Vous êtes sur la page 1sur 19

ACCION BACTERIOSTATICA

SELECTIVA DEL CRISTAL


VIOLETA ACCION
OLIGODINAMICA DE LOS
METALES PESADOS
MICROBIOLOGIA- laboratorio 5

JORGE TELLO
JORGE RAMIREZ ARONE

20114105K

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

OBJETIVOS
Acentuar la correcta preparacin del cristal violeta, as tambin su correcto uso.
Comprobar la accin Oligodinmica de los metales pesados, en este caso de la
moneda (compuesta por nquel y zinc).
Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta sobre
bacterias gram positivas y gram negativas.

FUNDAMENTO TEORICO
ACCION BACTERIOSTTICA DEL CRISTAL VIOLETA
Los colorantes del grupo trifenilmetano presentan una marcada accin
bacteriosttica
selectiva sobre las bacterias Gram positivas, en diluciones que aparentemente no
afectan
a las Gram negativas. Esta propiedad se aprovecha mediante la incorporacin de
alguno
de esos colorantes en medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de
bacterias
Gram negativas.
Entre los colorantes usados con estos propsitos estn: cristal violeta, fucsina
bsica,
verde brillante y verde malaquita.
COLORACION EN MICROBIOLOGIA
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de
ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre
la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste
es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos
diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de
actividad respiratoria, etc.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de
teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms
corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como
formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante,
no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma. La fijacin se
realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos,
tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el
proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las
clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo

MICROBIOLOGIA I

Pgina 1

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas
o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad
especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia
son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad
con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos
nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul
de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas
cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares
cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la
eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias
liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos
de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o
depstos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.
Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada
con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se
denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnco. El mordiente se
combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr
atacar el colorante.
Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la
microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de
metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las clulas
bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los
detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en
muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie.
La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se
dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve,
por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa
es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que
simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de
particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en
agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de
las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la
presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante forman
en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares
autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el
MICROBIOLOGIA I

Pgina 2

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse


muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos equivocando
al creer que un artefacto es una estructura realmente existente.
CRISTAL VIOLETA
El violeta de metilo, comnmente denominado cristal violeta o violeta de
genciana, es el nombre dado a un grupo de compuestos qumicos empleados
como indicadores de pH y colorantes.
Los violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-penta y N-hexametil prosanilinas. Por la mezcla de diferentes versiones, el fabricante puede crear
diferentes tonos de violeta en el colorante final. Cuanto ms metilado est el
colorante, su color ser de un violeta ms oscuro:

Tetrametilo (cuatro metilos) es conocido como Violeta de metilo 2B, y


encuentra usos especficos en qumica y medicina.

Pentametilo (cinco metilos) es conocido como Violeta de metilo 6B, y es ms


oscuro como colorante que 2B.

Hexametilo (seis metilos) es conocido como Violeta de metilo 10B, o


especficamente violeta cristal. Es mucho ms oscura que la 2B, y an ms
oscura que la 6B.
PROPIEDADES

En la forma pura, el violeta de cristal se presenta como lustrosos cristales azul


verdosos que funden a 137 Celsius (279Fahrenheit). Los violeta de metilo son
solubles en agua,etanol, dietilenglicol, y dipropilenglicol. En particular, el violeta de
metilo 6B es soluble en agua al 2.93% y soluble en etanol al 15.21%.
El violeta de metilo no debe ser confundido con el azul de metilo ni con el azul de
metileno, otros dos colorantes.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 3

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

Violeta de metilo 2B
Violeta de metilo 10B

Violeta de metilo 6B

El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas


(tanto Gram positivas como Gram negativas) a travs de la pared bacteriana.
El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de
potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan
de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la
pared de la clula bacteriana. El I 2 entra en las clulas y forma un complejo
insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya
que en la misma es soluble el complejo I 2/cristal violeta. Los organismos Gram
positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o
la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son
rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer
una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al
trmino del protocolo, las Gram positivas se vern azul-violceas y las Gram
negativas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us,
por ejemplo, safranina).
Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en
1884. En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de
uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso
determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se aade luego una
solucin de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; despus se
lava el portaobjetos con alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante. Sigue a
tal tratamiento una coloracin de contraste, como safranina, fucsina fenicada
diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de tratarlos
con un decolorante, y el color no se modifica al aadir ste; otros pierden con
facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de
grampositivos, y los que pierden la primera coloracin y retienen la segunda, de
gramnegativos. Basndonos pues, en la reaccin Gram, podemos clasificar a los
microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los
que mejores resultados dan en la coloracin Gram. Los representantes ms usados
de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad,
violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 4

