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REPLICACION

DEL ADN
WILLIAM BENJAMIN RUIZ CHANG
MAGISTER EN BIOQUMICA

REPLICACION DEL DNA


La replicacin es el proceso mediante el cual, a
partir de una molcula de DNA doble hlice, se
sintetizan dos molculas idnticas. Tiene lugar
cada vez que se divide una clula, ya que las dos
clulas hijas han de tener exactamente, la misma
dotacin gentica que la progenitora.

CARACTERISTICAS
Es Semiconservativa
Es Bidireccional
Es Semidiscontinua
Es Asincronica
Es monofocal en procariotas
y multifocal en eucariotas
Requiere de Cebadores
Ocurre en el perodo S.

Molcula DNA
parental

Cadena hija
(nueva)

Molculas de
DNA hijas

Es Semiconservativa
A partir de la doble hlice de una molcula de DNA se originan dos molculas
de DNA, ambas compuestas por una cadena original (preexistente) y una
cadena nueva (recin sintetizada).
Es decir, que las dos cadenas de la molcula progenitora se separan y sirven
cada una de molde para la sntesis de una nueva cadena hija complementaria,
siguiendo la regla normal de apareamiento.

Nucletidos

Molcula parental
de DNA

Ambas cadenas parentales


Sirven como molde

Dos molculas de DNA


hijas idnticas

Es Bidireccional
Al abrirse la doble hlice se
forma
una
estructura
llamada
burbuja
de
replicacin, cuyo tamao
aumenta a medida que
avanza la separacin de las
dos cadenas de DNA,
evento que se produce en
forma simultnea en los 2
extremos de la burbuja.
Cada burbuja, tiene dos
horquillas de replicacin que
a partir de ese punto de
origen comn avanzan en
ambas direcciones opuestas

Origen de
replicacin

Origen de
replicacin

Origen de
replicacin

Cadena parental
Cadena hija

Burbuja de
replicacin

Dos molculas de DNA hijas

Es Asimtrica

La cadena hija que


adopta como molde a la
cadena progenitora que
corre en direccin 35
se sintetiza en forma
continua, al crecer en
direccin 53, y se
denomina
cadena
adelantada
(leading
strand).
La otra cadena hija, cuyo molde es la cadena del DNA progenitora que corre
en direccin 53 es sintetizada de un modo singular, ya que para poder
crecer en esa direccin debe sintetizarse en direccin opuesta al avance de la
horquilla de replicacin. El problema se supera haciendo de que la sntesis
sea discontinua, lo cual significa que la nueva cadena se sintetiza de a
pequeos fragmentos y se le llama cadena retrasada (lagging strand).

La sntesis de la cadena
retrasada se lleva a
cabo en la direccin
opuesta
a
la
del
movimiento
de
la
horquilla de crecimiento,
a partir de una serie de
iniciadores
de
RNA
cortos formados por la
primasa en mltiples
sitios de la segunda
cadena
molde.
Los
segmentos resultantes
de RNA ms DNA se
conocen
como
fragmentos de Okasaki.

La Replicacin es Multifocal en Eucariotas

En eucariotas, para poder llevar a cabo la replicacin en un tiempo razonable, ha de


ser multifocal, es decir, empezar por muchos puntos a la vez. Se ha comprobado que
en el DNA de clulas de mamferos existen cerca de 50 000 a 100 000 replicones.
En cambio la replicacin del DNA bacteriano es monofocal, es decir, existe un slo
origen de replicacin.

Requiere de Cebadores
Para empezar la sntesis de
DNA se requiere una cadena
de nucletidos para agregarle
un nuevo nucletido. Cada
fragmento de Okazaki se
inicia con un RNA cebador
primer (~10 bases de largo).

Ocurre en Fase S del ciclo


celular. La replicacin del DNA
ocurre con alta fidelidad dentro de un
perodo de tiempo determinado en
forma precisa dentro del ciclo celular.
Sntesis de DNA = replicacin

REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION
EN PROCARIOTAS

EN EUCARIOTAS

DNA Helicasa.
Protenas SSB (Single- Strand binding).
Topoisomerasas I y II
RNA primasa.
DNA Polimerasas (DNA Pol)
I, II y III
Pirofosfatasa.
DNA Ligasa
DNA molde o template
Cebadores
Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato:
(dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Mg++
Abrazadera

DNA Helicasa.
Protenas SSB (Single- Strand binding).
Topoisomerasas I y II
RNA primasa.
DNA Polimerasas (DNA Pol)
,, , ,
Pirofosfatasa.
DNA Ligasa
DNA molde o template
Cebadores
Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato:
(dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Mg++
PCNA (Proliferating cell nuclear antigen)
ORC (origin recognition complex)
Nucleasa reparadora

DNA POLIMERASAS (DNA Pol)

La DNA Polimerasa, agrega un nucletido al extremo 3 de la cadena de DNA en


crecimiento y forma un enlace fosfodister entre este extremo y el grupo 5-fosfato de
nucletido entrante.
El nucletido trifosfato entrante provee la energa necesaria para esta reaccin por la
hidrlisis de los dos fosfatos terminales (PPi).
Este pirofosfato es luego hidrolizado a fosfato inorgnico (Pi), lo cual permite que la
reaccin de polimerizacin sea irreversible.

DNA HELICASAS Y PROTENAS SSB.


Una helicasa y las protenas de unin a las monocadenas (SSB) trabajan para desenrollar
y mantener las cadenas de DNA separadas antes del avance de la horquilla de replicacin
Las helicasas son una clase de enzimas capaces de desplazarse a lo largo del DNA
utilizando la energa de la hidrlisis del ATP, para separar las cadenas.
Las protenas SSB mantienen las cadenas separadas

Topoisomerasas
Las Topoisomerasas tipo I relajan el DNA (hacen desaparecer regiones
superenrolladas) por corte y cierre de una cadena del DNA.

