Prof. MSc.

Dora Cristina
González
Prof. Carlena Navas
Prof. Ana Karina Hernández
Prof. Vanessa Villareal.
 ¿QUE ES LA HISTOLOGIA?
“Estudio del Tejido”
Análisis de la composición microscópica y la respectiva función del
material biológico.

 Anatomía:

 Anatomía Macroscópica:
 Anatomía Microscópica:

 Año 1600: primeras investigaciones histológicas (invento del

microscopio).

 Marcello Malpighi es el fundador de la Histología.

 Año 1665: Hooke descubre que el tejido vegetal se constituye de

pequeñas cámaras (células).

 Teoría Celular:“La célula es el elemento fundamental del organismo

al que se deben trasladar todos los procesos vitales”. Las plantas y los
animales son agrupaciones de estas unidades vivas potencialmente
independientes.
 ¿QUE ES LA HISTOLOGIA?
 Nace la Citología:

Teoría de Virchow: omnis cellula e cellula.

 Tejido: Órgano:

Sistemas de órganos: Sistemas difusos:

“La Histología representa el nexo de unión entre la

bioquímica, la fisiología y la genética, por un lado y
los procesos patológicos y la clínica por el otro”.
 Fundamentos de la Preparación
Histológica de los Tejidos
Muestra: Humano o animal.
Se obtiene mediante extirpación de pequeños fragmentos de tejido
(humano o animal).
Preparación de Tejidos para Microscopía Óptica:
1. Fijación: consiste en interrumpir los procesos de degradación que
aparecen tras la muerte celular. tratando de conservar la
arquitectura y composición tisular más próxima posible a como era
en el organismo vivo.

Finalidad:
1) Abolir el metabolismo celular
2) Impedir la degradación enzimática de las celulas y los tejidos por
autolisis (Auto digestión)
3) Destruir los microorganismos patógenos como bacterias, virus y
hongos.
4) Endurecer el tejido como consecuencia de la formación de enlaces
cruzados o la desnaturalización de las moléculas proteicas.
 Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los
Tejidos (inanimados o muertos)

2-. Deshidratación: proceso mediante el cual se elimina

completamente el agua del espécimen o muestra tisular para que
se pueda embeber adecuadamente el tejido en aquellos medios de
inclusión que no sean hidrosolubles. Se suele realizar usando
alcohol etílico.

3-.Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitución del

agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de
inclusión. Xileno (xilol).

4-.Infiltración (Impregnación): Proceso que tiene por objeto

“rellenar o infiltrar” completamente la muestra histológica con el
medio que se va a usar para la imbibición del tejido.
 Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los
Tejidos (inanimados o muertos)

Baños Tiempo de procesamiento

(para inclusión) Manual Automático

Formol 10%
Etanol 70% 2 horas 30 minutos
Etanol 95% 2-4 horas 1 hora
Etanol 100% 2-4 horas 1 hora
Etanol 100% 1-2 horas 1 hora
Etanol 100% 1-2 horas 1 hora
Alcohol-Xilol 1 hora 30 minutos
Xilol I 1 hora 45 minutos
Xilol II 1 hora 45 minutos
Parafina Líquida 1 hora 1 hora
Parafina Líquida 1 hora 1 hora
Parafina Líquida 2 horas 1-2 horas
 Fundamentos de la Preparación Histológica de
los Tejidos.

5-. Encastramiento del tejido y confección de los bloques:

consiste en la de un bloque sólido de tejido más medio de
inclusión.
Se utilizan las llamadas “estaciones de inclusión”: dispensador
de parafina líquida, placa caliente para la orientación de la
pieza y placa fria para la solidificación del bloque.
Orientación de la pieza: Se coloca en la posición adecuada
al tipo de corte que se desea realizar (la cara inferior del
bloque será la superficie de corte).
Corte del bloque en un micrótomo de parafina con cuchilla de
acero (3-8 µm de grosor).
 Fundamentos de la Preparación
Histológica de los Tejidos

6-. Montaje: Colocar los cortes sobre portaobjetos

cubiertos previamente con capa de albúmina o
gelatina.

