GLUCLISIS ANAEROBICA: FERMENTACIN ALCOHLICA

DANIELA CARVAJAL MUOZ

VIVIANA MARCELA LPEZ BEDOYA
ERIKA MEDINA MORALES

JAIME ANDRS PEREAEZ JIMNEZ

INFORME DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA
QUMICA FARMACUTICA
MEDELLN
2014

INTRODUCCIN

Las biomolculas son esenciales en el mantenimiento de la vida de los

organismos vivos, pues son precursoras de un sinnmero de procesos, en los
cuales, se produce o consume energa libre con el fin de permitir a los sistemas
vivos llevar a cabo sus diversas funciones. Este conjunto de procesos o bien,
reacciones, constituyen el metabolismo, donde: pueden degradarse las molculas
biolgicas para la obtencin de energa, lo cual se conoce como catabolismo; o
sintetizarse a partir de componentes ms simples, generando un consumo de
energa, lo cual se denomina anabolismo. Es importante anotar que estas dos vas
metablicas estarn, entonces, acopladas; la energa libre producida a travs del
catabolismo, ser posteriormente consumida en la va anablica. (1)
Uno de los principales conjuntos de reacciones catablicas es propiciado por los
carbohidratos, especialmente la glucosa, la cual ocupa una posicin central en el
metabolismo de animales, microorganismos y plantas. El proceso de obtencin de
energa a partir de carbohidratos se denomina gluclisis, el cual est constituido
especficamente por diez reacciones: las cinco primeras estn involucradas en la
fase de preparatoria, donde se obtienen los intermediarios metablicos o
metabolitos necesarios para la obtencin de energa; las cinco restantes
conforman la fase de ganancia, donde se genera energa e intermediarios
esenciales en la oxido-reduccin de diversas molculas de distintos procesos
metablicos. De esta forma, se da lugar a tres transformaciones qumicas
importantes: Degradacin de la glucosa (6 carbonos) a piruvato (3 carbonos),
fosforilacin del ADP a ATP por medio de compuestos fosfato de alta energa y
reduccin del NAD+ a NADH. (3)
El piruvato resultante de la glcolisis puede tomar tres rutas metablicas distintas,
dependiendo de la cantidad de oxgeno presente:
1. En condiciones aerbicas, se oxidar hasta Acetil-CoA, y este,
posteriormente, entrar al ciclo de Krebs, donde sufrir oxidaciones
sucesivas hasta la obtencin de CO2. Los electrones resultantes de estas
oxidaciones sern transferidos a la cadena transportadora de electrones,
donde finalmente se obtendrn agua y ATP. (3)
2. En condiciones anaerbicas, puede tomar dos vas. En los seres humanos
y otros animales, en condiciones de hipoxia (por ejemplo, en actividad fsica
vigorosa), el piruvato ser transformado en lactato, continundose la
gluclisis; proceso conocido como fermentacin lctica. Para algunos

tejidos vegetales, invertebrados, protistas y microorganismos como

bacterias y levaduras de la cerveza y la panificacin, en condiciones
anaerobias, el piruvato ser degradado a etanol y CO 2, lo cual se conoce
como fermentacin alcohlica. (3)

Figura 1. Rutas metablicas del piruvato. (3)

La fermentacin alcohlica ha sido de gran importancia para la humanidad durante

miles de aos, pues el etanol y el CO2 resultante se han empleado para la
fabricacin de bebidas alcohlicas como la cerveza, el vino y el champn; as
como en la panificacin. Adicionalmente, la tecnologa empleada para la
produccin de bebidas alcohlicas a gran escala, adems de la produccin de las
mismas, ha encontrado la posibilidad de generar biocombustible a partir del etanol
y productos secundarios como protenas para la alimentacin de animales. (2) (3)
En esta prctica, se pretende evaluar cualitativa y cuantitativamente la velocidad a
la cual un tipo de levadura puede llevar a cabo la fermentacin de diferentes
clases de carbohidratos, a travs del anlisis de CO 2 generado.

