COLORACIONES

MICROBILOGICAS

COLORANTE
Loscolorantes, son sustancias que pueden tener un
origen natural o artificial y que se usan para
potenciar el color.
DIFERENCIA ENTRE TINCION Y COLORACION?

Coloracin: Ocurre a nivel de la superficie.

Tincin: Ocurre nivel molecular o celular

CLASIFICACION DE LOS COLORANTES

Segn su
origen

orcenina

Azul de
metileno,
safranina

Segn sus
propiedades
quimicas

Natural

Colorante
s acidos

Eosina

artificial

Colorante
s bsicos

Azul de
metileno

Colorante
s neutros
Colorante
s
indiferent
es

Eosinato de
azul de
metileno
Colorante
sudan

MECANISMO DE
SIMPLE COLORACIONES
Tamao, arreglo y
DIFERENCIAL

forma
Un solo tinte
se divide:
DIRECTA
Tie bacteria
Ejemplos:
tincin azul de
metileno
Azul de lactofenol

INDIRECTA
tie el fondo pero no
a la
Bacteria
Ejemplos: tincin
negativa

Separar y
clasificar
los
microorganismos
observados de
acuerdo a sus
Caractersticas
Ms de un tinte
Ejemplos:
Tincin Gram y
cido
Resistente

ESPECFICA

Para identificar
estructuras:
Ejemplos: Tincin
de flagelos,
espiroquetas
cpsulas y
esporas.

Coloracin simple
Tie las clulas de los

microorganismos
proporcionando
informacin sobre
MORFOLOGA, definida por
el tamao, forma,
agrupacin USANDO
UNICO COLORANTE como
safranina, azul de
metileno, cristal violeta y
carbolfuesina,etc
Se le puede aadir un
mordiente.

Coloracin simple
C.S DIRECTA
El reactivo que se usa,
que preferentemente es
de tipobsico y contiene
un cromgeno
(compuesto que da color
al tinte) con carga
positiva, ya que la pared
celularde las bacterias
posee componentes con
carga negativa que
atraen y enlazan el
cromgeno.

Todas las clulas absorbern el colorante

y quedarn teidas del mismo color.

EJEMPLOS :COLORACION CO AZUL DE METILENO, AZUL DE

LACTOFENOL,SAFRANINA ,CRISTAL VIOLETA

Procedimiento en el
laboratorio
1.-Frotis: hacer un extendido a partir de un
cultivo bacteriano en un portaobjetos.
2.-Fijar la preparacin exponiendo el
portaobjetos rpidamente a la llama del
mechero evitando un excesivo
calentamiento.
3.-Cubra el extendido con una pequea
cantidad de azul de metileno y djelo actuar
por un minuto.
4.-Lave con agua hasta eliminar el exceso de
colorante.
5.-Seque la preparacin al aire o al mechero.
6.-Examine las preparaciones teidas al
microscopio, con el lente de inmersin.

COLORACION DE AZUL DE
LACTOFENOL
Colorante acido que tie que tie el citoplasma y la quitina presente
en las celulas fungicas.
til para la identificacin de estructuras y esporas de hongos
Procedimiento en el laboratorio
1.-Hacer una extendido a
partir de un cultivo en un
portaobjetos.
2.-Cubra la muestra con azul
de lactofenol.
3.-cubrir con cubreobjetos.
4.-observar.

COLORACION DE AZUL DE
LACTOFENOLFotomicrografa de
hongos filamentosos
con el mtodo de
azul algodn de
lactofenol.
Exserohilum
sp. (izquierda);
Mucor
spp. (derecha)
(aumento 40x).
Imagen en color
en:
www.medigraphic
.
com/rid

C. SIMPLE
INDIRECTA

Las clulas se dejan sin teir, pero se

colorea en cambio el medio que las
rodea. Lo que se ve, por tanto, es el
perfil de las clulas.

COLORACION NEGATIVA

Permite observar las bacterias con

color translucido sobre un campo
oscuro, utilizando LA TINTA CHINA.

Limitado por la presencia de un

fondo oscuro que no permitir la
correcta identificacin y detallada de
los componente de dichas clulas.