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero de grupos


metilo en la molcula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono ms oscuro es
la hexametil-p-rosanilina (violeta cristal), y el tinte ms ligero, la tetrametil-prosanilina (violeta de metilo). Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B,
etc., se refieren al nmero de grupos metilo contenidos. La letra R indica matices
rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y
se considera como el mejor colorante primario para teir por el mtodo de Gram.
La facultad de las clulas para tomar la coloracin Gram no es propia de toda
sustancia viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. As
vemos que las clulas de plantas y animales superiores no conservan la primera
coloracin; los mohos se tien con cierta irregularidad; los grnulos de micelios
propenden retener el colorante. La reaccin de Gram no es infalible ni constante;
puede variar con el tiempo del cultivo y el pH del medio, y quiz por otras causas.
CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES QUMICOS
Control de un desinfectante ideal
Los desinfectantes se diferencian de los antibiticos en que no poseen toxicidad
selectiva; generalmente son txicos no solo para microorganismos parsitos sino
tambin para las clulas del hospedador. Muchos de ellos se inactivan por una
materia orgnica, pH y otros factores fsicos. Para preparar nuevos agentes
antimicrobianos o hacer la valoracin de los desinfectantes para uso prctico, hay
que tomar en cuenta los siguientes puntos:
Actividad antimicrobiana es la capacidad de la sustancia para matar a
microorganismos, en primer requisito. El producto qumico a baja
concentracin debe tener un amplio espectro de actividad antimicrobiana es
decir matar a muchas clases de microorganismos.
Solubilidad es la sustancia que debe ser soluble en el agua y otros solventes en la
cuanta suficiente que permita su uso efectivo.
Estabilidad deben ser mnimo los cambios que sufra la sustancia a largo de
tiempo mientras permanece es un estante y estos cambios no deben dar
como resultado una prdida significativa de la accin antimicrobiana.
No ser txico para las personas y otros animales idealmente, el compuesto
debera ser letal para los organismos e inocuo para las personas y animales.
Homogeneidad la preparacin debe ser la composicin uniforme de forma
que los ingredientes activos estn presentes en cada aplicacin. Los
productos qumicos puros son homogneos. pero las mezclas de materiales
pueden carecer de homogeneidad
No combinarse con material orgnico extrao. Muchos desinfectantes se
combinan con las protenas u otro material orgnico. Tales desinfectantes se
usan en condiciones en las que hay considerable cantidad de material
orgnico.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 5

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

Actividad antimicrobiana a temperatura ambiente y la del cuerpo. No debe


ser necesaria elevar la temperatura por encima de los valores que
normalmente se usa en el ambiente donde se va a usar el compuesto.
No ser corrosivo ni teir. El compuesto no debe oxidar o estropear de
cualquier otra forma los metales, ni debe estropear ni teir los tejidos.
Poder desodorante. Quitar los olores mientras desinfecta es un atributo
deseable. Idealmente, el propio desinfectante debera ser inodoro o tener un
olor agradable.
SELECCIN DE UN AGENTE QUMICO MICROBIANO
Algunos factores que debe tenerse en consideracin al hacer seleccin de un
agente qumico antimicrobiano para su aplicacin y su prctica son:
Naturaleza del material que se va a tratar. Un agente qumico usado para
desinfectar utensilios contaminados puede ser muy poco satisfactorio para
su aplicacin sobre la piel, es decir puede daar seriamente las clulas de
los tejidos. En consecuencia, la sustancia seleccionada debe ser compatible
con el material al cual se aplica.
Tipo de microorganismos. No todos los microorganismos son igualmente
susceptibles a la accin inhibidora o mortfera de un agente qumico
especfico. Por ello debe saberse que el agente seleccionado es efectivo
contra el tipo de microorganismo que hay que destruir.
Condiciones ambientales los factores de temperatura, pH, tiempo,
concentracin y presencia de material orgnica extraa, pueden tener
influencia sobre la casa y la efectividad de la destruccin microbiana. El uso
con xito de un agente microbiano requiere en conocimiento de la influencia
de estas condiciones sobre el agente determinado, de manera que puede ser
empleado bajo las condiciones favorables.
PRINCIPALES GRUPOS DE AGENTES QUMICOS ANTIMICROBIANOS
Algunos de los principales grupos de agentes antimicrobianos son:
Fenol y compuestos fenlicos.
Alcoholes
Halgenos y sus compuestos.
Detergentes.
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES
Ciertos metales pesados. Su accin se denomina oligodinmica, es decir son
activos en muy bajas concentraciones (ppm). Inactiva especficamente enzimas
claves al reaccionar con grupos SH. Son muy txicos y su actividad disminuye con
la existencia de fluidos biolgicos.
Plata: Nitrato de plata. Antisptico. Lavan los ojos de recin nacidos, en casos
concretos, para evitar la ceguera, se usa cuando la madre est infectada de
Neisseria gonorrea.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 6

