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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

GUIA DE PRCTICA DE
BIOLOGIA MOLECULAR

I CICLO

PROFESOR COORDINADOR:
Mg. EDITH RODRIGUEZ QUISPE

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
PRCTICA N1

APLICACIN DEL MTODO CIENTFICO

I. OBJETIVOS:
Dar a conocer los lineamientos bsicos del mtodo cientfico y su aplicacin
Adiestrar al estudiante en el uso del mtodo cientfico para usarlos en el campo de la medicina.

II. MATERIALES:
Lectura (s )seleccionada (s) a partir de revista especializada.

III PROCEDIMIENTO.
- Hacer una descripcin de las diferentes etapas que comprende en mtodo cientfico.
- Leer el artculo seleccionado rpidamente para tener una idea general del mismo.
- Proceda a leer el artculo cuidadosamente y analizarlo con el propsito de establecer lo siguiente:
1. Reconocimiento del problema planteado
2. Formulacin de la hiptesis
3. Formulacin de objetivos y mtodos
4. Prueba de hiptesis mediante la experimentacin
5. Anlisis de resultados y conclusiones.

IV.RESULTADO
-Entregar el reporte del artculo evaluado considerando todos los pasos del mtodo cientfico.

-Artculo de la Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud


Pblica 2013 30(4):616-20.
-Artculo de la Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud
Pblica 2008 25(2):250-52.

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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

PRACTICA N 2

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LOS CARBOHIDRATOS

I.

OBJETIVO
Reconocer las unidades monomricas y macromoleculares como componentes fundamentales de todos los seres
vivos.

II.

MATERIALES POR MESA

Solucin de Glucosa al 1% (Monosacrido)


Solucin de fructuosa al 1%(Monosacrido)
Solucin de Sacarosa al 1% (Disacrido, azcar comn)
Solucin de Maltosa al 1% (Disacrido)
Solucin de Almidn al 1% (Polisacrido)
Solucin de Lugol
cido sulfrico concentrado
Reactivo de Molish
Reactivo de Benedict
Tubos de 13x100
Tubos de 16x150
Gradillas
Pipeta de vidrio de 5 ml. graduada
Pipetas Pasteur
Propipeta
Pinzas de madera
Mecheros, trpode, rejilla de asbesto
Guantes
Plumn marcador

III. PROCEDIMIENTO

3.1. Determinacin General de Glcidos (reaccin de Molish):


Los Glcidos o Hidratos de carbono por accin deshidratante del cido sulfrico originan compuestos derivados
del furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el Reactivo de Molish, formarn un compuesto
coloreado.
Preparacin:
1.
2.
3.

Colocar 1 ml. de cada solucin del glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa y Almidn) en un tubo de
13x100 y roturarlo.
Adicionar a cada tubo con glcido una (1) gota del Reactivo de Molish, agitar suavemente.
Agregar lentamente por la pared del tubo sin agitar 1 ml. de cido sulfrico concentrado.

4.

Observar la formacin de un anillo coloreado en la zona de interfase.

3.2. Determinacin de Azcares Reductores:


Un Azcar reductor al ser sometido a la accin del calor en el medio alcalino del Reactivo de Benedict, sufre
fenmenos de enolizacin y se fragmenta formando cuerpo fuertemente reductores para el cobre del Reactivo de
Benedict que se transforma en Ion cuproso (Cu+) el que reaccionar con los iones OH- del medio para formar
Oxido cuproso (Cu2O) que es de color rojo ladrillo.

Preparacin:
1.
2.
3.
4.

Colocar 2 ml. de cada solucin de glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn) en
un tubo de 16x150 mm y roturarlo.
Adicionar 1 ml. de Reactivo de Benedict a cada tubo.
Someter los tubos a ebullicin en agua hirviendo en un beaker por 5 minutos. Retirarlos con ayuda de una
pinza.
Observar la formacin del oxido cuproso que es color anaranjado hasta rojo ladrillo .

3.3. Determinacin de Almidn:


El yodo del Lugol es absorbido por el almidn a nivel de los enlaces glucosidicos y forma con l compuestos
complejos de color azul negruzco (yoduro de almidn).

Preparacin:
1.
2.
3.
4.
III.

IV.

Colocar 2 ml. de solucin de Almidn al 1% en un tubo de 16x150 mm.


Adicionar 3 gotas de Lugol y agitar.
Observar la formacin de color (azul a negro si es positivo)
Calentar el tubo hasta perder el color y luego enfriar el tubo (interprete el proceso).

CUESTIONARIO:
1. Diga cules son las principales fuentes de carbohidratos en nuestra dieta y cul es el requerimiento diario?
2. Definir azcares reductor y no reductor, de 2 ejemplos.
1. Explique el significado de deficiencia de disacaridasa, de un ejemplo.
2. Establezca las diferencias estructurales y funcionales entre el almidn y el glucgeno.
INFORME: Debe contener lo siguiente

Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Resultados y fundamentos.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver)

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CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
PRCTICA N 3

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LPIDOS y PROTENAS

I.OBJETIVO
Reconocer que compuestos orgnicos como los lpidos y protenas son constituyentes importantes en todos los
seres vivos.