RESULTADOS

Carbohidrato

Volumen
desplazado

Glucosa
10%
tubo 1

Glucosa
30%
tubo 2

Fructosa
10%
tubo 3

Sacarosa
10%
tubo 4

Almidn
1%
tubo 5

Glucosa
30%
con
agua
tubo 6

Glucosa
30%
con
NaF
tubo 7

14 ml

10 ml

13.5 ml

10 ml

1 ml

14 ml

3.5 ml

Tabla 1. Volumen desplazado de agua en cada una de las disoluciones de carbohidratos,

directamente proporcional a la cantidad de CO2 producido.

ANLISIS DE LOS RESULTADOS

Para evaluar la velocidad a la cual el tipo de levadura empleado en la prctica de
laboratorio llev a cabo la fermentacin de cada una de las soluciones de
carbohidratos (a diferentes concentraciones), bsicamente se hizo una medicin
del CO2 producido de acuerdo al volumen de agua desplazado por el mismo, en
un tiempo determinado (15 minutos), en todas las soluciones particulares; dichas
soluciones corresponden a las expuestas en la Tabla 1.
La cantidad de CO2 generada en los tubos del 1 al 5, se compar con la ecuacin
neta balanceada de cada uno de los carbohidratos contenidos en los mismos, para
reconocer si la proporcin de CO2 experimental corresponde a la planteada
tericamente. As:
1. Para los tubos 1 y 2, glucosa 10% y 30% respectivamente (3):
Glucosa+2 ADP +2 Pi 2 Etanol+ 2CO 2+ 2 ATP+2 H 2 O
2. Para el tubo 3, fructosa 10%:
Fructosa+ 2 ADP+2 Pi 2 Etanol+2 CO2 +2 ATP+2 H 2 O
3. Para el tubo 4, sacarosa 10%:
Glucosa+ Fructosa+4 ADP+ 4 Pi 4 Etanol+ 4 CO 2+ 4 ATP+4 H 2 O
4. Para el tubo 5, almidn 1%:
( Glu cosa ) n+nADP +nPi nEtanol+n CO2 +nATP+ n H 2 O

Al comparar los tubos 1 y 2, los cuales contenan glucosa en diferentes

concentraciones, aunque segn la ecuacin 1 producen la misma proporcin de
CO2 y por ende, la cantidad de este compuesto obtenida aumente a mayor
concentracin de glucosa, esto no se observ a nivel experimental, pues el
volumen desplazado correspondiente a el tubo 2 (Glucosa 30%) fue menor que el
tubo 1 (Glucosa 10%). Esto pudo ser ocasionado porque cada uno de los
montajes en los que se evalu la actividad de la levadura, fue diferente para cada
uno, siendo elaborado por diferentes equipos del laboratorio; adems, haban dos
muestras de levadura diferentes, pudindose tomar la alcuota requerida sin
distincin entre uno y otro. En consecuencia, las condiciones a la cual estaba
sometida la levadura (temperatura, tiempo de reaccin) y la cantidad tanto de
levadura como de carbohidratos tomada, aunque se trataran de establecer en
trminos homogneos, pudieron variar y por ello, afectar los resultados obtenidos.
Por otra parte, tambin puede realizarse una comparacin entre los tubos 2, 3, 4 y
para establecer en cul de todos los carbohidratos analizados hubo una mayor
produccin de CO2. Para ello, se orden cada uno de los carbohidratos segn la
rapidez de la reaccin, proporcional a la cantidad de CO 2 generada:
1. Glucosa 30% (Tubo 2), Sacarosa 10% (Tubo 4)
2. Fructosa 10% (Tubo 3)
3. Almidn 1% (Tubo 5)
La glucosa y la fructosa al ser monosacridos, carbohidratos ms simples, pueden
ser metabolizados de manera mucho ms rpida que otras formas ms complejas
como el almidn (polisacrido). De esta manera, es como el volumen de agua
desplazado por el CO2 a partir de estos monosacridos, es mucho mayor que el
carbohidrato contenido en el tubo 5; en otras palabras, hay mayor produccin de
CO2. Tambin es importante anotar que, aunque, a nivel terico (Ecuacin 3 y 4),
se espera que mediante la sacarosa y el almidn (este en mayor grado) se
produzca una cantidad superior de CO2 que para la glucosa y la fructosa, en la
prctica esto no se reflej, ya que estas formas ms complejas de carbohidratos
deben hidrolizarse en sus monosacridos especficos para la entrada de estos a la
gluclisis y como se fij un tiempo invariable para cada una de las reacciones, la
hidrlisis ocup gran parte de este, disminuyndose el tiempo disponible para la
gluclisis y posterior produccin de CO 2. Adicionalmente, el volumen desplazado a
partir de la sacarosa fue igual al de la glucosa 30%, aunque se esperara, como se
expres anteriormente, que este fuera menor que el de la misma. Esto pudo ser
ocasionado por dos factores: la hidrlisis de la sacarosa a glucosa y fructosa no
influye significativamente en la velocidad de reaccin, o al manipularse la levadura

