DETECTOR DE GLUCOSA

EN SANGRE

Fundamentos Tericos
Se basa en el principio o tcnica de
Amperometra (medicin de la cantidad de
corriente que circula por el circuito analizado),
la cual mide la corriente elctrica que pasa por
un par de electrodos haciendo electrolisis. Uno
de los reactivos es el analito buscado y la
corriente medida es proporcional
a su
concentracion. Esto se logra si se trabaja en
condiciones donde el nico mecanismo de
transporte actuante con el analito sea la
difusin.

Biosensores
Instrumentos analticos que transforman
procesos biolgicos en seales elctricas
u pticas y permiten su cuantificacin o
tambin se puede definir como:
Elemento detector que responde al
sustrato que se est midiendo es
biolgico en su naturaleza

Utilizan la especificidad de los procesos

biolgicos:
Enzimas
x
Sustratos
Anticuerpos x
Antgenos
Lectinas x Carbohidratos
Complementariedad de cidos nucleicos.

Para obtener una respuesta muy selectiva de un

analito. Sus Ventajas son :

Reutilizacin
Menor manipulacin
Menor tiempo de ensayo
Repetitividad

TIPOS DE BIOSENSORES
BIOSENSORES ELECTROQUMICOS
Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas
con los electrones involucrados en procesos redox
Potenciomtricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones
Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia
asociados con cambios en el ambiente inico de las soluciones
BIOSENSORES TERMOMTRICOS
BIOSENSORES PIEZOELCTRICOS
BIOSENSORES PTICOS
De onda envanescente
Resonancia de plasma superficial
BIOSENSORES CELULARES
INMUNOSENSORES

Cmo se mide la glucosa en la

sangre?
La reaccin bsica catalizada por
esta enzima (D - glucosa) es la
siguiente:

 La D-glucosa es la hexosa ms comn. Est

presente en muchas plantas, y es el azcar de la
sangre. La glucosa que se puede encontrar en
animales y plantas es la -glucopiranosa
monohidratada dextrgira que es un constituyente
del almidn, celulosa, sucrosa y multitud de
glicsidos, a partir de los cuales puede obtenerse
mediante hidrlisis cida o enzimtica. La glucosa
es esencial para el crecimiento de diferentes tipos
de clulas, habindose demostrado que es un
precursor en la sntesis de amino cidos
nutricionales no esenciales, pirimidinas, purinas,
hidratos de carbono y lpidos de las clulas.

 Por otro lado, el consumo de glucosa

tambin es un indicador de la actividad
metablica
celular.
Puede
haber
consecuencias indeseables por un exceso en
la concentracin de glucosa, como una
represin catablica. Hay que tener en
cuenta tambin que, dentro de los azcares,
slo la glucosa ingresa directamente en el
metabolismo energtico dependiente de la
insulina y se utiliza en todos los tejidos.

 Los mtodos clsicos para la determinacin

de azcares se basan en la determinacin
de la actividad ptica (polarimetra) o en la
reduccin de una disolucin alcalina de
cobre
Sin embargo, estos mtodos estn sujetos a
tantas interferencias que hay que recurrir a
la separacin de cada uno de los azcares
por cromatografa de gases o en capa fina,
o al empleo de mtodos enzimticos

Reaccin de la glucosa con

O2
Las enzimas especficas de la glucosa son
la glucosa oxidasa (GOD), la glucosa
deshidrogenasa (GDH) y la glucosa-6fosfatodeshidrogenasa (G-6-PDH). De
ellas, la ms extendida para aplicaciones
analticas es la glucosa oxidasa, que oxida
la glucosa a cido glucnico y perxido de
hidrgeno, proporcionando multitud de
posibilidades de monitorizacin.

DETERMINACIN DE
GLUCOSA
O2
CH2OH
H

CH2OH
O

H
OH

H
OH

OH
H

Glucosa
Oxidasa

H
OH

OH

OH

Glucosa + O2

H
H2O2

OH

-gluconolactona + H2O2

La glucosa se determina por la disminucin de la

concentracin de oxgeno molecular disuelto
cuando la glucosa oxidasa cataliza la reaccin
redox

Por lo que respecta a la determinacin de glucosa a travs

de la deteccin amperomtrica del perxido de hidrgeno
generado, sta se puede llevar a cabo bien mediante la
monitorizacin directa del H2O2, o bien a travs de la
monitorizacin electroqumica de un mediador de la
reaccin enzimtica de la peroxidasa.
Esta ltima alternativa est basado en la coinmovilizacin
de glucosa oxidasa, peroxidasa y ferroceno en una matriz
compsita de grafito-Tefln.
El esquema de las reacciones enzimticas y electrdica
que tienen lugar es :

Mediadores
redox en
biosensores
amperomtrico
s
Oxidasas ms especficas para el
reactivo a oxidar
Rpidas velocidades de transferencia
de electrones
Capacidad para ser regenerados
fcilmente
Retenibles en membrana
biocataltica
No reaccionar con otras molculas,
incluyendo oxgeno molecular