II. MATERIALES POR MESA


Aceite comestible
Albmina al 2%
Alcohol
Cloroformo
ter etlico
Solucin alcohlica de Sudam III
Hidrxido de sodio al 40%
Hidrxido de sodio al 20%
Sulfato de cobre al 1%
cido ntrico concentrado
Tinta roja
Tubos de 16 x 150 mm.
Tubos 13x100mm.
Beakers de 50ml
Mechero
Pipetas Pasteur de plstico de 2.5ml.
Guantes
Pinza de madera
Gradilla para tubos

V.

PROCEDIMIENTO

1.DETERMINACIN DE LPIDOS

A.Solubilidad de los Lpidos


Los lpidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgnicos como el ter y cloroformo.
Preparacin:
1.
2.

3.

Colocar 1 ml. de Aceite en cada tubo de 13x100mm. y agitar.


Agregar:
En el tubo N 1: 1 ml de agua destilada
En el tubo N 2: 1 ml. de Alcohol
En el tubo N 3: 1 ml. de cloroformo
En el tubo N 4: 1 ml. de ter etlico
Agitar (con la misma intensidad a c/u) los tubos..

4.

Observarlos y determinar el grado de solubilidad de mayor a menor.

B.Solubilidad y Tincin en Sudam III


El Sudam III es un tinte diazo del tipo lisocromo altamente soluble en lpidos tindolos en la gama del
rojo cereza al anaranjado.

Preparacin:
1.
2.
3.

Colocar 1 ml. de aceite comestible en dos tubos de 13x100 mm.


Adicionar 1 ml. de Sudam III a uno de ellos y al otro agregar 1ml de tinta roja, agitar dejar reposar .
Observar la coloracin producida en en la zona del aceite en uno de los tubos.

C. Saponificacin.
Las grasas reaccionan en caliente con hidrxido sdico o potsico descomponindose en glicerina y cidos
grasos. stos se combinan con iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son por ende las sales
sdicas o potsicas de los cidos grasos.
1. Colocar en un tubo 16x150mm 2ml de aceite y 2ml de NaOH 20%.
2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo en bao mara de 20 a 25 minutos.
3. Observe en el tubo las 3 fases: inferior que contiene la solucin de soda sobrante junto con glicerina
formada,
Otra intermedia semislida que es el jabn formado y la superior lipdica de aceite inalterado.

II. DETERMINACIN DE PROTENAS


A.REACCIN DE BIURET
Los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo con las sales de cobre en un medio
fuertemente alcalino, dando un color prpura o violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los
iones del Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
Preparacin:
1.Disponer de dos tubos 16x150mm y colocar 2ml. de la solucin de Albmina al 1% solucin Clara de huevo al
10% y una muestra de leche respectivamente.
2. Agregar 2ml. de la solucin de Hidrxido de sodio al 40% en cada tubo y mezclar.
3. Aadir 6 gotas de Sulfato de cobre al 1%.
4.Incubar a 37 C por 10 minutos.
5.Observar la coloracin producida e intrprete .
B.REACCIN XANTOPROTECA
Se emplea para determinar la presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico
concentrado (HNO3). Las protenas que presentan aminocidos con anillos bencnicos, dan derivados
nitrogenados que se colorean de amarillo.
Preparacin:
1.
2.
3.
4.

VI.

CUESTIONARIO:
1.
2.
3.

Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o Clara de huevo al 10% en un tubo de 16x150


Adicionar 2 ml. de cido ntrico concentrado.
Observar la formacin de un precipitado blanco y hervir por 3 minutos.
Observar la coloracin producida.

Qu son los disolventes orgnicos?


Qu es la obesidad y la proteinuria
Qu supone la desnaturalizacin de una protena?

V. INFORME:

Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Resultados y fundamentos.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
PRCTICA N4

EXTRACCIN DE CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO

I. OBJETIVOS:
Utilizar mtodo sencillo de extraccin de ADN a partir de clulas eucariotas poniendo de manifiesto su
estructura fibrilar.
Reconocer algunos componentes estructurales del ADN

II. MATERIALES:
-Muestras de origen vegetal y animal.
-NaCl 0,9% mantener a 4C
-Solucin de Lisis ( EDTA, SDS, NACl) mantenerla en frio.
-Acetato Na 3M
-Etanol 96 frio (mantener a C)
-Solucin salino citratada.
- ADN
-Reactivo de Bial
-Azul de metileno
-Tubos de ensayo 16x150mm.
-Beakers 20ml
-Beaker de 500ml
-Baguetas
-Mortero y piln
-Embudos
-Mechero.
-Pinzas de madera
-Pipetas 5ml
-Propipetas
-Gasas 10x15cm (3)
-Gradilla para tubos
-Tijera
-Pinza de madera.