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

Mercurio: Cloruro de mercurio. ste elemento es altamente txico y es inefectivo


con materia orgnica, pero afecta a muchos microorganismos.
El mercurocromo es menos txico pero menos efectivo con materia org-nica.
Cobre: Sulfato de cobre. Se usa como alguicida en piscinas. Se adiciona a pinturas
para evitar hongos.
Zinc: Cloruro de zinc en colutorios bucales. El oxido de zinc es antifngico en
pinturas. En general ocasionan problemas medioambientales.

BACILLUS SUBTILIS
Bacillus
subtilis es
una bacteria Gram
positiva, Catalasa-positiva,
aerobio comnmente encontrada en el suelo. Miembro delGnero Bacillus, B.
subtilis tiene la habilidad para formar una resistente endospora protectora,
permitendo al organismo tolerar condiciones ambientalmente extremas.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 7

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

PATOGENIA
B. subtilis no es considerado patgeno humano; sin embargo puede contaminar los
alimentos, pero raramente causa intoxicacin alimenticia. Sus esporas pueden
sobrevivir la calefaccin extrema que a menudo es usada para cocinar el alimento,
y es responsable de causar la fibrosidad en el pan estropeado.
UTILIDAD
Algunas variedades de B. subtilis tambin tienen aplicaciones comerciales:

Una variedad de B. subtilis antes conocido como Bacillus natto es usada en


la produccin comercial del manjar japons Natt.

B. subtilis QST 713 (comercializado como QST 713 o Serenade) tiene una
actividad fungicida natural, y es empleado como un agente de control biolgico.

Las enzimas producidas por B. subtilis popoy B. licheniformis son usadas


extensamente como aditivos en detergentes de lavandera.

B. subtilis pBE2C1 and B. subtilis pBE2C1AB Son usados en la produccin de


polihidroxialcanoatos (PHA) a partir de desechos de malta como fuente de bajo
costo para la produccin de PHA

B. subtilis se ha mostrado muy manejable para


la manipulacin gentica, y se ha hecho, por lo
tanto,
extensamente
adoptado
como
un organismo modelo para estudios de laboratorio,
sobre todo de esporulacin, que es un ejemplo
simplificado de la diferenciacin celular. En
trminos de popularidad como un organismo
modelo de laboratorio B. subtilis a menudo es
usado como el equivalente Gram positivo
de Escherichia
coli,
un
bacilo Gram
negativo estudiado extensivamente.
Es una bacteria gram positiva que sirve en metodos de manipulacion genetica en
el caso de la experimentacion con uracilo y con enzimas dutt y dump
ESCHERICHIA COLI
La Escherichia coli, tambin conocida por la abreviacin de su nombre, E. coli, es
quizs el organismo procariota ms estudiado por el ser humano. Se trata de
una enterobacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y
por ende en las aguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado
que es un organismo ubicuo. F ue descrita por primera vez en 1885 por Theodore
von
Escherich, bacterilogo alemn,
quien
la
denomin Bacterium
coli.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 8

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

Posteriormente la taxonoma le adjudic el nombre de Escherichia coli, en honor a


su descubridor.
Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo, adems de producir las vitaminas B yK. Es un bacilo que reacciona
negativamente a la tincin de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo,
mvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz
de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de gentica y biologa
molecular.
PATOGENIA
La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extraintestinales
generalmente
graves,
tales
como
infecciones
del aparato
excretor, cistitis, meningitis, peritonitis,mastitis, septicemia y neumona Gramnegativa.
VIRULENCIA
La Escherichia coli est dividida por sus propiedades virulentas, pudiendo causar
diarrea
en
humanos
y
otros
animales.
Otras
cepas
causan
diarreas hemorrgicas por
virtud
de
su
agresividad, patogenicidad y toxicidad. En
muchos pases ya hubo casos de muerte con
esta bacteria. Generalmente le pasa a nios
entre 1 ao y 8 aos. Causado generalmente por
la contaminacin de alimentos, y posterior mala
coccin de los mismos, es decir, a temperaturas
internas y externas menores de 70 C.
INFECCIONES URINARIAS
Son ms comunes en mujeres por la corta
longitud de la uretra (25 a 50 mm, o bien 1 a 2 pulgadas) en comparacin con los
hombres (unos 15 cm, o unas 7 pulgadas). Entre los ancianos, las infecciones
urinarias tienden a ser de la misma proporcin entre hombres y mujeres. Debido a
que la bacteria invariablemente entra al tracto urinario por la uretra (una infeccin
ascendente), los malos hbitos sanitarios pueden predisponer a una infeccin, sin
embargo, otros factores cobran importancia, como el embarazo, hipertrofia
benigna omaligna de prstata, y en muchos casos el evento iniciante de la
infeccin es desconocido. Aunque las infecciones ascendentes son las causantes
de infecciones del tracto urinario bajo y cistitis, no es necesariamente esta la
causa de infecciones superiores como la pielonefritis, que puede tener origen
hematgeno.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 9

