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Pharm. MM. Trad. Afr. 1998, Vol.lO, pp.68-79.

KASE: VALORISATION D'UNE PLANTE MEDICINALE


ANTI-INFLAMMATOIRE
)

.,'

Par

M. LOMP01 ; S. OUEDRAOG01 ; S. SOURABm1 ; I.P. GUISSOUl -2


Institut de Recherche en Sciences de la Sant (lRSS)
Dpartement Mdecine-Phannacope TraditionnellelPharmacie
03 BP 7192 Ouagadougou 03
1

Facult des Sciences de la Sant - Universit de Ouagadougou.


,
03 BP 7021 - Ouagadougou 03.

RESUME

Khaya senegalen.ris A. Juss (MELIACEAE) est utilis au Burkina Faso en


tradithrapeutique dans les cas d'inflammations diverses. Une investigation de
l'activit anti-inflammatoire selon le modle de l'oedme l'huile de croton de
l'oreille de souris a permis de mettre en vidence un support phannacodynamique
explicatif de cette utilisation traditionnelle des corces de tronc de la plante.
L'tude de la toxicit gnrale aigu des extraits aqueux lyophiliss a permis d'valuer
la DL50 avec son intervalle de confiance les classant parmi les produits moyennement
toxiques. La toxicit gnrale aigu est correle d'une hypothermie qui laisse penser
une action centrale comme c'est le cas pour les neuroleptiques.
Dans le but de contribuer l'utilisation thrapeutique rationnelle des corces de tronc,
des formulations galniques sous forme de crmes et de gels ont t proposes offrant
une perspective d'usage de la plante sous une forme galnique moderne.

MOTS CLES:

Khaya senegalensis - Ecorces de tronc - Anti-inflammatoire -

Crmes - Gels - toxicit - DL50.

1.

INTRODUCTION

Khaya senegalen.ris A. Juss. (MELIACEAE) ou calcdrat est un grand arbre


de 25 30 m de haut typique des savanes arbores (BERHAUT, 1967). Trs
largement employ au Burkina Faso en mdecine et phannacope traditionnelles, il est
utilis dans de nombreuses pathologies parmi lesquelles les affections composante
inflammatoire en dennatologie, rhumatologie, traumatologie, odonto-stomatologie et
en O.R.L.
- 68-

La drogue, constitue essentiellement par les corces de tronc, est la plupart du temps
utilise en macration, en dcoction, en infusion ou broye et incorpore dans du
beurre de karit en pommade.
Dans le but de contribuer la valorisation des donnes de la mdecine et
pharmacope traditionnelles, nos travaux antrieurs (LOMPO, 1993) ont mis en
vidence une activit anti-inflammatoire par voie gnrale (intrapritonale) de l'extrait
aqueux de la poudre d'corce. De mme ces travaux (LOMPO, 1995) ont valu la
toxicit gnrale aigu de l'extrait en dfinissant la DL50 qui est gale 1250 mg!kg
chez la souris. Cette toxicit est correle d'un effet hypothennisant marqu aux doses
comprises entre 1000 et 1500 mg/kg o une faible variation de dose provoque un
important abaissement de temprature. Cet extrait doit tre par consquent considr
de maniement difficile.
L'objectif du prsent travail est de contribuer par une approche' plu~ rationnelle
l'utilisation thrapeutique des corces de tronc de Khaya senegalensis en proposant des
formes galniques topiques (crmes et gels) prsentant moins de risques d'utilis~ti9.n.
1

./,

Il.

MATERIEL ET METHODE DE L'ETUDE

1.

Mtriel

.;

1.1. Le vgtal
Les corces de tronc de Khaya senegalensis A. Juss. sont rcoltes dans la
rgion de Sapon (province du BAZEGA environ 30 km au Sud de Ouagadougou)
au Burkina Faso. Elles sont sches l'ombre dansuile salle are et sous ventilation
artificielle l'abri de la 'poussire, puis rduites en poudre et conserves dans des
rcipients appropris l'abri de l'humidit l'Institut de Recherche en Sciences de la
Sant (lRSS).

r.2. Matriel de l'tude de l'activit anti-inflammatoire


par voie topique
les extraits
extrait aqueux lyophilis
extrait la ptroleine
extrait chloroformique aprs puisement la ptroleine
extrait mthanolique aprs puisement la ptroleine et au chlorofonne
extrait aqueux aprs puisement la ptroleine au chlorofonne et au
mthanol.
les animaux
Ce sont des souris mles NMRI(IFFA CREDO)'de poids compris entre 28 et 32 g
stabules dans le laboratoire de pharmacologie dans les conditions de temprature
- 69-

comprise entre 21 et 24 oC et de taux d'humidit de 70 5 %. La salle est soumise


un clairage artificiel de 12 heures et d'obscurit de 12 h.