III PROCEDIMIENTO.
A.Extraccin de ADN:
El ADN en las clulas eucariotas se encuentra en el ncleo disperso y muy replegado unido a protenas para formar
la cromatina. Para extraerlo se requiere homogenizar la muestra para proceder al lisado de membranas , la liberacin
de ADN el retiro de protenas asociadas a dicha macromolcula y su posterior obtencin bajo la forma de fibras .
1. Colocar en el mortero la muestra ( 3 fresas sin hojas y/o pltano 3 cm/ ) e incorporar 2 ml de NaCl
0.9% triturar por 1 minuto.
2. Aadir 10ml de la solucin de lisis y seguir triturando hasta obtener una masa homognea y semilquida
(aprox. 5minutos).
3. Incluir a la preparacin 2ml de acetato de sodio, mezclar, para luego dejar reposar por 5

minutos.
4..Filtrar la preparacin en untubo de 16x150 con la ayuda de un embudo cubierto con gasa.
5. Transvasar 5-8ml d el filtrado a un beaker pequeo e incorporar 2 volmenes de etanol frio
por las paredes e introducir rpidamente una bagueta delgada y girar sobre su mismo eje a fin
para recuperar el ADN bajo la forma de fibras y colocarla en un tubo 16x150mm
conteniendo 1 ml de solucin salido citratada para su resuspencin y uso en la parte
experimental B.
6. Obtener ms fibra de ADN para reconocer el carcter cido, para ello dejar caer en las hebras
el colorante bsico como el azul de metileno,

B. Identificacin de Pentosas (reaccin de Bial)


Las pentosas en solucin cida se deshidratan dando furfural que al reaccionar con el orcinol en presencia de FeCl3,
dan un producto de condensacin de color verde-azulado
1.Colocar 1 ml de ADN en un tubo 16x150 y en otro tubo de 16x150 colocar 1 ml agua destilada.
2.Agregar 3 ml de Reactivo de Bial a cada tubo; calentar cuidadosamente cada tubo en la llama de un mechero hasta
que la solucin comience a hervir.
3.Obsrvese y antese el color que aparece en cada tubo de ensayo.

IV.CUESTIONARIO
1.Cul es la composicin bsica del ADN?
2.Qu protena est asociada al ADN, cules son sus caractersticas?
3. Por qu el ADN absorbe luz UV a 260nm?

V. INFORME:

Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Resultados y fundamentos.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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PRCTICA N5

MICROSCOPA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I.

OBJETIVO
1. Conocer e identificar correctamente las partes pticas y mecnicas del microscopio compuesto.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservacin del microscopio.

II.

MATERIALES
Microscopios
Lminas o portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Lminas artrpodo (Pulex irritans pulga Pediculus humanus piojo )
Suero fisiolgico
Pipeta Pasteur
1 Plumn indeleble
Papel lente
Hebra de algodn
Letra e

III. PARTES DEL MICROSCOPIO


Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio:

PARTE MECNICA
Tubo portalentes y cremallera
Tornillos macro y micromtrico
Revolver
Platina
Condensador
Brazo y Pie
PARTE PTICA
Ocular
Objetivos
Espejo
Lentes de condensador
Diafragma

10

IV. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO


1. Sistema de soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revolver y la platina.
2. Sistema de Iluminacin: comprende el foco, condensador y diafragma.
3. Sistema de Ajuste: comprende el macromtrico, micromtrico y cremallera
4. Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10 x , 15 x y los objetivos de 5x, 10, 40, y
100x.

VII.

PROCEDIMIENTO.

1. Preparar lminas hmedas (gota de suero fisiolgico mas la muestra) con hebra de algodn y letra e en
posicin de lectura .
2. Realizar las observaciones de dichas muestras con los objetivos 4x, 10x y 40x
3. Verificar con la lmina de la letra e, que los movimientos en estos sistemas son invertidos.
4. Observar con los objetivos de 4x y 10x la lmina de artrpodo fijadas.
VIII.
1.
2.
3.
4.
IX.

11

CUESTIONARIO
Definir que es una imagen real y que una imagen virtual
Cules son las unidades de medida de longitud empleadas en microscopia?
Defina aumento y, resolucin del microscopio.
Cmo se define un microscopio electrnico y cules son sus aplicaciones mdicas.

INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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PRCTICA N 6
OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTAS (BACTERIAS)

I.

OBJETIVO

Existen dos tipos de clulas, las procariotas y las eucariotas, que difieren principalmente, en la organizacin de su
material gentico.
Las procariotas no poseen envoltura nuclear, su DNA circular ocupa dentro de la clula un lugar llamado nucleoide
y se halla en contacto directo con el protoplasma. , por ello nuestro objetivo es identificar distintos tipos de
bacterias .
II. MATERIALES POR MESA
Laminas con tincin de Gram de Escherichia coli (bacilos) y Streptococcus (cocos)
Lminas con Tincin de Ziehl Neesel de Mycobacterium
Yogurt natural
Palitos mondadientes
Solucin fisiolgica al 0.85%
Solucin Mercurio cromo
Solucin de Violeta de genciana
Colorante azul de metileno
Alcohol yodado
Lamina portaobjetos
Lamina cubreobjeto
Varilla de coloracin
Aceite de inmersin
Alcohol isoproplico
Papel lente
Depsito para eliminar lminas y laminillas.
Microscopios
Guantes

III.PROCEDIMIENTO
A.Observacin de Microflora bacteriana en cavidad bucal (Tincin de Vag)
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre una lmina.


