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JORGE TELLO
JORGE RAMIREZ ARONE
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OBJETIVOS
Acentuar la correcta preparacin del cristal violeta, as tambin su correcto uso.
Comprobar la accin Oligodinmica de los metales pesados, en este caso de la
moneda (compuesta por nquel y zinc).
Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta sobre
bacterias gram positivas y gram negativas.
FUNDAMENTO TEORICO
ACCION BACTERIOSTTICA DEL CRISTAL VIOLETA
Los colorantes del grupo trifenilmetano presentan una marcada accin
bacteriosttica
selectiva sobre las bacterias Gram positivas, en diluciones que aparentemente no
afectan
a las Gram negativas. Esta propiedad se aprovecha mediante la incorporacin de
alguno
de esos colorantes en medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de
bacterias
Gram negativas.
Entre los colorantes usados con estos propsitos estn: cristal violeta, fucsina
bsica,
verde brillante y verde malaquita.
COLORACION EN MICROBIOLOGIA
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de
ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre
la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste
es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos
diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de
actividad respiratoria, etc.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de
teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms
corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como
formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante,
no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma. La fijacin se
realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos,
tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el
proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las
clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo
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que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas
o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad
especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia
son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad
con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos
nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul
de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas
cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares
cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la
eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias
liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos
de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o
depstos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.
Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada
con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se
denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnco. El mordiente se
combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr
atacar el colorante.
Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la
microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de
metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las clulas
bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los
detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en
muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie.
La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se
dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve,
por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa
es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que
simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de
particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en
agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de
las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la
presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante forman
en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares
autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el
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Violeta de metilo 2B
Violeta de metilo 10B
Violeta de metilo 6B
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BACILLUS SUBTILIS
Bacillus
subtilis es
una bacteria Gram
positiva, Catalasa-positiva,
aerobio comnmente encontrada en el suelo. Miembro delGnero Bacillus, B.
subtilis tiene la habilidad para formar una resistente endospora protectora,
permitendo al organismo tolerar condiciones ambientalmente extremas.
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PATOGENIA
B. subtilis no es considerado patgeno humano; sin embargo puede contaminar los
alimentos, pero raramente causa intoxicacin alimenticia. Sus esporas pueden
sobrevivir la calefaccin extrema que a menudo es usada para cocinar el alimento,
y es responsable de causar la fibrosidad en el pan estropeado.
UTILIDAD
Algunas variedades de B. subtilis tambin tienen aplicaciones comerciales:
B. subtilis QST 713 (comercializado como QST 713 o Serenade) tiene una
actividad fungicida natural, y es empleado como un agente de control biolgico.
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PROCEDIMIENTO
ACCIN BACTERIOLGICAA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA
1 1. Mantener 4 tubos con agar nutritivo fundido en bao de Mara.
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4.
Transferir 1mL de la dilucin 1:100000 a una placa Petri y 1mL a un tercer
tubo con 9mL de agua. Esto da una dilucin de 1:1000000.
1 6. Verter el agar fundido en las 3 placas Petri y mezclar bien el colorante con
el agar rotando suavemente la placa, para obtener una distribucin uniforme
de colorante.
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1 7. Verter el
contenido del ltimo tubo
de agar en la placa de Petri sin colorante para que sirva de control.
2 8. Cuando ha solidificado el agar, invertir las placas y dividir cada una en dos
partes iguales.
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RESULTADOS
Laboratorio 5: Accin Oligodinmica selectiva de cristal violeta y Accin
Oligodinmica de metales pesados.
DIA: martes 06-11-12
TEMPERATUTA: 30C
HORA: 12.00 PM.
Crecimiento Bacteriano:
GRUPO N1
Diluciones
1:10,000
1:
100,000
1:
1000,000
Sin
colorante
A
Sin
B
Control
GRUPO
N2
A
B
+
+
+
+
GRUPO
N3
A
B
+
?
+
?
GRUPO
N4
A
B
+
?
+
+
GRUPO
N5
A
B
+
+
?
?
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Coloracin Gram:
GRUPO N1
Colonia A
Gram (-)
Estreptococos
GRUPO N2
GRUPO N3
GRUPO N4
GRUPO N5
Gram (+)
Estafilococos
Gram (-)
Estreptococos
Gram (-)
Estreptococos
Gram (-)
Estafilococos
Colorante
Concentracin
Cristal Violeta
1: 10,000
1: 100,000
1: 1000,000
Sin colorante
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Colonia B
Gram (-)
Estafilococos
Escherichia
Colli
Gram Negativa
+
+
+
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Bacillus
subtilis
Gram Positiva
+
+
CONCLUSIONES
-
RECOMENDACIONES
-
Se debe inocular con cuidado, para evitar que se combinen las colonias de la
parte A con la parte B.
BIBLIOGRAFIA
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http://fagalab.com/Hojas%20de%20Seguridad/CRISTAL
%20VIOLETA.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Cristal_violeta
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://www.ambientales.una.ac.cr/files/carlosmicrobiologia/Clases
%20Laboratorio%20Microbiologia/Manual%20Laboratorio
%20Microbiologia.pdf
http://dentizta.ccadet.unam.mx/dental/pdfs/definiciones/metalesspesa
dos.pdf
http://bacillus8.blogspot.com/2010/04/bacillus-subtilisclasificacion.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus_subtilis
http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli
ANEXOS
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TALLER N 5
1. Importancia de la composicin qumica de la estructura bacteriana.
Ha permitido comprender la relacin con el hombre (flora normal, agentes
agresores), tambin en la comprensin del mecanismo de accin de diferentes
antibiticos.
2. Definicin de procariota
Son microorganismos celulares que se reproducen por fisin binaria (divisin
simple), muchos tienen vida libre. Contienen informacin gentica, sistemas de
produccin de energa y sistemas biosinteticos necesarios para el crecimiento y
reproduccin.
3. Qu son las bacterias?
Las bacterias son microorganismos unicelulares, siendo entonces clulas
procariotas. Existen 2 grupos de procariotas: eubacterias y las arqueobacterias.
4. Partes de la estructura bacteriana
Estructuras permanentes:
-
Membrana celular
Ribosomas
Material gentico
Estructuras variables
-
Pared celular
Flagelo
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5.
Fimbrias
Capsulas
Esporas
Tamao de las bacterias
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