2. MTHODE DE L'TUDE
2.1. Etude de l'activit anti-inflammatoire
A)

PREPARATION DES DIFFERENTS EXTRAITS

Extrait aqueux lyophilis


100 g de poudre d'corce sont mis macrer dans 500 ml d'eau distille au
rfrigrateur pendant 24 h. Aprs agitation magntique, l'extrait est filtr sur du coton
hydrophile et lyophilis pour donner une poudre de 5.9 g. soit un rendement
d'extraction de 5. 9g.

Extrait la ptroline
520 de poudre d'corces sont macrs dans un litre d'ther de ptrole sous
agitation pendant 96 h en chambre froide. Le macr est ensuite introduit dans un
percolateur sur lequel 1 litre d'ther de ptrole est vers goutte goutte. Le percolat
recueilli et vapor au rotavapor 40C sous pression rduite. Un rsidu de 1.67g est
recueilli. Le rendement est de 0.32%.

Extrait chloroformique
Sur le marc rsultant de l'extraction l'ther de ptrole, 2,5 litres de
chlorofonne sont verss goutte goutte et le percolat est recueilli dans un ballon rod
d'vaporation.
Cette solution chloroformique est galement vapore comme prcdemment
au rotavapor.
Le rsidu obtenu pse 6.3 g soit un rendement de 1.21 %.

Extrait mthanolique
Sur le marc issu de l'extraction chloroformique, 3.8 litres de mthanol sont
verss au goutte goutte. Le percolat est recueilli et trait de la mme manire que
prcdemment ; le rsidu mthanolique obtenu pse 97.8g, soit un rendement
d'extraction de 18.81 %.

1-

- 70-

Extrait aqueux
2.7501 d'eau distille sont enfm couls au goutte goutte sur le marc rest
dans le percolateur. Le percolat est vapor sous pression rduite 50C pour donner
un rsidu sec de 25.5g ; le rendement obtenu est de 4.90%.

B)

METHODE DE L'ETUDE DE L'ACTIVItE ANTI-INFLAMMATOIRE

Etude de l'activit anti-inflammatoire topique des diffrents extraits versus


l'indomtacine selon le modle de l'oedme l'huile de croton de l'oreille de souris.
1)

Prparation des solutions utilises


Solution de ktamine chlorhydrate 15 mg/ml :
75 mg de ketamine chlorhydrate sont dissous dans 5 ml d'eau pour prparation
injectable
Solution d'huile de croton 15 mg/ml ;
selon le cas, 75 mg d'huile de croton sont dissous dans 5 ml de
dichloromth.ane ou d'thanol

Solution d;indomtacine 50 mg/ml ;


50 mg d'indomtacine sont dissous dans 1 ml de la solution d'huile de croton cidessus.
les solutions d'extrait la ptroleine et chloroformique se prparent de la
mme faon que l' indomtacine.
les solutions d'extraits au mthanol et l'eau se prparent de la mme manire
mais en utilisant respectivement comme solvants la solution thanolique de croton et
de l'eau.
2)

Protocole exprimental

Deux lots d'au moins six souris peses et marques sont ncessaaires pour
chaque test. Le 1er lot (lot contrle) ne recevant que la solution d'huile de croton et
l'autre lot recevant la substance tudier dissoute dans la solution d'huile de croton
(des essaais prliminaires ont montr l'inexistence d'interfrence entre ces substances
(NIKIEMA, 1997).
L'inflammation cutane est induite chez le lot contrle en appliquant 5 Jtl de la
solution d 'huile de croton sur la surface interne du pavillon de l'oreille droite de la
souris pralablement anesthsie par la solution de ktamine chlorhydrate (150 mg/kg)
par voie intrapritonale. L'oreille gauche n'est pas traite et sert de tmoin.

