EXAMEN CITOQUIMICO DEL LCR

11.2.1 Estudio Fsico:

Coagulacin: El coagulo en tela de araa es caracterstico de la meningitis tuberculosa; algunos

11.2.2. Estudio Qumico

Durante el primer ao de vida los niveles estn entre 30 y 100 mg/dl.

Tabla N1 - Composicin del LCR en algunas enfermedades

11.2.3. Estudio Microscpico

11.3. OTRAS PATOLOGAS

11.3.1. Tcnicas de Laboratorio

Glucorraquia: La misma tcnica que se est realizando en sangre.

11.4 SEROLOGIA EN LCR

11.5. RECUENTO CELULAR

11.5.1. Recuento de Leucocitos

Leucocitos por mm3

Leucocitos por mm3

11.5.2. Recuento de Eritrocitos

X 10 = Eritrocitos por mm3

Se debe especificar si estn normales o crenados v/n: 0 eritrocitos por mm3.

11.5.3. Recuento Diferencial

11.5.4. Otras pruebas

12. DIRECTO HONGOS O KOH

Esta prueba permite observar microscpicamente la presencia de hongos en una muestra.

14. BACILOSCOPIA EN JUGO GASTRICO

Centrifugar la totalidad de la muestra por un espacio de 10 minutos a 2.500 RPM, se descarta el

Se siembra el sedimento en dos tubos de Ogawa de la siguiente manera:

15. TEST DE TZANCK

16. COLORACIN DE ALBERT (PARA CORYNEBACTERIAS)

Existe un mtodo abreviado para hacer la coloracin as:

FROTIS PARA INVESTIGAR CORYNEBACTERIAS DIFTERIA

17. DIRECTO LEISMANIASIS

18. FROTIS FARINGEO GRAM

1. Tomar la muestra con aplicador estril.

19. FLUJO VAGINAL

19.1. MUESTRA DE ENDOCERVIX

19.2. MUESTRA DE VAGINA

20. SECRECIN URETRAL

El Gram por si solo es diagnostico de la uretritis gonoccica en el hombre.

22. CONTROL DE CALIDAD INTERNO

22.1. CITOQUMICO DE ORINA

22.4. PRUEBA DE GRAHAM (OXIUROS)

22.5. SANGRE OCULTA EN HECES