Manifiesta la presencia
del hongo cryptococcuc
neoformans, causante de
la MENINGITIS

COLORACIN NEGATIVA
PROCEDIMIENTO EN

LABORATORIO
1.-Hacer un extendido a
partir de un cultivo
bacteriano en un
portaobjetos
2.- Cubra el extendido con
tinta china
3.-Cubrir con portaobjetos
4.-Observar

COLORACIN
DIFERENCIAL

COLORACIN
DIFERENCIAL
El colorante utilizado pone de manifiesto
diferencias entre clulas bacterianas o entre
partes de una misma clula. Estas tcnicas
utilizan mas de un colorante o bien ciertos
reactivos complementarios para la tincin.
Ejemplos: Tincin de Gram, Tincin de ZiehlNeelsen.

TINCIN DE GRAM
Esta tincin diferencial depende de la
estructura de la pared celular de las
bacterias.
Las bacterias Gram negativas tienen
una membrana externa de la que
carecen las bacterias Gram positivas.
La tcnica consiste en una tincin
primaria, una decoloracin y una
tincin de contraste.

MTODO DE
TINCIN:

Tincin de
Resistentes)

ZIEHL-NEELSEN

(cido

Alcohol

Esta tincin permite diferenciar micobacterias,

bacterias con cidos miclicos en su pared celular
pertenecientes a los gneros Mycobacterium y
Nocardia.
Manifiesta la
capacidad de resistir a
la decoloracin
gracias al alto
contenido de lpidos
complejos (cidos
miclicos) y ceras que
poseen algunos
microorganismos en
su pared celular.
Mycobacterium tuberculosis

Tinciones
especiales

 las tinciones especiales incrementan el contraste

en las clulas microbianas y revelan estructuras
particulares, entre las que se incluyen
endosporas, los flagelos y las cpsulas.

TINCIN DE ESPORAS
MTODO WIRTZ-CONKLIN

ESPORAS:
La espora bacteriana es un
cuerpo refringente oval
formado dentro de la
clula . Esta puede estar
ubicada en el centro o en
un extremo. La espora
puede tener dimetro
mayor que la bacteria
vegetativa y ser deformante
de ella.

PROCEDIMIENTO:

Preparar un frotis.

Lavar con agua corriente.

Lavar y secar.

Cubrir con verde malaquita

y calentar hasta el
desprendimiento de
vapores por 5 minutos.
Colorear con safranina por 1
minuto.
Observar.

TINCIN DE CPSULAS

La cpsula bacteriana o
glucoclix es una capa que
se forma en la parte
externa de la pared de la
mayora de las bacterias.

TINCIN DE CPSULAS POR

EL MTODO DE HISS

Preparar un frotis.

3.- Lavar con solucin acuosa

de sulfato de cobre al 20%.

4.- Lavar con agua corriente

y secar.

5.- Observar.

2.- Cubrir fucsina bsica y

calentar hasta el
desprendimiento de vapores
por 30 segundos.

TINCIN DE
ESPIROQUETAS

bacterias Gram negativas

largas, delgadas,
helicoidales y mviles.

Treponema, Borrelia y
Leptospira

TINCIN DE ESPIROQUETAS
CON EL MTODO DE VAGO

Con el palito mondadientes obtener

una muestra de sarro dentario y
realizar un frotis en capa fina
extendiendo en sentido espiral de
adentro hacia fuera.

Fijar el frotis al calor suave

Lavar con agua corriente

Lavar con agua corriente

Cubrir con Mercuro cromo durante 3

minutos
Cubrir el frotis con Violeta de genciana
por 3 minutos
Secar y observar al microscopio con
objetivo de inmersin.

TINCIN DE FLAGELOS

Flagelo:
Es un orgnulo filiforme.
Provee de movimiento a las
clulas.

Los flagelos son estructuras

demasiado finas para poder
ser visibles en el
microscopio de luz.

MTODO DE GRAY

Preparar una suspensin de la bacteria

en agua estril.

Sobre el portaobjetos flameado y frio

colocar 5 gotas de suspensin.

Dejar secar al aire, no calentar.

Cubrir con solucin de carbol-fucsina

durante 5 a 10 min.

Lavar con agua y dejar secar al aire.

Los flagelos se observaran de color rojo.

Cubrir con el mordiente durante 10 min.

Lavar con agua, tratando de no arrastrar
la preparacin.

Observar al microscopio con objetivo de

inmersin.