- 71 -

Le lot n02 reoit sur la face interne du pavillon de l'oreille droite (aprs tre
anesthsi comme prcdemment) 5 ILl de la soluton de substance tudier (250 JJ.g
par oreille).

N.B. : pour les solutions aqueuses, les extraits sont dissous dans de l'eau. Leur dpt
se fera immdiatement aprs celui de la solution d'huile de croton. Le contrle recevra
un dpt (mme volume) d'eau pour prparation injectable immdiatement aprs celui
de la solution d'huile de croton.

Les deux lots sont observs pendant 6 h (maximum de l'inflammation) (TUBARO ;


1985). Les animaux sont sacrifis par rupture de la moelle pinire au niveau cervical
par tirement. Les oreilles droites et gauches sont alors sectioIines au rS de leur
implantation. A l'aide d'un perce-bouton (diamtre 7 mm), un morceau du pavillon
de l'oreille est prlev au niveau de la marge en pointe et pes immdiatement.
Les diffrences de poids entre les morceaux de l'oreille droite et gauche sont notes.
Les tests sont raliss de 10 16 h pour viter les ventuelles variations des rponses
dues aux fluctuations circadiennes des corticostrodes des animaux.
3) Expression des rsultats
Soit D.M. la diffrence moyenne de poids entre les morceaux des oreilles
droites traites l'huile de croton et ceux des oreilles gauches non traites du lot
contrl. Soit D.M;T. la diffrence moyenne de poids entre les morceaux des oreilles
droites traites la substance anti-inflammatoire et ceux des oreilles gauches traites.
Soit D.i. la diffrence de poids entre les morceaux de l'oreille droite et de l'oreille
guche d'une souris donne.
Le pourcentage d'inhibition de l'inflammation est:
(D.M. - D.M.T.) x loo/D.M.
Le pourcentage d'inhibition calcul pour chaque animal est:
(D.M. - D.i.) x loo/D.M.

2.2. Mthode de l'tude de la toxicit gnrale aigu de l'extrait aqueux lyophilis


Six lots de 6 souris femelles pralablement mis jeun pendant 12 h sont
constitus de la faon la plus homogne possible et reoivent en mtrapritonale
respectivement des doses de 50 ; 100 ; 200 ; 300 ; 400 et 600 mg/kg de solution
d'extrait aqueux lyophilis. Des observations sont faites au bout de '24;'48 et 72 h
comparativement un lot tmoin qui ne reoit que de l'eau distille. Les souris mortes
sont dnombres et les valeurs enregistres et traites l'informatique selon le
programme TALLARIDA SOFfWARE (1987) pour en dterminer la DL50 et son
intervalle de confiance.

- 72 -

La valeur de la DLSO permet de classer l'extrait aqueux lyophilis sur l'chelle


de toxicit de HODGE et STERNER suivante chez le rat ou la souris :
-

produits
produits
produits
produits
produits
produits

extrmement toxiques
trs toxiques
moyennement toxiques
faiblement toxiques
pratiquement non toxiques
relativement sans danger

DLSO <
DLSO de
DLSO de
DLSO de
DL50 de
DL50 >

1 mg/kg
1 SO mg/kg
SO SOO mg/g
500 5000 mg/kg
5 15 glkg
15 g/kg

2.3. Mthodes de l'tude ealDigue


A)
a)

FORMULATION
Les crmes
Formule utilise
extrait de plante
cire blanche
alcool cetylique (lanette 16)
propylne glycol
emulgade 1000 NI
eau conservante q.s.p.

1g

1g
9g
10 g
lOg
100 g

Mode opratoire: Aprs avoir pes les diffrents constituants,


1.

Faire fondre dans un mortier au bain marie une temprature voisine de 70C
le mlange mulgade 1oooNI, alcool ctylique (lanette 16) et cire blanche

2.

Dissoudre le propylneglycol dans 3/4 de la quantit d'eau ncessaire dans


laquelle on a pralablement dissout chaud l'agent conservateur (acide
sorbique). Porter la temprature 75C.

3.