Con el mondadientes obtener una muestra de sarro dental y esparcir con movimientos circulares
en la gota de solucin fisiolgica.
Secar a temperatura ambiente y luego cubrir con colorante Mercurio de cromo por 5 minutos.
Enjuagar y aplicar inmediatamente el colorante Violeta de genciana, dejar por 3 minutos, para
luego lavar con agua de cao.
Dejar secar la muestra preparada por accin del calor o al medio ambiente.
Observar la lmina con el objetivo de 100x con un gota de aceite de inmersin, e identifique
las diferentes formas bacterianas.

B. Observacin de Lactobacillus en una muestra de yogurt.


1. Colocar una gota de yogurt en el extremo de un portaobjetos y con otro extender el material .
2. Dejar secar, colocar una gota de azul de metileno, cubrir con laminilla.
Observar 40x y 100x.

12

C . Observacin de Bacterias con Coloracines diferenciales como Gram y Ziehl Neelsen


1.Colocar sobre la lmina (E. coli) ya procesada con tincin de Gram , una gota de aceite de
inmersin. Observar con objetivo de 100x.
2.Colocar sobre la lmina (Streptococus sp.) ya procesada con tincin de Gram , una gota de aceite de
inmersin. Observar con objetivo de 100x.
3.Observacin de Mycobacterium turbeculosu s (tincin Ziehl Neelsen con el objetivo de 100x
V. CUESTIONARIO
1. Como es la estructura de una clula bacteriana.
2. Qu es la tincin o coloracin de Gram, como se realiza?
3. Describa a la bacteria que infectan el epitelio gstrico: Helicobacter pylori as como tambin a la
Pseudomona aeruginosa que se relaciona con la fibrosis qustica..

V.INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

BACTERIAS (Procarionte)

13

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PRCTICA N 7
OBSERVACIONES CELULAS EUCARIOTAS : animal, vegetal y fungi

II.

OBJETIVO

Existen dos tipos de clulas, las procariotas y las eucariotas, que difieren principalmente, en la organizacin de su
material gentico.
En las eucariotas el DNA se asocia a protenas formando unas estructuras complejas denominadas cromosomas, los
cuales se encuentran dentro de un ncleo verdadero rodeado por una complicada envoltura nuclear, a travs de la
cual tiene lugar los procesos de intercambios ncleo-citoplasmticos,
- Poder visualizar clulas eucariotas unicelulares y pluricelulares.
- Poder diferenciar al microscopio las caractersticas que presentan la membrana celular de la clula animal y la pared
celular de la clula vegetal.

II.MATERIALES POR MESA


Muestra de clula epitelial de la mucosa bucal
Muestra de catfila de cebolla (Allium cepa)
Muestra de levadura (Saccharomyces)
Lmina de hongos: Penicillium y Aspergillus
Microscopios
Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Bistur
Pinza de punta recta
Mechero de alcohol
Colorante Azul de metileno
Colorante Lugol
Alcohol yodado
Solucin fisiolgica (NaCl 0,9%)
Papel lente

III. PROCEDIMIENTO
A) OBSERVACION DE CELULA ANIMAL (RASPADO DE MUCOSA BUCAL)
1.Con la ayuda de un hisopo hacer un raspado de la mucosa bucal y colocar la muestra obtenida sobre
dos lminas .
2. Agregar a una lmina una gota de suero fisiolgico y a la otra aplicar una gota del colorante azul de
metileno.
3. Cubrir las preparaciones con una laminilla cubreobjeto.
4.Observar las preparaciones con objetivo de 10x y 40x.

14

1- Membrana plasmtica,
3- Retculo endoplsmico rugoso,
5- Nucleolo,
7- Citosol (=hialoplasma),
9- Retculo endoplsmico liso,

2- Mitocondria,
4- Ribosomas,
6- Cromatina,
8- Diplosoma (=centriolos),
10- Aparato de Golgi

B) OBSERVACION DE CELULA VEGETAL (CATAFILA DE CEBOLLA)


1.Con ayuda de la pinza separe una de las catfila de la cebolla y extindalo sobre la lmina portaobjeto.
2.Con el bistur corte cuadritos de medio centmetro de catfila.
3.Disponga de dos lminas y coloque en ella un cuadradito de catfila.
4. Agregar a una lmina una gota de suero fisiolgico y en l otra una gota del colorante lugol
5.Cubrir las preparacines con una laminilla cubreobjeto.
6.Observar con objetivos de 10x y 40x precisar su membrana , pared y ncleo.

C)OBSERVACION DE UNA CELULA FUNGICA UNICELULAR Y PLURICELULAR


C.1 En una lmina colocar dos gotas de cultivo de levadura (unicelulares) cubrir con laminilla y
observar a 40x .
C.2 Observar laminas fijadas de Penicillium y Aspergillus con el objetivo de 40x y 100x.

