La cristalizacin es el proceso mediante el cual las molculas se ordenan de un

modo natural formando un retculo repetitivo que denominamos cristal. No es

objeto de estas pginas hacer una presentacin exhaustiva de las diferentes
tcnicas de cristalizacin que se pueden encontrar en muchos libros de texto o
en diferentes pginas web, y slo nos detendremos brevemente en algunas de
las tcnicas ms extendidas que se usan para obtener cristales de protenas.
Sin embargo, para principiantes se recomienda leer el panfleto preparado
por la UNESCO para crecer cristales nicos.
El experimento de cristalizacin comienza con una solucin de protena
relativamente concentrada (entre 2 y 50 mg/ml) a la que, de algn modo, se le
aade lentamente algn reactivo, con la intencin de reducir la solubilidad de
la protena y generar una precipitacin controlada de la misma. Si
posteriormente se fuerza un incremento paulatino de concentracin y se
controlan las condiciones normalmente se generan diminutos ncleos
cristalinos cuyo ulterior crecimiento puede dar lugar a cristales de tamao
adecuado para los experimentos de difraccin (entre 0.1 y 0.5 mm).

Los esquemas superiores muestran, genricamente las diferentes zonas de un sistema protena
en funcin de las concentraciones de ambos componentes.

Las zonas de color amarillo (izquierda) y blanco (derecha) representas las condiciones en las qu

estara solubilizada. En la zona de color azul la protena dejara de ser soluble y aparecera com

precipitado. Ambas zonas estn separadas por otra (de color rosa) en donde existe una ligera s
idnea para la nucleacin y crecimiento cristalino.

Por lo tanto, para maximizar la posibilidad de xito de un intento de cristalizacin, es necesario

distintos experimentos, partiendo de diferentes posiciones iniciales, es decir, de diferentes conc

de protena y precipitante (flechas de diferentes colores en el esquema de la derecha).

El mtodo ms comn para estos experimentos es el basado

de la gota colgante.

Se colocan unos pocos microlitros (1-2 l) de la solucin de p

en el centro de un cubre-objetos de vidrio y se le aaden otro

microlitros de la solucin del precipitante contenido en un po

al cual previamente se le ha equilibrado su pH mediante un t

El cubre-objetos que contiene a la gota de mezcla se le da la

con l se tapa el pocillo mencionado. Este sistema cerrado ev

por equilibrio de vapor y como la mezcla de protena y precip

en la gota est menos concentrada que la solucin de precip

en el pocillo, el agua de sta se evaporar, unindose a la so

del pocillo. Como resultado de este proceso, la concentraci

Esquema de un pocillo de
cristalizacin con el mtodo de la
gota colgante

la protena y del precipitante aumentarn lentamente en la g

y si las condiciones son las adecuadas, se formarn cristales

En el mercado existen cajas que contienen un nmero elevad

estos pocillos (24 o ms), de tal modo que se puedan etiquet

almacenar con facilidad para su ulterior observacin a travs

una lupa-microscopio, tal como se muestra en la figura de a

Si las condiciones son adecuadas, los

cristales crecen en la gota con la
Como ayuda en la preparacin de las diferentes condicion
apariencia que se muestra en la
imagen superior, tomada a travs de desarrollado robots de cristalizacin que simplifican much
una lupa-microscopio.
para rellenar las cajas que contienen las diferentes condi

pudindose llenar una caja de cristalizacin en segundos

DISCUSIN:
La cristalizacin de protenas se obtienen a partir de soluciones concentradas de protena pura. El mtodo habitual es el
de la gota colgante. La cristalizacin es muy sensible a la temperatura, pH, fuerza inica, y a la presencia de otras
molculas en la disolucin. Hay que probar muchas condiciones hasta acertar. Segn estudios existen robots y kits
comerciales que ayudan a encontrar las condiciones adecuadas. Los cristales de protenas contienen
aproximadamente un 50 % de disolvente (entre 25-90 %). Esto tiene una ventaja (estn casi en disolucin y su
estructura no se altera) pero existe un inconveniente son frgiles.