ETAPAS DE LA REPLICACION
INICIACION
Reconocimiento de orgenes de replicacin
Separacin de hebra
Posicionamiento de maquinaria de
replicacin

ELONGACION
Crecimiento bidireccional de la horquilla de
replicacin
Replicacin semiconservativa,
semidoscontinua, coordinada.

TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin
Desensamble de replisomas

1) INICIACION

La sntesis del DNA se inicia en regiones especiales llamadas orgenes de replicacin.


Los orgenes de replicacin tpicamente contienen mltiples secuencias repetidas cortas.
Estos segmentos de DNA singulares son reconocidos por protenas multimricas que se unen
al origen y, a su vez, reclutan hacia ste otras enzimas de la replicacin.

La iniciacin de la replicacin del


DNA en E. coli, se produce por la
unin de la protena dnaA al nico
origen de
replicacin (oriC),
seguida por la fijacin de la DnaB,
una helicasa que disocia el DNA a
la altura de la horquilla.
La asociacin de la primasa (dnaG)
a este complejo forma un
primosoma. Tras la sntesis del
iniciador la primasa se separa.

2) ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS:


Una vez que el origen de replicacin se ha formado, el alargamiento para formar la cadena
adelantada progresa sin mayor dificultad.
Una primasa se une a un sitio adyacente a la helicasa en el segmento monocatenario del
molde de la cadena retrasada e inicia la sntesis de otro iniciador de RNA, el mismo que la
polimerasa procede a alargar para formar otro fragmento de Okasaki.
El ncleo polimersico que sintetiza la cadena adelantada se desplaza, junto con su
abrazadera de subunidad (estabiliza a la DNA poli), a lo largo de su molde en la
direccin del movimiento de la horquilla, y as alarga la cadena.

Una vez que los cebadores de la


cadena
retrasada
han
sido
elongados por la DNAP III, ellos
son removidos y se rellena dichos
espacios por la DNAP I.
La enzima tiene actividad
polimerasa
53,
3
5
exonucleasa (proofreading) en
una sola cadena polipeptdica. La
exonucleasa 53 remueve los
cebadores,
mientras
que
la
polimerasa funciona simultneamente llenando los espacios con
DNA por elongacin del extremo 3
del
fragmento
de
Okasaki
adyacente. El enlace fosfodister
final entre los fragmentos es
catalizado por la DNA ligasa

3) TERMINACIN
La replicacin finaliza cuando una horquilla de replicacin se encuentra con el otro lado
del cromosoma circular en el lugar de terminacin, la regin ter ( ). La regin ter est
formada por un par de secuencias ter de repeticiones invertidas.
Cada secuencia ter evita una progresin posterior de una de las horquillas de replicacin
cuando se une una protena de unin ter (TBP) de 26 KDa.
Las dos molculas hijas de DNA se separan porque acta una topoisomerasa de tipo II.

(T1)

(T2)

LA DNA POLIMERASA HACE UNA LECTURA DE


PRUEBA (PROOFREADING)
Muchos errores de copiado
que se producen durante la
replicacin del DNA son
corregidos por la funcin
de lectura de prueba de la
DNA
Polimerasa,
que
pueden reconocer bases
errneas (mal apareadas)
en el extremo 3 de la
cadena en crecimiento y
luego extraerlas por medio
de una actividad inherente
de exonucleasa 3 5.

DNA POLIMERASAS EUCARIOTICAS: , , , y .

Las enzimas son similares a aquellas involucradas en la replicacin


del DNA bacteriano. La DNA topoisomerasa II est involucrada en
aliviar superenrollamientos positivos en el DNA, mientras que la
helicasa desenrolla las dos cadenas.
LA DNA Pol- tiene baja procesividad y una primasa asociada y
carece de actividad exonucleasa. Est involucrada en la sntesis
de la cadena retrasada. Es fuertmente inhibida por afidicolina
(fuerte tambin para y )
DNA Pol tiene alta procesividad en presencia de PCNA (tiene
una funcin homloga a la subunidad de Pol III de E. coli ) y no
tiene asociada una primasa, sugiriendo que replica la cadena lder
eucaritica.
DNA Pol es encontrada en la mitocondria y replica su DNA.
DNA Pol y tienen buena procesividad y estn involucradas en la
reparacin del DNA.

La capacidad para sintetizar largo DNA es conferido a la DNA Pol- por el antgeno
nuclear de clulas en proliferacin (PCNA), de funcion semajante a la abrazadera .
El PCNA est formado por 3 subunidades monomricas que forman un aro que se une
a la polimerasa y no al DNA para impedir desprendimiento de la enzima ms no su
deslizamiento.
Los cebadores son eliminados por una nucleasa reparadora y su lugar lo ocupa una
pieza equivalente de DNA. El proceso culmina al actuar la DNA ligasa.

QU SON LOS TELMEROS?

Estn localizados en los extremos de


los cromosomas
Sin los telmeros, los cromosomas
son inestables y pueden combinarse
con otros cromosomas para formar
cromosoma dicntricos o anillos
Protegen al cromosoma de la
degradacin.
Permiten la replicacin completa de
cada cromosoma
Tienen unas 6-10 kilobases, y
consisten de unas 250 1500
repeticiones de una secuencia rica en
G, en los vertebrados es TTAGGG
Aade unidades sencillas de la
repeticin a los extremos de los
telmeros previniendo el acortamiento
de los cromosomas
Contiene un molde de ARN que
sirve para sintetizar el ADN.