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

Se distinguen seis cepas segn su capacidad patgena, -tambin se les puede


llamar virotipos-: Escherichia
coli enteropatognica
(ECEP),
enterotoxignica
(ECET), enteroinvasiva (ECEI), enterohemorrgica (ECEH), enteroagregativa (ECEA)
y de adherencia difusa (ECAD).

PROCEDIMIENTO
ACCIN BACTERIOLGICAA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA
1 1. Mantener 4 tubos con agar nutritivo fundido en bao de Mara.
2

1 2. Transferir 1mL de la solucin acuosa de cristal violeta de 1:1000 a uno de


los tubos con 9mL de agua. Esto da una dilucin de 1:10000.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 10

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

1 3. Usando la misma pipeta, transferir 1mL de la dilucin 1:10000 a una placa


Petri y 1mL al segundo tubo con 9mL de agua. Esto da una dilucin de
1:100000.

1
4.
Transferir 1mL de la dilucin 1:100000 a una placa Petri y 1mL a un tercer
tubo con 9mL de agua. Esto da una dilucin de 1:1000000.

1 5. Transferir 1mL de la dilucin de 1:1000000 a una placa Petri.


2

1 6. Verter el agar fundido en las 3 placas Petri y mezclar bien el colorante con
el agar rotando suavemente la placa, para obtener una distribucin uniforme
de colorante.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 11

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

1 7. Verter el
contenido del ltimo tubo
de agar en la placa de Petri sin colorante para que sirva de control.
2 8. Cuando ha solidificado el agar, invertir las placas y dividir cada una en dos
partes iguales.

1 9. Marcar cada mitad con el nombre del


organismo con el que se va a sembrar por el
mtodo de estras.
2 10. Rayar en estras la mitad de una placa de
Petri con una gotita, tomada con el asa del
inoculador, del cultivo B y la otra mitad
igualmente con una gotita de cultivo A.
3
4 11. Proceder de igual forma con las dems placas
Petri.
5 12. Invertir las placas e incubarlas a 37C por 48 horas.

ACCIN OLIGODINMICA DE LOS METALES PESADOS

MICROBIOLOGIA I

Pgina 12

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

1 1. Limpiar la moneda sumergindola dentro de una solucin al 10% de cido


ntrico.
2 2. Lavar bien la moneda con agua para quitarle todo el cido.
3 3. Colocar la moneda en el centro de una Placa Petri.
4 4. Tomar un tubo con agar nutritivo fundido del bao mara mantenido a 45
C.
5 5. Inocular el tubo con agar con una gotita del cultivo tomada con el asa del
inoculador.
6 6. Rotar el tubo entre las palmas de las manos para obtener una distribucin
uniforme de los organismos.
7 7. Verter el agar inoculado dentro de la placa de Petri que contiene la
moneda.
8 8. Dejar que solidifique el agar.
9 9. Invertir la placa e incubarla a 37C por 48 horas.

RESULTADOS
Laboratorio 5: Accin Oligodinmica selectiva de cristal violeta y Accin
Oligodinmica de metales pesados.
DIA: martes 06-11-12
TEMPERATUTA: 30C
HORA: 12.00 PM.
Crecimiento Bacteriano:
GRUPO N1
Diluciones
1:10,000
1:
100,000
1:
1000,000
Sin
colorante

A
Sin

B
Control

GRUPO
N2
A
B
+
+
+
+

GRUPO
N3
A
B
+
?
+
?

GRUPO
N4
A
B
+
?
+
+

GRUPO
N5
A
B
+
+
?
?