Dissoudre l'extrait aqueux lyophilis dans le 1/4 restant d'eau


- Retirer le mortier du bain-marie et ajouter par petites portions 2 dans 1 en
agitant vivement
- y additionner 3 en fin d'opration en agitant lorsque la temprature du
mlange est tombe au voisinage de 40C
.
- Mlanger en agitant de moins en moins vigoureusement jusqu'
refroidissement

4.

Conditionner dans des pots de 125 ml.

- 73 -

b)

Gel au carbopol de l'extrait aqueux lyophilis


Formule utilise
extrait de plante
carbopol940
propylneglycol
EDTA
triethanolamine
eau conservante q.s.p.

LOg
1.5 g

15.0 g
50.0 mg
5.0 g
100.0 g

Mode opratoire: Aprs avoir pes les diffrents constituants,


1.

dissoudre l'acide sorbique et l'EDTA dans 3/4 de l'eau ncessaire additionne


de trithanolamine ;

2.

dissoudre l'extrait 'aqueux lyophilis dans le 114 restant d'eau;

3.

dans un mortier, triturer avec soin le carbopol et propylneglycol


(homogniser) ;

4.

verser 1 dans 3 en remuant lentement pour homogniser;

5.

laisser reposer le gel et conditionner dans des pots de


125 ml.

N.B. : Les crmes et les gels des autres extraits sont prpars selon le mme principe.

B.

EVALUATION DEL 'ACTIVITE ANTI-INFLAMMATOIRE DES FORMES


REALISEES

Le protocole utilis est le mme que dcrit antrieurement selon le modle de


l'oedme l'huile de croton de l'oreille de souris. Le lot tmoin reoit l'excipient
aprs dpt de l'agent inflammatoire tandis que le lot trait reoit la crme ou le gel
aprs avoir dpos l'agent inflammatoire.
C.

CONTROLE DES FORMES REALISEES

Les tests suivants ont t raliss :


homognit de la forme
taleme~,s~ Ja peau
toxicit cutane '
stabilit d'activit
stabilit d'aspect au COurs du temps

- 74 -

III.

RESULTATS ET DISCUSSIONS

1. Activit anti-inflammatoire des diffrents extraits versus indomtacine


Tableau 1 : Inhibition de l'oedme par les diffrents extraits d'corce
de tronc de Khaya senegalensis A. Juss.
Dose administre (lLg/oreille)

Extraits

Nombre
d'animaux

.Pourcentage
d'inhibition
de l'oedme (%)

Extrait aqueux aprs puisements


successifs

250

11.0 7.8

Extrait aqueux lyophilis

250

44.3

Extrait la ptroline

250

Indomtacine

250

Extrait chloroformique aprs


puisement la ptroline
Extrait mthanolique aprs
puisement la ptroline et au
chloroforme

62.8
82.7

6.0

250

79.9

6.2

250

25.6

7.7

5.1
8.1

L'analyse du tableau 1 montre l'existence d'un effet anti-inflammatoire pour tous les
extraits raliss mais des degrs divers. On peut classer ces extraits suivant un ordre
croissant de l'effet anti-inflammatoire de la faon suivante:
extrait aqueux aprs puisement successif la ptroline,
au chloroforme et au mthanol. (inhibition d'oedme: 11 %)
extrait mthanolique aprs puisement la ptroleine et au
chloroforme (inhibition d'oedme: 25.6%) ;
extrait aqueux total lyophilis (inhibition d'oedme: 44.3 %) ;
extrait la ptroleine (inhibition d'oedme: 62.8%) ;
extrait chloroformique (inhibition d'oedme: 79%) ;
indomtacine (inhibition d'oedme: 82.7 %).
Les extraits organiques (moins polaires) semblent prsenter un effet antiinflammatoire suprieur celui des extraits mthanolique et aqueux plus polaires. Ceci
s'expliquerait par leur caractre lipophile plus marqu que les derniers.'