Algo de historia..
Dentro de los electrodos enzimticos el mayor nmero de biosensores
desarrollados corresponde sin lugar a dudas a los que se basan en la
inmovilizacin de glucosa oxidasa, dada la alta estabilidad de esta
enzima y la gran utilidad de estos sensores en el mercado de los
anlisis de glucosa en sangre (OConnell y Guibault, 2001). De hecho,
la glucosa oxidasa se suele emplear como enzima modelo para el
desarrollo de un gran nmero de sensores enzimticos cuya
metodologa se emplea posteriormente para disear otros biosensores
con diferentes enzimas. Por ello, desde 1962, ao en el que se report
el primer biosensor de glucosa oxidasa, el seguimiento de las
publicaciones de estos biosensores puede servir como indicador de la
evolucin de los biosensores amperomtricos en general.
La glucosa oxidasa no transfiere electrones directamente a electrodos
convencionales, debido a que una gruesa capa proteica rodea su centro
FAD, hecho bastante comn entre las flavoproteinas. Dicha capa
introduce una separacin espacial en la pareja dador/aceptor de
electrones y, por lo tanto, existe una barrera intrnseca a la
transferencia de electrones. Por ello, la minimizacin de esa distancia
es crucial para asegurar un funcionamiento ptimo de esta enzima
cuando se trabaja con biosensores amperomtricos (Wang, 2001). As,
desde los primeros diseos en los que la monitorizacin estaba
enfocada al empleo de electrodos de Clark, se ha pasado a la

Volviendo al concepto de un SENSOR

ENZIMATICO o BIOSENSOR DE GLUCOSA
Este tipo de dispositivo funciona inmovilizando la
enzima en la superficie del electrodo y el producto de
la reaccin es detectado andica o catdicamente.
La enzima glucosa oxidasa esta mantenida junto a un
electrodo de platino entre membranas. La glucosa
oxidasa cataliza la reaccin redox producindose
como producto a la glucolactonasa o acido gluconico
con peroxidasa, la cual esta ultima es oxidado a
700mV en la superficie del electrodo de platino,
produciendo una corriente electrica que es
directamente proporcional a la cantidad de glucosa
en la muestra.

Reactor

Transductor

Amplificador

S
4.328

P
Electrodode
referencia

Material biolgico + Analito

Analito unido

Respuesta biolgica

Respuesta Electrnica

Respuesta (Mxima respuesta electrnica posible) x (Concentracin del analito)

=
electrnica (Constante de semisaturacin) + (Concentracin del analito)

Unidades funcionales de un
biosensor

Cinticas de reaccin en biosensores

Se han desarrollado un gran nmero

de biosensores amperomtricos para
la cuantificacin de glucosa en
sangre, utilizando la mayora de ellos
un electrodo de Clark o un electrodo
de grafito como transductor.

Existen tres tipos de transductores que

pueden ser utilizados para medir la
concentracin de glucosa:
- Sensores de oxigeno, los cuales miden la
concentracin de oxigeno, convirtindola en
una corriente.
- Sensores de pH, miden la produccin de acido
glucnico, convirtiendo el cambio de pH en
una diferencia de potencial.
- Sensores de Perxido, los cuales miden la
concentracin de perxido, convirtiendo dicha
concentracin en una corriente elctrica.

Electrodo de Clark
(A) Electrodo de Platino,Pt
(B) Electrodo de plata y
Cloruro de plata, Ag/AgCl
(C) Electrolito de cloruro de
potasio saturado, KCl
(D) Membrana (Teflon?)
(E) Retencin de goma
(F) Fuente de poder
(G) Ampermetro

Diferencia importante
A diferencia de los electrodos ya
vistos:
potencial de xido reduccin (Eh,
potencial de Nernst, potencial de
hidrgeno, etc.)
pH

el electrodo de Clark tiene los dos

electrodos en la misma solucin de
electrolito, es decir, no utiliza una
referencia separada, conectada por

Principio de operacin
En el electrodo se desarrolla la
reaccin catalizada (por Pt) de xido
reduccin:
O2 + 4 e + 2 H2O 4 OH
La reaccin requiere que se movilicen
4 electrones
Los electrones provienen de la fuente
de poder que polariza 0,7 Volts
La reduccin de oxgeno genera
alcalinidad (o consume cido, que es lo

Semi Reacciones
4 Ag 0 4Cl
4 AgCl 4e Andica
4 H 4e O2
H 2O Catdica

Si no hay oxgeno, la reaccin

no puede ocurrir y no habr
flujo de electrones
Los electrones provienen de la
fuente de poder de unos 0,7 V

Oxgeno y corriente
El sistema de medicin de
corriente elctrica mide,
exactamente, el flujo de cargas
por unidad de tiempo
En la cmara del electrodo Clark
se consumir el oxgeno y se
terminar la reaccin si no
hubiese flujo de O2
Al terminar la reaccin, no habr
corriente que medir (el
ampermetro leer 0 mA)

Electrodo de Oxgeno

En este principio se
basa el primer y ms
sencillo biosensor
Determinacin de
glucosa
Electrodo de oxgeno
de Clark

Las nuevas tecnologas y los nuevos

biosensores de glucosa

Biosensor que detecta

concentracin de glucosa en
sangre.
Construido y vendido para
el control de los enfermos
diabticos.

rea de deteccin dispositivo con electrodo de un solo

uso
Deposicin sobre una tira de plstico. Consta de
electrodo de referencia Ag/AgCl y electrodo de
carbono con glucosa oxidasa y mediador de
ferroceno
Ambos electrodos cubiertos con tejido hidroflico. Paso
de molculas de diferente tamao, difusin
homogenea, evita evaporacin desigual
Duracin 6 meses
Deteccin 2-25 mM en una gota de sangre
Resultado en 30 segundos

Los requerimientos que debe cumplir un

biosensor de glucosa, para que sea viable su
comercializacin son:

Exactitud
Buena resolucin
Rango dinmico
Velocidad de respuesta
Compensacin de temperatura
Insensibilidad frente a interferencia
elctricas o del medio ambiente
Posibilidad de calibracin y testeo.

FIN