7-. Coloración: Tinción con colorantes histológicos en su

mayoría en solución acuosa (por lo que los cortes
incluidos en parafina deben ser “desparafinados).
El método de tinción más usado en la Hematoxilina-
eosina (HE)
 Fundamentos de la Preparación
Histológica de los Tejidos
Preparación de Tejidos para Microscopía Electrónica:

1. Fijación: Glutaraldehído o Tetróxido de osmio.

2. Deshidratación: Etanol y/o acetona en concentraciones crecientes
3. Aclaramiento: óxido de propileno (1-2 epoxipropano).
4. Inclusión: plástico (resinas). Epoxirresinas (araldite, resina epon y
resina de Spurr)
5. Confección de los bloques y cortes con un ultramicrotomo con
cuchilla de vidrio o diamante (20-100 nm). El corte se controla con un
microscopio y se aumenta el contrasta mediante el pasaje rápido por
una solución de acetato de uranilo.
No es necesario eliminar el plástico de inclusión.
6. Montaje: Los cortes ultrafinos se montan sobre un reticulado de cobre
(“grilla”) cubierto por una película plástica de sostén delgada.
 Fundamentos Químicos de la Coloración

El fundamento de cualquier método de tinción radica en la

propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar
de modo variable diversas sustancias coloreadas llamadas
colorantes.

ACIDOFILIA: Es la afinidad de tinción por los colorantes ácidos.

BASOFILIA: Es la capacidad de tinción por los colorantes básicos.

 Un ácido es una sustancia capaz de liberar un protón.

 Una base en una sustancia capaz de aceptar un protón.

Por lo tanto un colorante ácido tiene capacidad

para formar un enlace con un grupo tisular con carga positiva, y
un colorante básico forma enlace con un grupo tisular con
carga negativa.
Fundamentos Químicos de la Coloración
Fundamentos Químicos de la Coloración

 Colorantes Básicos: aquellos que poseen una carga global

positiva (catiónicos), por lo que reaccionan con los
componentes aniónicos de las células y los tejidos. Ej.:
Hematoxolina, fucsina básica, etc.
 Colorantes Ácidos: aquellos que poseen una carga global
negativa (aniónicos) por lo que reaccionan con los
componentes catiónicos de las células y los tejidos. Ej.:
Eosina, fucsina ácida, etc.
 Fundamentos Químicos de la
Coloración
Colorantes metacromáticos: colorantes básicos que
reaccionan con algunas estructuras tisulares que producen
tonos de color totalmente distintos al que se espera por el
colorante empleado. Ej.: azul de metileno o de toluidina en
la sustancia fundamental del cartílago (azul al rojo o
púrpura).
Colorantes neutros: su carga global es neutra por lo que
conservan la propiedad de colorear conjunta o
separadamente diversas estructuras. Ej.: tinción de Giemsa.

Colorantes indiferentes: aquellos que no poseen carácter

ácido, básico o salino definido. Colorean mediante
impregnación.
 HISTOQUÍMICA Y
CITOQUIMICA
 Procedimientos químicos específicos que proporcionan
información detallada sobre sustancias químicas y
componentes en las células y tejidos.
 Se fundamentan en:
-La unión específica a un colorante,

-El uso de anticuerpos marcados con un

colorante fluorescente dirigidos a un
componente celular en particular,

-La actividad enzimática inherente de

un elemento constitutivo de las células.
 HISTOQUÍMICA Y CITOQUIMICA
 Métodos basados en la reacción de Schiff para grupos
aldehído.
 Método del ácido peryódico-Schiff (PAS)

 Método de Feulgen.

 Determinación histoquímica de lípidos.

 Determinación histoquímica de enzimas.

 Métodos inmunohistoquímicos.
 MICROSCOPÍA

“El conocimiento detallado moderno de la arquitectura celular se basa sobre

varios tipos de observación por diferentes tipos de microscopios”

¿Qué es un Microscopio?