15

Reconocer sus partes y precisar su pared celular. .

HONGOS PLURICELULARES

Aspergillius

Penicillium :
1. Conidiforo

16

2. Mtula

3. Filide

4. Esporas

CUESTIONARIO.
1. Cmo se define a una clula epitelial, qu funcin tienen y cuantos tipos tejido epiteliales se reconocen.
2. Cules son los componentes y como est estructurado las paredes celulares de las bacterias, hongos y vegetales
3. Defina tincin vital y supravital
4. Qu es el lugol, cual es formula y cules son sus aplicaciones..
V.INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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PRCTICA N 8

FENMENOS FISICOS DE LA CLULA: DIFUSION, OSMOSIS

I.OBJETIVO
Observar los fenmenos de difusin y smosis y su importancia para la clula.
II.MATERIALES
Lminas portaobjeto
Laminillas cubreobjetos
Tubos de prueba
Microscopios
Lancetas hematolgicas
Solucin de NaCl al 0.4%
Solucin de NaCl al 0.9%
Solucin de NaCl al 2.0%
Agua destilada
Alcohol 96C
Algodn estril
Pipetas Pasteur para cada
Gradillas
Microscopios
Papel lente
Conteiner de descarte

(medio HIPOTONICO)
(medio ISOTONICO)
(medio HIPERTONICO)

solucin

III. PROCEDIMIENTO
A) Experimento con eritrocitos (clula animal):
1.Recepcionar tubos de prueba perfectamente rotulados conteniendo:
En el 1er. tubo: 3 ml. de Sol. NaCl al 0.4 %
En el 2do. tubo: 3ml. de Sol. NaCl al 0.9 %
En el 3er. tubo: 3ml. de Sol. NaCl al 2.0 %
1.
2.

Colocar 1 gota de cada concentracin de la sol.NaCl en lminas portaobjetos., previamente rotuladas.


Desinfectar el dedo cordial (tercero) con algodn humedecido en alcohol y realizar una puncin con
ayuda de la lanceta descartable, en el pulpejo del dedo.
3. Dejar caer 1 gotas de sangre a cada lmina y con la ayuda de la laminillas mezclar
suavemente, dejar en
reposo por 2
minutos.
Colocar el cubreobjeto o laminilla y observar en el microscopio 40x..

B) Experimento con catfila de cebolla (clula vegetal):


1. Colocar 1 gota de cada concentracin de NaCl en lminas portaobjeto previamente rotulados.
2. Agregar a cada lmina trocitos de catafila de cebolla.
3. Dejar en reposo dos minutos, para luego cubrirla con una laminilla.
4. Observar al microscopio 10x y 40x

IV. RESULTADO:

18

MUESTRA

Sol. NaCl 0.4% + sangre

MEDIO

Hipotnica

Sol.NaCl 0.9 % + sangre

Isotnica

Sol. NaCl 2 % + sangre

Hipertnica

Sol, NaCl 0.4% + vegetal

Hipotnica

Sol. NaCl 0.9% + vegetal

Isotnica

Sol. NaCl 2% + vegetal

Hipertnica

VI. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.

Qu tipo de difusin es la osmosis y qu es presin osmtica?.


Defina que es: Dilisis, Turgencia y Plasmlisis.
Qu significa homeostasis?
En qu consiste los fenmenos de crenacin y citlisis

V.INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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FENMENO

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PRCTICA N 9

ESTUDIO DE ORGANELAS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS, CLOROPLASTOS Y


PLASTIDOS.

I.

OBJETIVO:
Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las mitocondrias presentes slo en el
citoplasma de las clulas Eucariotas, que vienen a constituir las centrales de energa porque producen
y almacenan energa bajo la forma de ATP.
Las clulas tienen vesculas membranosas que contienen enzimas hidrolticas que permiten la digestin
intracelular y que corresponden a los lisosomas los cuales pueden pueden ser identificados en
protozoarios con una tincin vital.
Con el uso de suero fisiolgico observar plastidos en las clulas vegetales eucariticas, los que
contienen pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son
plastidos incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidn, los Proteinoplastos que acumulan
protenas, los Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos
coloreados como el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la
Xantofila de color amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya
funcin principal es realizar la fotosntesis.

II.

MATERIALES POR MESA:


Muestra de:
Clulas de epitelio bucal
Hoja de Elodea (Cloroplastos)
Aj amarillo (Xantofila)
Zanahoria (caroteno)
Papa (Amiloplastos)
Betarraga (Antocianina)
Cultivo de protozoarios (observacin de lisosomas)
Microscopios.
Bistur
Pinza en punta
Laminas y laminillas
Colorante Rojo neutro
Solucin Verde Janus 1/10,000
Colorante Lugol
Hisopos
Mecheros de alcohol
Guantes

III.