en diferentes condiciones (ya mencionadas) se gener un margen de error en la

cantidad de CO2 producido.
Adems de lo anterior, el almidn, al ser el carbohidrato ms complejo y en
consecuencia, al requerir un tiempo considerable para su hidrlisis, es de
esperarse que necesite de un intervalo de tiempo mayor a 15 minutos para que
produzca la cantidad neta de CO 2 va gluclisis anaerobia. Se sabe que el almidn
est conformado por grandes subunidades de -amilosa y amilopectina, cada una
de ellas formadas por molculas de glucosa unidas por enlaces (1-4) y (1-6)
respectivamente. Antes de entrar a la gluclisis, el almidn debe ser hidrolizado a
las molculas de glucosa respectivas por una amilasa, lo cual requiere un tiempo
adicional al que sera utilizado para metabolizar una simple molcula de glucosa.
(4)
El fluoruro de sodio (NaF), es un inhibidor del proceso de la fermentacin, este
efecto se evidenci, gracias a la reduccin del volumen desplazado por el dixido
de carbono (CO2) generado por la reaccin en el tubo al que fue agregado. Este
compuesto en disolucin acuosa es capaz de formar un complejo con el catin del
magnesio (Mg2+) y el anin del fosfato, inhibiendo la accin cataltica de la enzima
Enolasa. Dicha enzima, es encargada de catalizar la transformacin de 2fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato, para formar posteriormente el piruvato. (5)

PREGUNTAS

1. En qu consiste la fermentacin lctica y glicrica? En qu se

diferencian de la fermentacin etanlica?
En condiciones anaerbicas, la nica posibilidad de sintetizar ATP para la
mayora de los organismos es la degradacin de glucosa a piruvato
(gluclisis). El NADH+H+ obtenido durante el proceso debe de ser oxidado
en forma continua a NAD+ para asegurar la continuidad de la gluclisis, y
por ende, la sntesis de ATP. Este proceso, se le conoce como
fermentacin. (6)
En la fermentacin alcohlica, el piruvato se convierte en etanol en dos
pasos. En el primero, se libera dixido de carbono de carbono (CO 2) del
piruvato, que se convierte en el compuesto de dos carbonos acetaldehdo.
En el segundo, el acetaldehdo es reducido por el NADH a etanol. Lo que
genera, la provisin de NAD + necesario para la continuacin de la gluclisis.
Durante siglos, el ser humano ha utilizado la levadura (hongo) para la
produccin de cervezas, vinos y la panadera.
Por otra parte se encuentra la fermentacin lctica, en la cual, el piruvato se
reduce directamente a la por accin del NADH para formar lactato como
producto final, sin liberacin de CO 2 (el lactato es la forma ionizada del
cido lctico). La fermentacin cida lctica es llevada a cabo por ciertos
tipos de hongos y bacterias, y utilizada para la produccin de productos
lcteos como el queso y el yogur. Las clulas del musculo humano
sintetizan ATP mediante la fermentacin lctica cuando hay escasez de
oxigeno (hipoxia). (7)
Asimismo, La glicerina es el alcohol ms sencillo con tres grupos hidroxilo.
Tiene mltiples usos e industrialmente se prepara por saponificacin de
aceites y grasas en la fabricacin de jabones. Tambin puede prepararse
por sntesis a partir del propileno o propano. Un mtodo alterno es por
fermentacin. Este est a cargo de la levadura Saccharomyces
ellipsoideus. El sustrato contiene azcar fermentable y cuando es necesario
se le aaden sales nutritivas (sulfito de sodio). El proceso se realiza entre
30 - 37C. (8)
Dicho lo anterior, podemos evidenciar diferencias notables entre ellas. En
primer lugar, tanto la fermentacin lctica como la fermentacin glicrica se
dan en una sola reaccin, mientras que la fermentacin alcohlica se da en

