Bases moleculares

Principio molecular de FISH

La tcnica FISH toma como fundamento la complementariedad de los cidos
nuclicos, la cual puede ser DNA y/o RNA, a travs de puentes de hidrgeno
formados entre las bases: adeninatimina (DNA) o uracilo (RNA) y citosinaguanina (DNA y RNA). Este apareamiento da lugar a una doble cadena en
la cual una cadena, tiene la orientacin opuesta a la otra con respecto al
esqueleto azcar-fosfato. La secuencia es leda de 5' a 3'.
Los elementos bsicos de FISH son:
Secuencia blanco de ADN
Sondas
Antes de la hibridacin, la sonda de ADN es etiquetada con nick de traduccin,
etiquetado de primers al azar y PCR. Hay dos estrategias de etiquetado en FISH:
Indirecta: sondas marcadas con hapteno.
Directa: sondas marcadas con fluorfo.
A continuacin, la sonda marcada y el ADN diana se desnaturaliza. Y finalmente,
la combinacin de la sonda desnaturalizada y secuencia blanco permite la
hibridacin de secuencias de ADN complementarias. Es importante recordar que
la sonda etiquetada indirectamente permite la visualizacin del hapteno no
fluorescente utilizando un sistema de deteccin enzimtica o inmunolgica
Tipos de sondas
Sondas especficas de un locus
Sondas que se hibridan a una regin particular de un gen. Son tiles cuando se ha
aislado una pequea parte de un gen y se quiere averiguar en qu cromosoma se
encuentra.
Sondas alfoides o centromricas
Sondas que contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas
que se encuentran en los centrmeros de los cromosomas. Cada cromosoma
puede ser marcado de manera distinta. Se puede averiguar si un individuo tiene el
nmero correcto de cromosomas o si tiene un cromosoma extra.
Sondas para cromosomas completos
Sondas de un tamao reducido, cada una hibridada a una secuencia diferente a lo
largo de todo un cromosoma. Se puede marcar todo un cromosoma generando un
cariotipo espectral. Se consiguen imgenes en color que permiten examinar los
cariotipos de una forma ms exacta.
Bibliografa:
Copyright 2005 Nature Publishing Group, Speicher, M. R., et al., The new
cytogenetics: Blurring the boundaries with molecular biology, Nature Reviews
Genetics 6, 782792
Universidad Autonoma de Mexio (UNAM). HIBRIDACIN in situ. [Web en lnea].
<http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/hibridacion_in_situ.pdf>. [Consulta: 99-2011]
Instituto Qumico Biolgico (IQB). HIBRIZACIN FLUORESCENTE IN SITU .
[Web en lnea]. <http://www.iqb.es/monografia/fichas/ficha033.htm>. [Consulta: 99-2011]