PROCEDIMIENTO:
A) OBSERVACION DE MITOCONDRIA EN EPITELIO BUCAL:
1.Con una lmina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra de la mucosa bucal,
2.Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lmina,
3.Dejar secar la lmina con la muestra al medio ambiente,
4.Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos,

20

5.Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente,


6.Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.
B) OBSERVACION DE LISOSOMAS en PROTOZOARIOS
1.Colocar en una lmina dos gotas cultivo de protozoarios y una gota del colorante rojo neutro, mezclar
dejar reposar 2 minutos..
2.Cubrir con una laminilla y observar el preparado a 10x y 40x . Visualizar en el interior de los
Paramecium a los lisosomas .
C.OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES:
CLOROPLASTOS: Se localizan en las hojas debajo de la epidermis superior.
1.
2.
3.

Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto.
Cubrir la muestra con una laminilla.
Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.
CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas (redondas, elpticas, o
aciculares).

1.
2.
3.
4.

Realizar cortes finos de zanahoria, aj amarillo, betarraga sobre una lmina portaobjetos
Colocar una gota de agua sobre el corte.
Cubrir con una laminilla.
Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.
AMILOPLASTO: Son organelas que contienen almidn como sustancia de reserva.

1.
2.
3.
4.

IV.

Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de Lugol.


Agregar un corte transversal fino de papa .
Cubrir con una laminilla.
Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

PROTOCOLO:

MUESTRAS

OBSERVACIN DE MITOCONDRIA, CLOROPLASTOS Y PLASTIDIOS


20 X

EPITELIO BUCAL
CULTIVO
PROTOZOARIO

HOJA DE ELODEA

AJI AMARILLO
ZANAHORIA
BETARRAGA
PAPA

21

40 X

TIPO DE ORGANELA
PLASTIDIO

V. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.

Qu son las patologas mitocondriales?.


Qu relacin tiene los lisosomas y la autofagia?
Porqu las mitocondrias fijan el colorante verde de Janus?.
Qu funcin cumplen los plastidios en las clula?.

VI.INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
PRCTICA N 10
ACCIN ENZIMTICA

I. OBJETIVO:
Conocer el mecanismo de accin de las enzimas durante una reaccin qumica.
Conocer cmo acta un catalizador.
II. MATERIALES:
Gradilla
Mortero con piln
Tubos de prueba de 16 x150 /13x100
Agua oxigenada
Dixido de Manganeso
Azul de metileno
Aceite
Succinato
sodio 0,1M
Buffer Fosfato pH7.4
NaCl 0,9%
Bistur

Mechero de alcohol
Hgado de pollo
Hisopos
Fsforos
Pipetas pasteurss
Pipetas1ml
Cloruro de sodio
Gradilla
Placas Petri

III. FUNDAMENTACION:
Las Enzimas tienen como funcin acelerar la velocidad de una reaccin qumica. El mecanismo de accin se
realiza de la siguiente manera:
Unin de un Sustrato a la Enzima para formar un Complejo Enzima- Sustrato y desdoblamiento del complejo
formado para liberar los Productos.
E+S E-SE+P
IV. PROCEDIMIENTO:
a. Actividad de la Enzima Catalasa

MnO2 + 2 H2O2
Catalasa + 2 H2O2

2 H2O + O2 + MnO2
2 H2O + O2 + Catalasa

1) Numerar los tubos del 1 al 3


2) Colocar en cada tubo 2 ml. de Perxido de hidrgeno (Agua oxigenada).

3) Agregar al:
Tubo 1: cucharita de Hgado de pollo entero
Tubo 2: cucharadita de Hgado de pollo triturado
Tubo 3: 2 g. Dixido de Manganeso
4) Colocar a cada tubo el palito de Ignicin encendido en la boca del tubo

23

5) Si el palito de Ignicin aumenta la intensidad del fuego, la reaccin es positiva.


b. Actividad de la Enzima Succinato Deshidrogenasa
1) Preparar homogenizado de hgado con cloruro de sodio.
2) Disponer de 2 tubos de 13x100 y roturarlos (tubo N 1 y tuboN 2)
3) Colocar en cada tubo 1 ml de Succinato y luego 1 ml de buffer .
4) Aadir 2 gotas de azul de metileno, agitar, anotar el color.
5) Incorporar al tuboN 1 0,5ml de aceite por las paredes y dejar en la gradilla NO MOVER
6) Agregar al tubo N 2 1ml de homogenizado de hgado e inmediatamente aadir 0,5ml de aceite por las
paredes, No MOVER, dejar en la gradilla.
7) Hacer el seguimiento de la decoloracin de los tubos por 20minutos,
8) Analice lo ocurrido .
.

V. CUESTIONARIO:
1)
2)
3)
4)

Defina que es un catalizador


Qu se entiende por sitio activo.?
Qu tipo de enzima es la catalasa, y cul es su importancia en el metabolismo ?
Cul es el rol de la deshidrogenasa succnica y porque se relaciona con el sndrome de Kearns Sayre?

VI.INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

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CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA N 11

OBSERVACIN DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

I.

OBJETIVOS
Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre perifrica humana,
mediante el uso de una coloracin diferencial.
Observar la presencia de ncleos en su interior.

II.