dos reacciones sucesivas. En segundo lugar, las reacciones tienen

diferentes productos (cido lctico, glicerina y etanol), a pesar de que en las
tres fermentaciones se parte del piruvato. Por ltimo, la fermentacin lctica
y la glicrica, adems de ser efectuadas por algunos microorganismos,
tambin puede darse en los seres humanos, mientras la alcohlica solo
puede ejecutarse por microorganismos como las levaduras, que procesan
los carbohidratos para obtener productos finales como etanol, dixido de
carbono y ATP.
2. El arsenato (AsO4) es qumicamente similar al fosfato inorgnico
(PO43-) y algunas enzimas que utilizan fosfato inorgnico pueden
utilizar tambin arsenato. La produccin de ATP en la glucolisis es
inhibida por el arsenato. Identifique las enzimas que pueden ser
afectadas.
El arsenato es especial respecto a sus efectos sobre la gluclisis. No es un
inhibidor del proceso y, en ciertas condiciones, puede incluso estimular el
flujo a travs de la gluclisis. El arsenato impide la sisntesis de ATP al
causar arsenlisis en la reaccin del gliceraldehdo-3-fosfato
deshidrogenasa. El arsenato se parece muchi al P i y puede sustituir a ste
en reacciones catalizadas por enzimas. El resultado en el caso de reaccin
catalizada por gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa es la formacin de
un anhdrido mixto del cido arsnico y del grupo carboxilo del 3fosfoglicerato. El 1-arseniato-3-fosfoglicerato es inestable y experimenta
hidrlisis espontnea a 3-fosfoglicerato y arsenato inorgnico. De este
modo, aunque la gluclisis contina sin debilitarse en presencia de
aresenato, no se forma 1,3-bifosfoglicerato, lo que da lugar a la prdida de
capacidad para sintetizar ATP en el paso catalizado por la fosfoglicerato
quinasa. La consecuencia de ello es que cuando la gluclisis se lleva a
cabo en presencia de arsenato, no hay sntesis neta de ATP, ya que el ATP
invertido en la fase de preparacin queda equilibrado por el ATP generado
en el paso de la piruvaqto quinasa. Esto, juntamente con el hecho de que la
arsenlisis tambin interfiere en la formacin de ATP por fosforilacin
oxidativa, hace que el arsenato sea un compuesto txico. (9)
3. Adems de ATP, se forman otros dos productos importantes en la
glicolisis Cules son?
Tenemos que los otros dos productos importantes son el piruvato y el
NADH de los cuales se producen dos molculas de cada uno.
PIRUVATO: En la respiracin anaerbica, el piruvato se utiliza como punto
de partida para la fermentacin, produciendo etanol o lactato. En la
respiracin aerobica, el piruvato se transporta a la mitocondria para ser
utilizado en el ciclo de TCA.