- 75 -

t
En effet, la barrire pidennique est essentiellement constitue par la couche
corne qui est surtout une barrire limitante de caractre lipophile (WEPIERRE,
1977). Les composs lipophiles pourraient s'y dissoudre et diffuser dans la matrice
lipidique situe entre les marnents de kratine et au sein des lipides intercellulaires.
Les petites molcules hydrophiles beaucoup moins diffusibles migreraient lentement
au sein des rgions riches en eau.
La diffrence d'activit entre ces deux types d'extraits (moins polaires et
polaires) peut galement s'expliquer par la diffrence de composition chimique qui
ferait que dans les extraits moins polaires on retrouve des substances activit antiinflammatoire plus marque que celle des extraits plus polaires.
2. Toxicit gnrale aigu de l'extrait aqueux lyophilis
Le traitement informatique des donnes sur la mortalit cumulative :

- au cours de 24 heures
DL50 = 318 mglkg avec un intervalle de confiance
(I.C.) = [228.9 - 442.6 mg/kg] p < 0.05
DL5

145111g!kg ; DL95

= 700 mg/kg

Les rapprts DL5/DL95 = 0.21 ; DL5/DL50 = 0.46 ; DL50/DL95 = 0.45 prouvent


la validit du test; cependant le rapport DL95/DL5 est infrieur 10 d'o les
prcautions prendre quant l'utilisation par voie gnrale.
- au cours de 48 heures
DL50 = 221.3 mg!kg avec I.C. = [165.6 - 295.9 mg/kg] p < 0.05
- au cours de 72 heures
DL50 = 203.6 mg/kg avec I.C.

[124.6 - 332 mg!kg] p < 0.05

Ces diffrentes valeurs de la DL50 classent l'extrait aqueux lyophilis en


administration intrapritonale comme tant moyennement toxique. Cette toxicit est
correle d'un certain nombre de signes: Hypothennie ; tendance l'immobilisation
; perte d'instinct d'exploration; tendance l'endormissement et au regroupement,
perte du tonus, refus de s'alimenter.
L'hypothermie releve au cours de cette tude serait alors un tmoin voire un signe
de la toxicit de l'extrait l'instar de ce qui est observ avec certains psychotropes
comme les neuroleptiques (COHEN, 1996 ; GINESTET et al. 1988). Une action
centrale pourrait tre alors envisage.

L
- 76 -

m.3.
A)

Etude galnique
Fonnulation

Les fonnes topiques ont t choisies parce que prsentant une action locale, ce qui
viterait l'hypothennie observe par voie gnrale.
a)
Les crmes
Les crmes de l'extrait aqueux lyophilis, de l'extrait la ptroleine et au chlorofonne
. se ralisent aisment sans artifice particulier.
b)

Les gels : il en est de mme pour les gels

B)

Evaluation de l'activit des fonnes ralises

Les mesures ont t faites seulement six heures aprs une administration unique

Tableau fi : Inhibition de l'oedme des fonnes ralises

Formes ralises

Dose
administre
mg/oreille

Nombre
d'animaux

Pourcentage
d'inhibition
de l'oedme (%)

Crme de l'extrait aqueux lyophilis

25

19.3

+ 6.4

Crme de l'extrait la petroleine

25

21.4

+ 12.1

Crme de l'extrait chloroforroique

25

22.8

+ 6.9

Gel de l'extrait aqueux lyophilis

25

30.4

+ 8.3

Gel de l'extrait la ptroleine

25

20.4

+ 12.8

Gel de l'extrait chloroforroique

25

24.8

+ 11.6

Gel de l'indomtaeine

25

24.7

+ 9.1

D'une manire gnrale, les gels obtenus semblent prsenter une meilleure
biodisponibilit que les crmes.
Les rapports effet (gel) sur effet (extrait correspondant) sont les suivants:
-

68.5% pour l'extrait aqueux lyophilis


32.5 % pour l'extrait l'ther de ptrole
31 % pour l'extrait chloroforroique
29.9% pour l'indomtacine

- 77-

Les rapports effet (crme) sur effet (extrait correspondant) sont les suivants:
- 43.5% pour l'extrait aqueux lyophilis
- 34.1 % pour l'extrait la ptroleine
- 28.5 % pour l'extrait chloroformique
Il en rsulte que le gel et la crme de l'extrait aqueux lyophilis prsentent les
meilleurs rapports effet (forme ralise) sur effet (extrait non formul). lis semblent les plus
intressants exploiter.
C)