(+) Hay crecimiento


(?) No hay crecimiento

MICROBIOLOGIA I

Pgina 13

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

Coloracin Gram:
GRUPO N1

Colonia A
Gram (-)
Estreptococos

GRUPO N2
GRUPO N3
GRUPO N4
GRUPO N5

Gram (+)
Estafilococos
Gram (-)
Estreptococos
Gram (-)
Estreptococos
Gram (-)
Estafilococos

Colorante

Concentracin

Cristal Violeta

1: 10,000
1: 100,000
1: 1000,000

Sin colorante

MICROBIOLOGIA I

Colonia B

Gram (-)
Estafilococos

Escherichia
Colli
Gram Negativa
+
+
+

Pgina 14

Bacillus
subtilis
Gram Positiva
+
+

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

En ambas placas se observ crecimiento

CONCLUSIONES
-

La mayora de resultados fueron positivos, excepto algunos en donde se


puede apreciar en la primera tabla con el smbolo , que podra deberse a
una inadecuada inoculacin.

Para preparar cristal violeta se utiliz: violeta de genciana y agua destilada.

Las concentraciones de los metales pesados en las monedas van a


determinar el grado de toxicidad con respecto a las bacterias.
Se pudo observar claramente la zona Oligodinmica de la moneda, debido a
su accin txica, ya que alrededor de la moneda no hubo crecimiento. A
medida que disminuye la accin txica de la moneda el desarrollo se va
haciendo ms notorio, por eso se observa ms desarrollo en los bordes de la
placa Petri, porque est un tanto ms lejos del metal. Y por ello puede haber
crecimiento de colonias.
La experiencia de la moneda fueron relizadas por los grupos 2 y 4.

RECOMENDACIONES
-

Al realizar la prueba de tincin Gram, debe tenerse cuidado de inocular


correctamente, porque este es el principal motivo de que no se haya podido
obtener los resultados adecuados.

Se debe inocular con cuidado, para evitar que se combinen las colonias de la
parte A con la parte B.

Debe evitarse el succionar la pipeta con la boca, podra ocurrir algn


accidente con los lquidos que en algunas ocasiones son txicos.

Realizar el reconocimiento de los procedimientos al retirar las muestras de la


incubadora, esto podra originar un cambio en ellas, no es lo mismo recin
salidas de la incubadora que 24hrs despus, en ese tiempo hay muchas
generaciones que se producen y ya no sera las mismas.

BIBLIOGRAFIA

MICROBIOLOGIA I

Pgina 15

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

http://fagalab.com/Hojas%20de%20Seguridad/CRISTAL
%20VIOLETA.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Cristal_violeta
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://www.ambientales.una.ac.cr/files/carlosmicrobiologia/Clases
%20Laboratorio%20Microbiologia/Manual%20Laboratorio
%20Microbiologia.pdf
http://dentizta.ccadet.unam.mx/dental/pdfs/definiciones/metalesspesa
dos.pdf
http://bacillus8.blogspot.com/2010/04/bacillus-subtilisclasificacion.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus_subtilis
http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli

ANEXOS

MICROBIOLOGIA I

Pgina 16

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

TALLER N 5
1. Importancia de la composicin qumica de la estructura bacteriana.
Ha permitido comprender la relacin con el hombre (flora normal, agentes
agresores), tambin en la comprensin del mecanismo de accin de diferentes
antibiticos.
2. Definicin de procariota
Son microorganismos celulares que se reproducen por fisin binaria (divisin
simple), muchos tienen vida libre. Contienen informacin gentica, sistemas de
produccin de energa y sistemas biosinteticos necesarios para el crecimiento y
reproduccin.
3. Qu son las bacterias?
Las bacterias son microorganismos unicelulares, siendo entonces clulas
procariotas. Existen 2 grupos de procariotas: eubacterias y las arqueobacterias.
4. Partes de la estructura bacteriana
Estructuras permanentes:
-

Membrana celular
Ribosomas
Material gentico

Estructuras variables
-

Pared celular
Flagelo

MICROBIOLOGIA I

Pgina 17

ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION OLIGODINAMICA DE


LOS METALES PESADOS

5.

Fimbrias
Capsulas
Esporas
Tamao de las bacterias

Van desde 0.5 a 2 micrometros y algunas pueden llegar a 10 micras.


6. Describir la forma de las bacterias
La morfologa est determinada por su pared rgida. Se pueden presentar como
esfricas, ovaladas, denominndose cocos. Si la forma es cilndrica se denominan
bacilos o bastones.
7. Definir la pared celular
Es una estructura rgida presente en la mayora de bacterias, se sita fuera de la
membrana citoplasmtica. Es una estructura vital para las bacterias que la poseen.

MICROBIOLOGIA I

Pgina 18