•La naturaleza de la imagen depende

de:
•Forma de preparación del
tejido.
•Tipo de microscopio.
•Tipo de luz empleada.
 MICROSCOPÍA
TIPOS DE MICROSCOPIOS:

Campo claro
M. Óptico Campo oscuro Transmisión
compuesto Contraste de fases M. Electrónico (MET)
Fluorescencia
Confocal Barrido
Luz U.V. (MEB)
Luz Polarizada
 MICROSCOPÍA
PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO
Mecánicas Ópticas

•Lámpara
Cabezal
Brazo •Condesador/Di
Revolver afragma
Platina
•Objetivos
Carro
Tornillos •Oculares
macrométrico y
micrométrico
Base
 MICROSCOPÍA MICROSCOPÍA
AUMENTO
PODER DE RESOLUCIÓN

Es la relación entre el tamaño de la Es la capacidad de distinguir por

imagen y el del objeto en medidas separado, dos objetos muy cercanos
lineales entre si. Numéricamente equivale a
El Aumento de un microscopio es: d o distancia mínima entre dos
Am= Alente objetivo x ALente ocular objetos distinguibles.
Ej: Ocular: 10X Ojo humano: d= 0.2 mm
Objetivo: 40X Depende de:
¿Cuanto es el aumento del Índice de Refracción (n): Aire =1
microscopio? Apertura numérica (An) del sistema
óptico. An= n x sen u
Longitud de onda de la luz
incidente (λ )
d= 0.61λ /An
D max =0.2um
MICROSCOPÍA
 MICROSCOPÍA
.M. Óptico de campo claro:
Usa Luz Visible. D =0.2 um.
La luz atraviesa el objeto examinado y el objetivo capta la luz
directa proveniente de la fuente luminosa
Uso: Académico, Diagnostico clínico (Lab. Bioanàlisis,
Patológico), Investigación.

M. óptico de campo oscuro:

Solo los rayos de luz refractados por las estructuras de la
muestras son los que penetran en el objetivo:
Gracias a un condensador especial que ilumina el preparado con
mucha intensidad pero en forma oblicua.
Se ve el campo oscuro y sobre el se destacan pequeñas
partículas brillantes.
Proporciona mayor contraste.
Uso: Examinar preparados auto radiográficos. Detectar cristales
en la orina. Identificar Espiroquetas
 MICROSCOPÍA
.M. óptico contraste de fases:

Aprovecha pequeñas diferencias en el índice de refracción existentes en

las diversas estructuras de la muestra examinada.
Las partes oscuras de la imagen corresponden a las regiones más densas.
Sirve para examinar células y tejidos vivos sin colorear.

.M. óptico Fluorescencia:

Aprovecha la capacidad de algunas moléculas de Fluorescer bajo la luz UV

(emiten luz de una long de onda diferente a la luz que la hizo fluorescer)
Autofluorescencia (Vit A, algunos neurotransmisores)
Fluorescencia secundaria.
Se detectan moléculas mas pequeñas que el poder de resolución del
microscopio.
 MICROSCOPÍA
. M. óptico Luz U.V.:
Usa lentes de cuarzo
Tiene mayor poder de resolución
Las imágenes se registran en una película fotográfica
Uso: detección de Ac. Nucléicos, proteínas que tienen ciertos
anticuerpos.-
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
Representa un gran adelanto respecto a la M. óptica ya que:
Reemplaza la luz visible por un haz de electrones con una long e onda de
aprox 0.005 nm  Poder de resolución muy elevado.
Los e- no pueden atravesar el vidrio, por lo que deben remplazarse por bobinas
o lentes electromagnéticas
Existen dos tipos: MET y el MEB
 MICROSCOPÍA
. M. Electrónico de transmisión
Usa la interacción de un haz de elctrones con la muestra para producir una
imagen

Fuente: Filamento de Tunsteno calentado que emite electrones (cátodo)

Los electrones son atraídos hacia el ánodo produciendose una aceleración de estos y
por lo tanto un haz.
El haz de electrones atraviesa los lentes electromagneticos: Condensadora,
objetivos, proyectora.
La imagen final se mira en una pantalla fosforescente: La parte de la muestra
atravesada por los electrones aparecen claras y las que han absorbido y dispersado a
los electrones aparecen oscuras.
 MICROSCOPÍA
. M. Electrónico de Barrido
El haz de electrones no atraviesa la muestra sino que explora su superficie (barre)
 MICROSCOPÍA
 . M. Electrónico de Barrido y M
Electronico de transmisión
1. Investigar conceptos e importancia
de: Biopsia, autopsia, Técnica de
congelación y criostato.

2. Diferencias entre metodos de

preparacion para microscopia optica
y electronica.