MATERIALES
Microscopios
Colorante Wright o Giemsa
Alcohol yodado
Agua destilada
Lminas portaobjetos limpias y desengrasadas
Lancetas hematolgicas
Algodn estril
Varillas de coloracin
Lminas coloreadas de sangre con Wright
Papel lente.
Aceite de cedro
Guantes
Conteiner de descarte

III. PROCEDIMIENTO
A.

Obtencin de sangre capilar


1.
2.
3.

B.

Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodn y con una lanceta estril punzar el dedo y
dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lmina portaobjetos.
Con ayuda de otra lmina portaobjeto formar un ngulo de 45 y realizar un frotis, tratando de
esparcir homogneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lmina.
Dejar secar la preparacin y proceder luego a la coloracin con Wright o Giemsa.

Coloracin
1.
Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 minuto.
2.Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 minutos.
3.Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cao.
4.Dejar secar la lmina coloreada.
5.Una vez que la lmina coloreada a secado, observar al microscopio con el objetivo de 100 X y aceite
de inmersin.

IV. PROTOCOLO

25

(Esquematice los siguientes elementos que abajo se indican y que sern


microscopio).

1.

observados con ayuda del

LEUCOCITOS GRANULARES:
a)

Neutrfilos segmentados: presenta un ncleo con varios lbulos (2-5) unidas por bandas de
cromatinas.

b)Neutrfilos en banda o abastonado: presenta un ncleo no dividido en forma de S o en cayado O.


c)Eosinfilos: redondos, voluminosos, con granulaciones acidfilas de color anaranjado, ncleo con dos
lbulos.
d)Basfilos: son escasos de 0-1, presenta un ncleo difcil de observar, pues se halla cubierto por una
granulacin de color violeta o morado oscuro .

2.

LEUCOCITOS AGRANULARES:
a)

Linfocitos: De forma redonda o irregular, su ncleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte
de la clula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su nmero aumenta con las infecciones.

b)Monocitos: De forma redonda u ovalada, ncleo variable generalmente en forma de rin, citoplasma
sin grnulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

3.

PLAQUETAS:
Las ms pequeas de las clulas de la sangre, de forma redonda y no contienen hemoglobina. Son
esenciales en la coagulacin de la sangre.

4.

HEMATIES O ERITROCITOS:
De forma generalmente redonda, sin ncleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina. La protena que
se encarga del transporte de oxgeno y anhdrido carbnico.

Neutrofilos

26

Eosinfilos

Basfilo

Monocitos

Linfocitos
X.

CUESTIONARIO
1. Cul es la diferencia entre plasma y suero?.
2. Diga que es la frmula leucocitaria, cules son los valores normales en el adulto y qu significado tiene los

27

valores anormales.
3. Qu es la histamina y cul es su importancia?.
4. Qu es la anemia, y cul es su origen?

V.INFORME
Cartula;
Introduccin,
Marco terico.
Observaciones (esquemas) con su descripcin.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

28

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CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

PRCTICA N 12

CICLO CELULAR: Divisin Celular : LA MITOSIS

I.

OBJETIVO:
Se estudiar la mitosis y el ciclo de divisin celular en las clulas meristemticas de la raz de Allium cepa
(cebolla).
En este sistema la poblacin celular esta en equilibrio dinmico y los cromosomas son relativamente grandes, con
un nmero diploide ( 2n =16 ).

II.

MATERIALES:
Races de cebolla
Lminas fijadas de mitosis
Placas Petri
Estiletes y pinzas
Papel de Filtro
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersin
Mechero de Alcohol
Orcena actica- clorhdrica
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopios

III.

PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

29

Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeos conteniendo agua corriente, la que deber cambiarse cada 24
horas, mantener los bulbos en oscuridad a 25C y sometidos a aireacin constante.
Despus de 48 a 72 horas, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 races del bulbo, cortar 2 cm. de la parte
apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orcena.
Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente 60C y se observe la emisin
de vapores blancos, evitar la ebullicin del colorante.
Dejar enfriar y repetir esta operacin cuatro veces.
Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos.
Colocar la raicilla en la lmina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, aadir una agota de Orcena fra, cubrir la
preparacin con laminilla.
Con la punta de un lpiz golpear suavemente la preparacin describiendo crculos concntricos para permitir la
extensin del tejido meristemtico.
Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
Observar la preparacin a mayor aumento y lente de inmersin.

IV.

PROTOCOLO:
Esquematizar las diferentes fases que se observan:
Interfase:Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no puede
absorber suficiente colorante para ser visible.
Profase:Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromtidas.
Metafase:Se observa el huso acromtico, los cromosomas estn mas condensados y cortos.
Anafase:Los cromosomas se dirigen a los polos
Telofase:Los cromosomas estn en los polos, empieza la formacin de la membrana nuclear

V.

CUESTIONARIO:
1.

Qu hay de comn entre mitosis y meiosis.

2.

Que es Indic mittico e ndice interfsico

3.

Defina cariocinesis y citocinesis

REALIZAR ESQUEMAS:

FASE DE LA MITOSIS

30

ESQUEMAS

31

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PRACTICA N 13
GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh

I.