Contrle des formes ralises

Le contrle, ralis sur ces formes selon diffrents protocoles dcrits par
PRADEAU (1992) semble indiquer une bonne qualit de ces crmes et gels. En effet, ils
sont dnus de toute irritabilit de la peau; l'indice d'irritation cutane primaire tant <
0.5. Les pH des formes sont compris entre 5 - 6 donc voisin de celui de la pe,au. Leur
stabilit organoleptique et d'activit au cours du temps est notable (plus d'une anne de
conservation).
'

CONCLUSION ET "PERSPECTIVES

Khaya senegalensis qui jouit d'une rputation non ngligeable en mdecine et


pharmacope traditionnelles fait prsentement l'objet de nombreuses investigations dans le
but de valoriser les donnes de l'utilisation traditionnelle contre les maladies
inflammatoires. Du point de vue pharmacologique, la recherche du support
pharmacologique explicatif de l'utilisation des corces de tronc comme anti-inflammatoire
a t dmontre par la mise en vidence de l'activit inhibitrice de l'oedme l'huile de
croton chez la souris des extraits aqueux, l'ther de ptrole, au chloroforme et au
mthanol. Cependant la prpondrance de cet effet inhibiteur de l'oedme semble plus
marque pour les extraits organiques moins polaires (chloroformique 79.9% d'inhibition,
et la petroleine 62.8% d'inhibition qu'aux extraits plus polaires comme extrait aqueux
lyophilis (44.4. % d'inhibition). L'indomtacine quant elle prsente 82.7% d'inhibition.
La DL5 de l'extrait aqueux lyophilis qui est de 318 mg/kg aprs 24 h
d'observation; 221.3 mg/kg aprs 48 h et 203.6 mglkg aprs 72 h d'observation le classe
parmi les produits moyennement toxiques. L'hypothermie semble un signe de la
manifestation de la toxicit gnrale aigu.
Les propositions de formulation faites semblent offrir des perspectives de
l'utilisation plus rationnelle des corces de tronc sous forme de gels ou de crmes.
En effet, la crme 1% ou le gel 1% de l'extrait aqueux lyophilis semblent en
particulier prsenter un meilleur rapport effet (forme ralise) sur effet (extrait non
formul). Par ailleurs, l'extrait aqueux lyophilis prsente un bon rendement d'extraction.
Les travaux futurs viseront au fractionnement des diffrents extraits en vue de
meUre en vidence la substance active afin de pouvoir mieux la contrler au cours du temps
et envisager sa formulation galnique.

- 78 -

BIBUOGRAPHIE

1-

BERHAUT J. (1967) : Flore du Sngal- 2me Ed. Clairafrique Dakar, P. 60.

2-

COHEN Y.(1986): Abrg Pharmacologie (2me Ed. MASSON - Paris 89.

3-

GINESTET D., KAPSAMBEUS V. et BRION N. (1988) : Neuroleptiques in


Pharmacologie clinique : Bases de la thrapeutique. Expansion scientifique
Franaise, Paris, 2me Ed. 1209-1232

4-

WMPO M. (1993) : Etude pharmaco-toxicologique chez la souris et le rat de


Khaya senegalensis (Desr.) A. Juss. (MEUACEAE) utilis en tradithrapeutique
au Burkina Faso. Mm. de DEA Sc. Biol. Appl. (Physiol. Animale) Univ.
Ouagadougou 66-71

WMPO M. (1995) : Effet hypothermisant et toxicit gnrale aigu chez les


souris des corces de tronc de KASE. CAMES Pharm. Md. Trad. Mr. Lom
Presses de l'UB 73-80

NIKIEMAJ.B. (1997): Contribution l'tude phytochimiqueet pharmacologique


de Leptenia hastata (pres.) Decne. Thse Doctorat s Sciences Pharmaceutiques.
Institut de Pharmacie. Univ. Libre de Bruxelles.

7-

PRADEAU D. (1992) : L'analyse pratique du mdicament. Ed. Mdicales


Internationales. Tee et Doc. Lavoisier Paris - 970-976.

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TUBARO A., DR! P., DELBEUO G., ZILU C., DELLA WGGIA R.
(1985) : The Croton Oil Ear Test revisited. Agents and Actions, Vol. 17, 3-4

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- 79-