NADH: La gran cantidad de NADH resultante de la gluclisis, oxidacin de

cidos grasos, y el ciclo del TCA utiliza para suministrar la energa para la
sntesis de ATP a travs de la fosforilacin oxidativa. La oxidacin del
NADH con la fosforilacin del ADP para formar ATP son procesos que se
hacen con el apoyo del transporte de electrones de la mitocondria y por la
sintasa de ATP, que son complejos proteicos que se encuentran en la
membrana mitocondrial interna.
4. Enumere algunos inhibidores de la gliclisis.
La gluclisis es un proceso metablico, regulado por algunas enzimas
participes en la misma ruta. Dichas enzimas, son inhibidas por las
necesidades de la clula, es decir, los excesos de algunos sustratos y
productos pueden bloquear o activar la accin cataltica de las enzimas.
La hexoquinasa es inhibida por el producto de reaccin de la glucosa-6fosfato. Asimismo, la fosfofructoquinasa 1 (PFK1) es una enzima clave en el
control de la glucolisis. Bsicamente, esta es la principal limitante de la
velocidad glucoltica, siendo sensible a los cambios energticos de la
clula. Se ve inhibida por metabolitos como ATP, citrato, H +. Igualmente, la
piruvato quinasa es inhibida por el ATP, ALA, Acetil-CoA y los cidos grasos
de cadena larga. Los ltimos pueden proporcionar ATP a travs del Ciclo de
Krebs. Es activada por Fructosa-1,6-Bifosfato y en hgado es inhibida por
fosforilacin. (6)
Otros compuestos que inhiben el metabolismo energtico son: monxido de
carbono y yodo-acetatos.
CONCLUSIONES

La estructura del compuesto interfiere sobre la fermentacin alcohlica

mediada por microorganismos como las levaduras, debido a que, los
polisacridos a diferencia de los monosacridos y los disacridos deben
romper un mayor nmero de enlaces para poder iniciar de la gluclisis y
pasar a la fermentacin.

La fermentacin alcohlica es un proceso metablico de algunos seres

vivos, el cual, se presenta en condiciones anaerobias. Los productos de
dicho proceso; Etanol y CO2, son aprovechados para la produccin de
bebidas alcohlicas y en la panadera.

La gluclisis es un proceso rpido, aprovechado por la clula para solventar

las necesidades

energticas en condiciones donde hay poca

concentracin de oxigeno (O2)

El fluoruro de sodio es un inhibidor de la glucolisis, gracias a que, inhibe la

enzima enolasa imposibilitando la transformacin de fosfoenolpiruvato en
piruvato, disminuyendo la actividad en la reaccin a la mitad.

REFERENCIAS

(1) Voet D, Voet JG, Pratt CW. Fundamentos de Bioqumica.2a ed. Buenos
Aires: Editorial Mdica Panamericana S.A.; 2006. Captulo 13, Introduccin
al metabolismo; p. 396
(2) Voet D, Voet JG, Pratt CW. Fundamentos de Bioqumica.2a ed. Buenos
Aires: Editorial Mdica Panamericana S.A.; 2006. Captulo 14, Catabolismo
de la glucosa; p. 448
(3) Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry [Internet] .5 th
ed. New York: W.H. Freeman and Company; 2008. Chapter 14 th, Glycolysis,
Gluconeogenesis and the Pentose Phosphate Pathway; p.527-530,546-549.
[Access
August
10th
2014].
Available
in:
https://archive.org/stream/LehningerPrinciplesOfBiochemistry5thFifthEdition
2008/Lehninger%20Principles%20of%20Biochemistry%205th%20Fifth
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(4) Voet D, Voet JG, Pratt CW. Fundamentos de Bioqumica.2a ed. Buenos
Aires: Editorial Mdica Panamericana S.A.; 2006. Captulo 8,
Carbohidratos; p. 215,218-219.
(5) Lpez Prez, Jos Pedro. Boronat Gil, Raquel. Estudio de la inhibicin
de la respiracin/fermentacin en clulas de levadura por fluoruro de sodio
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(6) Koolman, Jan. Rhm, Klaus-Heinrich. Bioqumica: texto y atlas [En
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(7) Campbell, Neil. Reece, A.Jane. Biologa [En lnea]. 7 ed. Madrid;
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http://books.google.com.co/books?
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(8) Capitulo 2 La fermentacin alcohlica y otras clases de
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[acceso
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http://datateca.unad.edu.co/contenidos/306598/contlinea/capitulo_2_la_fer
mentacin_alcohlica_y_otras_clases_de_fermentacionesdefinicin_condicione
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(9) Devlin, Thomas M. Bioqumica: libro de texto con aplicaciones mdicas
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