Introduo

Insulin
a

Glucago
n

Material
Foram utilizados ratas da espcie Wistar
3 Gaiolas: Gravidas com parto normal
Gravidas para coleta pre-natal
No gravidas
Acesso vontade a comida e bebida
Com 12 h de luz e 12 h de escurido
Fecundadas com plugs copulatorios (1 dia de gestao)

Pre -natal
Do dia 17 ao dia 22, coleta de material tanto materno
quanto fetal
Anestesia com pentobarbital sdico, 50 mg/kg via
intraperitoneal
Amostras coletadas foram resfriadas com nitrognio
liquido
Em algumas ninhadas apenas o sangue foi coletado

ps-natal
Coleta foi realizada nos dias 7,14, 21, e 28 aps o
nascimento
Coleta atravs de veias porta e veia cava
Ratas no-grvidas foram sacrificadas para coleta
sangunea

Preparo
Os tecidos congelados foram reunidos e
homogeneizados
Os tecidos foram colocados em uma soluo
com:500mM de sacarose, 62.5mM de glicilglicina, 50mM
de NaF, e 5mM de EDTA (quelante)
A foi soluo centrifugada e foram realizados testes
para glicognio-sintase e glicognio-fosforilase
Para o ensaio de sintase-fosfatase e atividades
fosforilase-fosfatase, foram usados ratos ps-natal

Mtodo
Para medir a atividade da sintase-fosfatase foi utilizado um
mtodo de duas etapas
Na primeira etapa, 30l de glicognio-sintase b(inativa) do
msculo esqueltico parcialmente purificado foram adicionados a
60l da subfrao apropriada e 20l de gua destilada, que foram
colocados em um tubo e em um banho com temperatura 30C
Posteriormente uma alquota de 25l foi removido deste tubo e
colocados em outro contendo 50l da mistura teste de glicogniosintase

Mtodo
Outros alquotas foram removidos dos tubos de incubao de
fosfatase em 5 e 10 minutos e colocados em tubos -G6P de
reao
Aps isso, as misturas foram filtradas e as medidas
mensurveis
A atividade enzimtica sintase-fosfatase foi determinada
como a ativao ao longo do tempo da glicognio-sintase
anteriormente inativa
Considera-se que este mtodo representa a atividade
sintase-fosfatase fisiologicamente relevante, pois simula a
ativao do substrato inativo em condies fisiolgicas

Mtodo
Atividade fosforilase-fosfatase[PFK] foi medida como a
taxa de converso de glicognio-fosforilase da forma
ativa(a) para a inativa(b).
Fraes celulares apropriadas(30l) foram adicionadas
aos tubos de incubao contendo 20mM de glicilglicina,
10mM de cafena, 10% de glicerol, e 0.1% de albumina,
pH 7.8.
As reaes foram iniciadas pela adio de 10U/ml de
fosforilase a do msculo de coelho
A reao de glicognio-fosforilase a foi encerrada em 20
minutos pela remoo de 60l e marcao em
quadrados de papel-filtro em 66% de etanol.

Glucagon e Insulina
As determinaes da insulina e do glucagon plasmticos
foram feitos utilizando mtodos de radioimunoensaio
O glucagon plasmtico livre foi medido usando o
anticorpo anti-glucagon