OBJETIVO:
Al finalizar la prctica el alumno debe saber qu es el grupo sanguneo, sus aplicaciones en el campo de la
medicina y el grupo sanguneo al que pertenece.

II.

GENERALIDADES:
El serlogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguneos y en
1938 el Comit de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiologa de 1930 en Londres y la
Internacional de Transfusin Sangunea de Pars, se adopt definitivamente la clasificacin de los grupos
sanguneos humanos heredables, designados como A, B, AB, O.

GRUPOS SANGUINEOS RESULTANTES

III.

GRUPO SANGUINEO

ANTIGENO EN GLOBULOS
ROJOS
(AGLUTINOGENOS)

ANTICUERPOS EN PLASMA O
SUERO SANGUINEO
(AGLUTININAS)

Anti-B

Anti-A

AB

AB

Ninguno
(Receptor universal)

Ninguno

Anti-A + Anti-B
(Dador universal)

MATERIAL Y METODOS:
Lmina preparadas de frotis sanguneo
Placas excavadas de porcelana
Lancetas hematolgicas
Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-D o Rh.
Mondadientes
Algodn
Alcohol yodado
Guantes
Conteiner de descarte

32

RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS:


La tcnica de reconocimiento de grupos sanguneos se basa en la aglutinacin o no de los hemates cuando se
mezclan con la aglutinina Anti-A o Anti-B.
IV.

PROCEDIMIENTO :
1.
Limpie con algodn embebido en alcohol la yema del dedo anular.
2.Realizar la puncin utilizando una lanceta hematologa estril.
3.Coloque dos gotas de sangre por separado sobre la lmina portaobjetos, de la persona a la cual se va a realizar
la prueba y en otra lmina otra gota de sangre.
4.Agregar a cada gota de sangre una gota de suero Anti-A y Anti-B y Anti-D o Anti-Rh por separado.
5.Observar la reaccin e identificar a que grupo pertenece y que factor Eh, si es positivo o negativo
METODO DE RECONOCIMIENTO PRACTICO:
GRUPO A
Anti-A Anti-B

GRUPO B
Anti-A Anti-B

GRUPO AB GRUPO O

Rh: Anti D o Rh (+)

Anti- D o Rh (-)

V: CUESTIONARIO :
1.
2.
3.
4.

A quienes se les llama receptores y donadores universales, por qu?


Explique la Eritroblastosis fetal.
En que se basa el reconocimiento de los grupos sanguneos?
Indique que tipo de sangre pueden recibir y donar las personas de los grupos sanguneo A,B,AB y O con
Rh + y Rh -

VI . INFORME ; Cartula,
Introduccin,
Marco terico.
Conclusiones.
Cuestionario.
Referencias Bibliogrficas (estilo Vancouver).

33

Observaciones (esquemas) con su descripcin.

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PRACTICA N14

CDIGO GENTICO
III. OBJETIVOS:
Comprender las bases moleculares del dogma de la biologa molecular.
Usar el cdigo gentico y comprender el efecto de mutaciones y sus posibles causas.
IV. MATERIALES:
Secuencias problemas entregadas por el docente.
Lapiz, borrador.
Tabla de cdigo gentico.

34

III PROCEDIMIENTO.
Analice y complete las siguientes secuencias (en clase)

Ejemplo:

Pro
Reconocer:
Sitio de N glicosilacin: Asparragina-X-Serina o Asparragina-X-Serina-Treonina.
Sitio de O Glicosilaicon: Serina o treonina

SECUENCIA I
Segmento A:
ADN 5

35

ADN3
Mensajero
Aminocido
Segmento B
ADN 5
ADN3
Mensajero
Aminocido

Segmento C
ADN 5
ADN3
Mensajero
Aminocido

Analice y responda:
1.Numero de codones:
2.Numero de aminocidos empleados:
3.Secuencia usada por la ARN polimerasa:
4.Sitios de Glicosilacion.

SECUENCIA II
Segmento A:
ADN 5
ADN3
Mensajero
Aminocido

Segmento B
ADN 5
ADN3
Mensajero
Aminocido
Segmento C
ADN 5
ADN3
Mensajero
Aminocido

36

Analice y responda:
1.Numero de codones:
2.Numero de aminocidos empleados:
3.Secuencia usada por la ARN polimerasa:
4.Sitios de glicosilacin:

Secuencia C (para el informe: preste atencin a las indicaciones que dar el profesor)
*A continuacin se le entrega una secuencia de aminocidos, halle la posible secuencia nucleotdica y responda lo
siguiente:

FVNQHLCGSH LVEALYLVCG ERGFFYTPKS


1.Numero de aminocidos:
2.Nmero de Codones:
3.Por qu el primer aminocido no es Metionina?
4.Cmo podramos averiguar a qu protena pertenece esta secuencia?

IV.CUESTIONARIO
1.Por qu el cdigo gentico es degenerado?
2.Qu mutaciones son cruciales en el gen de hemoglobina y como atae esto la salud?
3.Explique, por qu en el cdigo gentico se utilizan tres nucletidos por codn?
4.Por qu son importantes las mutaciones?

37

38